探討麥芽醇對大鼠腦缺血再灌注損傷后NO的影響

1、探討麥芽醇對大鼠腦缺血再灌注損傷后NO的影響摘要：目的 觀察麥芽醇對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后 NO的影響。方法 建立大鼠大腦中動脈阻塞 （ MCAO）再灌注模型， 應用亞硝酸鹽還原法測定腦組織中NO的含量。結果 腦缺血再灌注損傷后，腦組織中 NO水平異常增高，給予麥芽醇后， NO水平明顯下降。結論 麥芽醇可抑制 NO水平，對腦缺血再灌注損傷有保護作用。關鍵詞：麥芽醇；腦缺血再灌注；一氧化氮；大鼠腦缺血再灌注損傷實質是一個涉及多方面因素的復雜的病理生理過程。NO作為一種神經(jīng)毒性分子， 可通過與超氧化物陰離子結合形成過氧化亞硝酸鹽，以及通過干擾鐵離子代謝促進氧化損害在腦缺血再灌注損傷中發(fā)揮著重

2、要的作用。麥芽醇是從紅參中提取的單體化合物， 其在體內外可與自由基結合， 對腦缺血再灌注損傷有保護作用 1 ，2 。為了深入研究麥芽醇抗腦缺血的機制， 本實驗觀察了麥芽醇對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后 NO的影響。1 材料與方法試驗動物和分組成年健康雄性 SD大鼠 36 只，體質量 230280g，清潔級，武漢大學基礎醫(yī)學院試驗動物中心提供。 隨機分為對照組、 缺血再灌注組和麥芽醇組， 每組12 只。MCAO及再灌注模型的建立參照 Koizumi 等方法制作大鼠左側 MCAO及再灌流模型。 采用 10水合氯醛（ /100g ）麻醉 , 術中維持動物肛溫 ( ±) ，頸部正中切口，分離

3、并結扎左側頸總動脈、頸外動脈 , 注意避免刺激迷走神經(jīng)。從頸總動脈分叉處插入號絲線 ,沿頸內動脈進入距頸總動脈分叉處略感阻力時停止， 30min 后拔出絲線缺血再灌流 24h。術后在約 20的空調環(huán)境下單籠飼養(yǎng), 自由進食、進水。對照組只暴露血管。麥芽醇給藥參考有關文獻，麥芽醇組分別在缺血前和缺血后30min 經(jīng)尾靜脈注射2ml 700 mol/L 麥芽醇生理鹽水。腦組織 NO含量測定再灌流 24h 后動物處死，取出全腦迅速置于冰盤上， 分離左側海馬及皮質缺血中心區(qū)，分別稱重，后置于勻漿機上制成10%的腦勻漿， 3000r/min 離心10min，取上清液作檢測標本。檢測標本加55nm NaO

4、H和 1ml 75nm ZnSO4溶液混勻，靜置10min，3000r/min離心5min，取上清液，再加甘氨酸緩沖液1ml，混勻后加進4g 活化鎘，放置90min 后取1ml，加進1%黃胺和%的萘基乙二胺鹽酸顯色，靜置反應20min，用 721 分光光度計，以 =546nm，靈敏度 1，空白調 0，測 OD值。統(tǒng)計學處理所有實驗數(shù)據(jù)以均值±標準差( ±s) 表示。采用SPSS 統(tǒng)計軟件處理。各組組間差異比較采用t檢驗 ,以 P< 為差異有顯著性。2結果腦缺血再灌注 24h 后，缺血再灌注組皮層、海馬的 NO含量異常升高，與正常對照組相比有顯著性差異 (P<)

5、；麥芽醇組皮層、海馬的 NO含量明顯下降，與缺血再灌組比較有顯著性差異 (P<), 見表 1。表 1 3 組大鼠皮層、海馬亞硝酸鹽 OD值的比較與對照組比較， *P<；與缺血再灌注組比較， P<3討論NO是一種自由性質的氣體，為較小的生物活性分子，可自由穿過細胞膜，作用于細胞內的靶分子。在生物體內， NO生成后很快被氧化，以硝酸根和亞硝酸根的形式存在于細胞的內外液中，使 NO失去生物學活性。低濃度的 NO能使血管擴張，抑制血小板集聚與粘附，使谷氨酸調控的離子通道下調 , 防止細胞內鈣超載，因而對細胞有保護作用；但在高濃度下， NO可與超氧陰離子反應生成超氧亞硝酸根離子， 超氧

6、亞硝酸根離子可以降解為 OH-和 NO2-自由基，使細胞膜發(fā)生脂質過氧化作用， 在細胞的膜水平造成強烈的神經(jīng)毒性， 甚至導致神經(jīng)元死亡等 5 ，6 。研究表明 NO在腦缺血性損傷的發(fā)病中起重要作用，缺血后數(shù)分鐘 NO含量明顯增高 , 之后緩慢下降，于再灌注期 NO再次升高。 NO含量增加的機制可能為： 腦缺血后神經(jīng)元受損， 細胞膜去極化過程增強， 突觸前谷氨酸等興奮性氨基酸生成大量增加，使細胞外谷氨酸濃度升高，激活甲基天門冬氨酸 (NMDA)受體， NMDA受體激活后使突觸后 Ca2+內流增加，激活 NOS，促進NO的生成；再次，腦缺血后， ATP大量消耗，使能量代謝障礙及 cAMP依賴蛋性白

7、激酶活性下降，使 NOS脫磷酸化， NOS的活性增強，促進 NO的生成。本實驗的研究結果表明，大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后，腦組織中NO含量顯著增加，說明NO參與了腦缺血再灌注損傷的發(fā)病機制，給予麥芽醇治療后， NO含量明顯下降。表明麥芽醇對腦缺血再灌注損傷的保護作用與其對NO生成含量的調節(jié)有關，我們推測麥芽醇對 NO生成的關鍵酶 NOS也進行調節(jié)，麥芽醇通過對 NOS活性和 NO含量進行調節(jié)從而發(fā)揮腦缺血再灌注損傷的保護作用，詳細機制有待進一步研究。【參考文獻】高艷，戴冀斌，李應續(xù) . 麥芽醇對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)元凋亡的影響 J.咸寧學院學報 ( 醫(yī)學版 ), 20XX,21(

8、01):4甘云波 , 胡松林 , 王亞威 . 麥芽醇治療大鼠不完全性腦缺血再灌注損傷的實驗研究 J. 咸寧醫(yī)學院學報 , 20XX,15(01):14Koizumi J, Yoshida Y, Nakazawa T,et studies of ischemic brain edema:anew experimentalmodel of cerebralembolism in ratsin which recirculationcan be introduced in the ischemia areaJ.Jpn J Stroke,1986,8:1 Bertholf RL,Herman MM,Savory J,et longterm intravenous model aluminum maltol toxicity in rabbits: tissuedistribution,hepatic,rental and neuronal cytokeletal changes associated with sys