常見tag蛋白標簽介紹3頁

1、蛋白標簽蛋白標簽（proteintag）是指利用DNA體外重組技術(shù)，與目的蛋白一起融合表達的一種多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表達、檢測、示蹤和純化等。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，研究人員相繼開發(fā)出了具有各種不同功能的蛋白標簽。目前，這些蛋白標簽已在基礎(chǔ)研究和商業(yè)化產(chǎn)品生產(chǎn)等方面得到了廣泛的應(yīng)用。美國GeneCopoeia（復能基因）為客戶提供50多種蛋白標簽，可以滿足客戶的不同需求，包括各種最新型的標簽，如：SNAP-Tag、Halo Tag、AviTag、Sumo等；也提供齊全的各種常用標簽，如eGFP、His、Flag等等標簽。以下是部分蛋白標簽的特性介紹，更加詳細的介紹可在查詢克隆產(chǎn)品的結(jié)果列

2、表里面看到各種推薦的蛋白標簽和載體。標簽 純化促進溶解度抗體效價細胞標記His6+/-+/-   Flag+/-+   GST+   MBP+   His-MBP+   HA  +   eGFP/CFP/YFP   +Myc  +   His-Myc+ +   His-

3、AviTag+ +  Sumo +   His-Sumo+ +   SNAP-Tag+ +Halo Tag+TrxHISHis6是指六個組氨酸殘基組成的融合標簽，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。當某一個標簽的使用，一是能構(gòu)成表位利于純化和檢測；二是構(gòu)成獨特的結(jié)構(gòu)特征（結(jié)合配體）利于純化。組氨酸殘基側(cè)鏈與固態(tài)的鎳有強烈的吸引力，可用于固定化金屬螯合層析(IMAC)，對重組蛋白進行分離純化。 使用His-tag有下面優(yōu)點：· 標簽的分子量小，只有0.84KD，而GST

4、和蛋白A分別為26KD和30KD，一般不影響目標蛋白的功能；· His標簽融合蛋白可以在非離子型表面活性劑存在的條件下或變性條件下純化，前者在純化疏水性強的蛋白得到應(yīng)用，后者在純化包涵體蛋白時特別有用，用高濃度的變性劑溶解后通過金屬螯和親和層析去除雜蛋白，使復性不受其它蛋白的干擾，或進行金屬螯和親和層析復性；· His標簽融合蛋白也被用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-DNA相互作用研究；· His標簽免疫原性相對較低，可將純化的蛋白直接注射動物進行免疫并制備抗體。· 可應(yīng)用于多種表達系統(tǒng)，純化的條件溫和；· 可以和其它的親和標簽一起構(gòu)建雙親和標簽。F

5、lag標簽蛋白Flag標簽蛋白為編碼8個氨基酸的親水性多肽（DYKDDDDK），同時載體中構(gòu)建的Kozak序列使得帶有FLAG的融合蛋白在真核表達系統(tǒng)中表達效率更高。 FLAG作為標簽蛋白，其融合表達目的蛋白后具有以下優(yōu)點：· FLAG作為融合表達標簽，其通常不會與目的蛋白相互作用并且通常不會影響目的蛋白的功能、性質(zhì)，這樣就有利用研究人員對融合蛋白進行下游研究。· 融合FLAG的目的蛋白，可以直接通過FLAG進行親和層析，此層析為非變性純化，可以純化有活性的融合蛋白，并且純化效率高。· FLAG作為標簽蛋白，其可以被抗FLAG的抗體識別，這樣就方便通過Wester

6、n Blot、ELISA等方法對含有FLAG的融合蛋白進行檢測、鑒定。· 融合在N端的FLAG，其可以被腸激酶切除（DDDK），從而得到特異的目的蛋白。因此現(xiàn)FLAG標簽已廣泛的應(yīng)用于蛋白表達、純化、鑒定、功能研究及其蛋白相互作用等相關(guān)領(lǐng)域。MBP（麥芽糖結(jié)合蛋白）MBP（麥芽糖結(jié)合蛋白）標簽蛋白大小為40kDa，由大腸桿菌K12的malE基因編碼。MBP可增加在細菌中過量表達的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBP標簽可通過免疫分析很方便地檢測。有必要用位點專一的蛋白酶切割標簽。如果蛋白在細菌中表達，MBP可以融合在蛋白的N端或C端。 純化：融合蛋白可通過交聯(lián)淀粉親和層析一步純化

7、。結(jié)合的融合蛋白可用10mM麥芽糖在生理緩沖液中進行洗脫。結(jié)合親和力在微摩爾范圍。一些融合蛋白在0.2% Triton X-100或0.25% Tween 20存在下不能有效結(jié)合，而其他融合蛋白則不受影響。 緩沖條件為pH7.0到8.5，鹽濃度可高達1M，但不能使用變性劑。如果要去除MBP融合部分，可用位點特異性蛋白酶切除。檢測：可用MBP抗體或表達的目的蛋白特異性抗體檢測。GST(谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶)GST(谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶) 標簽蛋白本身是一個在解毒過程中起到重要作用的轉(zhuǎn)移酶，它的天然大小為26KD。將它應(yīng)用在原核表達的原因大致有兩個，一個是因為它是一個高度可溶的蛋白，希望可以利用它增加

8、外源蛋白的可溶性；另一個是它可以在大腸桿菌中大量表達，起到提高表達量的作用。GST融合表達系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于各種融合蛋白的表達，可以在大腸桿菌和酵母菌等宿主細胞中表達。結(jié)合的融合蛋白在非變性條件下用10mM 還原型谷胱甘肽洗脫。在大多數(shù)情況下，融合蛋白在水溶液中是可溶的，并形成二體。GST標簽可用酶學分析或免疫分析很方便的檢測。標簽有助于保護重組蛋白免受胞外蛋白酶的降解并提高其穩(wěn)定性。 在大多數(shù)情況下GST融合蛋白是完全或部分可溶的。純化：該表達系統(tǒng)表達的GST標簽蛋白可直接從細菌裂解液中利用含有還原型谷胱甘肽瓊脂糖凝膠(Glutathione sepharose)親和樹脂進行純化。GST標簽蛋白

9、可在溫和、非變性條件下洗脫，因此保留了蛋白的抗原性和生物活性。GST在變性條件下會失去對谷胱甘肽樹脂的結(jié)合能力，因此不能在純化緩沖液中加入強變性劑如：鹽酸胍或尿素等。如果要去除GST融合部分，可用位點特異性蛋白酶切除。檢測：可用GST抗體或表達的目的蛋白特異性抗體檢測。HAHA標簽蛋白，標簽序列YPYDVPDYA，源于流感病毒的紅細胞凝集素表面抗原決定簇，9個氨基酸，對外源靶蛋白的空間結(jié)構(gòu)影響小, 容易構(gòu)建成標簽蛋白融合到N端或者C端。易于用AntiHA抗體檢測和ELISA檢測。c-MycC-Myc 標簽蛋白，是一個含11個氨基酸的小標簽，標簽序列Glu-Gln-Lys-Leu-Ile- Se

10、r-Glu-Glu-Asp-Leu，這11個氨基酸作為抗原表位表達在不同的蛋白質(zhì)框架中仍可識別其相應(yīng)抗體。C-Myc tag已成功應(yīng)用在 Western-blot雜交技術(shù)、免疫沉淀和流式細胞計量術(shù)中, 可用于檢測重組蛋白質(zhì)在靶細胞中的表達。eGFPeGFP標簽蛋白，是增強型綠色熒光蛋白eGFP,激發(fā)波長為488nm，發(fā)射波長為507nm，其是由野生型綠色熒光蛋白GFP通過氨基酸突變和密碼子優(yōu)化而來的。相對于GFP，eGFP熒光強度更強、熒光性質(zhì)更穩(wěn)定。同時載體中構(gòu)建的Kozak序列使得含有eGFP的融合蛋白在真核表達系統(tǒng)中表達效率更高。 eGFP作為標簽蛋白，其融合表達目的蛋白后具有以下優(yōu)點：

11、· 不用破碎組織細胞和不加任何底物，直接通過熒光顯微鏡就能在活細胞中發(fā)出綠色熒光，實時顯示目的基因的表達情況，而且熒光性質(zhì)穩(wěn)定，被譽為活細胞探針。· 其自發(fā)熒光，不需用目的基因的抗體或原位雜交技術(shù)就可推知目的基因在細胞中的定位等情況。· 同時細胞內(nèi)的其它產(chǎn)物不會干擾標簽蛋白檢測，從而使其檢測更顯得快速、簡便、靈敏度高而且重現(xiàn)性。· 其低消耗、高靈敏度檢測，十分適用于高通量的藥物篩選。因此現(xiàn)eGFP 表達標簽被廣泛地應(yīng)用于基團表達調(diào)控、轉(zhuǎn)基因功能研究、蛋白在細胞中的功能定位、遷移變化及藥物篩選等方面。此外由我公司提供的IRES雙順反子載體，可同目的基因共表

12、達eGFP，用于目的基因的體內(nèi)蛋白示蹤研究。eYFPeYFP標簽蛋白為增強型黃綠色熒光蛋白eYFP，激發(fā)波長為513nm，發(fā)射波長為527nm，其是由野生型黃綠色熒光蛋白YFP通過氨基酸突變和密碼子優(yōu)化而來的。相對于YFP，eYFP熒光強度更強、熒光性質(zhì)更穩(wěn)定。同時載體中構(gòu)建的Kozak序列使得含有eYFP的融合蛋白在真核表達系統(tǒng)中表達效率更高。 eYFP作為標簽蛋白，其融合表達目的蛋白后具有以下優(yōu)點：· 不用破碎組織細胞和不加任何底物，直接通過熒光顯微鏡就能在活細胞中發(fā)出綠色熒光，實時顯示目的基因的表達情況，而且熒光性質(zhì)穩(wěn)定，被譽為活細胞探針。· 其自發(fā)熒光，不需用目的基

13、因的抗體或原位雜交技術(shù)就可推知目的基因在細胞中的定位等情況。· 同時細胞內(nèi)的其它產(chǎn)物不會干擾標簽蛋白檢測，從而使其檢測更顯得快速、簡便、靈敏度高而且重現(xiàn)性。· 其低消耗、高靈敏度檢測，十分適用于高通量的藥物篩選。因此現(xiàn)eYFP 表達標簽被廣泛的應(yīng)用與基團表達調(diào)控、轉(zhuǎn)基因功能研究、蛋白在細胞中的功能定位、遷移變化及藥物篩選等方面。此外由我公司提供的IRES雙順反子載體，可同目的基因共表達eYFP，用于目的基因的體內(nèi)蛋白示蹤研究。eCFPeCFP標簽蛋白為增強型青色熒光蛋白eCFP，激發(fā)波長為433nm或453nm，發(fā)射波長為475nm或501nm，其是由野生型青色熒光蛋白CF

14、P通過氨基酸突變和密碼子優(yōu)化而來的。相對于CFP，eCFP熒光強度更強、熒光性質(zhì)更穩(wěn)定。同時載體中構(gòu)建的Kozak序列使得含有eCFP的融合蛋白在真核表達系統(tǒng)中表達效率更高。 eCFP作為標簽蛋白，其融合表達目的蛋白后具有以下優(yōu)點：· 不用破碎組織細胞和不加任何底物，直接通過熒光顯微鏡就能在活細胞中發(fā)出綠色熒光，實時顯示目的基因的表達情況，而且熒光性質(zhì)穩(wěn)定，被譽為活細胞探針。· 其自發(fā)熒光，不需用目的基因的抗體或原位雜交技術(shù)就可推知目的基因在細胞中的定位等情況。· 同時細胞內(nèi)的其它產(chǎn)物不會干擾標簽蛋白檢測，從而使其檢測更顯得快速、簡便、靈敏度高而且重現(xiàn)性。

15、3; 其低消耗、高靈敏度檢測，十分適用于高通量的藥物篩選。因此現(xiàn)eCFP 表達標簽被廣泛的應(yīng)用與基團表達調(diào)控、轉(zhuǎn)基因功能研究、蛋白在細胞中的功能定位、遷移變化及藥物篩選等方面。Avi TagAviTag標簽蛋白是一個15 個氨基酸的短肽，具有一個單生物素化賴氨酸位點，與已知天然可生物素化序列完全不同，可以加在目標蛋白的N端和C端。融合表達后，可被生物素連接酶生物素化，為了純化重組蛋白選用低親和性的單體抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物，除了用于蛋白質(zhì)分離純化，還用于蛋白質(zhì)相互作用研究。Avi Tag標簽系統(tǒng)具有以下幾大優(yōu)點:· 無論在體外或者體內(nèi)，幾乎所有的蛋白都可以在一個獨特的Avi

16、 Tag位點輕易且有效地被生物素化；· 生物素化是通過酶和底物的反應(yīng)來實現(xiàn)，反應(yīng)條件相當溫和而且標記的專一性極高；· 生物素Avi Tag只有15個氨基酸，對蛋白空間結(jié)構(gòu)的影響非常小。SNAP-TagSNAP-Tag是新一代的蛋白標簽技術(shù)，不僅專一性極高而且穩(wěn)定，最大的優(yōu)點是適用于多種環(huán)境下的蛋白質(zhì)檢測與純化，如活細胞內(nèi)、溶液中、或固態(tài)相(如SDS-PAGE gels)等。SNAP-Tag是從人的O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移（O6-alkylguanine-DNA- alkyltransferase）獲得。無論體內(nèi)還是體外，SNAP-Tag都能與底物高特異性地共價結(jié)合，

17、使蛋白標記上生物素或熒光基團（如熒光素和若丹明）。SNAP所帶的活性巰基位點接受了苯甲基鳥嘌呤所攜帶的側(cè)鏈苯甲基基團，釋放出了鳥嘌呤。這種新的硫醚鍵共價結(jié)合使SNAP所帶的目的蛋白攜帶上了苯甲基基團所帶的標記物。苯甲基鳥嘌呤在生化條件下穩(wěn)定，并且沒有其他蛋白會和這類物質(zhì)作用，所以SNAP標簽反應(yīng)是高特異的。 檢測：生物素或各種顏色熒光的底物（如熒光素、若丹明）可滲透進入細胞，方便快捷地進行活細胞內(nèi)SNAP-Tag融合蛋白的標記與檢測。它們也可特異性地標記大腸桿菌，酵母和哺乳動物等細胞抽提液或已經(jīng)純化的蛋白液中的SNAP-tag融合蛋白。將純化的或未純化的SNAP-Tag融合蛋白與表面固定了苯甲

18、基鳥嘌呤的基質(zhì)混合，蛋白即可特異與底物作用，形成共價鍵，融合蛋白間接被固定在了基質(zhì)表面上，可以達到更方便快捷地研究蛋白功能或純化蛋白的目的。Halo TagHaloTag標簽蛋白是一種脫鹵素酶的遺傳修飾衍生物，可與多種合成的HaloTag配基有效地共價結(jié)合。這個分子量為33KDa的單體蛋白能融合在重組蛋白的N端或C 端，并在原核和真核系統(tǒng)中表達。HaloTag配基是小分子化學物，能夠在體外或體內(nèi)與HaloTag蛋白共價結(jié)合。這些配基由兩個關(guān)鍵組分組成：(1)一個通用的HaloTag反應(yīng)聯(lián)結(jié)子，結(jié)合HaloTag蛋白；(2)一個功能基團,例如熒光染料或親和媒介。能夠共價和特異性結(jié)合多種合成的報告基團和親和配基的特性，使得HaloTag蛋白能夠用于檢測和親和結(jié)合或固相化固定目的蛋白。SUMOSUMO標簽蛋白是一種小分子泛素樣修飾蛋白（Small ubiquitin-li