美白劑實驗研究及臨床應(yīng)用ppt課件

1、美白劑實驗研討及臨床運用美白劑實驗研討及臨床運用 大連醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院皮膚科大連醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院皮膚科 涂彩霞涂彩霞 1. 1.研討方法研討方法 2.2.研討方向研討方向 3.3.美白劑的運用美白劑的運用1.1.主要研討方法主要研討方法 1 1美白活性成分分析美白活性成分分析 是指經(jīng)過高效液相色譜等方法對美白化裝品是指經(jīng)過高效液相色譜等方法對美白化裝品中的美白活性物質(zhì)進展種類和含量的測定。中的美白活性物質(zhì)進展種類和含量的測定。 1.1.主要研討方法主要研討方法 2 2細胞程度效果測定細胞程度效果測定 檢測內(nèi)容：黑素含量測定、酪氨酸酶活檢測內(nèi)容：黑素含量測定、酪氨酸酶活性、蛋性、蛋 白表

2、達、白表達、mRNAmRNA程度測定、信號傳導通路程度測定、信號傳導通路等。等。 1.1.主要研討方法主要研討方法 2 2細胞程度效果測定細胞程度效果測定1 1細胞模型細胞模型 B16B16黑素瘤細胞黑素瘤細胞 大多數(shù)研討中，采用大多數(shù)研討中，采用B16B16黑素瘤細胞黑素瘤細胞檢測色素抑制造用檢測色素抑制造用PIPI 1 1細胞模型細胞模型melan-a或mel-ab黑素細胞或正常人黑素細胞(nHEM) 正常人黑素細胞(nHEM)更好的模擬體內(nèi)環(huán)境，但黑素細胞更難維持培育。源于小鼠或人皮膚的黑素細胞和角質(zhì)構(gòu)成細胞共培育更貼近體內(nèi)環(huán)境，體外系統(tǒng)的皮膚等效模型SEM也用于皮膚美白研討。2主要實驗

3、方法主要實驗方法n酪氨酸酶活性檢測方法有放射性同位素法、免疫學法酪氨酸酶活性檢測方法有放射性同位素法、免疫學法和生化酶學法，其中以生化酶學法較為簡單成熟，如和生化酶學法，其中以生化酶學法較為簡單成熟，如氧化多巴法。氧化多巴法。n細胞中色素含量測定是美白化學物功能評價的最重要細胞中色素含量測定是美白化學物功能評價的最重要檢測目的。目前多采用生物化學檢測目的。目前多采用生物化學-分光光度法測定黑素分光光度法測定黑素細胞中的黑素含量，此法經(jīng)典穩(wěn)定細胞中的黑素含量，此法經(jīng)典穩(wěn)定 。2主要實驗方法主要實驗方法n信號傳導通路蛋白表達信號傳導通路蛋白表達Western Blot，免疫組化，免疫組化，流式細胞

4、術(shù)，流式細胞術(shù)，ELISA等等nmRNA轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄Rt-PCR3動物實驗動物實驗n 棕色豚鼠模型 黃棕色豚鼠皮膚黑素細胞和黑素小體的分布近似于人類，實驗結(jié)果反復性好，常采用UV或-MSH誘導色素冷靜。斑馬魚模型 對顯示美白制劑體內(nèi)毒性具有意義 4人體實驗人體實驗視覺評分客觀性強，不準確照相對比受光線及拍攝條件的影響 FoToFinder dermoscope 儀，由攝像機和顯微鏡頭組成，可以對色素冷靜區(qū)進展拍照、放大，并進展圖像處置，計算各種參數(shù)如皮損大小、邊緣情況、構(gòu)造參數(shù)，同時作出平安評價，是一種常用的色斑評價法。 4人體實驗人體實驗三色分析法：經(jīng)過檢測皮膚表層構(gòu)造上的紫外可見反射光，采用三

5、維顏色空間分量的定量，來模擬并復原描畫人肉眼所看到的物體的顏色，經(jīng)過計算來綜合評價皮膚的色度。4人體實驗人體實驗漫反射光譜法：針對皮膚顏色的特征性發(fā)色基團，如黑漫反射光譜法：針對皮膚顏色的特征性發(fā)色基團，如黑色素、血紅蛋白等，選擇特定波長掃描，測定皮膚外色素、血紅蛋白等，選擇特定波長掃描，測定皮膚外表的反射光譜，從而對皮膚中的血紅蛋白和黑色素等表的反射光譜，從而對皮膚中的血紅蛋白和黑色素等進展定量，其丈量參數(shù)能較好地從生理學上解釋皮膚進展定量，其丈量參數(shù)能較好地從生理學上解釋皮膚顏色的改動。顏色的改動。4人體實驗人體實驗數(shù)字化成像定量技術(shù)是顯微鏡照相技術(shù)和計算機處置系數(shù)字化成像定量技術(shù)是顯微鏡

6、照相技術(shù)和計算機處置系統(tǒng)的結(jié)合，可以對色素冷靜進展掃描并進展色度定量，統(tǒng)的結(jié)合，可以對色素冷靜進展掃描并進展色度定量，經(jīng)計算機處置系統(tǒng)進展數(shù)據(jù)信息的轉(zhuǎn)換，可以計算得經(jīng)計算機處置系統(tǒng)進展數(shù)據(jù)信息的轉(zhuǎn)換，可以計算得出各種發(fā)色團的含量，以此來綜合評價皮膚色度的變出各種發(fā)色團的含量，以此來綜合評價皮膚色度的變化，從而可對化裝品的祛斑效果進展準確的定量評價?；?，從而可對化裝品的祛斑效果進展準確的定量評價。 1. 1.研討方法研討方法 2.2.研討方向研討方向 3.3.美白劑的運用美白劑的運用2.2.主要研討方向主要研討方向2.1 2.1 抑制酪氨酸酶活性及表達抑制酪氨酸酶活性及表達2.2 2.2 抑制黑

7、素向角質(zhì)構(gòu)成細胞轉(zhuǎn)移抑制黑素向角質(zhì)構(gòu)成細胞轉(zhuǎn)移2.3 2.3 抑制氧化反響抑制氧化反響2.4 2.4 抑制炎癥反響抑制炎癥反響2.5 2.5 調(diào)理黑素生成信號通路調(diào)理黑素生成信號通路2.1 2.1 抑制酪氨酸酶活性或表達抑制酪氨酸酶活性或表達 n4-4-羥基茴香醚：作為酪氨酸酶替代底物引起色素減羥基茴香醚：作為酪氨酸酶替代底物引起色素減退退n針葉中提取茶多酚或從黑桑樹中分別的查爾酮衍生針葉中提取茶多酚或從黑桑樹中分別的查爾酮衍生物可抑制酪氨酸酶活性。物可抑制酪氨酸酶活性。 n從大豆胚軸酒曲從大豆胚軸酒曲soygerm kojisoygerm koji分別出來的兩個分別出來的兩個8-8-羥基羥基

8、異黃酮：異黃酮：n 具有不可逆抑制酪氨酸酶活性作用具有不可逆抑制酪氨酸酶活性作用 n面包樹面包樹(Artocarpus incisus)(Artocarpus incisus)或龍膽或龍膽( (根根) (Sophora ) (Sophora flavescens)flavescens)分別的間苯二酚特有的側(cè)基與分別的間苯二酚特有的側(cè)基與C4, C5 C4, C5 或或C8C8位置置換抑制酪氨酸酶活性位置置換抑制酪氨酸酶活性2.1 2.1 抑制酪氨酸酶活性或表達抑制酪氨酸酶活性或表達 n對天然化合物進展修飾，如經(jīng)對天然化合物進展修飾，如經(jīng)Veratrum patulumVeratrum patu

9、lum提取物的纖維素酶的處置，使二苯乙烯化合物去提取物的纖維素酶的處置，使二苯乙烯化合物去糖基化，可提高對酪氨酸酶的抑制造用。糖基化，可提高對酪氨酸酶的抑制造用。 2.1 2.1 抑制酪氨酸酶活性或表達抑制酪氨酸酶活性或表達 nN-N-乙酰氨基葡萄糖乙酰氨基葡萄糖(Nacetylglucosamine(Nacetylglucosamine，NAG)NAG)是構(gòu)成細胞外基質(zhì)透明質(zhì)酸的主要成分，部分外是構(gòu)成細胞外基質(zhì)透明質(zhì)酸的主要成分，部分外用用NAGNAG可以減輕女性面部皮膚色素冷靜。能夠與可以減輕女性面部皮膚色素冷靜。能夠與抑制酪氨酸酶的糖基化有關(guān)。抑制酪氨酸酶的糖基化有關(guān)。2.1 2.1 抑

10、制酪氨酸酶活性或表達抑制酪氨酸酶活性或表達 2.2 2.2 抑制黑素向角質(zhì)構(gòu)成細胞轉(zhuǎn)移抑制黑素向角質(zhì)構(gòu)成細胞轉(zhuǎn)移n蛋白酶激活受體蛋白酶激活受體2 2PAR-2PAR-2對于黑素小體從黑素細對于黑素小體從黑素細胞向角質(zhì)構(gòu)成細胞的轉(zhuǎn)移非常重要，可以用于皮膚胞向角質(zhì)構(gòu)成細胞的轉(zhuǎn)移非常重要，可以用于皮膚美白的靶點。美白的靶點。n維生素維生素B3B3衍生物煙酰胺是一種抑制黑素小體轉(zhuǎn)移的衍生物煙酰胺是一種抑制黑素小體轉(zhuǎn)移的制劑。制劑。 n黑素細胞表達高程度的黑素細胞表達高程度的sAPPsAPPnsAPPsAPP在經(jīng)過樹突末梢釋放黑素小粒過程中能夠發(fā)揚重在經(jīng)過樹突末梢釋放黑素小粒過程中能夠發(fā)揚重要的作用要的

11、作用n阻斷阻斷sAPPsAPP信號能夠是另一種影響黑素小體保送的途徑信號能夠是另一種影響黑素小體保送的途徑2.2 2.2 抑制黑素向角質(zhì)構(gòu)成細胞轉(zhuǎn)移抑制黑素向角質(zhì)構(gòu)成細胞轉(zhuǎn)移2.3 2.3 抑制氧化反響抑制氧化反響減少黑素細胞中活性氧減少黑素細胞中活性氧ROSROS程度能夠阻止黑素合成的活化程度能夠阻止黑素合成的活化 FujiwaraFujiwara等發(fā)現(xiàn)每日給棕色豚鼠服用維生素等發(fā)現(xiàn)每日給棕色豚鼠服用維生素C C抗壞血抗壞血酸、維生素酸、維生素E E和半胱氨酸可減少和半胱氨酸可減少UVBUVB誘導的色素冷靜誘導的色素冷靜維生素維生素C C更穩(wěn)定的衍生物如抗壞血酸葡糖苷和抗壞血酸棕更穩(wěn)定的衍生

12、物如抗壞血酸葡糖苷和抗壞血酸棕櫚酸酯已被用在不同的皮膚美白配方中櫚酸酯已被用在不同的皮膚美白配方中 2.4 2.4 抑制炎癥介質(zhì)抑制炎癥介質(zhì)n馬尾藻提取物具有抑制炎癥介質(zhì)產(chǎn)生的作用。經(jīng)過馬尾藻提取物具有抑制炎癥介質(zhì)產(chǎn)生的作用。經(jīng)過這種間接的方法減少色素細胞內(nèi)黑素生成。這種間接的方法減少色素細胞內(nèi)黑素生成。2.5 調(diào)理黑素生成信號通路調(diào)理黑素生成信號通路2.5 2.5 調(diào)理黑素生成信號通路調(diào)理黑素生成信號通路nUVUV反響經(jīng)過反響經(jīng)過cAMPcAMP和和PKAPKA介導信號系統(tǒng)及蛋白激酶介導信號系統(tǒng)及蛋白激酶C C (PKC)(PKC)，能夠添加小眼畸形轉(zhuǎn)錄因子，能夠添加小眼畸形轉(zhuǎn)錄因子(MIT

13、F)(MITF)表達，導表達，導致酪氨酸酶活化。致酪氨酸酶活化。n經(jīng)過特異性經(jīng)過特異性PKCPKC抑制劑抑制劑bisindolylmaleimide (bis)bisindolylmaleimide (bis)可減少豚鼠的曬黑反響，使其毛發(fā)顏色變淡?？蓽p少豚鼠的曬黑反響，使其毛發(fā)顏色變淡。 n信號系統(tǒng)可誘導多種途徑產(chǎn)生堿性成纖維細胞生長因信號系統(tǒng)可誘導多種途徑產(chǎn)生堿性成纖維細胞生長因子子(bFGF)(bFGF)、肝細胞生長因子、肝細胞生長因子(HGF)(HGF)、干細胞因子、干細胞因子(SCF)(SCF)、內(nèi)皮素、內(nèi)皮素-1 (ET-1)-1 (ET-1)、促腎上腺皮質(zhì)激素、促腎上腺皮質(zhì)激素A

14、CTHACTH和和-促黑激素促黑激素(-MSH)(-MSH)，結(jié)合黑素細胞上，結(jié)合黑素細胞上的受體，刺激色素產(chǎn)生。的受體，刺激色素產(chǎn)生。2.5 2.5 調(diào)理黑素生成信號通路調(diào)理黑素生成信號通路nWnt/-catenin途徑途徑 ：n Wnt蛋白和其受體的結(jié)合可被蛋白和其受體的結(jié)合可被Dikkopf 1(DKK1)抑制，抑制，DKK1是一種成纖維細胞分泌的因子，可是一種成纖維細胞分泌的因子，可抑制黑素細胞生長并劇烈抑制黑素生成。抑制黑素細胞生長并劇烈抑制黑素生成。 2.5 2.5 調(diào)理黑素生成信號通路調(diào)理黑素生成信號通路nSCF/c-kit途徑：途徑：n 肝細胞因子是一種結(jié)合于肝細胞因子是一種結(jié)

15、合于c-kit受體受體 (CD117)的細的細胞因子，活化胞因子，活化c-kit而導致多重信號級聯(lián)的活化。而導致多重信號級聯(lián)的活化。 n Na等發(fā)現(xiàn)苯基咪唑磺酰胺衍生物阻止干細胞因等發(fā)現(xiàn)苯基咪唑磺酰胺衍生物阻止干細胞因子誘導的人類黑色素瘤細胞子誘導的人類黑色素瘤細胞ckit磷酸化，進而阻磷酸化，進而阻止了止了UV誘導的棕色豚鼠的色素冷靜。誘導的棕色豚鼠的色素冷靜。 2.5 2.5 調(diào)理黑素生成信號通路調(diào)理黑素生成信號通路nYaar等提出骨構(gòu)成蛋白等提出骨構(gòu)成蛋白(BMPs)參與調(diào)理黑素合成。黑參與調(diào)理黑素合成。黑素細胞表達素細胞表達BMP受體并產(chǎn)生受體并產(chǎn)生BMP-4，可降低培育的人，可降低培

16、育的人黑素細胞的黑素合成。黑素細胞的黑素合成。n過氧化物酶體增殖子活化受體過氧化物酶體增殖子活化受體(PPAR)：十八碳烯二酸：十八碳烯二酸octadecenedioic acid結(jié)合結(jié)合PPAR降低黑素合成和酪降低黑素合成和酪氨酸酶表達。氨酸酶表達。2.5 2.5 調(diào)理黑素生成信號通路調(diào)理黑素生成信號通路nKimKim等報道細胞外信號調(diào)理激酶等報道細胞外信號調(diào)理激酶(ERK)(ERK)的信號通路可的信號通路可調(diào)理黑素生成。生長因子調(diào)理黑素生成。生長因子bFGFbFGF和和HGFHGF和細胞因子和細胞因子(SCF)(SCF)可激發(fā)此途徑?？杉ぐl(fā)此途徑。n c2-c2-神經(jīng)酰胺經(jīng)過活化神經(jīng)酰胺經(jīng)

17、過活化ERKERK抑制黑素合成抑制黑素合成n 2-2-亞胺基亞胺基-1,3-1,3二氫噻唑衍生物，可經(jīng)過誘導二氫噻唑衍生物，可經(jīng)過誘導ERKERK降降低低B16B16黑素瘤細胞的黑素生成黑素瘤細胞的黑素生成2.5 2.5 調(diào)理黑素生成信號通路調(diào)理黑素生成信號通路土曲菌素可刺激土曲菌素可刺激ERKERK和下調(diào)和下調(diào)MITFMITF，可抑制，可抑制Mel-abMel-ab黑素細黑素細胞黑素合成胞黑素合成咪唑衍生物咪唑衍生物AVS-7AVS-7，可經(jīng)過活化，可經(jīng)過活化ERKERK和下調(diào)和下調(diào)MITFMITF、酪氨、酪氨酸酶減少色素生成酸酶減少色素生成Haginin AHaginin A抑制酪氨酸酶并

18、活化抑制酪氨酸酶并活化ERKERK，下調(diào)，下調(diào)MITFMITF、酪氨、酪氨酸酶和酸酶和TRP-1TRP-1，降低棕色豚鼠和斑馬魚模型系統(tǒng)的色素，降低棕色豚鼠和斑馬魚模型系統(tǒng)的色素冷靜冷靜2.5 2.5 調(diào)理黑素生成信號通路調(diào)理黑素生成信號通路 1. 1.研討方法研討方法 2.2.研討方向研討方向 3.3.美白劑的運用美白劑的運用3 3、美白劑的運用、美白劑的運用n氫醌氫醌(HQ)作為有效美白制劑曾廣泛運用，但最近已作為有效美白制劑曾廣泛運用，但最近已被禁用，由于存在嚴重的平安問題：能夠?qū)е峦蛔?，被禁用，由于存在嚴重的平安問題：能夠?qū)е峦蛔?，添加非洲國家褐黃病的發(fā)生率。添加非洲國家褐黃病的發(fā)生率

19、。 n曲酸、熊果苷和壬二酸常用曲酸、熊果苷和壬二酸常用n熊果苷是氫醌的糖基化方式，存在于熊果提取物中，熊果苷是氫醌的糖基化方式，存在于熊果提取物中，也可由氫醌經(jīng)也可由氫醌經(jīng)(葡萄葡萄)糖苷酶作用來合成。糖苷酶作用來合成。n脫氧熊果苷是是去除熊果苷全部葡萄糖側(cè)鏈中的羥基脫氧熊果苷是是去除熊果苷全部葡萄糖側(cè)鏈中的羥基組制得，毒性明顯低于熊果苷。組制得，毒性明顯低于熊果苷。 3 3、美白劑的運用、美白劑的運用熊果提取物熊果提取物-熊果苷的自然來源能夠加強熊果苷的自然來源能夠加強MeladermMeladerm和和LucedermLucederm制劑中制劑中-熊果苷的作用。熊果苷的作用。 桑椹和甘草活

20、性成分具有酪氨酸酶抑制造用桑椹和甘草活性成分具有酪氨酸酶抑制造用(TI)(TI)和色素減和色素減少少(PI)(PI)的作用。的作用。 3 3、美白劑的運用、美白劑的運用n檸檬提取物作為一種有效的皮膚脫色成分運用于檸檬提取物作為一種有效的皮膚脫色成分運用于Skin Skin Bright, LucedermBright, Lucederm和和MeladermMeladerm等國外產(chǎn)品。但高濃度等國外產(chǎn)品。但高濃度容易引起皮膚刺激。容易引起皮膚刺激。n槐屬槐屬SophoraSophora的一些活性成分作為酪氨酸酶和色素生的一些活性成分作為酪氨酸酶和色素生成有效的抑制劑用于成有效的抑制劑用于LiBi

21、olLiBiol的的SynerlightSynerlight產(chǎn)品中。產(chǎn)品中。 3 3、美白劑的運用、美白劑的運用n獼猴桃中的黃酮類如槲皮素用于抑制黑素生成獼猴桃中的黃酮類如槲皮素用于抑制黑素生成n n煙酰胺除具有抑制酪氨酸酶作用外，還干擾黑素小體煙酰胺除具有抑制酪氨酸酶作用外，還干擾黑素小體向角質(zhì)構(gòu)成細胞的轉(zhuǎn)移，用于向角質(zhì)構(gòu)成細胞的轉(zhuǎn)移，用于MeladermMeladerm和和LucedermLucederm產(chǎn)產(chǎn)品中品中 3 3、美白劑的運用、美白劑的運用nRevitolRevitol公司的公司的Skin BrightenerSkin Brightener產(chǎn)品含有二乙酰波產(chǎn)品含有二乙酰波爾定堿

22、爾定堿diacetyl boldinediacetyl boldine可影響酪氨酸酶表達可影響酪氨酸酶表達程度。程度。 nBayerBayer公司的公司的MandresyMandresybutterfly treebutterfly tree含有兩含有兩種化合物四羥黃酮和毛蕊花糖苷，不僅抑制酪氨酸種化合物四羥黃酮和毛蕊花糖苷，不僅抑制酪氨酸酶和色素生成，而且經(jīng)過減少樹突的構(gòu)成影響角質(zhì)酶和色素生成，而且經(jīng)過減少樹突的構(gòu)成影響角質(zhì)構(gòu)成細胞和黑素細胞之間的相互作用。構(gòu)成細胞和黑素細胞之間的相互作用。 3 3、美白劑的運用、美白劑的運用nMeladermMeladerm和和TossekiTosseki

23、美白乳含有多種明顯抑制酪氨酸美白乳含有多種明顯抑制酪氨酸酶的提取物的混合物桑椹、甘草、槐屬和薔薇紅酶的提取物的混合物桑椹、甘草、槐屬和薔薇紅酰胺，還含有其他抗氧化劑或抗炎劑。酰胺，還含有其他抗氧化劑或抗炎劑。 nMeladermMeladerm制劑中的一種成分是制劑中的一種成分是TegoCosmoTegoCosmo，含有一種，含有一種胍化合物，影響酪氨酸酶活性。另一種成分是胍化合物，影響酪氨酸酶活性。另一種成分是Giga Giga whitewhite，含有阿爾卑斯山不同植物的提取物，能夠具，含有阿爾卑斯山不同植物的提取物，能夠具有酪氨酸酶抑制造用。有酪氨酸酶抑制造用。 3 3、美白劑的運用、美白劑的運用nLipotecLipotec公司在其美白產(chǎn)品中運用二甲基甲氧基苯并公司在其美白產(chǎn)品