赤芍化學(xué)成分沒食子酸丙酯在大鼠體內(nèi)代謝探究

1、赤芍化學(xué)成分沒食子酸丙酯在大鼠體內(nèi)代謝探究摘要為了闡明赤芍化學(xué)成分沒食子酸丙酯在大鼠體內(nèi)的代謝情況，歸屬赤芍代謝產(chǎn)物的原型成分來源，該 研究首次對沒食子酸丙酯進行了動物體內(nèi)代謝研究。灌胃給 予大鼠沒食子酸丙酯混懸液，收集尿液和血液，采用液質(zhì)聯(lián) 用技術(shù)檢測、鑒定沒食子酸丙酯在大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物。通 過對比沒食子酸丙酯和赤芍代謝產(chǎn)物的液質(zhì)數(shù)據(jù)，歸屬赤芍 代謝產(chǎn)物的來源。最終從大鼠含藥尿液中鑒定沒食子酸丙酯 代謝產(chǎn)物33個，從大鼠含藥血漿中鑒定沒食子酸丙酯代謝 產(chǎn)物20個，除去相同的代謝產(chǎn)物，共從大鼠的含藥尿液和 血漿中鑒定代謝產(chǎn)物37個，其中17個代謝產(chǎn)物和赤芍的代 謝產(chǎn)物相同。它們主要為沒食子酸

2、丙酯、沒食子酸丙二醇酯、 沒食子酸和焦沒食子酸的二相結(jié)合產(chǎn)物。37個代謝產(chǎn)物中 35個為沒食子酸丙酯的新代謝產(chǎn)物，推測22個為新化合物。 本研究明確了赤芍的代謝產(chǎn)物中有17個可以來自于沒食子 酸丙酯，為闡明赤芍代謝產(chǎn)物的來源及沒食子酸丙酯在體內(nèi) 的代謝途徑奠定基礎(chǔ)，并有助于尋找沒食子酸丙酯在體內(nèi)的 顯效形式。關(guān)鍵詞沒食子酸丙酯；代謝產(chǎn)物；代謝途徑；液質(zhì)聯(lián)用；赤芍；顯效形式收稿日期2013-05-28基金項目國家自然科學(xué)基金重點項目(30830120)； 中國博士后科學(xué)基金項目(20080430293)通信作者蔡少青，tel/fax： (010) 82801693, e-mail: sqcai；

3、 徐風，tel/fax： (010) 82802534, e-mail： xufeng_pharm163 com作者簡介梁靜，博士，主要從事天然藥物的體內(nèi)代 謝研究，e-mail： 1 jingbjmu. edu. cn沒食子酸丙酯，是常用中藥赤芍的有效成分之一 1。 筆者前期對赤芍的體內(nèi)代謝進行了較為系統(tǒng)的研究，從灌胃 赤芍后的大鼠尿液和血漿中共鑒定出15個吸收成分和90個 代謝產(chǎn)物，推測其中31個代謝產(chǎn)物可能來自于赤芍中的沒 食子酸類成分2。沒食子酸丙酯最早由我國學(xué)者對赤芍有 效成分沒食子酸進行結(jié)構(gòu)修飾而得到，較沒食子酸具有更強 的生物效應(yīng)3。其具有抗氧化作用4,抗血小板聚集作用 5,對大

4、鼠缺血再灌注時心肌線粒體功能具有保護作用 3,同時有報道稱沒食子酸丙酯可改善荷瘤鼠血液凝固狀 態(tài)和血小板功能而實現(xiàn)其抗腫瘤作用6。nakagawa y等認 為肝細胞可將沒食子酸丙酯代謝為沒食子酸、4-0-甲基-沒 食子酸、沒食子酸二聚體7。葉藤芝等認為在人工胃、腸 液中沒食子酸丙酯穩(wěn)定，在小鼠肝微粒體液中代謝明顯8。 進行沒食子酸丙酯的體內(nèi)代謝研究有助于闡明其代謝產(chǎn)物 和代謝途徑，進而揭示它在體內(nèi)的存在形式，這對于確定沒 食子酸丙酯的體內(nèi)顯效形式及藥理作用機制，對于預(yù)測潛在 的藥物相互作用具有重要意義。1材料島津shimadzu lc-ms-it-tof液質(zhì)聯(lián)用儀：由2個 lc-20ad輸液泵

5、、1個lc-20ab輸液泵、cbm-20a系統(tǒng)控制器、 脫氣單元dgu-20a3.可制冷自動進樣器sil-20ac.柱溫箱 ct0-20a.二極管陣列檢測器spd-m20a. esi離子源、離子 阱-飛行時間質(zhì)譜系統(tǒng)等模塊構(gòu)成。數(shù)據(jù)的采集和處理采用 shimadzu 公司的 lcmssolution version 3. 60. 361 軟件、分 子式和元素組成預(yù)測采用formula predictor和accurate mass calculator 軟件。乙睛（hplc級，美國fisher公司）；甲酸（hplc級， mreda technology）,甲醇（色譜純，天津大茂化工廠），去 離

6、子水（18.2mq,經(jīng)m訂li-q純水凈化系統(tǒng)純化）,cmc-na （分析純，科貿(mào)化學(xué)試劑有限公司）。取血管（3.8%枸椽酸 鈉1 ： 4,河北鑫樂科技有限公司）。沒食子酸丙酯（批號f20090707）和沒食子酸甲酯（批 號f20110318）均購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司；沒食子 酸（批號20110905）購自上海展舒化學(xué)科技有限公司；3-0- 甲基-沒食子酸（批號00013562-023）與沒食子酸乙酯（批 號wzgyc-0g）均購自百靈威科技有限公司。sd大鼠，雄性，體重250300 g,購于北京大學(xué)醫(yī)學(xué) 部動物科學(xué)部。所有動物實驗均得到北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部倫理委 員會的許可，許可證號la20

7、11-058o2方法2. 1沒食子酸丙酯溶液配制將沒食子酸丙酯混懸于 0. 5% cmc-na溶液中，使用前再次渦旋混勻。2.2生物樣品的收集與處理 把12只大鼠隨機分為空白 組和給藥組，每組6只大鼠，分組后即放入代謝籠中進行飼 養(yǎng)，先適應(yīng)7d。之后灌胃給藥3d,每天1次，劑量為500 mg kg-1大鼠體重，空白組給同樣體積的0. 5% cmc-na溶液, 給藥期間正常給水給食。第1次和第2次給藥后收集24 h內(nèi)的尿液，每天收集 之后置-30 °c冰箱保存，最終將收集到的尿液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 在50 °c濃縮至干，取其中1.00 g加4 ml甲醇超聲提取30 min, 5 0

8、00 r min-1 離心 15 min,取上清液，過 0. 45 p m 濾膜，待液質(zhì)分析。在第3次給藥后，分別在給藥后0.5, 1, 1.5 h取2只 大鼠，腹腔注射水合氯醛麻醉，心臟穿刺取血，將所取全血 于3 000 r min-1離心15 min,取上清液，從中取5 ml, 加20 ml （4倍量）甲醇超聲20 min, 5 000 r min-1離心 15 min去除蛋白，取上清液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在40 °c濃縮至 干，加5ml甲醇過0.45 u m濾膜，用氮氣吹干，加200 u l甲醇超聲30 min, 5 000 r min-1離心15 min,取上清液 以備液質(zhì)分析。2

9、.3液質(zhì)分析條件hplc檢測條件：phenomenex gemini c18 色譜柱（4. 60 mmx250 mm, 5 u m）； 柱溫35 °c；進樣體積5 pl；流動相a-0. 1%甲酸，b-乙睛; 流速1. 00 ml min-1,分流為0. 20 ml min-1后進入質(zhì)譜; 洗脫梯度 012 min, 0%b； 1233 min, 08%b； 3337. 5 min, 8% b； 37. 552. 5 min, 8%12% b； 52. 582. 5 min, 12%25%； 82. 5105 min, 25%60% b； 105120 min, 60%100%bo質(zhì)譜

10、檢測條件為esi離子源；msims3檢測范圍（m/z） 為501 000；離子累積時間，2030 ms；霧化氣（氮氣） 流速，1.5lmin-1；曲型脫溶劑管和加熱塊溫度，200 °c； cid能量50%；檢測器電壓，1.70kv；干燥氣（氮氣）壓力， 98.0 kpa；檢測模式，正、負離子切換檢測。3結(jié)果3. 1對照品質(zhì)譜裂解特征為了鑒定沒食子酸丙酯的體 內(nèi)代謝產(chǎn)物，本研究通過質(zhì)譜技術(shù)研究對照品沒食子酸丙 酯、沒食子酸乙酯、沒食子酸甲酯、3-0-甲基-沒食子酸、 沒食子酸的質(zhì)譜裂解規(guī)律，并比較了同分異構(gòu)體沒食子酸甲 酯和3-0-甲基沒食子酸的質(zhì)譜裂解特征，發(fā)現(xiàn)二者的差異在 于：負離

11、子檢測模式下特征離子m/z 168. 00和m/z 124. 02 的相對豐度不同，沒食子酸甲酯特征離子m/z 124. 02的相 對豐度比m/z 16&00的相對豐度高，而3-0-甲基-沒食子酸 特征離子m/z 124. 02的相對豐度比m/z 168. 00的相對豐度 低。3-0-甲基沒食子酸的二級質(zhì)譜中，可以觀察到準分子離 子m-h-直接失去c02生成的m/z 139. 04離子，而沒食子 酸甲酯的二級質(zhì)譜中則無該離子出現(xiàn)。據(jù)此可以區(qū)分二者。3.2對照品紫外（uv）譜特征文獻報道沒食子酸類化 合物（沒食子酸、沒食子酸甲酯、五沒食子?；咸烟牵┰?215, 273 nm處顯示沒食子

12、酸骨架的特征吸收9。沒食子酸 的二相代謝產(chǎn)物沒食子酸硫酸酯的uv譜未發(fā)生明顯變化， 但沒食子酸脫竣基的代謝產(chǎn)物uv譜的215 nm吸收峰消失， 甲基化代謝產(chǎn)物270 run吸收峰紫移至255 nm10。作者利 用hplc-dad對沒食子酸丙酯、沒食子酸乙酯、沒食子酸甲 酯、3-0-甲基-沒食子酸、沒食子酸的uv譜進行研究，發(fā)現(xiàn) 他們的uv特征同上述文獻報道一致，也在215, 273 nm處顯示沒食子酸骨架的特征吸收。3. 3大鼠含藥血漿及尿液中沒食子酸丙酯代謝產(chǎn)物的分析鑒定采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，從灌胃沒食子酸丙酯的大鼠 尿液中鑒定代謝產(chǎn)物33個，從含藥血漿中鑒定代謝產(chǎn)物20 個，除去相同的代謝產(chǎn)物

13、，共鑒定37個沒食子酸丙酯代謝 產(chǎn)物（表1）。除沒食子酸、4-0-甲基-沒食子酸外，其他35 個代謝產(chǎn)物均為沒食子酸丙酯的新代謝產(chǎn)物。其中22個化 合物的各種可能的結(jié)構(gòu)在scifinder美國化學(xué)文摘數(shù)據(jù)庫中 均未能查到，因此推測這22個化合物為新化合物。這些代 謝產(chǎn)物的主要結(jié)構(gòu)類型有：沒食子酸丙酯的硫酸酯化、甲基 化和葡萄糖醛酸化產(chǎn)物，沒食子酸丙二醇酯的硫酸酯化產(chǎn) 物，沒食子酸的甲基化、硫酸酯化和葡萄糖醛酸化產(chǎn)物，焦 沒食子酸的甲基化、硫酸酯化和葡萄糖醛酸化產(chǎn)物，這些代 謝產(chǎn)物的發(fā)現(xiàn)有助于揭示沒食子酸丙酯在大鼠體內(nèi)的直接 顯效形式。各代謝產(chǎn)物的鑒定過程如下。ml, m2, m5, m6：在負

14、離子模式下，ml, m2, m5, m6的 準分子離子m-h-分別為 m/z 387. 092 6,387. 096 5,291. 016 4, m/z 291.017 2,預(yù)測其分子式表1大鼠含藥尿液和血 漿中沒食子酸丙酯代謝產(chǎn)物的液質(zhì)數(shù)據(jù)(負離子模式下)table 1 the lcms data obtained in negative ion detection mode (ni) for metabolites of propyl gallate in urine and plasma of rats注：1)新化合物；2)與赤芍代謝產(chǎn)物相同；+檢測到; - 未檢測到。分別為 c16h2

15、0011, c16h20011, c10h1208s, c10h1208s。 在二級質(zhì)譜圖中，可見它們分別通過丟失c6h806 (176. 02), c6h806 (176.02), s03 (79. 95), s03 (79. 95)中性片段而 得到的母核離子aglycon-h- ( m/z 211. 06),預(yù)測母核的 分子式為c10h1205,據(jù)此推測ml和m2為c10h1205的葡萄 糖醛酸結(jié)合物，m5和m6為c10h1205的硫酸結(jié)合物。母核離 子進一步裂解產(chǎn)生特征碎片離子m/z 169.01, m/z 125. 02, 與沒食子酸丙酯的裂解特征一致，據(jù)此確定ml和m2為沒食 子酸丙

16、酯葡萄糖醛酸昔，m5和m6為沒食子酸丙酯硫酸酯。此外，ml與m2為同分異構(gòu)體，二者質(zhì)譜裂解規(guī)律一致，但 在反相hplc ±的保留時間不同，根據(jù)clogp規(guī)律2,推測 保留時間相對比較大的ml (tr 85. 87 min)為沒食子酸丙酯 -3-0-葡萄糖醛酸昔(clogp-0. 179 579), m2 (tr 69. 592 min) 為沒食子酸-4-0-葡萄糖醛酸昔(clogp-0. 499 579)o m5和 m6為同分異構(gòu)體，二者質(zhì)譜裂解特征一致，根據(jù)clogp規(guī)律, 推測保留時間較大的m6 (tr 123.893 min)為沒食子酸丙酯 -3-0-硫酸酯(clogp 0.

17、485 721), m5 (tr 104. 357 min) 為沒食子酸丙酯-4-0-硫酸酯(clogpo. 415 721)om3和m4：在負離子一級質(zhì)譜圖中，m3和m4在m/z 401. 10處 顯示相同的準分子離子m-h-,預(yù)測它們的分子式為 c17h22011o在二級質(zhì)譜圖中，可觀察到準分子離子能丟失 c6h806 (176. 02)中性片段，推測二者為葡萄糖醛酸結(jié)合 物。經(jīng)與ml, m2母核的質(zhì)譜裂解特征比較，推測m3和m4 的母核為甲基化沒食子酸丙酯。同時根據(jù)clogp規(guī)律，最終 推測m3 (tr 75. 343 min)為4-0-甲基沒食子酸丙酯葡萄糖 醛酸昔(clogp-0.

18、499 579), m4 (tr 80. 833 min)為 3-0- 甲基沒食子酸丙酯葡萄糖醛酸昔(clogp-0. 179 579)om8, m9, m10：在負離子一級質(zhì)譜圖中，m8, m9, m10的準分子離子m-h-分別為 m/z 271.003 1, 277. 002 3, m/z 373. 079 4o在二級質(zhì)譜圖中，可觀察到準分子離子分別通 過丟失 s03 (79. 95), s03 (79. 95), c6h806(176. 02)中性片段得到相同的母核離子aglycon-h- (m/z 197. 04), 據(jù)此預(yù)測母核的分子式為c9h1005,推測母核可能為沒食子 酸乙酯或

19、二-0-甲基沒食子酸。在多級質(zhì)譜圖中，母核離子 進一步裂解產(chǎn)生特征碎片離子m/z 182. 02, 167. 00,與沒食 子酸乙酯的質(zhì)譜裂解特征不一致，從裂解規(guī)律可以判斷母核 為二-0-甲基沒食子酸。根據(jù)以上信息，推測m8和m9為二 -0-甲基沒食子酸硫酸酯，m10為二-0-甲基沒食子酸葡萄糖 醛酸昔。m12, m14, m15, m16：在負離子模式下，m12, m14, m15, m16 的準分子離子m-h-分別為 m/z 262. 986 3, 342. 942 4, m/z 359. 061 3, 359. 061 5o 它們分別通過丟失 s03 (79. 95), 2 個 s03

20、(79.95),c6h806 (176.02)和 c6h806 (176.02)中性片段產(chǎn)生相同的母核離子aglycon-h- (m/z 183. 03), 據(jù)此預(yù)測母核的分子式為c8h805o母核離子進一步裂解產(chǎn)生 特征碎片離子 m/z 183. 03, 168. 00, 124.02, 139. 04,與甲 基沒食子酸質(zhì)譜裂解特征一致，且m12的uv譜與4-0-甲基 沒食子酸的uv譜一致(圖1),根據(jù)文獻報道10,硫酸酯 化對化合物的uv譜沒有影響，因此可以判斷m12為4-0-甲 基沒食子酸硫酸酯。m14為4-0-甲基沒食子二酸硫酸酯。根 據(jù)文獻10和m15, m16的質(zhì)譜裂解特征，推測m

21、15和m16 為甲基化沒食子酸-葡萄糖醛酸昔，根據(jù)clogp規(guī)律，最終 推測m15 (tr 26. 888 min)為4-0-甲基-沒食子酸-葡萄糖 醛酸昔(clogp-1.593 48), m16 (tr 31.975 min)為 3-0- 甲基-沒食子酸-葡萄糖醛酸昔(clogp-1.493 48)oa. m12； b. 4-0-甲基沒食子酸。圖1 m12和4-0-甲基沒食子酸的紫外圖譜fig. 1 the uv spectra of m12 and 4-0-methylgallic acidm18, m19, m20, m21： m18, m19, m20 的準分子離子m-h- 分別為

22、m/z 345. 045 1, 345. 046 3, 248. 971 2, 248.971 1, 據(jù)此預(yù)測它們的分子式分別為c13h14011, c13h14011, c7h608s, c7h608so在多級質(zhì)譜圖中，它們顯示相同的母核 離子aglycon-h- ( m/z 169. 01),經(jīng)確認母核為沒食子酸, 根據(jù)它們的特征中性丟失，可以確定m18和m19為沒食子酸 葡萄糖醛酸昔，m20和m21為沒食子酸硫酸酯。根據(jù)clogp 規(guī)律，最終推測在反相hplc上具有較大保留時間(tr 27. 455 min)的m19為沒食子酸-3-0-葡萄糖醛酸昔(clogp-1. 728 59), m

23、18 (tr 18. 858 min)為沒食子酸酸-4-0-葡萄糖醛酸 昔(clogp-2. 048 59)om23, m24, m25：在負離子模式下，m23, m24, m25的準 分子離子m-h-分別為 m/z307. 010 6, 307. 010 5, 307. 0107, 預(yù)測它們的分子式為c10h1209s,經(jīng)丟失s03 (79. 95)中性片段產(chǎn)生母核離子aglycon-h- ( m/z 227. 056 2),母核 離子進一步丟失c3h6o,產(chǎn)生特征碎片離子m/z 169.01,根 據(jù)碎片離子m/z 169.01的元素組成可以確定其為沒食子酸, 根據(jù)以上信息確定母核離子為沒食

24、子酸丙二醇酯，結(jié)合特征 中性丟失，最終確定m23, m24, m25為沒食子酸丙二醇酯- 硫酸酯。m26和m28：在負離子模式下，m26和m28的準分子離子m-h-分別為m/z 204. 982 3, 301.055 2o在 二級質(zhì)譜圖中，可見它們分別通過丟失s03(79. 95)和c6h806(176. 02)中性片段產(chǎn)生相同的母核離子aglycon-h - (m/z 125. 02),推測母核的分子式為c6h603,判斷母核為焦沒食 子酸，最終推測m26為焦沒食子酸硫酸酯，m28為焦沒食子 酸葡萄糖醛酸昔。m37：在負離子一級質(zhì)譜圖中，m37在m/z 315. 073 2處 顯示準分子離子

25、m-h-,在二級質(zhì)譜圖中，可看到母核離子 m/z 139. 045 6 (元素組成：c7h803)和葡萄糖醛酸片段的 特征離子m/z 175. 028 2,說明該化合物為葡萄糖醛酸結(jié)合 物。母核離子通過丟失ch3游離基產(chǎn)生碎片離子m/z 124. 021 4,根據(jù)元素組成，可以判斷母核為甲基化焦沒食子酸。最 終推測m37為0-甲基焦沒食子酸葡萄糖醛酸昔。此外，采用與對照品或者參考文獻2中的液質(zhì)數(shù)據(jù)進 行對比的方法，對代謝產(chǎn)物m7, mil, m13, m17, m22, m27, m29m36進行了鑒定(表1)。3.4沒食子酸丙酯在大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物譜研究采用 液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，從大鼠含藥尿液和血

26、漿中共鑒定出37個沒 食子酸丙酯的代謝產(chǎn)物，發(fā)現(xiàn)主要的代謝反應(yīng)類型有：務(wù)基 化、脫竣、甲基化、硫酸酯化和葡萄糖醛酸化。根據(jù)代謝產(chǎn) 物的結(jié)構(gòu)特點及代謝反應(yīng)類型，推測沒食子酸丙酯在大鼠體 內(nèi)的代謝途徑（圖2）。圖2沒食子酸丙酯在大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物及代謝途徑fig.2 the metabolites and proposed metabolic pathways of propyl gallate in rats3. 5 通過對比沒食子 酸丙酯和赤芍的代謝產(chǎn)物，歸屬赤芍代謝產(chǎn)物的來源前期 作者推測赤芍代謝產(chǎn)物中有31個可能來自沒食子酸類成分2 。本研究鑒定了 37個沒食子酸丙酯的代謝產(chǎn)物，通過對 比

27、hplc保留時間以及多級質(zhì)譜數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)有17個和前期報 道的赤芍代謝產(chǎn)物相同（表1）。這表明，沒食子酸丙酯確實 是赤芍的這些代謝產(chǎn)物的原型成分之一。4討論在本研究中作者采用了 hplc-dad-esi-it-tof-msn技術(shù) 從復(fù)雜的生物樣品中篩選和鑒定沒食子酸丙酯的代謝產(chǎn)物， 該技術(shù)具有如下優(yōu)點：首先esi源質(zhì)譜適合檢測中高極性的 化合物（代謝產(chǎn)物的極性通常較大），且它是一種濃度型的 檢測器，因而可不受樣品量的影響，在藥物代謝分析中有很 好的應(yīng)用；同時it-tof復(fù)合型質(zhì)譜儀靈敏度好、分辨率高, 具有高達十級質(zhì)譜（ms10）的準確質(zhì)量測定功能，可以精確 測定各級離子的質(zhì)量數(shù)并推測元素組成，

28、為代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu) 鑒定提供方便。本研究共鑒定了沒食子酸丙酯的代謝產(chǎn)物37個，其中 17個代謝產(chǎn)物和作者前期報道的赤芍的代謝產(chǎn)物相同2。 這表明赤芍的31個可能來自于沒食子酸類成分的代謝產(chǎn)物 中，有17個可以來自于沒食子酸丙酯，而另外14個代謝產(chǎn) 物則可能來自于沒食子酸丙酯之外的其他沒食子酸類成分， 如沒食子酸、沒食子酸乙酯，或者以沒食子酸為基本單元的 可水解軟質(zhì)等。因此本研究結(jié)果為歸屬赤芍在大鼠體內(nèi)代謝 產(chǎn)物的原型成分來源提供了重要依據(jù)。藥物進入體內(nèi)后在各種代謝酶的作用下，產(chǎn)生各類結(jié)構(gòu) 形式的代謝產(chǎn)物。代謝產(chǎn)物中有些可能具有活性。它們到達 相應(yīng)的靶點后，進而發(fā)揮藥理作用，因此對藥物的體內(nèi)代謝

29、進行研究，有助于揭示藥物的體內(nèi)顯效形式，進而揭示其藥 效機制。本研究鑒定了沒食子酸丙酯的代謝產(chǎn)物37個，其 中新代謝產(chǎn)物35個，新化合物22個。這些代謝產(chǎn)物有可能 對沒食子酸丙酯的體內(nèi)藥理作用也有重要貢獻，其中m17（沒 食子酸）具有多種生物活性報道，可能為其顯效形式。本研究從大鼠血漿中檢測到了 20個代謝產(chǎn)物，從尿液 中則檢測到了 33個代謝產(chǎn)物，說明尿液更有利于代謝產(chǎn)物 的分析鑒定。此外，焦沒食子酸類代謝產(chǎn)物主要存在于尿液 中，在含藥血漿中幾乎不存在，據(jù)此，作者推測沒食子酸丙 酯的脫竣基反應(yīng)可能主要發(fā)生在沒食子酸丙酯及其代謝產(chǎn) 物隨血液循環(huán)最終進入腎臟之后的環(huán)節(jié)。本研究為闡明沒食 子酸丙酯

30、的體內(nèi)代謝途徑和顯效形式奠定了基礎(chǔ)，同時對其 安全用藥和藥理機制研究均具有一定參考價值。參考文獻1 阮金蘭，趙鐘祥，曾慶忠，等赤芍化學(xué)成分和藥理作用的研究進展j.中國藥理學(xué)通報，2003,19 (9)：965.2 liang j, xu f, zhang y z, et al. the profilingand identification of the absorbed constituents and metabolites of paeoniae radix rubra decoction in rat plasma and urine by the hplc-dad - esitt -

31、 tof-msn technique :a novel strategy for the systematicscreening and identification of absorbed constituents and metabolites from traditional chinese medicinesj. j pharm biomed anal, 2013, 83： 108.3 曾蝶，李元建.沒食子酸丙酯對大鼠缺血再灌注心肌線 粒體損傷的保護j.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2005,15 (14)：2139.4 garrido j, garrido e m, borges f.studi

32、es on the food additive propyl gallate :synthesis ，structural characterization, and evaluation of the antioxidant activityj. j chem educ, 2012,89 (1 )：130.5 金成贊丙酯注射液的安全性實驗d.延邊：延 邊大學(xué)，2007.6 胡素坤，李曉琳，王少君，等.赤芍801抗腫瘤作用的實驗研究j.中國醫(yī)藥學(xué)報，1990,5 (3)：22.7 nakagawa y, nakajima k, tayama s , etal. metabolism and c

33、ytotoxicity of propyl gallate in isolated rat hepatocytes： effects of a thiol reductant and an esterase inhibitor j mol pharmacol, 1995,47(5)：1021.8 葉蕨芝，蔡晶，徐偉，等.沒食子酸丙酯在大鼠體內(nèi)生物利用度的測定j.福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2008,18(3) ：27.9 王瑞.川赤芍化學(xué)成分與芍藥質(zhì)量控制方法研究 d.沈陽：沈陽藥科大學(xué)，2005.10 yan z, chen y, li t, et al. identificationof metab

34、olites of si-ni-san, a traditional chinese medicine formula, in rat plasma and urine using liquid chromatography/diodearraydetection/triple-quadrupolespectrometryj jchromatogr b： anal technol biomed life sci,2012,73：885.metabolite profiling of propyl gallate in rat plasma and urine byhplc-dad-esi-it

35、-tof-msn techniqueliang jing, xu feng, shang ming-ying, liu guang-xue, wang xuan, cai shao-qing(state key laboratory of natural and biomimetic drugs, school of pharmaceutical sciences,peking university, beijing 100191, china)abstract to make a clear understanding of the in vivo met abolism of propyl

36、 galla te in rats and det ermine the original compounds of the metabolites of paeoniae radix rubra (prr), the urine and plasma of the rats administrated with propyl gallate were collected, and then the hplc-dad-esi-it-tof-msn technique was applied to screen and identify the metabolites of propyl gallate from these bio-samples .by comparing the collected