A260A230A280的含義

1、A260/A280 和 A260/A230 的含義1. A260nm是核酸最高吸收峰的吸收波長(zhǎng) ，最佳測(cè)量值的范圍為 0.1 至 1.0 。 如果不在此范圍，稀釋或濃縮樣品，使之在此范圍內(nèi)；如果吸光 度小于 0.05 ，檢查是否存在操作因素（如移液不準(zhǔn)確，樣品內(nèi)有 懸浮物等）影響。DNA羊品的A260吸光度值是否>0.1。（請(qǐng)注意， 這個(gè)值跟儀器無(wú)關(guān)， 核酸的吸光度必需大于 0.1 ，其值才有效和可 靠，因?yàn)檠蚱分械碾s質(zhì)和顆粒這些不純物的干擾通常會(huì)對(duì)光有一 定吸收，其值 <0.1 ）； 朗伯比爾定律：A 吸光值I0 入射光強(qiáng)度I 投射光強(qiáng)度c 吸光物質(zhì)的摩爾濃度（ mol/L ）d

2、 光通過的液層厚度（ cm）e摩爾吸光系數(shù)（Lmol-1cm-1）2. A280nm 是蛋白和酚類物質(zhì)最高吸收峰的吸收波長(zhǎng) ，比值可進(jìn)行核酸羊品 純度評(píng)估：純DNA勺A260/A280比值為1.8，純RNA為2.0。如果 比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚類物質(zhì)的污染，需要純化 樣品。比值=1.5相當(dāng)于50%蛋白質(zhì)/DNA溶液3. A230nm是碳水化合物最高吸收峰的吸收波長(zhǎng) ，比值可進(jìn)行核酸樣品純度評(píng)估：純 DNA和RNA的A260/A230比值為2.5。若比值小于2.0 標(biāo)明樣品被碳水化合物(糖類) 、鹽類或有機(jī)溶劑污染，需要純化 樣品。A230產(chǎn)生負(fù)值主要是由于在很低 DNA濃度的溶液中

3、的一些 其他成分的干擾所導(dǎo)致的。在下一個(gè)測(cè)定中，需要降低樣品的稀 釋度，A230的負(fù)值會(huì)被校正。4. A320nm 或 A340nm為檢測(cè)溶液樣品的濁度和其他干擾因子。 該值應(yīng)該接近 0.0。如果不是，標(biāo)明溶液中有懸浮物，需要純化樣品。純樣品的A320 一般是 0。5. A260/A280 和 A260/A230是核酸純度的指示值，純度好的DNA在PH7-8.5下其比值應(yīng)該在2.0或2.5，A260/ A280的比值，用于評(píng)估樣品的純度， 因 為蛋白的吸收峰是280 nm。純凈的樣品比值大于1.8(DNA或 者2.0 ( RNA。如果比值低于1.8或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者 酚類物質(zhì)的影響

4、。A230 是多肽、芳香基團(tuán)、苯酚和一些碳?xì)浠衔锏奈舛龋?A230 表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物、多肽、苯酚等，較 純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0 °A280是蛋白質(zhì)的吸光度。2.純凈的DNA和RNA在 A260和A280都有吸收值，但以260最高。而核酸提取過程中最主要的污染物蛋白質(zhì)在 A280處有強(qiáng)烈的吸收 值，所以計(jì)算這兩個(gè)吸收峰的比值就可以確定核酸的純度。 DNA的 這個(gè)值一般是1.82.0,而RNA則是2.0。值得注意的是，這個(gè) 比值并不能很好的反應(yīng)出核酸的純度，簡(jiǎn)單來(lái)說寡聚核酸會(huì)造成 A260值升高，如果核酸有降解，則會(huì)導(dǎo)致 A260/A280值上升。另 外，如果A280值偏高，并不一定是蛋白污染。蛋白在 A280有吸 收值是因?yàn)槠浔奖彼岬劝被釟埢兴械谋江h(huán)的緣故,所 有含苯環(huán)的化合物都會(huì)在A280有吸收峰。所以如果A280升高雖 然有最有可能是蛋白污染,但也有可能是其他苯環(huán)物質(zhì)。如植物 DNA提取過程中的多酚類物質(zhì)污染。另外，如果要求高的話，我們 還會(huì)要求