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文檔簡介

1、環(huán)氧化酶2在食管癌中表達初步探究【關鍵詞】環(huán)氧化酶an initial study on cyclooxygenase 2 esophagusin esophagus cancerabstract : objective to research the cyclooxygenase 2 protein expression and its effect in the esophagus cancer. methods 34 cases of esophagus cancer specimens were examined the expression of cox 2 by immunohis

2、tochemical method and western blotting method. resuits the significant positive rates of cox 2 expression in esophagus cancer was 71%,but the significant positive expression in the adenocarcinoma and squamous carcinoma is not significant differencestatistics tes t showed that the age,gender,tissue d

3、ifferentiation,clinical stage(tnm) and node metastasis did not affect the cox 2 significant expression in esophagus cancer. conclusion the cox 2 protein significant positive expression may be closely associated with the occurrence,form and development of the esophagus cancer.keywords: cyclooxygenase

4、 2; esophagus squamous cancer; esophagus adenous cancer摘要:目的 研究 環(huán)氧化酶2 (cyclooxygenase 2, cox 2)在食管癌中的表達情況,探討其在食管癌發(fā)展中 作用。方法 應用 免疫組織化學方法和western blotting 方法檢測34例食管癌中cox 2的表達情況。結果cox 2 約在71%的食管癌中顯著表達,其中鱗癌及腺癌的顯著表達 之間無統(tǒng)計學顯著性差異。并且統(tǒng)計學檢驗表明腫瘤的臨床 病理特征中,年齡、性別、組織分化程度、臨床分期(tnm) 以及有無淋巴結轉(zhuǎn)移對食管癌中的cox 2的顯著表達無明 顯影響。結論

5、cox 2在食管癌中的表達顯著增高,臨床 意義尚未明確。論文代寫關鍵詞:環(huán)氧化酶2;食管磷癌;食管腺癌論文 代寫0引言流行病學資料研究表明,長期堅持服用非輜體類抗炎 藥(non steroidal anti inflammatory drugs, nsaids) 可使大腸癌的危險性降低40%50 % 1,使家族性腺瘤性 息肉病的癌變率和死亡率降低。nsaids作用機制在于抑制 環(huán)氧化酶 2(cyclooxygenase 2,cox 2)的活性2。臨 床及實驗研究表明,cox 2在機體大多數(shù)正常組織中無表 達,但在多種腫瘤組織中表達增高。國內(nèi)外已有學者開始研 究cox在食管癌中的表達意義。本實驗

6、旨在研究cox 2在 食管癌組織中的表達情況,并探討其與食管癌的發(fā)生、發(fā)展 與轉(zhuǎn)移的關系。1材料和方法1. 1材料 選自本院2001年8月2002年4月間手術 切除并經(jīng)病理檢查證實的食管癌組織標本34例,其中鱗癌 28例,腺癌6例。組織標本切除后于30min內(nèi)取癌組織一塊 立即置入液氮中速凍后儲存于-8(tc冰箱保存?zhèn)溆?,取遠離 癌組織(>5cm)的正常組織送病理檢查,另取正常組織一 小塊以上述方法保存。論文代寫1.2試劑羊抗人cox 2多克隆抗體(購于santa cruz公司,美國)spkit(購于zymed公司,美國),apes (sigma 公司)o trozol試劑(in

7、vitrogen公司),考馬斯亮藍g 250 染料(sigma公司),pvdf膜(德國羅氏公司)。1.3辣根過氧化酶標記的sp法即石蠟切片常規(guī)脫 蠟至水,3%過氧化氫 甲醇封閉5min, pbs漂洗后置檸檬酸 中,微波爐抗原修復5min, pbs漂洗后依次滴加一抗4*過 夜,二抗37 °c 15min,辣根酶標記的鏈霉卵白素工作液15min, pbs漂洗后dab顯色,自來水充分沖洗終止反應,蘇 木素復染,脫水,透明,封片。1.4對照及評估方法 以平滑肌細胞和血管內(nèi)皮細胞 為陽性對照,以pbs代替一抗作陰性對照。按以下腫瘤細胞 染色陽性率比例記分:為0計分為0,1%10%記分為1,11

8、% 50%記分為2, 51%80%記分為3, 81%100%記分為4。論 文代寫1. 5分級標準0 (無表達),14(弱表達),58(中 等表達),912(高度表達),512(顯著表達)。畢業(yè)論 文1. 6 western blotting雜交將組織制成勻漿,室溫 靜置lomin,離心后取下層酚氯仿相,提取蛋白質(zhì);用 bradford法測定蛋白質(zhì)濃度;將含等量蛋白質(zhì)的樣品與3x 加樣緩沖液以2 : 1的體積比混合,煮沸5min后上樣行sds 聚丙烯酰胺凝膠電泳,正常組織和癌組織同時上樣做對照, 同時點5 n 1 bio rad預染蛋白質(zhì)標準作為分子量參照,垂 直電泳分離蛋白質(zhì);將蛋白質(zhì)通過電轉(zhuǎn)

9、移轉(zhuǎn)至pvdf膜上; 以含5%脫脂奶粉的tbs t室溫封閉23h,山羊抗人c0x 2 多克隆抗體搖動過夜,辣根酶偶聯(lián)的兔抗山羊igg抗體, 室溫輕搖23h。畢業(yè)論文2結果cox 2的陽性染色主要是胞漿染色,其主要表達于癌 組織中,而正常組織中除平滑肌細胞、血管內(nèi)皮細胞外基本 無表達,以平滑肌細胞、血管內(nèi)皮細胞的cox 2表達為對 照標準。cox 2在約70%的食管癌中顯著表達,無統(tǒng)計學檢驗 顯著性差異。并且統(tǒng)計學檢驗表明腫瘤的臨床病理特征中, 年齡、性別、組織分化程度、臨床分期(tnm)、有無淋巴結 轉(zhuǎn)移對食管癌中的cox 2的顯著表達無明顯影響,見表 1、2o論文代寫表1 cox 2在食管癌

10、中的表達情況(略)western blot檢測cox 2在腫瘤組織中和正常組織 中的表達情況,見圖1。其中15泳道為鱗癌,第6泳道為腺癌的表達情況, 每一癌組織泳道配一正常組織泳道對照。圖中可見到 c0x 2在食管癌組織中明顯表達,而正常組織中則無表達或 輕微表達,western blotting檢測到cox 2的表達情況和 免疫組化標本中的表達情況基本一致。畢業(yè)論文表2食管癌cox 2顯著表達與臨床特征的關系(略) 圖1 western blot檢測食管癌組織和正常組織cox 2 蛋白表達(略)3討論環(huán)氧化酶(cyclooxygenase,c0x)是分解花生四烯酸 (aa)、生成各種內(nèi)源性前

11、列腺素(pgs)過程中重要的限速酶。 目前認為c0x有兩種類型:cox 1和cox 2o前者為結 構型cox,在多數(shù)組織細胞中持續(xù)低濃度表達,并參與維持 機體正常的生理功能;后者為可誘生型cox,在正常生理狀態(tài) 下多數(shù)組織內(nèi)檢測不到,而當細胞受到炎癥等刺激后便開始 表達合成。近年來研究表明,cox 2與一些腫瘤的發(fā)生、 發(fā)展和轉(zhuǎn)移有關3。c0x 2在腫瘤中的意義首先明確于結腸腫瘤和直腸 腫瘤。隨后的研究逐漸發(fā)現(xiàn)在全身其他部位的腫瘤中也有不 同程度的表達。目前多數(shù)學者認為,cox 2的過度表達與腫 瘤特別是消化系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切關系4,5。本研究表明cox 2在食管癌中顯著表達,其中鱗癌

12、 及腺癌的顯著表達分別為71%與67%,而癌旁組織中則無表 達或輕微表達,這與同類研究結果一致,提示cox 2表達 異常可能是食管癌發(fā)病過程中發(fā)生的重要分子改變。本研究 提示cox 2的表達程度與食管癌分化程度相關性無統(tǒng)計學 差異,但有文獻提示食管癌的分化程度越高,其cox 2表 達越強6,認為cox 2的表達可能主要存在于較為成熟 的腫瘤細胞,其差異可能由于本組低分化食管癌例數(shù)太少, 影響其統(tǒng)計學檢驗。發(fā)生淋巴結轉(zhuǎn)移的患者cox 2的染色 分數(shù)為5. 700±0. 868,而在無淋巴結轉(zhuǎn)移病例中cox 2的 染色分數(shù)為5. 571±0. 912,統(tǒng)計 分析 不支持cox

13、2的表 達程度與有無淋巴結轉(zhuǎn)移間存在相關性,但國內(nèi)有關cox 2 表達與淋巴結轉(zhuǎn)移的關系報道不一,具體原因尚不清楚,仍 需進一步研究。雖然我們研究發(fā)現(xiàn)臨床分期對食管癌中的 cox 2的顯著表達無明顯影響,但shamma等7對日本 食管癌患者研究發(fā)現(xiàn):cox 2在食管鱗狀上皮重度異型增生 的組織中表達最強,依次強于原位食管癌和浸潤性食管癌, 這可能與腫瘤基因調(diào)控的復雜性以及地區(qū)差異等多方面因 素有關。關于cox 2與食管癌發(fā)生的階段,仍需進一步探 討,以便明確cox 2抑制劑可否對食管癌前病變起阻斷作 用。本實驗研究結果表明cox 2在食管癌中表達顯著升 高,其在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中可能發(fā)揮著重要

14、作用,因 此cox 2抑制劑可能通過抑制cox 2的活性來發(fā)揮其抗食 管癌的作用。其進一步研究將為腫瘤的化學預防和靶向治 療提供新的策略與途徑?!緟⒖嘉墨I】1 thun mj. nsaid use and decreased risk of gastrointestinal cancers j gastro enterol clin north am,1996, 25 (2):33334&2 marx j. anti inflammatories inhibit cancer growth buthowjscience, 2001,291(5504):581582.3 dannenbe

15、rg aj, altorki nk, boyle jo, et al. cyclooxygenase 2: a pharmacological target for the prevention of cancerj lancet oncol,2001, 2 (9): 544 551.4 fosslien e. molecular pathology of cyclooxygenase 2 in neoplasiaj ann clin lab sci, 2000,30 (1): 3 21.5 marks f, furstenberger g. cancerchemoprevention through interruption of multi stage carcinogenesis: the lessons learnt by comparing mouse skin carcinogenesis and human large bowel cancerj. eur j cancer, 200

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