環(huán)氧化酶2在食管癌中表達初步探究

1、環(huán)氧化酶2在食管癌中表達初步探究【關鍵詞】環(huán)氧化酶an initial study on cyclooxygenase 2 esophagusin esophagus cancerabstract : objective to research the cyclooxygenase 2 protein expression and its effect in the esophagus cancer. methods 34 cases of esophagus cancer specimens were examined the expression of cox 2 by immunohis

2、tochemical method and western blotting method. resuits the significant positive rates of cox 2 expression in esophagus cancer was 71%,but the significant positive expression in the adenocarcinoma and squamous carcinoma is not significant differencestatistics tes t showed that the age,gender,tissue d

3、ifferentiation,clinical stage(tnm) and node metastasis did not affect the cox 2 significant expression in esophagus cancer. conclusion the cox 2 protein significant positive expression may be closely associated with the occurrence,form and development of the esophagus cancer.keywords： cyclooxygenase

4、 2； esophagus squamous cancer； esophagus adenous cancer摘要：目的 研究 環(huán)氧化酶2 (cyclooxygenase 2, cox 2)在食管癌中的表達情況，探討其在食管癌發(fā)展中 作用。方法 應用 免疫組織化學方法和western blotting 方法檢測34例食管癌中cox 2的表達情況。結果cox 2 約在71%的食管癌中顯著表達，其中鱗癌及腺癌的顯著表達 之間無統(tǒng)計學顯著性差異。并且統(tǒng)計學檢驗表明腫瘤的臨床 病理特征中，年齡、性別、組織分化程度、臨床分期(tnm) 以及有無淋巴結轉(zhuǎn)移對食管癌中的cox 2的顯著表達無明 顯影響。結論

5、cox 2在食管癌中的表達顯著增高，臨床 意義尚未明確。論文代寫關鍵詞：環(huán)氧化酶2；食管磷癌；食管腺癌論文 代寫0引言流行病學資料研究表明，長期堅持服用非輜體類抗炎 藥(non steroidal anti inflammatory drugs, nsaids) 可使大腸癌的危險性降低40%50 % 1，使家族性腺瘤性 息肉病的癌變率和死亡率降低。nsaids作用機制在于抑制 環(huán)氧化酶 2（cyclooxygenase 2,cox 2）的活性2。臨 床及實驗研究表明，cox 2在機體大多數(shù)正常組織中無表 達，但在多種腫瘤組織中表達增高。國內(nèi)外已有學者開始研 究cox在食管癌中的表達意義。本實驗

6、旨在研究cox 2在 食管癌組織中的表達情況，并探討其與食管癌的發(fā)生、發(fā)展 與轉(zhuǎn)移的關系。1材料和方法1. 1材料 選自本院2001年8月2002年4月間手術 切除并經(jīng)病理檢查證實的食管癌組織標本34例，其中鱗癌 28例，腺癌6例。組織標本切除后于30min內(nèi)取癌組織一塊 立即置入液氮中速凍后儲存于-8（tc冰箱保存?zhèn)溆?，取遠離 癌組織（&gt；5cm）的正常組織送病理檢查，另取正常組織一 小塊以上述方法保存。論文代寫1.2試劑羊抗人cox 2多克隆抗體（購于santa cruz公司，美國）spkit（購于zymed公司，美國）,apes （sigma 公司）o trozol試劑（in

7、vitrogen公司），考馬斯亮藍g 250 染料（sigma公司），pvdf膜（德國羅氏公司）。1.3辣根過氧化酶標記的sp法即石蠟切片常規(guī)脫 蠟至水，3%過氧化氫 甲醇封閉5min, pbs漂洗后置檸檬酸 中，微波爐抗原修復5min, pbs漂洗后依次滴加一抗4*過 夜，二抗37 °c 15min,辣根酶標記的鏈霉卵白素工作液15min, pbs漂洗后dab顯色，自來水充分沖洗終止反應，蘇 木素復染，脫水，透明，封片。1.4對照及評估方法 以平滑肌細胞和血管內(nèi)皮細胞 為陽性對照，以pbs代替一抗作陰性對照。按以下腫瘤細胞 染色陽性率比例記分：為0計分為0,1%10%記分為1,11

8、% 50%記分為2, 51%80%記分為3, 81%100%記分為4。論 文代寫1. 5分級標準0 （無表達），14（弱表達），58（中 等表達），912（高度表達），512（顯著表達）。畢業(yè)論 文1. 6 western blotting雜交將組織制成勻漿，室溫 靜置lomin,離心后取下層酚氯仿相，提取蛋白質(zhì)；用 bradford法測定蛋白質(zhì)濃度；將含等量蛋白質(zhì)的樣品與3x 加樣緩沖液以2 : 1的體積比混合，煮沸5min后上樣行sds 聚丙烯酰胺凝膠電泳，正常組織和癌組織同時上樣做對照， 同時點5 n 1 bio rad預染蛋白質(zhì)標準作為分子量參照，垂 直電泳分離蛋白質(zhì)；將蛋白質(zhì)通過電轉(zhuǎn)

9、移轉(zhuǎn)至pvdf膜上； 以含5%脫脂奶粉的tbs t室溫封閉23h,山羊抗人c0x 2 多克隆抗體搖動過夜，辣根酶偶聯(lián)的兔抗山羊igg抗體, 室溫輕搖23h。畢業(yè)論文2結果cox 2的陽性染色主要是胞漿染色，其主要表達于癌 組織中，而正常組織中除平滑肌細胞、血管內(nèi)皮細胞外基本 無表達，以平滑肌細胞、血管內(nèi)皮細胞的cox 2表達為對 照標準。cox 2在約70%的食管癌中顯著表達，無統(tǒng)計學檢驗 顯著性差異。并且統(tǒng)計學檢驗表明腫瘤的臨床病理特征中， 年齡、性別、組織分化程度、臨床分期（tnm）、有無淋巴結 轉(zhuǎn)移對食管癌中的cox 2的顯著表達無明顯影響，見表 1、2o論文代寫表1 cox 2在食管癌

10、中的表達情況（略）western blot檢測cox 2在腫瘤組織中和正常組織 中的表達情況，見圖1。其中15泳道為鱗癌，第6泳道為腺癌的表達情況, 每一癌組織泳道配一正常組織泳道對照。圖中可見到 c0x 2在食管癌組織中明顯表達，而正常組織中則無表達或 輕微表達，western blotting檢測到cox 2的表達情況和 免疫組化標本中的表達情況基本一致。畢業(yè)論文表2食管癌cox 2顯著表達與臨床特征的關系(略) 圖1 western blot檢測食管癌組織和正常組織cox 2 蛋白表達(略)3討論環(huán)氧化酶(cyclooxygenase,c0x)是分解花生四烯酸 (aa)、生成各種內(nèi)源性前

11、列腺素(pgs)過程中重要的限速酶。 目前認為c0x有兩種類型：cox 1和cox 2o前者為結 構型cox,在多數(shù)組織細胞中持續(xù)低濃度表達，并參與維持 機體正常的生理功能；后者為可誘生型cox,在正常生理狀態(tài) 下多數(shù)組織內(nèi)檢測不到，而當細胞受到炎癥等刺激后便開始 表達合成。近年來研究表明,cox 2與一些腫瘤的發(fā)生、 發(fā)展和轉(zhuǎn)移有關3。c0x 2在腫瘤中的意義首先明確于結腸腫瘤和直腸 腫瘤。隨后的研究逐漸發(fā)現(xiàn)在全身其他部位的腫瘤中也有不 同程度的表達。目前多數(shù)學者認為，cox 2的過度表達與腫 瘤特別是消化系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切關系4,5。本研究表明cox 2在食管癌中顯著表達，其中鱗癌

12、 及腺癌的顯著表達分別為71%與67%,而癌旁組織中則無表 達或輕微表達，這與同類研究結果一致，提示cox 2表達 異常可能是食管癌發(fā)病過程中發(fā)生的重要分子改變。本研究 提示cox 2的表達程度與食管癌分化程度相關性無統(tǒng)計學 差異，但有文獻提示食管癌的分化程度越高，其cox 2表 達越強6,認為cox 2的表達可能主要存在于較為成熟 的腫瘤細胞，其差異可能由于本組低分化食管癌例數(shù)太少， 影響其統(tǒng)計學檢驗。發(fā)生淋巴結轉(zhuǎn)移的患者cox 2的染色 分數(shù)為5. 700±0. 868,而在無淋巴結轉(zhuǎn)移病例中cox 2的 染色分數(shù)為5. 571±0. 912,統(tǒng)計 分析 不支持cox

13、2的表 達程度與有無淋巴結轉(zhuǎn)移間存在相關性，但國內(nèi)有關cox 2 表達與淋巴結轉(zhuǎn)移的關系報道不一，具體原因尚不清楚，仍 需進一步研究。雖然我們研究發(fā)現(xiàn)臨床分期對食管癌中的 cox 2的顯著表達無明顯影響，但shamma等7對日本 食管癌患者研究發(fā)現(xiàn)：cox 2在食管鱗狀上皮重度異型增生 的組織中表達最強，依次強于原位食管癌和浸潤性食管癌， 這可能與腫瘤基因調(diào)控的復雜性以及地區(qū)差異等多方面因 素有關。關于cox 2與食管癌發(fā)生的階段，仍需進一步探 討，以便明確cox 2抑制劑可否對食管癌前病變起阻斷作 用。本實驗研究結果表明cox 2在食管癌中表達顯著升 高，其在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中可能發(fā)揮著重要

14、作用，因 此cox 2抑制劑可能通過抑制cox 2的活性來發(fā)揮其抗食 管癌的作用。其進一步研究將為腫瘤的化學預防和靶向治 療提供新的策略與途徑?！緟⒖嘉墨I】1 thun mj. nsaid use and decreased risk of gastrointestinal cancers j gastro enterol clin north am,1996, 25 (2):33334&2 marx j. anti inflammatories inhibit cancer growth buthowjscience, 2001,291(5504):581582.3 dannenbe

15、rg aj, altorki nk, boyle jo, et al. cyclooxygenase 2： a pharmacological target for the prevention of cancerj lancet oncol,2001, 2 (9): 544 551.4 fosslien e. molecular pathology of cyclooxygenase 2 in neoplasiaj ann clin lab sci, 2000,30 (1)： 3 21.5 marks f, furstenberger g. cancerchemoprevention through interruption of multi stage carcinogenesis： the lessons learnt by comparing mouse skin carcinogenesis and human large bowel cancerj. eur j cancer, 200