計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查驗證方案

1、計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查驗證方案1. 驗證目的:細菌、孫菌及酵母菌計數(shù)用的培養(yǎng)基應(yīng)進行培養(yǎng)基的適用性檢杳。本次驗證的目的是確 認營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基適合細菌、霉菌及酵母菌數(shù)測定。2. 參照標準：2010版中國藥典二部附錄x門微牛物限度檢查法。3. 驗證項營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)皐和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查。4. 驗證小組人員及職責(zé)：4.1驗證小組人員：小組人員職務(wù)姓名所在部門職務(wù)組長質(zhì)量部經(jīng)理組員質(zhì)量部組員質(zhì)量部檢驗員4.2驗證人員職責(zé)及要求4.2.1按驗證方案及相關(guān)文件實施驗證。4.2.2認真觀察并做好驗證原始記錄。4.2.3對實施驗證的結(jié)果負責(zé)。5. 合格標準：被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)

2、不小于對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的70%,且菌 落形態(tài)大小與対照培養(yǎng)基上的菌落一致。6. 試驗材料：6丄被驗證產(chǎn)品：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基6.2.儀器設(shè)備：6.2.1. *蒸汽滅菌器6.2.2.*凈化工作臺6.23* 爭彳匕扌犁臺6.2.4. *霉菌培養(yǎng)箱（2328°c）6 2.5. *電熱恒溫培養(yǎng)箱（3035°c）6.2.6. *遠紅外烘箱627 *電熱鼓風(fēng)干燥箱6 ? q*63驗證用培養(yǎng)基名稱生產(chǎn)廠家批號營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基改良馬丁培養(yǎng)基改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂對照培養(yǎng)基玫瑰紅鈉瓊脂對照培養(yǎng)基酵母浸出粉豚葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基6.4.驗證

3、用菌株:（第代）驗證菌株培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時間（小時）人腸埃希菌營養(yǎng)肉湯3035 °c1824金黃色葡萄球菌營養(yǎng)肉湯3035 °c1824枯草芽他桿菌營養(yǎng)肉湯3035 °c1824白色念珠菌改良馬丁培養(yǎng)基2328 °c2448黑曲霉菌改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基2328 °c57 （天）7菌液制備7.1. 接種人腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌的新鮮培養(yǎng)物 至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)慕或 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基屮，培養(yǎng)1824小時；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基 或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2448小時。上述培養(yǎng)物川0.9%無菌氯化鈉溶液制成每 lml含菌

4、數(shù)為50loocfu的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng) 基中，培養(yǎng)57天，加入35ml含0.05% （v/v）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶 液，將抱子洗脫。然后，用適宜方法吸出抱了懸液至無菌試管內(nèi)，用含0.05% （v/v）聚 山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成每lml含抱了數(shù)50loocfu的也了懸液。菌懸液在室溫卜放置應(yīng)在2小時內(nèi)使川，若保存在28°c可在24小時內(nèi)使用。黑 曲霉砲子懸液可保存在28°c,在驗證過的貯存期內(nèi)使用。8.菌液計數(shù)：（每種菌液接種2個平皿）人腸埃希菌、金黃色葡萄球菌與枯草芽抱桿菌分別収lml接種至營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，

5、置 3035°c培養(yǎng)48小時；白色念珠菌、黑曲每分別取1ml接種至玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，置23 28°c培養(yǎng)72小時。菌落計數(shù)結(jié)果(2個平1111計數(shù)取平均值)見下表菌落計數(shù)結(jié)來(cfu / ml)試驗次數(shù)io-'稀釋計稀釋ict?稀釋123123123大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽他桿菌口色念珠菌黑曲霉9.適用性檢杳:取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌各50loocfu,分別注入無菌平皿屮, 立即傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，置3035°c培 養(yǎng)48小時,計數(shù);取白色念珠菌、黑曲霉各50loocfu,分別注入無菌平皿中，立即傾 注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，置232lc培養(yǎng)72 小時，計數(shù)；取白色念珠菌50loocfu,注入無菌平皿中，立即傾注酵母浸出粉j東葡萄糖 瓊脂培養(yǎng)基，平行制備2個平血，混勻，凝固，g 2328°c培養(yǎng)72小時，計數(shù)。同時, 用相應(yīng)的対照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進行上述試驗。9.2.結(jié)果見附表10.結(jié)論計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢杳驗證記錄驗證菌株平皿號供試品組cfu / ml對照培養(yǎng)基組cfu / ml回收率應(yīng) $70%大腸埃希菌（培養(yǎng)3天計數(shù)）12一平均值金黃色葡萄球