正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化洋金花總生物堿提取工藝探究

1、正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化洋金花總生物堿提取工藝探究作者：許海玉，郁建平，譚艾娟，梅興國(guó)【關(guān)鍵詞】總生物堿；提取；正交試驗(yàn)摘要目的篩選洋金花總生物堿的最佳提取工藝條 件。方法采用l9 (3) 4正交試驗(yàn)，用滴定法測(cè)定總生物堿 含量，以總生物堿浸膏重和總生物堿含量為指標(biāo)。結(jié)果 洋 金花總生物堿的最佳提取工藝為，使用80%的酸水乙醇，酸 水ph值為3,提取3次，使用相當(dāng)于藥材量4倍的溶劑量。結(jié) 論優(yōu)選的提取條件效率高，可增加洋金花的利用率。關(guān)鍵詞總生物堿；提??；正交試驗(yàn)extracting technique of total alkaloids from flos datura optimized by o

2、rthogonal designabstract objective to study and select the optimal extracting technique of total alkaloids from flos datura .methods the orthogonal design were used. results the results showed that the optimal extracting technique of total alkaloids from flos datura was that 80 perce nt sulf-alcohol

3、, a nd ph of sulf-water was 3, a nd the extracting time was 3, and the volume of solvent was 4 times as much as the amount of crude drug. conclusion the methods has high efficiency for extracting and increased the availability of flos dat ura.key words total alkaloids； extraction； orthogonal tes t洋金

4、花為茄科植物白曼陀羅（datura metel l）的干燥 花，又稱為南洋金花。而同科同屬植物毛曼陀羅（datura innoxia m訂1）的干燥花稱北洋金花。前者主產(chǎn)于江蘇、福 建、廣東等地。洋金花具有平喘止咳、鎮(zhèn)痛、解痙的功效1。 洋金花中含生物堿0.3%0.43%,其中東萇蓉堿約占85%, 萇著堿和阿托品共占約15%o游離生物堿類及其鹽一般都能 溶于乙醇，故選用乙醇作為溶劑2。有效利用洋金花藥材 資源，控制中藥制劑質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)以溶劑濃度a、溶劑倍量 b、提取次數(shù)c、ph值d為考察因素，每個(gè)因素設(shè)置3個(gè)水 平，以總生物堿浸膏和總生物堿含量為定量指標(biāo)，采用正交 設(shè)計(jì)優(yōu)選酸性乙醇提取條件，為

5、制訂科學(xué)、經(jīng)濟(jì)的洋金花總 生物堿制備工藝提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料與方法1. 1材料洋金花（產(chǎn)地湖北，生產(chǎn)批號(hào)05100101,調(diào)出 單位北京普生霖藥業(yè)有限公司）。乙醇、石油瞇、氨水、氯 仿、硫酸滴定液（0. olmol/l）.甲基紅試液、氫氧化鈉（0. 02 mol/l)溶液、烘箱、滴定管(定制)。1. 2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1提取條件的選擇為了優(yōu)化提取工藝，根據(jù)藥材提 取過(guò)程中的影響因素，考慮乙醇濃度、溶劑倍量、提取次數(shù) 及ph值4個(gè)因素，選擇l9(3)4正交表實(shí)施實(shí)驗(yàn)，見(jiàn)表1表 1實(shí)驗(yàn)因素和水平把洋金花粉碎過(guò)40目篩，稱取洋金花粉 末10 g,共9份，按照正交設(shè)計(jì)方案，進(jìn)行l(wèi)9 (3) 4正交 實(shí)

6、驗(yàn)，提取液放置過(guò)夜，過(guò)濾，合并濾液，回收乙醇，濃縮 至干，得浸膏。1. 2. 2總生物堿的純化將上述醇浸膏各加水40 ml,加 熱溶解后并調(diào)ph為23,過(guò)濾，用5 ml的石油醯脫脂2次, 用氨試液調(diào)ph值至10,依次用40 ml、30 ml、30 ml的氯 仿萃取3次，回收氯仿得總生物堿浸膏，在烘箱干燥1天, 在干燥器冷卻15 min,稱重1。結(jié)果見(jiàn)表2。表2 l9 (3) 4正交試驗(yàn)表及試驗(yàn)結(jié)果1.2.3總生物堿的含量測(cè)定(1)樣品液的制備：將上 面樣品的總生物堿浸膏分別用95%乙醇溶解至相當(dāng)于每1 ml 含0.4 g洋金花，搖勻后精密吸取20 ml,水浴蒸干，殘留 物加中性乙醇5mlo (

7、2)總生物堿的測(cè)定2：在上述(1) 的樣品液精密加入硫酸滴定液(0.01 mol/l) 10 ml,水10ml 與甲基紅試液6滴，用氫氧化鈉(0.02 mol/l)溶液滴定黃 色，以無(wú)水乙醇按同樣的方法處理作空白，按下式計(jì)總生物 堿的含量，結(jié)果見(jiàn)表2中總生物堿含量。x%=c (vo-vi) x303x100%/10c：氫氧化鈉滴定液摩爾濃度v0：空白消耗氫氧化鈉滴定液毫升數(shù)vi：供試品消耗氫氧化鈉滴定液毫升數(shù)303：東萇蓉堿的分子量2實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析根據(jù)以上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，有2個(gè)指標(biāo)即總生物堿浸膏重和 總生物堿含量，這兩個(gè)指標(biāo)對(duì)洋金花提取工藝評(píng)價(jià)都很重 要，總生物堿得率最高的得分為50以及總生物堿含

8、量最高 的得分也為50,求出總得分見(jiàn)表2?？偟梅侄偵飰A浸膏 重/0. 572x50+總生物堿含量/0. 318x50最后按照總得分進(jìn) 行實(shí)驗(yàn)直觀分析和方差分析，分析結(jié)果見(jiàn)表3o表3方差 分析結(jié)果 注：*：溶劑濃度a因素有顯著性正交設(shè)計(jì)結(jié)果分析：將實(shí)驗(yàn)得到的數(shù)據(jù)用直觀分析法和 方差分析法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，可以看出，影響總生物堿浸膏 得率的因素順序?yàn)閍&gt； b&gt； d&gt； c,a因素中 a2&gt；a3&gt；a1,b 因素中 b2&gt；b3&gt；bl,c 因素中 c3&gt；c2&gt；c1,d 因素中 d

9、2&gt；dl&gt；d3,所以最佳提取工 藝為a2b2c3d2,用80%的酸水乙醇，酸水ph值為3,用4倍 量的溶劑，提取3次。為了驗(yàn)證上述結(jié)果的準(zhǔn)確性，重復(fù)提取a2b2c3d2,得總 生物堿浸膏平均重為0. 602 g (rsd=0. 92%,n=5),總生物堿 的平均含量為0. 362% (rsd=1.02%,n=5)。總得分為109. 5, 實(shí)驗(yàn)結(jié)果總生物堿浸膏得率和總生物堿的含量明顯高于預(yù) 實(shí)驗(yàn)和正交設(shè)計(jì)優(yōu)化9個(gè)實(shí)驗(yàn)號(hào)，因此可以證明優(yōu)化實(shí)驗(yàn)具 有合理性。3討論經(jīng)過(guò)方差分析，ph值對(duì)總得分影響最大這與總生物堿呈 堿性，在酸性溶解度要大，最佳ph值為3左右，但當(dāng)ph值 增

10、大到1時(shí)，總生物堿的提取率和總得分反而明顯減少，這 可能是在強(qiáng)酸的作用下，受破壞產(chǎn)生新的成分，這和賈元印 等3的結(jié)果一致。其他3個(gè)因素對(duì)總得分沒(méi)有顯著影響。評(píng)價(jià)指標(biāo)有兩個(gè)：總生物堿浸膏重和總生物堿含量。這 兩個(gè)指標(biāo)存在一定的相關(guān)性，即總生物堿浸膏得率高的，其 總生物堿的含量大。上述最佳工藝經(jīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)，總生物堿浸膏重和總生物堿 含量的總得分為109.5,比最高得分組高9. 5%左右。因此， 筆者認(rèn)為，本實(shí)驗(yàn)得到的最佳提取工藝條件，不僅提高了總 生物堿浸膏得率和總生物堿含量，而且節(jié)省溶劑用量，降低 成本。參考文獻(xiàn)1朱月琴洋金花總生物堿提取工藝的研究時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó) 藥，2000, 11 （11）： 965-966.2中華人民共和國(guó)藥典（2000年版一部