實驗六 病毒的觀察與培養(yǎng)真菌的培養(yǎng)方法與形態(tài)觀察

1、實驗六實驗六病毒的觀察與培養(yǎng)病毒的觀察與培養(yǎng)真菌的培養(yǎng)方法與形態(tài)觀察真菌的培養(yǎng)方法與形態(tài)觀察 醫(yī)學微生物學醫(yī)學微生物學實驗實驗 實驗內容：實驗內容： 1.1.病毒的觀察：形態(tài)觀察及生長狀況觀察病毒的觀察：形態(tài)觀察及生長狀況觀察 2.2.病毒的培養(yǎng)病毒的培養(yǎng) 3.3.真菌的培養(yǎng)、形態(tài)觀察（真菌的培養(yǎng)、形態(tài)觀察（真菌的單染法真菌的單染法）和淺）和淺部真菌病臨床標本檢查部真菌病臨床標本檢查 1.1.病毒的觀察病毒的觀察 （1 1）病毒的形態(tài)觀察病毒的形態(tài)觀察 （2 2）病毒的生長狀況觀察病毒的生長狀況觀察 病毒的形態(tài)結構病毒的形態(tài)結構痘病毒痘病毒 脊髓灰質炎病毒脊髓灰質炎病毒 鼻病毒鼻病毒上為模式圖

2、，下為電子顯微鏡下觀察結果上為模式圖，下為電子顯微鏡下觀察結果煙草花葉病毒煙草花葉病毒 狂犬病毒狂犬病毒 噬菌體噬菌體上為模式圖，下為電子顯微鏡下觀察結果上為模式圖，下為電子顯微鏡下觀察結果（2 2）病毒的生長狀況觀察病毒的生長狀況觀察病毒在細胞中生長繁殖的指標：病毒在細胞中生長繁殖的指標：1) 1) 細胞病變效應（細胞病變效應（cytopathiccytopathic effect, effect, CPE CPE）: : 有些病毒在細胞內增殖時可引起細胞發(fā)有些病毒在細胞內增殖時可引起細胞發(fā)生特有的形態(tài)學變化（細胞病變），稱為細胞病生特有的形態(tài)學變化（細胞病變），稱為細胞病變效應（變效應（C

3、PE CPE ）。）。2 2）包涵體）包涵體 (inclusion body)(inclusion body)：3 3）紅細胞吸附：）紅細胞吸附：4 4）干擾現(xiàn)象：）干擾現(xiàn)象： 示教：病毒感染細胞示教：病毒感染細胞CPE/CPE/正常細胞正常細胞 Negri body in a neuron 示教：病毒包涵體示教：病毒包涵體 2.2.病毒的培養(yǎng)病毒的培養(yǎng) 病毒的培養(yǎng)方法包括：病毒的培養(yǎng)方法包括： （1 1）動物接種動物接種 （2 2）雞胚培養(yǎng)雞胚培養(yǎng) （3 3）細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)（1 1）動物接種動物接種（2 2）雞胚培養(yǎng)雞胚培養(yǎng)：目前主要用于流感病毒的分離培養(yǎng)。目前主要用于流感病毒的分離培養(yǎng)。

4、 氣室卵殼殼膜尿囊腔絨毛尿囊膜胚胎羊膜腔卵黃卵白天花病毒，痘病毒和HSV流感病毒，腮腺炎病毒流感病毒初次分離嗜神經病毒 （3 3）細胞培養(yǎng)：細胞培養(yǎng)：將人或動物離體組織塊或分散的活將人或動物離體組織塊或分散的活細胞，模擬體內的生理條件在試管或培養(yǎng)瓶內加以培養(yǎng)，細胞，模擬體內的生理條件在試管或培養(yǎng)瓶內加以培養(yǎng)，使之生存和生長，稱為組織培養(yǎng)。目前一般所指的組織培使之生存和生長，稱為組織培養(yǎng)。目前一般所指的組織培養(yǎng)多指單層細胞培養(yǎng)。養(yǎng)多指單層細胞培養(yǎng)。 是目前最常用的方法。常用的細胞有：是目前最常用的方法。常用的細胞有： 原代培養(yǎng)細胞原代培養(yǎng)細胞：采用機械或胰蛋白酶等處理離體的新鮮：采用機械或胰蛋白

5、酶等處理離體的新鮮組織器官，制成分散的單個細胞懸液，加入生長液后，分組織器官，制成分散的單個細胞懸液，加入生長液后，分裝于培養(yǎng)管中培養(yǎng)，活細胞貼壁生長繁殖，數(shù)天后形成單裝于培養(yǎng)管中培養(yǎng)，活細胞貼壁生長繁殖，數(shù)天后形成單層細胞，稱原代細胞培養(yǎng)。層細胞，稱原代細胞培養(yǎng)。 二倍體細胞株二倍體細胞株：原代細胞經過多次傳代仍能保持二倍體：原代細胞經過多次傳代仍能保持二倍體特性，稱為二倍體細胞株。特性，稱為二倍體細胞株。 傳代細胞系或株傳代細胞系或株：來源于腫瘤細胞或細胞株在傳代過程：來源于腫瘤細胞或細胞株在傳代過程中變異的細胞系，是能在體外無限傳代的細胞系。中變異的細胞系，是能在體外無限傳代的細胞系。

6、動物細胞原代培動物細胞原代培養(yǎng)過程圖養(yǎng)過程圖 示教：原代細示教：原代細胞培養(yǎng)錄像胞培養(yǎng)錄像 3.3.真菌的培養(yǎng)與形態(tài)觀察真菌的培養(yǎng)與形態(tài)觀察 （1 1）真菌的培養(yǎng)方法真菌的培養(yǎng)方法 （2 2）真菌的形態(tài)觀察真菌的形態(tài)觀察 （3 3）淺部真菌病臨床標本檢查淺部真菌病臨床標本檢查（1 1）真菌的培養(yǎng)真菌的培養(yǎng)真菌的營養(yǎng)要求不高；真菌的營養(yǎng)要求不高；常用沙保弱培養(yǎng)基常用沙保弱培養(yǎng)基(Sabourauds(Sabouraudsmedium)medium)：蛋白胨、葡萄糖、氯化鈉和瓊脂。蛋白胨、葡萄糖、氯化鈉和瓊脂。溫度：溫度：22222828，但某些深部感染的真菌為，但某些深部感染的真菌為3737。p

7、HpH：4.04.06.06.0生長速度生長速度: :較慢較慢可出現(xiàn)三種菌落：可出現(xiàn)三種菌落：（1 1）酵母型菌落：與細菌菌落相似，）酵母型菌落：與細菌菌落相似，圓形，表面光滑、濕潤、柔軟而致圓形，表面光滑、濕潤、柔軟而致密、乳白或奶油色。密、乳白或奶油色。（2 2）類酵母菌落：菌落表面同酵母）類酵母菌落：菌落表面同酵母型菌落，在菌落根部有假菌絲伸向型菌落，在菌落根部有假菌絲伸向培養(yǎng)基內生長，乳白色。培養(yǎng)基內生長，乳白色。（3 3）絲狀菌落：是多細胞真菌的菌）絲狀菌落：是多細胞真菌的菌落形式，由許多疏松的菌絲體構成，落形式，由許多疏松的菌絲體構成，菌落呈棉絮狀，絨毛狀或粉末狀、菌落呈棉絮狀，絨

8、毛狀或粉末狀、菌落中央有皺褶，外圍有放射狀溝，菌落中央有皺褶，外圍有放射狀溝，多為茶褐色。多為茶褐色。白假絲酵母白假絲酵母(血平板血平板)黃曲霉黃曲霉示教：酵母、類酵母型菌落和絲狀真菌示教：酵母、類酵母型菌落和絲狀真菌菌落菌落 小培養(yǎng)法：小培養(yǎng)法是采用真菌培養(yǎng)板或普通小培養(yǎng)法：小培養(yǎng)法是采用真菌培養(yǎng)板或普通載玻片進行真菌培養(yǎng)。培養(yǎng)物可直接于顯微鏡下載玻片進行真菌培養(yǎng)。培養(yǎng)物可直接于顯微鏡下檢查，也可經染色后觀察。檢查，也可經染色后觀察。 （2 2）真菌的形態(tài)觀察真菌的形態(tài)觀察單細胞真菌：白假絲酵母，卵圓形，革蘭染色陽性，著色不一，可單細胞真菌：白假絲酵母，卵圓形，革蘭染色陽性，著色不一，可見假

9、菌絲。見假菌絲。多細胞真菌：絲狀菌或霉菌，有菌絲和孢子。多細胞真菌：絲狀菌或霉菌，有菌絲和孢子。煙曲霉煙曲霉白假絲白假絲酵母酵母真菌的單染法（白假絲酵母菌）真菌的單染法（白假絲酵母菌）實驗步驟：實驗步驟：制片（同革蘭染色）制片（同革蘭染色）染色：滴加結晶紫（或堿性染色：滴加結晶紫（或堿性亞甲藍亞甲藍）染色染色1min1min，水洗，吸干，油鏡觀察。，水洗，吸干，油鏡觀察。 （3 3）淺部真菌病臨床標本檢查淺部真菌病臨床標本檢查 淺部真菌病臨床上極為常見，包括手淺部真菌病臨床上極為常見，包括手癬、足癬、甲癬、頭癬、體癬和股癬癬、足癬、甲癬、頭癬、體癬和股癬等，其在檢查方面多采用直接鏡檢。等，其在檢查方面多采用直接鏡檢。 示教：皮膚真菌示教：皮膚真菌 實驗材料：白假絲酵母菌一管實驗材料：白假絲酵母菌一管/ /小組，小組，結晶紫結晶紫1 1瓶瓶/ /小組，玻片小組，玻片1 1個個/ /人人實驗報告內容實驗報告內容 真菌的單染真菌的單染實驗原理、實驗步驟、實驗結果繪圖