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文檔簡介
1、(1)微生物的分離與培養(yǎng)微生物的分離與培養(yǎng)(2)某種微生物數(shù)量的測定某種微生物數(shù)量的測定(3)培養(yǎng)基對微生物的選擇作用培養(yǎng)基對微生物的選擇作用(4)利用微生物發(fā)酵來生產(chǎn)特定的產(chǎn)物以及微利用微生物發(fā)酵來生產(chǎn)特定的產(chǎn)物以及微生物在其他方面的應(yīng)用生物在其他方面的應(yīng)用(1)培養(yǎng)基的種類、營養(yǎng)要求及配制原則培養(yǎng)基的種類、營養(yǎng)要求及配制原則(2)無菌技術(shù)的內(nèi)容及方法無菌技術(shù)的內(nèi)容及方法(3)分離純化微生物的研究思路、方法分離純化微生物的研究思路、方法一、微生物的實驗室培養(yǎng)一、微生物的實驗室培養(yǎng)1培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成營養(yǎng)營養(yǎng)物質(zhì)物質(zhì)定義定義作用作用主要來源主要來源碳源碳源能提供碳元能提供碳元素的
2、物質(zhì)素的物質(zhì)構(gòu)成生物體的物構(gòu)成生物體的物質(zhì),異養(yǎng)生物的質(zhì),異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)能源物質(zhì)無機物:無機物:co2、nahco3有機物:糖類、有機物:糖類、脂肪酸、石油、脂肪酸、石油、花生粉餅等花生粉餅等營養(yǎng)營養(yǎng)物質(zhì)物質(zhì)定義定義作用作用主要來源主要來源氮源氮源能提供氮元素能提供氮元素的物質(zhì)的物質(zhì)合成蛋白質(zhì)、合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮核酸以及含氮代謝產(chǎn)物代謝產(chǎn)物無機物:無機物:n2、nh3、氨鹽、氨鹽、硝酸鹽硝酸鹽有機物:尿素、有機物:尿素、牛肉膏、蛋白牛肉膏、蛋白胨等胨等生長生長因子因子生長不可缺少生長不可缺少的微量有機物的微量有機物酶和核酸的成酶和核酸的成分分維生素、氨基維生素、氨基酸、堿基等酸、堿基
3、等(1)微生物最常利用的碳源是糖類微生物最常利用的碳源是糖類(特別是葡萄特別是葡萄糖糖),常利用的氮源是氨鹽、硝酸鹽。,常利用的氮源是氨鹽、硝酸鹽。(2)在微生物所需要的化合物中需要量最大的在微生物所需要的化合物中需要量最大的是碳源。是碳源。(3)微生物之所以需要補充生長因子,是由于微生物之所以需要補充生長因子,是由于缺乏合成這些物質(zhì)所需要的酶或合成能力有缺乏合成這些物質(zhì)所需要的酶或合成能力有限。限。2大腸桿菌的純化大腸桿菌的純化大腸桿菌的純化培養(yǎng),包括培養(yǎng)基的配制和大腸桿菌的純化培養(yǎng),包括培養(yǎng)基的配制和純化大腸桿菌兩個階段。純化大腸桿菌兩個階段。(1)培養(yǎng)基的配制流程培養(yǎng)基的配制流程(以牛肉
4、膏蛋白胨培養(yǎng)基以牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基為例為例)計算:根據(jù)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方的比計算:根據(jù)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方的比例,計算配制例,計算配制100 ml的培養(yǎng)基時,各種成分的培養(yǎng)基時,各種成分的用量。的用量。稱量:準(zhǔn)確地稱取各種成分。稱量:準(zhǔn)確地稱取各種成分。溶化:先將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同溶化:先將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯,加入少量的水加熱。當(dāng)牛肉膏溶放入燒杯,加入少量的水加熱。當(dāng)牛肉膏溶化并與稱量紙分離后,用玻璃棒取出稱量紙?;⑴c稱量紙分離后,用玻璃棒取出稱量紙。然后往燒杯中加入蛋白胨和氯化鈉,最后加然后往燒杯中加入蛋白胨和氯化鈉,最后加入瓊脂,加熱使其熔化。在此過程中不斷
5、用入瓊脂,加熱使其熔化。在此過程中不斷用玻璃棒攪拌,防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。玻璃棒攪拌,防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。當(dāng)瓊脂完全熔化后,補加蒸餾水至當(dāng)瓊脂完全熔化后,補加蒸餾水至100 ml。滅菌:將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中滅菌:將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中加棉塞包好,放入高壓滅菌鍋,在壓力為加棉塞包好,放入高壓滅菌鍋,在壓力為100 kpa、溫度為、溫度為121 條件下,滅菌條件下,滅菌1530 min。將培養(yǎng)皿包好后放入干熱滅菌箱內(nèi),在將培養(yǎng)皿包好后放入干熱滅菌箱內(nèi),在160170 下滅菌下滅菌2 h。倒平板:等培養(yǎng)基冷卻至倒平板:等培養(yǎng)基冷卻至50 左右時,在左右時,在酒精燈火焰
6、附近倒平板。酒精燈火焰附近倒平板。(2)純化大腸桿菌純化大腸桿菌平板劃線法:通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)平板劃線法:通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作,將聚集的菌種逐步基表面連續(xù)劃線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng),可以分離到由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼養(yǎng),可以分離到由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體,這就是菌落??梢姷淖蛹?xì)胞群體,這就是菌落。稀釋涂布平板法:將菌液進(jìn)行一系列的梯稀釋涂布平板法:將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面,進(jìn)行
7、培養(yǎng)。在稀到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面,進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的微生物釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的微生物將被分散成單個細(xì)胞,從而能在培養(yǎng)基表面將被分散成單個細(xì)胞,從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。形成單個的菌落。(3)培養(yǎng):將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng):將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基培養(yǎng)基(對照組對照組)都放入都放入37 恒溫箱中,培養(yǎng)恒溫箱中,培養(yǎng)12 h和和24 h后,分別觀察并記錄結(jié)果。后,分別觀察并記錄結(jié)果。3無菌技術(shù)無菌技術(shù)(1)消毒和滅菌的區(qū)別消毒和滅菌的區(qū)別條件條件結(jié)果結(jié)果常用的方法常用的方法消消毒毒較為溫和的較為溫和的物理或化學(xué)物理或化學(xué)方法方法
8、僅殺死物體表面僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對或內(nèi)部一部分對人體有害的微生人體有害的微生物物(不包括芽孢和不包括芽孢和孢子孢子)煮沸消毒法、巴煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外氏消毒法、紫外線或化學(xué)藥物消線或化學(xué)藥物消毒法毒法滅滅菌菌強烈的理化強烈的理化因素因素殺死物體內(nèi)外所殺死物體內(nèi)外所有的微生物,包有的微生物,包括芽孢和孢子括芽孢和孢子灼燒滅菌、干熱灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、高壓蒸汽滅菌滅菌酒精消毒時,酒精消毒時,70%的酒精殺菌效果最好,原的酒精殺菌效果最好,原因是:濃度過高,使菌體表面蛋白質(zhì)凝固成因是:濃度過高,使菌體表面蛋白質(zhì)凝固成一層保護(hù)膜,乙醇分子不能滲入其中;濃度一層保護(hù)膜,乙醇
9、分子不能滲入其中;濃度過低,殺菌力減弱。過低,殺菌力減弱。(2)無菌技術(shù)主要操作要求無菌技術(shù)主要操作要求實驗前應(yīng)對操作空間、操作人員消毒,對實驗前應(yīng)對操作空間、操作人員消毒,對所有器具和培養(yǎng)基滅菌。所有器具和培養(yǎng)基滅菌。實驗進(jìn)行時需在酒精燈火焰周圍無菌區(qū)操實驗進(jìn)行時需在酒精燈火焰周圍無菌區(qū)操作,另外要避免已滅菌處理材料再次污染。作,另外要避免已滅菌處理材料再次污染。二、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)二、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)1選擇合適的培養(yǎng)基選擇合適的培養(yǎng)基(1)根據(jù)培養(yǎng)基的用途可分為選擇培養(yǎng)基和鑒根據(jù)培養(yǎng)基的用途可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基別培養(yǎng)基培養(yǎng)基培養(yǎng)基種類種類特點特點用途
10、用途選擇培選擇培養(yǎng)基養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種化培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長,要的微生物的生長,促進(jìn)所需要的微生物促進(jìn)所需要的微生物的生長的生長培養(yǎng)、分離出特定微培養(yǎng)、分離出特定微生物生物(如培養(yǎng)酵母菌和如培養(yǎng)酵母菌和霉菌,可在培養(yǎng)基中霉菌,可在培養(yǎng)基中加入青霉素;用尿素加入青霉素;用尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)作為唯一氮源的培養(yǎng)基用于分離分解尿素基用于分離分解尿素的細(xì)菌的細(xì)菌)(2)分離分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基即為選分離分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基即為選擇培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中的氮源只有尿素,理論擇培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中的氮源只有尿素,理論上只有能合成脲酶的微生物才能在上面生長。上
11、只有能合成脲酶的微生物才能在上面生長。培養(yǎng)培養(yǎng)基種基種類類特點特點用途用途鑒別鑒別培養(yǎng)培養(yǎng)基基根據(jù)微生物的代根據(jù)微生物的代謝特點,在培養(yǎng)謝特點,在培養(yǎng)基中加入某種指基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品示劑或化學(xué)藥品鑒別不同種類的微生物,如鑒別不同種類的微生物,如可用伊紅可用伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中是否有大飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌腸桿菌(若有,菌落呈深紫色,若有,菌落呈深紫色,并帶有金屬光澤并帶有金屬光澤)2統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法(1)顯微鏡直接計數(shù)法顯微鏡直接計數(shù)法原理:利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)原理:利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板,在顯微鏡下計一定容
12、積的樣品中微生物板,在顯微鏡下計一定容積的樣品中微生物數(shù)量。數(shù)量。方法:用計數(shù)板計數(shù)。方法:用計數(shù)板計數(shù)。缺點:不能區(qū)分死菌與活菌。缺點:不能區(qū)分死菌與活菌。(2)間接計數(shù)法間接計數(shù)法(活菌計數(shù)法活菌計數(shù)法)原理:當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時,培養(yǎng)基原理:當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時,培養(yǎng)基表面生長的一個菌落,來源于樣品稀釋液中表面生長的一個菌落,來源于樣品稀釋液中的一個活菌,通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù),就的一個活菌,通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù),就能推測出樣品中大約含有多少活菌。能推測出樣品中大約含有多少活菌。操作操作a設(shè)置重復(fù)組,增強實驗的說服力與準(zhǔn)確性。設(shè)置重復(fù)組,增強實驗的說服力與準(zhǔn)確性。b為了保證結(jié)果準(zhǔn)確
13、,一般選擇菌落數(shù)在為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計數(shù)。的平板進(jìn)行計數(shù)。計算公式:每克樣品中的菌株數(shù)計算公式:每克樣品中的菌株數(shù) ,其中其中c代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù),數(shù),v代表涂布平板時所用的稀釋液的體積代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(ml),m代表稀釋倍數(shù)。代表稀釋倍數(shù)。3細(xì)菌分離與計數(shù)的實驗流程細(xì)菌分離與計數(shù)的實驗流程土壤取樣土壤取樣樣品稀釋樣品稀釋取樣涂布取樣涂布微生物微生物培養(yǎng)培養(yǎng)觀察并記錄結(jié)果觀察并記錄結(jié)果細(xì)菌計數(shù)細(xì)菌計數(shù)三、分解纖維素的微生物的分離三、分解纖維素的微生物的分離1纖維素酶纖維素酶是一種復(fù)合酶,
14、它包括是一種復(fù)合酶,它包括c1酶、酶、cx酶和葡萄糖酶和葡萄糖苷酶,前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖,苷酶,前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖,第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。2纖維素分解菌的篩選原理纖維素分解菌的篩選原理(1)剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物,但剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物,但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。反應(yīng)。(2)纖維素分解菌能產(chǎn)生纖維素酶分解纖維素,纖維素分解菌能產(chǎn)生纖維素酶分解纖維素,從而使菌落周圍形成透明圈。從而使菌落周圍形成透明圈。3土壤中纖維素分解菌的篩選土壤中纖維素分解菌的篩選(
15、1)方案方案土壤取樣土壤取樣選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)梯度稀釋梯度稀釋將樣品涂布將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透挑選產(chǎn)生透明圈的菌落。明圈的菌落。(2)選擇培養(yǎng)的目的:增加纖維素分解菌的濃度,選擇培養(yǎng)的目的:增加纖維素分解菌的濃度,確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物。確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物。(3)涉及到的微生物技術(shù)主要有:培養(yǎng)基的制作、涉及到的微生物技術(shù)主要有:培養(yǎng)基的制作、無菌操作、稀釋涂布平板法、選擇培養(yǎng)基的作無菌操作、稀釋涂布平板法、選擇培養(yǎng)基的作用、土壤取樣等。用、土壤取樣等。 (2010年青島市模擬年青島市模擬)啤酒是我們?nèi)粘I【剖?/p>
16、我們?nèi)粘I钪凶畛R姷娘嬃现?。生產(chǎn)過程大致如下:活中最常見的飲料之一。生產(chǎn)過程大致如下:將經(jīng)過滅菌的麥芽汁充氧,接入啤酒酵母菌將經(jīng)過滅菌的麥芽汁充氧,接入啤酒酵母菌菌種后輸入發(fā)酵罐。初期,酵母菌迅速繁殖,菌種后輸入發(fā)酵罐。初期,酵母菌迅速繁殖,糖度下降,酒精濃度漸漸上升,泡沫不斷增糖度下降,酒精濃度漸漸上升,泡沫不斷增多;當(dāng)糖度下降到一定程度后,結(jié)束發(fā)酵;多;當(dāng)糖度下降到一定程度后,結(jié)束發(fā)酵;最后分別輸出有形物質(zhì)和啤酒。最后分別輸出有形物質(zhì)和啤酒。根據(jù)上述過根據(jù)上述過程,回答以下問題:程,回答以下問題:(1)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精發(fā)酵菌種
17、,對野生酵母菌進(jìn)行誘變后通酒精發(fā)酵菌種,對野生酵母菌進(jìn)行誘變后通過篩選可以得到具有這些特性的突變菌,誘過篩選可以得到具有這些特性的突變菌,誘變及篩選過程如下:變及篩選過程如下:步驟步驟1:野生菌液體培養(yǎng)一段時間后接受紫外:野生菌液體培養(yǎng)一段時間后接受紫外線照射誘變處理。線照射誘變處理。步驟步驟2:制備選擇培養(yǎng)基。在基本培養(yǎng)基的基:制備選擇培養(yǎng)基。在基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,注意添加礎(chǔ)上,注意添加_和調(diào)低和調(diào)低ph,加瓊脂,加瓊脂后滅菌,制成固體平板。后滅菌,制成固體平板。步驟步驟3:將紫外線照射后的菌液稀釋涂布平板。:將紫外線照射后的菌液稀釋涂布平板。步驟步驟4:根據(jù):根據(jù)_篩選出突變菌。篩選出突變
18、菌。(2)上述步驟上述步驟2、3的目的分別是的目的分別是_。(3)釀酒過程中,經(jīng)檢測活菌數(shù)量適宜但卻不釀酒過程中,經(jīng)檢測活菌數(shù)量適宜但卻不產(chǎn)生酒精,應(yīng)采取的措施是產(chǎn)生酒精,應(yīng)采取的措施是_。(4)秸稈的主要成分為木質(zhì)素、纖維素和半纖秸稈的主要成分為木質(zhì)素、纖維素和半纖維素,但是酵母菌卻無法直接利用,原因是維素,但是酵母菌卻無法直接利用,原因是其其_。若要酵母菌能利用植物。若要酵母菌能利用植物秸稈進(jìn)行發(fā)酵抽取酒精,請?zhí)岢鼋鉀Q該問題秸稈進(jìn)行發(fā)酵抽取酒精,請?zhí)岢鼋鉀Q該問題的方法。的方法。(列舉兩種方法列舉兩種方法)_。【解析解析】(1)因為是選擇耐高糖的酵母菌,因為是選擇耐高糖的酵母菌,所以應(yīng)該加糖
19、;一般來說能在選擇培養(yǎng)基上所以應(yīng)該加糖;一般來說能在選擇培養(yǎng)基上生長繁殖的一定是耐高糖和耐酸的酵母菌。生長繁殖的一定是耐高糖和耐酸的酵母菌。(2)步驟步驟2的目的是創(chuàng)造選擇的特定環(huán)境,步驟的目的是創(chuàng)造選擇的特定環(huán)境,步驟3的目的是通過稀釋的方法期望獲得單一菌落。的目的是通過稀釋的方法期望獲得單一菌落。(3)活菌數(shù)量較多但不能產(chǎn)生酒精說明酵母菌活菌數(shù)量較多但不能產(chǎn)生酒精說明酵母菌不能進(jìn)行無氧呼吸,所以為了獲得酒精必須不能進(jìn)行無氧呼吸,所以為了獲得酒精必須密閉。密閉。(4)酵母菌缺乏分解纖維素的酶系所以不能利酵母菌缺乏分解纖維素的酶系所以不能利用纖維素,但是可以通過基因工程的方法將用纖維素,但是可
20、以通過基因工程的方法將分解纖維素的微生物中有關(guān)基因?qū)虢湍妇?,分解纖維素的微生物中有關(guān)基因?qū)虢湍妇?,或者混合培養(yǎng)等方式。或者混合培養(yǎng)等方式?!敬鸢复鸢浮?1)高濃度蔗糖高濃度蔗糖(葡萄糖葡萄糖)是否能在是否能在選擇培養(yǎng)基上生長選擇培養(yǎng)基上生長(2)提供高糖和酸性篩選環(huán)境獲得單菌落提供高糖和酸性篩選環(huán)境獲得單菌落(3)隔絕空氣隔絕空氣(4)缺乏相應(yīng)分解酶系缺乏相應(yīng)分解酶系(或缺乏纖維素酶和半纖或缺乏纖維素酶和半纖維素酶維素酶)在酵母菌中轉(zhuǎn)入分解酶系相關(guān)基因;在酵母菌中轉(zhuǎn)入分解酶系相關(guān)基因;利用酶或微生物分解秸稈;利用物理和化學(xué)利用酶或微生物分解秸稈;利用物理和化學(xué)方法分解秸稈;將酵母菌與其他能
21、分解秸稈方法分解秸稈;將酵母菌與其他能分解秸稈的微生物混合發(fā)酵的微生物混合發(fā)酵 (2009年寧夏高考題年寧夏高考題)(1)在大腸桿菌培在大腸桿菌培養(yǎng)過程中,除考慮營養(yǎng)條件外,還要考慮養(yǎng)過程中,除考慮營養(yǎng)條件外,還要考慮_、_和滲透壓等條件。由于該和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易細(xì)菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、選擇、_、_等優(yōu)點,因此常作等優(yōu)點,因此常作為遺傳學(xué)研究的實驗材料。為遺傳學(xué)研究的實驗材料。(2)在微生物培養(yǎng)操作過程中,為防止雜菌污在微生物培養(yǎng)操作過程中,為防止雜菌污染,需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行染,需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行_(消毒、滅消毒、滅菌菌);
22、操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和;操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和_;靜;靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅,其原因是止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅,其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性,還能紫外線能使蛋白質(zhì)變性,還能_。(3)若用稀釋涂布平板法計數(shù)大腸桿菌活菌的若用稀釋涂布平板法計數(shù)大腸桿菌活菌的個數(shù),要想使所得估計值更接近實際值,除個數(shù),要想使所得估計值更接近實際值,除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外,還應(yīng)保證待測樣應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外,還應(yīng)保證待測樣品稀釋的品稀釋的_。(4)通常,對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的通常,對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對細(xì)菌進(jìn)行初步的形狀、大小等菌落特征對細(xì)菌進(jìn)行初步的_。
23、(5)培養(yǎng)大腸桿菌時,在接種前需要檢測培養(yǎng)培養(yǎng)大腸桿菌時,在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是測方法是_。(6)若用大腸桿菌進(jìn)行實驗,使用過的培養(yǎng)基若用大腸桿菌進(jìn)行實驗,使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過_處理后才能丟處理后才能丟棄,以防止培養(yǎng)物的擴散。棄,以防止培養(yǎng)物的擴散?!窘馕鼋馕觥?1)影響微生物培養(yǎng)的因素除了營影響微生物培養(yǎng)的因素除了營養(yǎng)條件外,外界條件主要包括溫度、酸堿度養(yǎng)條件外,外界條件主要包括溫度、酸堿度和滲透壓等。由于大腸桿菌具有體積小、結(jié)和滲透壓等。由于大腸桿菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型
24、容易選擇、易培養(yǎng)、生活構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、易培養(yǎng)、生活周期短等優(yōu)點,所以常作為遺傳學(xué)研究的實周期短等優(yōu)點,所以常作為遺傳學(xué)研究的實驗材料。驗材料。(2)滅菌是指用強烈的物理或化學(xué)的方法,殺滅菌是指用強烈的物理或化學(xué)的方法,殺死物體內(nèi)外的一切微生物,包括芽孢和孢子。死物體內(nèi)外的一切微生物,包括芽孢和孢子。消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物。對于培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿要進(jìn)行滅菌,對物。對于培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿要進(jìn)行滅菌,對操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和用酒精消毒,操作者的雙手需要進(jìn)行清洗
25、和用酒精消毒,靜止空氣中的細(xì)菌在用紫外線照射能夠使蛋靜止空氣中的細(xì)菌在用紫外線照射能夠使蛋白質(zhì)變性,并損傷白質(zhì)變性,并損傷dna結(jié)構(gòu),使細(xì)菌死亡。結(jié)構(gòu),使細(xì)菌死亡。(3)樣品的稀釋度直接影響平板上生長的菌落樣品的稀釋度直接影響平板上生長的菌落的數(shù)目,實際操作中,通常選用一定稀釋范的數(shù)目,實際操作中,通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng),以保證獲得的菌落數(shù)圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng),以保證獲得的菌落數(shù)在在30300之間。之間。(4)菌落的特征是判斷微生物的種類的重要依菌落的特征是判斷微生物的種類的重要依據(jù)。對獲得的純菌種可以依據(jù)菌落的特征對據(jù)。對獲得的純菌種可以依據(jù)菌落的特征對細(xì)菌進(jìn)行初步檢測。細(xì)菌進(jìn)行
26、初步檢測。(5)要判斷固體培養(yǎng)基是否被污染,可將未接要判斷固體培養(yǎng)基是否被污染,可將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下培養(yǎng)一段時間,種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下培養(yǎng)一段時間,若發(fā)現(xiàn)有菌落說明培養(yǎng)基已被污染。若發(fā)現(xiàn)有菌落說明培養(yǎng)基已被污染。(6)進(jìn)行微生物培養(yǎng)時,使用過的培養(yǎng)基及培進(jìn)行微生物培養(yǎng)時,使用過的培養(yǎng)基及培養(yǎng)物必須經(jīng)滅菌后才能丟棄,防止培養(yǎng)的微養(yǎng)物必須經(jīng)滅菌后才能丟棄,防止培養(yǎng)的微生物擴散到環(huán)境中,造成危害。生物擴散到環(huán)境中,造成危害?!敬鸢复鸢浮?1)溫度酸堿度易培養(yǎng)生活溫度酸堿度易培養(yǎng)生活周期短周期短(2)滅菌消毒損傷滅菌消毒損傷dna的結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)(3)比例合適比例合適(4)鑒定鑒定(或分類
27、或分類)(5)將未接種將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時間,的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時間,觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生(6)滅菌滅菌1(2009年四川高考題年四川高考題)下列關(guān)于幾種微生物下列關(guān)于幾種微生物的營養(yǎng)代謝和生長繁殖的描述,正確的是的營養(yǎng)代謝和生長繁殖的描述,正確的是()a根瘤菌通過生物固氮,制造了含氮養(yǎng)料和根瘤菌通過生物固氮,制造了含氮養(yǎng)料和含碳有機物含碳有機物b接種到培養(yǎng)基上的青霉菌,進(jìn)入對數(shù)期接種到培養(yǎng)基上的青霉菌,進(jìn)入對數(shù)期能大量積累青霉素能大量積累青霉素c培養(yǎng)液中溶氧量的變化,會影響酵母培養(yǎng)液中溶氧量的變化,會影響酵母菌的生長繁殖和代
28、謝途徑菌的生長繁殖和代謝途徑d用用32p標(biāo)記的噬菌體感染細(xì)菌,在新形標(biāo)記的噬菌體感染細(xì)菌,在新形成的噬菌體中都能檢測到成的噬菌體中都能檢測到32p【解析解析】根瘤菌異養(yǎng)生活,不能合成含氮根瘤菌異養(yǎng)生活,不能合成含氮有機物,有機物,a選項錯誤;處于對數(shù)期的青霉菌是選項錯誤;處于對數(shù)期的青霉菌是菌種數(shù)目大量增加的時期,處于穩(wěn)定期時才菌種數(shù)目大量增加的時期,處于穩(wěn)定期時才能積累大量青霉素,能積累大量青霉素,b選項錯誤;酵母菌的繁選項錯誤;酵母菌的繁殖需要在有氧條件下進(jìn)行,酵母菌在有氧和殖需要在有氧條件下進(jìn)行,酵母菌在有氧和無氧條件下分別進(jìn)行有氧呼吸和無氧呼吸,無氧條件下分別進(jìn)行有氧呼吸和無氧呼吸,c
29、選項正確;用選項正確;用32p標(biāo)記噬菌體感染細(xì)菌時,其標(biāo)記噬菌體感染細(xì)菌時,其子代遺傳物質(zhì)的合成是以被子代遺傳物質(zhì)的合成是以被32p標(biāo)記噬菌體的標(biāo)記噬菌體的dna為模板,以細(xì)菌的核苷酸為原料,所以為模板,以細(xì)菌的核苷酸為原料,所以子代噬菌體中只有少數(shù)含子代噬菌體中只有少數(shù)含32p,d選項錯誤。選項錯誤?!敬鸢复鸢浮縞2(2009年重慶高考年重慶高考)下列有關(guān)大腸桿菌的敘下列有關(guān)大腸桿菌的敘述,正確的是述,正確的是()a大腸桿菌以復(fù)制方式進(jìn)行繁殖,其擬核是大腸桿菌以復(fù)制方式進(jìn)行繁殖,其擬核是一個環(huán)狀一個環(huán)狀dna分子分子b在含葡萄糖和乳糖的培養(yǎng)基上,大腸桿菌在含葡萄糖和乳糖的培養(yǎng)基上,大腸桿菌首
30、先利用乳糖作碳源首先利用乳糖作碳源c用大腸桿菌工程菌生產(chǎn)干擾素時,應(yīng)及時用大腸桿菌工程菌生產(chǎn)干擾素時,應(yīng)及時添加核酸等生長因子添加核酸等生長因子d處于對數(shù)期的大腸桿菌,常作為生產(chǎn)用的處于對數(shù)期的大腸桿菌,常作為生產(chǎn)用的菌種和科研的材料菌種和科研的材料【解析解析】大腸桿菌是一種細(xì)菌,以二分裂大腸桿菌是一種細(xì)菌,以二分裂的方式進(jìn)行繁殖;在含葡萄糖和乳糖的培養(yǎng)的方式進(jìn)行繁殖;在含葡萄糖和乳糖的培養(yǎng)基上,大腸桿菌首先利用葡萄糖作能源,然基上,大腸桿菌首先利用葡萄糖作能源,然后再利用乳糖;利用大腸桿菌作為工程菌生后再利用乳糖;利用大腸桿菌作為工程菌生產(chǎn)干擾素時,不需要添加外源生長因子;處產(chǎn)干擾素時,不需
31、要添加外源生長因子;處于對數(shù)期的大腸桿菌細(xì)胞代謝最旺盛,常作于對數(shù)期的大腸桿菌細(xì)胞代謝最旺盛,常作為生產(chǎn)用的菌種和科研的材料。為生產(chǎn)用的菌種和科研的材料。【答案答案】d3(2009年安徽高考題年安徽高考題)下列是關(guān)于下列是關(guān)于“檢測土檢測土壤中細(xì)菌總數(shù)壤中細(xì)菌總數(shù)”實驗操作的敘述,其中錯誤實驗操作的敘述,其中錯誤的是的是()a用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,經(jīng)高用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板溫、高壓滅菌后倒平板b取取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水倍的土壤稀釋液和無菌水各各0.1 ml,分別涂布于各組平板上,分別涂布于各組平板上c將實驗組和對照組平板倒置,
32、將實驗組和對照組平板倒置,37 恒溫恒溫培養(yǎng)培養(yǎng)2448小時小時d確定對照組無菌后,選擇菌落數(shù)在確定對照組無菌后,選擇菌落數(shù)在300以以上的實驗組平板進(jìn)行計數(shù)上的實驗組平板進(jìn)行計數(shù)【解析解析】采用稀釋涂布平板法統(tǒng)計菌落數(shù)采用稀釋涂布平板法統(tǒng)計菌落數(shù)目時,一般選擇菌落數(shù)在目時,一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行的平板進(jìn)行計數(shù)。計數(shù)?!敬鸢复鸢浮縟4(2007年江蘇高考卷年江蘇高考卷)不同的微生物對營養(yǎng)不同的微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需要各不相同。下列有關(guān)一種以物質(zhì)的需要各不相同。下列有關(guān)一種以co2為為唯一碳源的自養(yǎng)微生物營養(yǎng)的描述中,不正唯一碳源的自養(yǎng)微生物營養(yǎng)的描述中,不正確的是確的是()a氮源物
33、質(zhì)為該微生物提供必要的氮素氮源物質(zhì)為該微生物提供必要的氮素b碳源物質(zhì)也是該微生物的能源物質(zhì)碳源物質(zhì)也是該微生物的能源物質(zhì)c無機鹽是該微生物不可缺少的營養(yǎng)物質(zhì)無機鹽是該微生物不可缺少的營養(yǎng)物質(zhì)d水是該微生物的營養(yǎng)要素之一水是該微生物的營養(yǎng)要素之一【解析解析】本題考查微生物的營養(yǎng)要素以及本題考查微生物的營養(yǎng)要素以及理解應(yīng)用能力、判斷能力。理解應(yīng)用能力、判斷能力。co2可為自養(yǎng)型微可為自養(yǎng)型微生物提供碳源,但不能提供能源。生物提供碳源,但不能提供能源?!敬鸢复鸢浮縝5下列所述環(huán)境條件下的微生物,能正常生下列所述環(huán)境條件下的微生物,能正常生長繁殖的是長繁殖的是()a在缺乏生長素的無氮培養(yǎng)基中的固褐固氮
34、在缺乏生長素的無氮培養(yǎng)基中的固褐固氮菌菌b在人體表皮擦傷部位的破傷風(fēng)桿菌在人體表皮擦傷部位的破傷風(fēng)桿菌c在新配制的植物礦質(zhì)營養(yǎng)液中的酵母菌在新配制的植物礦質(zhì)營養(yǎng)液中的酵母菌d在滅菌后的動物細(xì)胞培養(yǎng)液中的禽流感病在滅菌后的動物細(xì)胞培養(yǎng)液中的禽流感病毒毒【解析解析】 圓褐固氮菌是自生固氮細(xì)菌,圓褐固氮菌是自生固氮細(xì)菌,因此可以在缺乏生長素的無氮培養(yǎng)基中的生因此可以在缺乏生長素的無氮培養(yǎng)基中的生長繁殖。破傷風(fēng)桿菌是異養(yǎng)厭氧細(xì)菌,人體長繁殖。破傷風(fēng)桿菌是異養(yǎng)厭氧細(xì)菌,人體表皮擦傷部位是有氧的環(huán)境,破傷風(fēng)桿菌不表皮擦傷部位是有氧的環(huán)境,破傷風(fēng)桿菌不能生長和繁殖,酵母菌是異養(yǎng)型微生物,新能生長和繁殖,酵母
35、菌是異養(yǎng)型微生物,新配制的植物礦質(zhì)營養(yǎng)液中缺少有機碳;禽流配制的植物礦質(zhì)營養(yǎng)液中缺少有機碳;禽流感病毒不能獨立生活,只能寄生在活的細(xì)胞感病毒不能獨立生活,只能寄生在活的細(xì)胞中,因此禽流感病毒不能在滅菌后的動物細(xì)中,因此禽流感病毒不能在滅菌后的動物細(xì)胞培養(yǎng)液中生長繁殖。胞培養(yǎng)液中生長繁殖?!敬鸢复鸢浮縜6下列關(guān)于平菇培養(yǎng)的操作程序,正確的是下列關(guān)于平菇培養(yǎng)的操作程序,正確的是()a配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,接種,高壓蒸配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,接種,高壓蒸汽滅菌,培養(yǎng)汽滅菌,培養(yǎng)b配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,高壓蒸汽滅菌,配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,高壓蒸汽滅菌,接種,培養(yǎng)接種,培養(yǎng)c配制棉子殼培養(yǎng)基,接種
36、,高壓蒸汽滅菌,配制棉子殼培養(yǎng)基,接種,高壓蒸汽滅菌,培養(yǎng)培養(yǎng)d配制棉子殼培養(yǎng)基,高壓蒸汽滅菌,接種,配制棉子殼培養(yǎng)基,高壓蒸汽滅菌,接種,培養(yǎng)培養(yǎng)【解析解析】培養(yǎng)平菇所用的培養(yǎng)基是棉子殼,培養(yǎng)平菇所用的培養(yǎng)基是棉子殼,具體的操作程序是:配制培養(yǎng)基,高壓蒸汽具體的操作程序是:配制培養(yǎng)基,高壓蒸汽滅菌,培養(yǎng)。滅菌,培養(yǎng)。【答案答案】d7通過選擇培養(yǎng)基可以從混雜的微生物群體通過選擇培養(yǎng)基可以從混雜的微生物群體中分離出所需的微生物。在缺乏氮源的培養(yǎng)中分離出所需的微生物。在缺乏氮源的培養(yǎng)基上大部分微生物無法生長;在培養(yǎng)基中加基上大部分微生物無法生長;在培養(yǎng)基中加入青霉素可以抑制細(xì)菌和放線菌;在培養(yǎng)基入青霉素可以抑制細(xì)菌和放線菌;在培養(yǎng)基中加入中加入10%酚可以抑制細(xì)菌和霉菌。利用上酚可以抑制細(xì)菌和霉菌。利用上述方法能從混雜的微生物群體中分別分離出述方法能從混雜的微生物群體中分別分離出(多選多選)() a大腸桿菌大腸桿菌b霉菌霉菌 c放線菌放線菌 d固氮細(xì)菌固氮細(xì)菌【解析解析】根據(jù)題意,固氮細(xì)菌的生長不需根據(jù)題意,固氮細(xì)菌的生長不需要從培養(yǎng)基上獲得氮源,可在缺乏氮源的培要從培養(yǎng)基上獲得氮源,可在缺乏氮源的培養(yǎng)基上正常生長;加入青霉素的培養(yǎng)基上不養(yǎng)基上正常生長;加入青霉素的培養(yǎng)基上不能生長細(xì)菌和放線菌,則可收獲霉菌和酵母能生長細(xì)菌和放線菌,則可收獲霉菌和酵母菌;加入酚的培養(yǎng)基使細(xì)菌和霉菌不能
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