加壓毛細(xì)管電色譜儀的

1、分子生物研究中心主講人:李少偉1微型分離技術(shù)2micro-hplc 和 ce的結(jié)合3電滲流 (eof) 為流動(dòng)向的推動(dòng)力4二維分離機(jī)理：液相色譜和電泳之和（分配和電泳淌度）用途:分析生物活性肽中草藥多糖等的成分分析.建立中草藥的指紋圖譜.藥品的質(zhì)量監(jiān)控.結(jié)合高電壓系統(tǒng)可提高分析效率.并使圖譜更清晰明了.hw-001(001,20050727 15;55;32)血 清 肽hw-001(002,20050727 16;23;19)血 清 肽 -10kvhw-001(003,20050727 16;48;15)血 清 肽 +10kvhw-001(004,20050727 16;59;21)血 清 肽

2、 +20kv1.822.22.42.62.833.2mv12345678910min圖形分析:黑色代表普通hplc的血清肽圖譜.粉色代表加-10kv電壓后血清肽圖譜.黃色代表加+20kv電壓后血清肽圖譜.說明分析: 加負(fù)電壓后血清肽的出峰時(shí)間向后延遲,加正電壓后出峰時(shí)間向前平移.表明血清肽合流動(dòng)相后顯負(fù)電性.樣本在淌度和電壓共同作用下譜圖有變化.可以發(fā)現(xiàn)更多成分.同時(shí)提高分離效率.因?yàn)橥怀煞衷诹鲃?dòng)相相同的情況下只是淌度不同.現(xiàn)在加了高電壓.使以前需很長(zhǎng)時(shí)間才能出現(xiàn)的峰現(xiàn)在只需很短時(shí)間就可出現(xiàn).hw-001(002,20050720 15;46;14)hw-001(005,20050720 1

3、6;38;22)-5kvhw-001(003,20050720 16;07;46)-10kvhw-001(004,20050720 16;16;36)-15kv0.91.82.73.64.55.46.37.28.19mv0.91.82.73.64.55.46.37.28.19min黑色代表普通hplc的脾肽圖譜.藍(lán)色代表加-5kv電壓后脾肽圖譜.粉色代表加-10kv電壓后脾肽圖譜.黃色代表加-15kv電壓后脾肽圖譜. 出峰時(shí)間從5.6分提前到了3.4分.效率幾乎底稿50%.而且各主要成分均完美再現(xiàn).沒有漏掉主要的峰.準(zhǔn)備工作：樣品：過濾（0.45或0.22m濾膜）流動(dòng)相：過濾（0.45或0.2

4、2m濾膜），脫氣, (注意：超聲脫氣時(shí)，水太熱了要換) 主要包括四個(gè)模塊：流體輸送單元（solvent delivery module）；微流控制單元（micro flow control module）；高壓電源（high voltage module）；檢測(cè)器（detection module）和數(shù)據(jù)采集軟件。各部分分別開關(guān)、設(shè)置工作參數(shù)和程序。 使用溫度10-35，相對(duì)濕度不大于75%。可以進(jìn)行毛細(xì)管微柱色譜、毛細(xì)管電色譜、加壓毛細(xì)管電色譜、毛細(xì)管電泳分析。 1溶劑輸送單元11 參數(shù)設(shè)置：反復(fù)按 func/back 鍵至顯示所要設(shè)置的參數(shù)，按數(shù)字鍵輸入后，enter 確認(rèn)；設(shè)置下一參數(shù)，

5、主要參數(shù)設(shè)置完成，按ce 回到初始畫面。常用參數(shù)包括流速flow（正常流速為0.02-0.05ml/min, 如果在這個(gè)流速范圍內(nèi)進(jìn)樣量太大，就增加流速；反之就減小流速）、最高、最低限壓p.max/p.min等（最低限壓建議設(shè)置大于0的數(shù)值，否則漏夜、進(jìn)氣保護(hù)功能不能發(fā)揮作用）121 單泵恒比例送液：使用兩個(gè)溶劑輸送單元中的一個(gè)，按比例配好流動(dòng)相并超聲脫氣，設(shè)置流速，按pump開始輸液122 雙泵恒比例送液：一種方式是分別在兩個(gè)溶劑輸送單元上分別設(shè)置流速，輸送需要混合的a、b兩種溶劑；另一種方法是設(shè)置主泵和從泵：func/back 滾動(dòng)至sys 項(xiàng)，將主泵設(shè)為2，（從泵此項(xiàng)為1），此時(shí)主泵面板

6、上的g.e.燈亮，在主泵面板上設(shè)置兩種溶劑的比例conc和總流速flow后，按主泵pump開始送液（注意，輔泵的流速是總流速乘梯度的比例后的值，此值最好不要小于0.005ml/min, 否則輔泵流速不穩(wěn)，影響梯度基線） 確認(rèn)各溶劑系統(tǒng)互溶、確認(rèn)各溶劑系統(tǒng)互溶、緩沖溶液中緩沖溶液中溶質(zhì)不會(huì)析出結(jié)晶溶質(zhì)不會(huì)析出結(jié)晶！ 注意：開色譜軟件前要把微流控單元的開關(guān)打開。否則軟件打不開。1.裝柱前首先把毛細(xì)管檢測(cè)窗口和檢測(cè)池裝檢測(cè)窗口的位置都用分析純的乙醇擦干凈，等乙醇揮發(fā)完后，可以裝柱。（注意不要用口吹干）2.把柱子的檢測(cè)窗口對(duì)準(zhǔn)檢測(cè)池的小球，對(duì)著光看，是透光的說明位置正好3固定柱子的peek螺絲的pee

7、k管要插到底部固定螺絲，否則毛細(xì)管裝好后還會(huì)移動(dòng)。4然后蓋上蓋子，按對(duì)角順序上四個(gè)螺絲并固定住。（注意不要一次性擰緊一個(gè)螺絲）5螺絲固定后，把出口端的毛細(xì)管插到peek管里，把池子安裝到檢測(cè)器上，6打開檢測(cè)器，自檢結(jié)束后，按func/back 滾動(dòng)至看sample和reference 值是否正常，如果sample值太小，說明柱子沒裝好。7卸柱子時(shí)，一定要把柱子出口端的毛細(xì)管從peek管里拔出，是毛細(xì)管柱子處于自由狀態(tài)后才卸四個(gè)螺絲。否則容易把柱子折斷。1確認(rèn)各部分正確連接，開啟電源，啟動(dòng)數(shù)據(jù)采集軟件unimicrotrisep workstation。設(shè)置參數(shù)及程序，平衡色譜柱2設(shè)置工作站信號(hào)

8、采集時(shí)間等，工作站工具欄綠色示意燈狀態(tài)，準(zhǔn)備采集信號(hào)3當(dāng)進(jìn)樣控制面板的load燈亮?xí)r，用微量進(jìn)樣器進(jìn)樣，此時(shí)，樣品被注入到進(jìn)樣閥的定量環(huán)中，定量環(huán)的體積是固定的2 l（本系統(tǒng)中見入毛細(xì)管柱內(nèi)的樣品量通常是10 l或20 l），與實(shí)際進(jìn)樣量無關(guān)，多余的樣品會(huì)流到樣品廢液瓶中。但應(yīng)注意，由于在進(jìn)樣孔與進(jìn)樣閥之間存在一個(gè)連接管，其體積約10 l，因此，每當(dāng)進(jìn)一個(gè)新的樣品時(shí)，第一次進(jìn)樣的進(jìn)樣量要大于40 l，以確保樣品置換了進(jìn)樣管路里所有的溶液到達(dá)進(jìn)樣閥的定量環(huán)，以后每次進(jìn)樣，進(jìn)樣量只須5l即可。要將樣品注入色譜柱中時(shí)，按進(jìn)樣控制面板上的按鍵，經(jīng)過約1 s后，inject燈亮，表示樣品池已被連入流路系統(tǒng)，樣品開始進(jìn)入色譜柱。當(dāng)inject燈亮?xí)r系統(tǒng)自動(dòng)開始采集數(shù)據(jù)。同時(shí)需按下主泵run鍵開始梯度程序、高壓電源run 啟動(dòng)高壓電場(chǎng)。 4分析結(jié)束，存儲(chǔ)色譜數(shù)據(jù)，reset停止高壓。5清洗色譜柱、儀器管路、進(jìn)樣針，進(jìn)樣口；關(guān)閉各部分電源；填寫使用記錄。h w -001(002,20050720 15;46;14)h w -001(005,20050720 16;38;22)-5k