基金申請(qǐng)的策略和技巧[中山大學(xué)黎明濤]

1、 黎黎 明明 濤濤中山大學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)研究中心中山大學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)研究中心中山大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理教研室中山大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理教研室l選題l撰寫申請(qǐng)書l答辯l好心情、好身體 邊想邊寫 3h /天l讀指南、讀通知 注意截止期l讀標(biāo)書、讀高手、讀同行l(wèi)讀自己 賣點(diǎn)??？選題 創(chuàng)新性 工作基礎(chǔ) l想法變文字 一氣呵成 “立項(xiàng)依據(jù)”l溝通 科研科87330567、醫(yī)科處 87333055 1. 1. 基礎(chǔ)：繼續(xù)和深入基礎(chǔ)：繼續(xù)和深入 發(fā)表和未發(fā)表發(fā)表和未發(fā)表 創(chuàng)新創(chuàng)新2. 2. 問(wèn)題問(wèn)題 中肯中肯 3. 3. 預(yù)實(shí)驗(yàn)預(yù)實(shí)驗(yàn) 針對(duì)針對(duì)“問(wèn)題問(wèn)題”的預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果4. 4. 假設(shè)假設(shè) 思想性、創(chuàng)新性思想性

2、、創(chuàng)新性5. 5. 方法方法 可靠性第一可靠性第一 先進(jìn)性第二先進(jìn)性第二6. 6. 目標(biāo)目標(biāo) 明確、具體明確、具體7. 7. 意義意義 理論性和應(yīng)用性理論性和應(yīng)用性2. 2. 要求：充分的理由和意義要求：充分的理由和意義 思想性思想性 與摘要呼應(yīng)與摘要呼應(yīng) 3. 3. 自己的工作為依據(jù)自己的工作為依據(jù) 圖文并茂圖文并茂 規(guī)范規(guī)范 4. 4. 參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn) 時(shí)效性時(shí)效性 自己的文章自己的文章 規(guī)范化規(guī)范化5. 5. 深入淺出深入淺出 內(nèi)行、外行讀得懂內(nèi)行、外行讀得懂 6. 6. 人文文化人文文化 素質(zhì)素質(zhì) 精神精神 動(dòng)人的故事動(dòng)人的故事 細(xì)胞凋亡細(xì)胞凋亡 時(shí)時(shí)SP1對(duì)對(duì)BH3-only蛋白蛋

3、白Bim的轉(zhuǎn)錄調(diào)控的轉(zhuǎn)錄調(diào)控神經(jīng)元凋亡時(shí)神經(jīng)元凋亡時(shí) BH3-only蛋白蛋白Bim的轉(zhuǎn)錄調(diào)控的轉(zhuǎn)錄調(diào)控神經(jīng)元凋亡時(shí)神經(jīng)元凋亡時(shí)SP1對(duì)對(duì)BH3-only蛋白蛋白Bim的的 調(diào)控調(diào)控 SP1對(duì)對(duì)BH3-only蛋白蛋白Bim的轉(zhuǎn)錄調(diào)控的轉(zhuǎn)錄調(diào)控 SP1對(duì)神經(jīng)元凋亡的調(diào)控作用對(duì)神經(jīng)元凋亡的調(diào)控作用l關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞：SP1/Bim /基因調(diào)控基因調(diào)控/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)/神經(jīng)元凋亡神經(jīng)元凋亡 l獲得獲得SP1SP1直接調(diào)控直接調(diào)控bimbim基因表達(dá)的可靠證據(jù)，闡基因表達(dá)的可靠證據(jù)，闡明促凋亡蛋白明促凋亡蛋白BimBim由由SP1SP1轉(zhuǎn)錄調(diào)控的新機(jī)制，為轉(zhuǎn)錄調(diào)控的新機(jī)制，為確立確立SP1SP1作為神

4、經(jīng)退行性疾病治療的新靶點(diǎn)提作為神經(jīng)退行性疾病治療的新靶點(diǎn)提供更充分的科學(xué)依據(jù)。供更充分的科學(xué)依據(jù)。明確、具體明確、具體 解決學(xué)術(shù)問(wèn)題解決學(xué)術(shù)問(wèn)題 與題目相呼應(yīng)與題目相呼應(yīng) （緊緊圍繞研究目標(biāo)）（緊緊圍繞研究目標(biāo)） 1. 證明證明bim啟動(dòng)子核心區(qū)的啟動(dòng)子核心區(qū)的SP1結(jié)合序列是否介導(dǎo)了結(jié)合序列是否介導(dǎo)了bim基因的基因的上調(diào)上調(diào) 為了證實(shí)bim啟動(dòng)子核心區(qū)的SP1結(jié)合序列是否介導(dǎo)了bim基因的上調(diào)，將其中的SP1結(jié)合序列進(jìn)行點(diǎn)突變，使其不能結(jié)合SP1；確定這一突變是否能夠消除bim啟動(dòng)子的撤鉀反應(yīng)。 2. 分析分析SP1 是否能夠與是否能夠與bim啟動(dòng)子核心區(qū)的啟動(dòng)子核心區(qū)的SP1結(jié)合序列結(jié)合

5、結(jié)合序列結(jié)合 應(yīng)用EMSA (Electrophoretic Mobility Shift Assay)技術(shù)，證實(shí)bim啟動(dòng)子核心區(qū)的SP1 結(jié)合序列是否能夠與SP1結(jié)合；進(jìn)一步采用CHIP(Chromatin immunoprecipitation)方法，獲得SP1與bim啟動(dòng)子核心區(qū)在細(xì)胞內(nèi)結(jié)合的證據(jù)。 3. 從從 bim 的的mRNA 和蛋白質(zhì)水平，觀察負(fù)顯性和蛋白質(zhì)水平，觀察負(fù)顯性SP1是否能夠抑是否能夠抑制撤鉀誘導(dǎo)的制撤鉀誘導(dǎo)的bim基因的上調(diào)基因的上調(diào) 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CGNs的轉(zhuǎn)染率只能達(dá)到0.1-1.0 %，腺病毒的感染率可達(dá)7080%1。 因此，構(gòu)建dnSP1的腺病毒載體Ad-dnS

6、P1，感染CGNs才能達(dá)到可靠分析bim的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平改變的目的。 4. 4. 分析分析SP1誘導(dǎo)誘導(dǎo)Bim這一機(jī)制對(duì)神經(jīng)元凋亡的調(diào)控作用這一機(jī)制對(duì)神經(jīng)元凋亡的調(diào)控作用 確立SP1轉(zhuǎn)錄激活bim這一機(jī)制后，進(jìn)一步分析這一機(jī)制對(duì)神經(jīng)元凋亡的調(diào)控作用。 獲得獲得SP1SP1直接調(diào)控直接調(diào)控bimbim基因表達(dá)的可靠依據(jù)?；虮磉_(dá)的可靠依據(jù)。 研究過(guò)程中對(duì)達(dá)到預(yù)期目標(biāo)有重要影響的某些研究?jī)?nèi)容或因素。 為達(dá)到預(yù)期目標(biāo)所必須掌握的關(guān)鍵技術(shù)或研究手段。找出關(guān)鍵問(wèn)題，問(wèn)題清晰，分析透徹， 合理的解決方法。 項(xiàng)目需求為前提；項(xiàng)目需求為前提；可靠性第一，先進(jìn)性第二；可靠性第一，先進(jìn)性第二；參考文獻(xiàn)；

7、參考文獻(xiàn)；突出關(guān)鍵技術(shù)的描述；突出關(guān)鍵技術(shù)的描述；不主張使用流程圖，建議開(kāi)頭：不主張使用流程圖，建議開(kāi)頭：“有關(guān)方法、技術(shù)路有關(guān)方法、技術(shù)路線、試線、試 驗(yàn)手段、關(guān)鍵技術(shù)綜述如下驗(yàn)手段、關(guān)鍵技術(shù)綜述如下”。 1. 工作基礎(chǔ)工作基礎(chǔ) （學(xué)術(shù)思想）（學(xué)術(shù)思想） 2. 科研梯隊(duì)科研梯隊(duì) 3. 實(shí)驗(yàn)條件實(shí)驗(yàn)條件 4. 實(shí)驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)技術(shù) 5. 交流與合作（國(guó)內(nèi)、國(guó)外）交流與合作（國(guó)內(nèi)、國(guó)外） 對(duì)創(chuàng)新的理解：創(chuàng)新性與先進(jìn)性是有根本區(qū)別的。對(duì)創(chuàng)新的理解：創(chuàng)新性與先進(jìn)性是有根本區(qū)別的。 原始創(chuàng)新：原始創(chuàng)新： 填補(bǔ)空白或修改傳統(tǒng)的理論；填補(bǔ)空白或修改傳統(tǒng)的理論； 新技術(shù)、新方法的發(fā)明創(chuàng)造。新技術(shù)、新方法的發(fā)明創(chuàng)

8、造。 跟蹤創(chuàng)新：跟蹤創(chuàng)新： 在前人工作基礎(chǔ)上補(bǔ)充、完善現(xiàn)有理論；在前人工作基礎(chǔ)上補(bǔ)充、完善現(xiàn)有理論； 對(duì)原有技術(shù)、方法進(jìn)行修改后產(chǎn)生對(duì)原有技術(shù)、方法進(jìn)行修改后產(chǎn)生1 11 12 2的效果。的效果。申請(qǐng)人首次報(bào)道了神經(jīng)元凋亡時(shí)促凋亡蛋白Bim上調(diào)是不依賴于JNK/c-Jun通路(Leyu Shi,et al, Neurosci Lett. 2005)一觀察之后，又以可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明PI3K/Akt/FKHRL1信號(hào)通路也不參與bim的上調(diào)（見(jiàn)立項(xiàng)依據(jù)）。 bim上調(diào)的轉(zhuǎn)錄機(jī)制是什么？我們率先對(duì)bim啟動(dòng)子進(jìn)行了5末端序列續(xù)減分析，確立了誘導(dǎo)bim表達(dá)的啟動(dòng)子核心區(qū)， 進(jìn)而發(fā)現(xiàn)一個(gè)典型的轉(zhuǎn)錄因子

9、SP1結(jié)合序列位于其中。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)顯示：神經(jīng)元凋亡時(shí)SP1被激活；負(fù)顯性SP1突變體和SP1-DNA結(jié)合抑制劑mithramycin A可抑制bim的上調(diào)。根據(jù)以上生物信息學(xué)分析和實(shí)驗(yàn)觀察，我們首次提出了SP1介導(dǎo)bim上調(diào)這一新的bim轉(zhuǎn)錄機(jī)制：神經(jīng)元凋亡時(shí)轉(zhuǎn)錄因子SP1被激活，激活的SP1與bim啟動(dòng)子核心區(qū)的SP1結(jié)合序列結(jié)合，從而轉(zhuǎn)錄激活bim的表達(dá)。 本項(xiàng)目擬進(jìn)一步采用負(fù)顯性SP1突變體的腺病毒表達(dá)技術(shù)以及啟動(dòng)子點(diǎn)突變、EMSA和CHIP方法，旨在獲得SP1直接調(diào)控bim基因的可靠證據(jù)，為闡明SP1對(duì)促凋亡蛋白Bim的調(diào)控作用和機(jī)制并進(jìn)一步確立SP1作為神經(jīng)退行性疾病治療的新靶點(diǎn)提供

10、更充分的科學(xué)依據(jù)。 ( (對(duì)于自由申請(qǐng)項(xiàng)目，著重對(duì)于自由申請(qǐng)項(xiàng)目，著重填寫申請(qǐng)人近期的主要工作業(yè)績(jī)；對(duì)于重點(diǎn)項(xiàng)目，填寫申請(qǐng)人近期的主要工作業(yè)績(jī)；對(duì)于重點(diǎn)項(xiàng)目，請(qǐng)著重填寫本課題組與本項(xiàng)目相關(guān)的研究工作積累請(qǐng)著重填寫本課題組與本項(xiàng)目相關(guān)的研究工作積累和近五年的主要研究業(yè)績(jī)和近五年的主要研究業(yè)績(jī)) ) ( (包括利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室包括利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和部門開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室的計(jì)劃與落實(shí)情況和部門開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室的計(jì)劃與落實(shí)情況) ) 在國(guó)家自然科學(xué)基金在國(guó)家自然科學(xué)基金(已結(jié)題三項(xiàng)、正進(jìn)行一項(xiàng)已結(jié)題三項(xiàng)、正進(jìn)行一項(xiàng))的資助下，的資助下，近五年有如下工作積累和成績(jī)：近五年有如下工作積累和成績(jī)： 1. SCI論文論

11、文 近五年發(fā)表了近五年發(fā)表了14篇篇SCI論文；其中與神經(jīng)元凋亡的信號(hào)論文；其中與神經(jīng)元凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因調(diào)控有關(guān)的論文，作為第一作者的有轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因調(diào)控有關(guān)的論文，作為第一作者的有2篇，作為通訊作者的篇，作為通訊作者的有有4篇篇(見(jiàn)后見(jiàn)后)，作為共同作者的有，作為共同作者的有8篇篇。 2. Bim轉(zhuǎn)錄機(jī)制的前期工作轉(zhuǎn)錄機(jī)制的前期工作 我們首次報(bào)道了神經(jīng)元凋亡時(shí)我們首次報(bào)道了神經(jīng)元凋亡時(shí)JNK/c-Jun不參與不參與bim的上調(diào)的上調(diào)1，隨后，我們又以可靠的證據(jù)揭示了，隨后，我們又以可靠的證據(jù)揭示了PI3K/Akt/ FKHRL1也不介導(dǎo)也不介導(dǎo)bim的上調(diào)的上調(diào)(未發(fā)表資料未發(fā)表資料)。這些

12、研究工作改變了以往。這些研究工作改變了以往的觀點(diǎn)的觀點(diǎn),也是本項(xiàng)目重要的立項(xiàng)依據(jù)之一。也是本項(xiàng)目重要的立項(xiàng)依據(jù)之一。 3. Bim啟動(dòng)子核心區(qū)確立啟動(dòng)子核心區(qū)確立 啟動(dòng)子啟動(dòng)子5末端序列續(xù)減分析確立了誘導(dǎo)末端序列續(xù)減分析確立了誘導(dǎo)Bim表達(dá)的啟動(dòng)子核表達(dá)的啟動(dòng)子核 心區(qū)，并發(fā)現(xiàn)一個(gè)典型的轉(zhuǎn)錄因子心區(qū)，并發(fā)現(xiàn)一個(gè)典型的轉(zhuǎn)錄因子SP1結(jié)合序列位于其結(jié)合序列位于其中。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)顯示：神經(jīng)元凋亡時(shí)中。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)顯示：神經(jīng)元凋亡時(shí)SP1被激活；負(fù)顯性被激活；負(fù)顯性SP1突變體和突變體和SP1-DNA結(jié)合抑制劑均可抑制結(jié)合抑制劑均可抑制Bim的上調(diào)。這些實(shí)驗(yàn)資料揭示了的上調(diào)。這些實(shí)驗(yàn)資料揭示了SP1介導(dǎo)介

13、導(dǎo) bim轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄調(diào)控的新機(jī)制，也為本項(xiàng)目申請(qǐng)?zhí)峁┝俗罡镜膶?shí)驗(yàn)依據(jù)。錄調(diào)控的新機(jī)制，也為本項(xiàng)目申請(qǐng)?zhí)峁┝俗罡镜膶?shí)驗(yàn)依據(jù)。 4. 轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控神經(jīng)元凋亡的工作基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控神經(jīng)元凋亡的工作基礎(chǔ) 另一項(xiàng)轉(zhuǎn)錄因子另一項(xiàng)轉(zhuǎn)錄因子MEF2抗抗神經(jīng)元凋亡的工作也顯示了申請(qǐng)人與本項(xiàng)目相關(guān)的較扎實(shí)的研究工作積累。神經(jīng)元凋亡的工作也顯示了申請(qǐng)人與本項(xiàng)目相關(guān)的較扎實(shí)的研究工作積累。本人首次報(bào)道本人首次報(bào)道(Mingtao Li, et al, J of Neurosci. 2001, 21:6544-6552 )、隨后被、隨后被他人證實(shí)他人證實(shí)(Shu-ichi Okamoto, et al, PNAS 20

14、02, 99:3974-3979)，神經(jīng)元凋亡時(shí)，神經(jīng)元凋亡時(shí)轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄因子MEF2A和和MEF2D不僅活性降低和失去抗凋亡作用，而且被凋亡殺不僅活性降低和失去抗凋亡作用，而且被凋亡殺手手caspase 剪切，其剪切，其N-末端產(chǎn)物反而具有促凋亡活性。這一末端產(chǎn)物反而具有促凋亡活性。這一MEF2調(diào)控凋亡機(jī)調(diào)控凋亡機(jī)制的發(fā)現(xiàn)，不僅對(duì)于我們理解神經(jīng)元存活或凋亡具有重要的意義，而且也為制的發(fā)現(xiàn)，不僅對(duì)于我們理解神經(jīng)元存活或凋亡具有重要的意義，而且也為神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和分化的研究開(kāi)拓了一條嶄新的思路，具有創(chuàng)新性。神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和分化的研究開(kāi)拓了一條嶄新的思路，具有創(chuàng)新性。 5. 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的工作基礎(chǔ)信號(hào)

15、轉(zhuǎn)導(dǎo)的工作基礎(chǔ) 較早的一項(xiàng)對(duì)較早的一項(xiàng)對(duì)cAMP / PKA 抗神經(jīng)元凋亡機(jī)制抗神經(jīng)元凋亡機(jī)制的研究也反映了本人在神經(jīng)元凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究方面有較厚實(shí)的工作積累的研究也反映了本人在神經(jīng)元凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究方面有較厚實(shí)的工作積累。申請(qǐng)者首次發(fā)現(xiàn)促凋亡激酶。申請(qǐng)者首次發(fā)現(xiàn)促凋亡激酶 GSK-3 和和GSK- 3是是PKA的天然底物；闡明的天然底物；闡明cAMP/PKA 通過(guò)磷酸化并抑制通過(guò)磷酸化并抑制GSK-3發(fā)揮其促神經(jīng)元存活的作用，此內(nèi)容發(fā)揮其促神經(jīng)元存活的作用，此內(nèi)容發(fā)表在發(fā)表在分子細(xì)胞生物學(xué)分子細(xì)胞生物學(xué)( Mingtao Li, et al, Mol Cell Biol. 2000, 2

16、0: 9356-9363)。 6. JNK/c-Jun通路的工作基礎(chǔ)通路的工作基礎(chǔ) 我們首次以我們首次以JNK/c-Jun為直接靶點(diǎn)、用為直接靶點(diǎn)、用小分子小分子JNK抑制劑抑制劑(SP600125)治療帕金森病動(dòng)物，證實(shí)治療帕金森病動(dòng)物，證實(shí)JNK是有效的治療靶是有效的治療靶點(diǎn)。此工作發(fā)表后點(diǎn)。此工作發(fā)表后 (Neuroscience Research, 2004; 48:195-202)，得到了國(guó)際，得到了國(guó)際同行的認(rèn)可。同行的認(rèn)可。SCI期刊期刊Drug News Perspectives邀請(qǐng)本人撰寫了有關(guān)邀請(qǐng)本人撰寫了有關(guān)“以以JNK為靶點(diǎn)治療帕金森病為靶點(diǎn)治療帕金森病”的專題綜述的專

17、題綜述“JNK Inhibition as a Potential Strategy in Treating Parkinsons Disease”(Drug News Perspect. 2004; 17:646-54)。 1. Leyu Shi , Shoufang Gong, Zhongmin Yuan , Chi Ma, Yanling Liu, Chuanfu Wang , Wenming Li, Rongbiao Pi, Shoujian Huang, Ruzhu Chen , Yifan Han , Zixu Mao, and Mingtao Li(通訊作者). Activity

18、 deprivation-dependent induction of the proapoptotic BH3-only protein Bim is independent of JNK/c-Jun activation during apoptosis in cerebellar granule neurons. Neurosci Lett. 2005, 375：712. 2. Wenya Wang, Chi Ma, Zixu Mao and Mingtao Li. (通訊作者). JNK inhibition as a potential strategy in treating Pa

19、rkinsonss disease. Drug News Perspect, 2004, 17(10):646-54. 3. Wenya Wang, Leyu Shi, Yuanbin Xie, Chi Ma, Wenming Li, Xingwen Su, Shoujian Huang, Ruzhu Chen, Zhenyu Zhu, Zixu Mao, Yifan Han and Mingtao Li. (通訊作者). SP600125, a new JNK inhibitor, protects dopaminergic neurons in the MPTP model of Park

20、insons disease. Neurosci Res 2004；48:195-202 4. Yuanbin Xie, Yanling Liu, Chi Ma, Zhongmin Yuan, Wenya Wang, Zhenyu Zhu, , Guoquan Gao, Xianguo Liu, Hengxin Yuan, Ruzhu Chen, Shoujian Huang, Xuelan Wang, Xiaonan Zhu, Xuemin Wang, Zixu Mao and Mingtao Li (通訊作者). Indirubin-3-oxime inhibits c-Jun NH2-t

21、erminal kinase: anti-apoptotic effect in cerebellar granule neurons. Neurosci Lett. 2004, 367:355-359. 5. Rongbiao Pi, Wenming Li Nelson T.K.Lee, Hugh H.N.Chan, Yongmei Pu, Ling Nga Chan, Nikolaus J.Sucher, Doanld C. Chang, Mingtao Li and Yifan Han. Minocycline prevents glutamate-induced apoptosis o

22、f cerebellar granule neurons by differential regulation of p38 and Akt pathways. J Neurochem. 2004, 91:1212-1230. Wenya Wang, Chi Ma, Zixu Mao and Mingtao Li. (通訊作者). JNK inhibition as a potential strategy in treating Parkinsonss disease. Drug News Perspect, 2004, 17(10):646-54. 6. Wenming Li, Rongb

23、iao Pi, Hugh H. N. Chan, Hongjun Fu, Nelson T. K. Lee, Hing Wai Tsang, Yongmei Pu, Donald C. Chang, Chaoying Li, Jialie Luo, Keming Xiong, Zhiwang Li, Hong Xue, Paul R. Carlier, Yuanping Pang, Karl W. K. Tsim, Mingtao Li and Yifan Han. Novel dimeric AChE inhibitor Bis(7)-tacrine, but not Donepezil,

24、prevents glutamate-induced neuronal apoptosis by blocking NMDA receptors. J Biol Chem. 2005, 280(18):18179-88. 7. Xuemin Wang, Xiaoli Tang, Mingtao Li, John Marshall, Zixu Mao. Regulation of neuroprotective activity of myocyte enhancer factor 2 by cAMP-PKA signaling pathway in neuronal survival. J B

25、iol Chem. 2005, 280(17):16705-13. 8. Marcus Wiedmann, Xuemin Wang, X.iaoli Tang, Mingtao Li, Zixu Mao. PI3K/Akt-dependent regulation of the transcription factor myocyte enhancer factor-2 in insulin-like growth factor-1- and membrane depolarization-mediated survival of cerebellar granule neurons. J N

26、eurosci Res. 2005 2005 81(2):226-234. 9. Mingtao Li，Xiaomin Wang，Mary Kay Meintzer，Tracey Laessig，Morris J. Birnbaum and Kim A. Heidenreich. Cyclic AMP promotes neuronal survival by phosphorylation of glycogen synthase kinase 3. Mol Cell Biol. 2000, 20（24）：9356-9363. 10. Mingtao Li，Daniel A. Linsenm

27、an，Melissa P.Allen，Mary Kay Meintzer， Xiaomin Wang，Tracey Laessig，Margaret E. Wierman & Kim A. Heidenreich. MEF2A and MEF2D undergo phosphorylation and caspase-mediated degradation during apoptosis of rat cerebellar granule neurons. J. Neurosci. 2001; 21(17):6544-6552. 11. Daniel A. Linseman, Ch

28、ristopher M. Bartley, Shoshona S. Le, Tracey A. Laessig, Ron J. Bouchard, Mary Kay Meintzer, Mingtao Li and Kim A. Heidenreich . Inactivation of the Myocyte Enhancer Factor-2 Repressor Histone Deacetylase-5 by Endogenous Ca2/Calmodulin-dependent Kinase II Promotes Depolarization-mediated Cerebellar

29、Granule Neuron Survival. J Biol Chem 2003, 278:4147241481. 12. Jing-Ping Yun, Choong-Tsek Liew, Eng Ching Chew, Xiao-Yu Yin, Paul Bo San Lai, Yam Hin Fai, H.K. Richard Li, Mei-Lin Jin, Ming-Xiao Ding, Mingtao Li, Han-Liang Lin, and Wan Yee Lau. Nuclear Matrix Protein Expressions in Hepatocytes of No

30、rmal and Cirrhotic Rat Livers Under Normal and Regenerating Conditions. J Cell Biochem. 2004, 91:12691279. 13. Hongwei Yang, Xiaodong Hu, Hongmei Zhang, Wenjun Xin, Mingtao Li, Tong Zhang, Lijun Zhou and Xianguo Liu. Roles of CaMKII, PKA, and PKC in the induction and mainternance of LTP of C-fiber-e

31、voked field potentials in rat spinal dorsal horn. J Neurophysiol. 2004, 91: 1122-1133.14 . Nengwei Hu, Hongmei Zhang, Xiaodong Hu , Mingtao Li, Tong Zhang, Lijun Zhou and Xianguo Liu. Protein Synthesis Inhibition Blocks the Late-Phase LTP of C-Fiber Evoked Field Potentials in Rat Spinal Dorsal Horn.

32、 J Neurophysiol, 2003;89:2354- 235915 . Juan Sun, Mingtao Li, Jiahuai Han and Jun Gu. Sensitization of differentiated PC12 cells to apoptosis by presenilin-2 is mediated by p38. Biochem. Biophy. Res. Commun., 2001, 287: 536-541. 16. Weibin Cai, Jianfang Ma , Chaoyang Li, Zhonghan Yang, Xia Yang, Wei

33、 Liu , Zuguo Liu , Mingtao Li, Guoquan Gao. Enhanced anti-angiogenic effect of a deletion mutant of plasminogen kringle 5 on neovascularization. J Cell Biochem. 2005 Sep 15;(in press).17. Ming YANG, Cun-you WAGN, Feng ZHOU, Jing TAO, Tao LIU, Hai-yan WEI, Wei LIU, Ming-tao Li, Xian-song FENG. Proteo

34、mic Analysis in the Early Process of Pancreatic Regeneration in the Pancreatectomized Rat. Acta Pharmacologica Sinica 2005 (in press) 2001年回國(guó)，獲得211基金180萬(wàn)元，組建了一流的分子、細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室。2002年，作為負(fù)責(zé)人獲得一期985學(xué)科建設(shè)經(jīng)費(fèi)700萬(wàn)元，籌建了一流的蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)室并正在主持開(kāi)展蛋白質(zhì)科學(xué)的前沿性工作。近三年，培養(yǎng)和匯聚了一支從事分子神經(jīng)生物學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)研究的科研隊(duì)伍。 這些建設(shè)性工作為解決細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因調(diào)控以及本項(xiàng)目的核

35、心問(wèn)題奠定了扎實(shí)的基礎(chǔ)。 項(xiàng)目負(fù)責(zé)人黎明濤所在單位中山大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理教研室是211項(xiàng)目資助學(xué)科和國(guó)家重點(diǎn)學(xué)科。人才濟(jì)濟(jì)，科研裝備精良。近三年，藥理教研室獲得學(xué)科建設(shè)資金3000萬(wàn)元，已購(gòu)置大型儀器如質(zhì)譜儀、激光共聚焦顯微鏡、超速離心機(jī)、流式細(xì)胞儀、高效液相和蛋白質(zhì)分離純化系統(tǒng)等。這是申請(qǐng)者視為非?？少F的研究工作環(huán)境。 申請(qǐng)者和項(xiàng)目組主要成員申請(qǐng)者和項(xiàng)目組主要成員 l學(xué)歷l研究工作簡(jiǎn)歷l近期已發(fā)表與本項(xiàng)目有關(guān)的文章目錄l獲得學(xué)術(shù)獎(jiǎng)勵(lì)情況l在本項(xiàng)目中承擔(dān)的任務(wù)。 黎明濤黎明濤 (Li Mingtao) 項(xiàng)目負(fù)責(zé)人，中山大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理教研室教授，博士生導(dǎo)師，中山醫(yī)學(xué)院蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)室主任。于

36、1984年、1989年和1996年分別獲得醫(yī)學(xué)學(xué)士、碩士和博士學(xué)位。 主要研究領(lǐng)域是神經(jīng)元凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因調(diào)控和蛋白質(zhì)組學(xué)。在美國(guó)Department of Pharmacology, University of Colorado Health Sciences Center從事兩年博士后研究（1999-2001），主攻凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因調(diào)控和蛋白質(zhì)組學(xué)。 近五年發(fā)表了14篇SCI論文，其中：作為第一作者，在國(guó)際核心雜志Molecular and Cellular Biology(Impact Factor, 10.03)和 Journal of Neuroscience(IF, 8.4

37、)發(fā)表了具有創(chuàng)新性的文章；作為通訊作者，最近在Neurosci Res(IF, 2.4) 和Neurosci Lett（IF，2.2）等期刊上發(fā)表了開(kāi)拓性的文章。近五年（19982004）作為第一主持人獲得13項(xiàng)基金，包括：4項(xiàng)國(guó)家自然科學(xué)基金；5項(xiàng)省自然科學(xué)基金；3項(xiàng)市基金；1項(xiàng)教育部基金。 發(fā)表的相關(guān)論文發(fā)表的相關(guān)論文 1. Leyu Shi , Shoufang Gong, Zhongmin Yuan , Chi Ma, Yanling Liu, Chuanfu Wang , Wenming Li, Rongbiao Pi, Shoujian Huang, Ruzhu Chen , Yi

38、fan Han , Zixu Mao, and Mingtao Li(通訊作者). Activity deprivation-dependent induction of the proapoptotic BH3-only protein Bim is independent of JNK/c-Jun activation during apoptosis in cerebellar granule neurons. Neurosci Lett. 2005, 375:712. 2. 3. 皮榮標(biāo)皮榮標(biāo)(Pi Rongbiao) 33歲，博士學(xué)位，講師。2002年畢業(yè)于中山大學(xué)，獲神經(jīng)藥理學(xué)博士

39、。同年赴香港科技大學(xué)生物化學(xué)系從事博士后研究，現(xiàn)在中山大學(xué)藥學(xué)院任講師。主要研究興趣涉及神經(jīng)保護(hù)藥物的作用及其機(jī)制的研究。曾負(fù)責(zé)或參加包括國(guó)家自然科學(xué)基金等多項(xiàng)研究。已發(fā)表或待發(fā)表論著近20篇，其中SCI論文5篇。 皮博士與本人合作達(dá)11年，有共同的研究趣向，作為共同作者發(fā)表多篇SCI論文。他掌握了本項(xiàng)目涉及的大部分實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)，尤其在腺病毒載體構(gòu)建方面積累了經(jīng)驗(yàn)（見(jiàn)文章）。主要負(fù)責(zé)腺病毒載體構(gòu)建等工作。 發(fā)表的相關(guān)論文發(fā)表的相關(guān)論文 1. Rongbiao Pi, Wenming Li, Nelson T.K.Lee, Hugh H.N.Chan, Yongmei Pu, Ling Nga

40、 Chan, Nikolaus J. Sucher, Doanld C. Chang, Mingtao Li and Yifan Han. Minocycline prevents glutamate-induced apoptosis of cerebellar granule neurons by differential regulation of p38 and Akt pathways. J Neurochem. 2004, 91:1212-1230. 2. 3. 黎明濤先生：黎明濤先生： 您好！您申請(qǐng)的項(xiàng)目經(jīng)專家投票表決，同意資助。您好！您申請(qǐng)的項(xiàng)目經(jīng)專家投票表決，同意資助。關(guān)于你

41、的項(xiàng)目的同行評(píng)議意見(jiàn)如下： 1. 本項(xiàng)目在小腦顆粒細(xì)胞撤鉀的離體凋亡模型中，發(fā)現(xiàn)了一種直接調(diào)節(jié)Bim的新轉(zhuǎn)錄因子SP1，申請(qǐng)人試圖采用腺病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)、基因突變以及分子生物學(xué)方法進(jìn)一步論證SP1是直接調(diào)控bim基因的這一假說(shuō)。立項(xiàng)具有前言性，申請(qǐng)人工作基礎(chǔ)好，并與美國(guó)Emory大學(xué)、香港大學(xué)有長(zhǎng)期的合作條件，完全能夠完成本項(xiàng)課題。建議優(yōu)先資助。 2. 本項(xiàng)課題的立項(xiàng)依據(jù)較為充分，具有一定的學(xué)術(shù)創(chuàng)新及科學(xué)意義。研究?jī)?nèi)容明確、技術(shù)路線清晰、研究方法和方案可行。申請(qǐng)者有較高的學(xué)術(shù)水平，以及多次主持國(guó)家自然科學(xué)基金課題的經(jīng)驗(yàn)。同時(shí)，申請(qǐng)者所在單位又有比較好的實(shí)驗(yàn)室及條件。建議給予資助。 3. 課題研究具

42、有較好的工作基礎(chǔ)，研究具有較高的學(xué)術(shù)價(jià)值，建議資助。 4. 同意資助。理由：該項(xiàng)目立論依據(jù)充分，其重要的意義表現(xiàn)在澄清撤鉀誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡時(shí)，Bim上調(diào)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。申請(qǐng)者有較好的研究基礎(chǔ)和研究能力，項(xiàng)目的內(nèi)容設(shè)置合適，重點(diǎn)突出，總體方案合理，技術(shù)路線可行，可資助。 5. This is a nicely writen proposal with a clear aim and practical approaches. Further, the group has published results related to the current proposal, indicating

43、 the ability of the group to perform the experiments. l工作基礎(chǔ)好l學(xué)術(shù)創(chuàng)新性及學(xué)術(shù)價(jià)值l立項(xiàng)依據(jù)充分l研究?jī)?nèi)容明確l技術(shù)路線清晰l重點(diǎn)突出、方案合理l國(guó)際合作l充滿自信、激情 l儀表和體語(yǔ) l特點(diǎn)： 專家心理？按提前結(jié)束做準(zhǔn)備！l準(zhǔn)備充分 幻燈 小道具l口頭表達(dá) 準(zhǔn)確性、情感性、可信性和簡(jiǎn)明性l開(kāi)門見(jiàn)山、突出主題 做什么？為什么？怎樣做？l突出特色和創(chuàng)新黎 明 濤中山大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院中山大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 現(xiàn)現(xiàn) 狀：狀： 1.發(fā)病情況：發(fā)病情況： 世界性；中國(guó)世界性；中國(guó) 100萬(wàn)；美國(guó)萬(wàn)；美國(guó) 100萬(wàn)萬(wàn) 2.病理特征：病理特征： 黑質(zhì)多巴胺

44、神經(jīng)元凋亡黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元凋亡 紋狀體多巴胺含量紋狀體多巴胺含量 3.治療現(xiàn)狀：治療現(xiàn)狀： 左旋多巴左旋多巴對(duì)癥治療：療效不理想、安全性受對(duì)癥治療：療效不理想、安全性受 到質(zhì)疑到質(zhì)疑2002年省重點(diǎn)項(xiàng)目（15萬(wàn)元）資助 MLK JNK SP600125SP600125 c-Jun 凋亡 以以JNK為靶治療為靶治療PD1. 1. 保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元2. 2. 改善行為學(xué)指標(biāo)改善行為學(xué)指標(biāo)3. 3. 提高黑質(zhì)多巴胺濃度提高黑質(zhì)多巴胺濃度 結(jié)題情況結(jié)題情況1. 四篇SCI文章， 通訊作者2. 人才培養(yǎng)： 1名 博士 2名 碩士 JNK Neurosci Res 2004, 48:1

45、95-202 Drug News Perspect.2004 17(10):646-54 GSK3 Mingtao Li, et al, unpublished data CDK5 PNAS USA 2003,100(23):13650-5 1.三種抑制劑聯(lián)合 2.一種抑制劑，“一石三鳥(niǎo)” Nat Cell Biol. 1999 1(1):60-7 J Biol Chem. 2001, 5;276(1):251-60靛玉紅直接抑制JNK活性靛玉紅直接抑制靛玉紅直接抑制JNK, 保護(hù)神經(jīng)元保護(hù)神經(jīng)元 Indirubin-3-oxime prevented loss of dopamine neu

46、rons after MPTP administration. (a) vehicle treated (control); (b) MPTP treated; MPTP along with Indirubin-3-oxime 5mg/kg (c); 10mg/kg (d) and 30mg/kg (e). Note Indirubin-3-oxime rescued the dopaminergic neurons loss in a dose-dependent manner (c-e). 以JNK/CDK5/GSK3為明確靶點(diǎn)，以靛玉紅衍生物為抑制劑, 研發(fā)出一類毒性小、特異性高、作用

47、強(qiáng)的治療PD的新藥物 1. 篩選對(duì)JNK具有特異性抑制作用的靛玉紅衍生物 (11個(gè)）2. 篩選對(duì)黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元凋亡具有保護(hù)性干預(yù)作用的靛玉紅衍生物 （8個(gè)）3. 篩選對(duì)PD具有治療作用的衍生物 （4個(gè)）4. 藥理、毒理研究1. 首次證實(shí)JNK是治療PD的有效靶點(diǎn)2. 證實(shí)GSK-3是治療PD的靶點(diǎn)之一3. 發(fā)現(xiàn)靛玉紅衍生物能夠抑制JNK，對(duì)PD具有治療作用4. 15篇相關(guān)SCI文章1.Wiedmann M, Wang X, Tang X, Han M, Li M, Mao Z. J Neurosci Res. 2005 Jun 1 Epub ahead of print 2.Wang X,

48、Tang X, Li M, Marshall J, Mao Z. J Biol Chem. 2005, 280(17):16705-13. 3.Li W, Pi R, Chan HH, Fu H, Lee NT, Tsang HW, Pu Y, Chang DC, Li C, Luo J, Xiong K, Li Z, Xue H, Carlier PR, Pang Y, Tsim KW, Li M, Han Y. J Biol Chem. 2005, 280(18):18179-88. 1. 首次證實(shí)JNK是治療PD的有效靶點(diǎn) 2. 證實(shí)GSK-3是治療PD的靶點(diǎn)之一 3. 發(fā)現(xiàn)靛玉紅能夠抑

49、制JNK，對(duì)PD具有治療作用 4. JNK/CDK5/ GSK-3為靶治療PD 5. 用一種化合物抑制JNK/CDK5/ GSK-3 Fig.6 Mithramycin A, a SP1-DNA binding inhibitor, attenuates bim upreguation by activity deprivation in CGNs. (A) Mithramycin A attenuates the upregulation of BimEL induced by activity deprivation in a dose dependent manner. CGNs wer

50、e placed in 25K or 5K media in the absence or presence of mithramycin A at the indicated concentrations for 6 h. BimEL expression was assessed by Western blot as described in Fig.1(A). Results shown are representative of four separate experiments. (B) Mithramycin A inhibits the increase in bim mRNA

51、level in a dose-dependent manner. Neurons were treated as described in (A), bim and actin mRNAs were determined by RT-PCR, Results shown are representative of five separate experiments. (C) Mithramycin A suppresses the activation of bim promoter induced by activity deprivation. Neurons were co-trans

52、fected with bim-Luc and pEF-RL for 8 hr. Luciferase activities were measured as described in Fig.2, The experiments were repeated three times with duplicates for each treatment. The data represent S.E.M. of three experiments. 1. Leyu Shi , Shoufang Gong, Zhongmin Yuan , Chi Ma, Yanling Liu,Chuanfu W

53、ang , Wenming Li, Rongbiao Pi, Shoujian Huang, Ruzhu Chen , Yifan Han , Zixu Mao, and Mingtao Li. Activity deprivation-dependent induction of the proapoptotic BH3-only protein Bim is independent of JNK/c-Jun activation during apoptosis in cerebellar granule neurons. Neurosci Lett. 2005, 375：712. 2. Weny