穿刺液標本細菌學檢驗標準操作規(guī)程

1、穿刺液標本細菌學檢驗標準操作規(guī)程1. 目的 規(guī)范穿刺液標本細菌學檢驗標準操作規(guī)程，確保檢驗結(jié) 果準確可靠。2. 適用范圍穿刺液標本培養(yǎng)。3. 標本3.1 標本類型 胸水、腹水、心包液、關節(jié)液、鞘膜液 等。3.2 標本采集 采用無菌方法采集體內(nèi)可疑感染部位 的液體約 2ml ，注入無菌試管，或抽取穿刺液 1-2ml 注入多 功能液體培養(yǎng)瓶， 或抽取穿刺液 2-5ml 注入血培養(yǎng)瓶， 混勻， 立即送檢。如懷疑厭氧菌感染，應做床邊接種或接種運送培 養(yǎng)基。3.3 標本拒收標準3.3.1 標本標識與化驗申請單不符。3.3.2 標本不是無菌留取，容器不符合要求。3.4 標本保存 采集標本后立即送到實驗室，

2、 不能及時 送檢可置于室溫，放置時間不超過 2 小時。4. 試劑、儀器4.1 革蘭染液、氧化酶試劑、 3% 觸酶、血瓊脂平板、巧克力平板、麥克凱平板、相關生化試劑等4.2 VITEK 鑒定系統(tǒng)；革蘭陰性菌鑒定卡（ GNI+ ）、革 蘭陰性菌藥敏卡（GNS ）、革蘭陽性菌鑒定卡（GPI）、革蘭 陽性菌藥敏卡（GPS）、真菌鑒定卡（YBC）、藥敏紙片、TBA 板條等，有效期及儲存條件參見試劑說明書。4.3 接種針、接種環(huán)、電熱灼燒器、顯微鏡、孵育箱、 CO2 培養(yǎng)箱等。5. 細菌鑒定和藥敏質(zhì)控參見質(zhì)量管理程序6. 檢驗步驟 接收標本后，立即對標本進行編號、登記。6.1 涂片檢查 膿性標本直接涂片。

3、 漿液性標本先離心（ 3000r/min ） 15 分鐘， 取沉淀物涂片作革蘭染色， 觀察有無 細菌，以及細菌的形態(tài)。6.2 分離培養(yǎng)6.2.1 一般細菌培養(yǎng) 接種于接種于血瓊脂平板、巧克 力瓊脂平板和麥康凱（或 EMB 、中國藍）瓊脂平板，置于 5%-10%CO2 環(huán)境中， 35° C 培養(yǎng) 18-24 小時，根據(jù)菌落及染 色形態(tài)特點，作出初步判斷。6.2.2 增菌 -分離培養(yǎng)法 將多功能體液培養(yǎng)瓶顛倒混勻 使液體覆蓋整個固體面，然后置 35° C 孵育培養(yǎng)箱（固體面 在上，液體在下） 。次日觀察固體表面菌苔生長及瓶中液體 是否渾濁。如發(fā)現(xiàn)有菌生長，立即涂片鏡檢、生化鑒定

4、和藥敏試驗。此法可提高陽性檢出率。6.2.3 厭氧菌培養(yǎng) 床邊接種或從厭氧菌運送培養(yǎng)基轉(zhuǎn) 種后，立即置于厭氧環(huán)境中， 35°C 培養(yǎng) 24-48 小時；挑取 可疑菌落作耐氧試驗，確定為厭氧菌。6.2.4 結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)： 參見分支桿菌屬檢驗標 準操作規(guī)程 。7 結(jié)果報告培養(yǎng) 48小時無菌生長，報告“培養(yǎng) 2 日無細菌生長” 。 查見細菌，報告菌名和藥敏結(jié)果。注意事項標本的采集一定要嚴格履行無菌操作技術，避免污染。 加入抗凝劑的標本（如胸腹水）采集后要與抗凝劑充分 混勻并及時送檢。體液均需做厭氧培養(yǎng)，故運送過程嚴格厭氧環(huán)境。臨床意義 各個部位穿刺液（胸水、腹水、心包液、關節(jié)液及鞘膜

5、液等）的細菌學檢查對于確定該部位是否有細菌感染具有重 要的診斷價值。正常穿刺液是無菌的，若從病人穿刺液中查 見致病菌或條件致病菌則提示該部位有細菌感染。胸腔感染 的病原菌以結(jié)核分枝桿菌多見，其次是金黃色葡萄菌、溶血 性鏈球菌、大腸埃希菌和銅綠假單胞菌等，腹腔感染的病原 菌以腸道細菌如大腸埃希菌、溶血性鏈球菌、糞腸球菌，以 及結(jié)核分枝桿菌多見；心包炎和關節(jié)炎以金黃色葡萄菌、溶 血性鏈球菌、大腸埃希菌和銅綠假單胞菌等多見。10.危急值報告涂片發(fā)現(xiàn)細菌或培養(yǎng)陽性均需要及時向臨床報告結(jié)果。參 考 文 獻1 中國合格評定國家認可委員會.CNAS-CL32:2008醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則在微生物學檢驗領域的指南.20082 周庭銀編著.臨床微生物學診斷與圖解第二版.上海： 上?？茖W技術出版社，20073 葉應嫵，王毓三，申子瑜主編全國臨床檢驗操作規(guī)程第.三版.南京：東南大學出版社，20064 Murray PR. Manual of Clini