生物化學復習知識點概括

1、生物化學復習知識點概括b6 蛋白質(zhì)的純化（purification）1、 蛋白質(zhì)的穩(wěn)定作用（stabilization） 1.選擇適當?shù)木彌_液（ph=7）； 2.操作溫度：4； 避免蛋白質(zhì)變性和降解 3.添加蛋白酶抑制劑二、硫酸銨沉淀法-蛋白質(zhì)混合物的分級分離加入硫酸銨鹽離心 棄去上清液，重新再溶解蛋白 通過透析脫鹽 結(jié)果：目標蛋白和溶解度相似的蛋白與溶解度差異較大的蛋白及非蛋白類物質(zhì)相互分離。 【鹽析利用蛋白質(zhì)的性質(zhì)：溶解度】3、 透析（dialysis） 1.蛋白質(zhì)是高分子化合物，不易透過半透膜，因此可用透析法純化蛋白質(zhì)，主要應用是脫鹽 (de-salting)。 2.半透膜上的孔允許約1

2、0kda以下分子通過，大多數(shù)蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量超過了10kda，故會留在透析袋內(nèi)。 【到達平衡時，透析袋內(nèi)的小分子濃度相同，故此需要多次更換周圍的溶液-有效地降低小分子在蛋白質(zhì)溶液中的濃度】4、 凝膠過濾層析（gel filtration chromatography) 1.原理: 柱子中的固定相為多孔凝膠顆粒(porous gel beads),具有一定的孔徑;將蛋白質(zhì)溶液加到柱子上端,并使一定緩沖液(buffer,即流動相)不斷流過柱子, 則大分子不能進入凝膠顆粒先被洗脫(eluted),而小分子進入凝膠顆粒,后被洗脫,因此,不同分子是基于它們的大小不同而被分離的。（1）多孔凝膠顆粒(不溶的

3、、高度親水的)。（2）elution volume (ve)(洗脫體積) 從樣品被加到柱子上開始到其被洗脫出柱子所流過柱子緩沖液的總體積。（3）void volume (vo) (空體積) 柱子內(nèi)部除去凝膠顆粒以外的剩余體積。（相對洗脫體積(ve/vo)與分子量的對數(shù)呈線性關系）2. 主要應用: 樣品的脫鹽 、蛋白質(zhì)分子量的估計 5、 離子交換層析(ion exchange chromatography） 1.原理:柱子中的固定相為帶正電荷(positively charged)或負電荷(negatively charged)的顆粒(又稱為離子交換劑 ion exchanger),在一定ph值

4、下各種蛋白質(zhì)所帶凈電荷不同,與離子交換劑的作用方式和強弱也不同,可通過一定方式被先后洗脫下來,因此,不同分子是基于它們所帶的凈電荷(on the basis of their net charge)差異而被分離的。 （1）陰離子交換劑(自身帶正電),用于陰離子交換層析中,可吸附并分離帶負電的蛋白質(zhì) (陰離子) （2）陽離子交換劑(自身帶負電),用于陽離子交換層析中,可吸附并分離帶正電的蛋白質(zhì) (陽離子)6、 親和層析（affinity chromatography） 1.原理: 利用蛋白質(zhì)與另一種分子(它的配體)的特異性結(jié)合的性質(zhì)進行分離。如酶與其抑制劑或輔酶, 抗體與抗原,受體與激素等。 2

5、.過程: 配體(ligand)固定在不溶性支持物上并裝入柱中, 混合蛋白通過親和柱時, 其它蛋白全流過, 只有目標蛋白結(jié)合在固定化的配體上,使用緩沖液對柱子進行沖洗，最后加入含可溶性配體的緩沖液可將目標蛋白以高純度的形式洗脫下來。隨后再透析除去小分子配體。b7 蛋白質(zhì)的電泳（electrophoresis）1、 電泳（electrophoresis）1. 定義：帶凈電荷的分子在電場中向一極或另一極移動的現(xiàn)象。2. 凈電荷越大，分子移動越快。3. 原理：根據(jù)蛋白質(zhì)的凈負電荷和分子大小在電場中進行分離。小的帶負電荷較多的蛋白質(zhì)比較大的帶負電荷較少的蛋白質(zhì)在凝膠中遷移得快。2、 sds-page（s

6、ds-聚丙烯酰胺凝膠電泳） 1.原理：用還原劑處理樣品，使二硫鍵打開,同時用陰離子去污劑sds使蛋白質(zhì)變性，并使蛋白質(zhì)覆蓋負電荷,然后進行電泳。由于所有蛋白質(zhì)都帶與其質(zhì)量成正比的負電荷，所以是根據(jù)它們的質(zhì)量而被分離。小分子遷移快，大分子慢。 2.特點：快速、靈敏、廣泛使用 3.應用：測定蛋白質(zhì)樣品的純度；估計未知蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量；推測某種蛋白多肽亞基數(shù)目。c4 酶的抑制作用（ enzyme inhibition）1、 酶的抑制作用（ enzyme inhibition）1. 抑制劑（inhibitors）：直接作用于酶并使它的催化速率降低的分子。包括正常機體代謝物、藥物和毒物。2.酶的抑制作用

7、類型：可逆的和不可逆的。可逆性抑制可分為競爭性抑制和非競爭性抑制。2、 不可逆性抑制1. 定義：抑制劑不可逆地與酶結(jié)合，它通常與活性部位或其附近的氨基酸殘疾形成共價鍵，永久使酶失活。3、 可逆的競爭性抑制 1.典型的競爭性抑制劑與酶的正常底物有相似的結(jié)構 ，故它與底物分子競爭性地結(jié)合酶的活性部位，酶既可以結(jié)合底物分子也可以結(jié)合抑制劑分子，但不能同時與兩者結(jié)合。 2.競爭性抑制劑與活性部位可逆結(jié)合，底物濃度增高科消弱競爭性抑制劑的作用；因為足夠高的底物濃度可將結(jié)合在活性部位的抑制劑分子競爭性地排出。（增加底物濃度，競爭性抑制劑的抑制作用降低）3.競爭性抑制劑存在時，酶的vmax不變，但酶對起底物

8、的表現(xiàn)親和力降低，km增加。（競爭性抑制劑增加km，vmax不變）4.lineweaver-burk圖：競爭性抑制劑使直線斜率增加，x軸上截距變?。╧m增大），y軸截距不變（vmax不變）。4、 可逆的非競爭性抑制 1.非競爭性抑制劑與酶活性部位以外的部位可逆地結(jié)合，導致酶的三維構象變化，從而降低酶的催化速率。（酶既可以結(jié)合底物，也可以結(jié)合抑制劑，或兩者同時結(jié)合） 2.非競爭性抑制劑的抑制作用不受底物濃度增加的影響,所以vmax降低。3.受非競爭性抑制劑作用時，酶對底物濃度的親和力不變，所以km不變。4.lineweaver-burk圖：非競爭性抑制劑能增加直線斜率，改變y軸截距（vmax減少

9、），使x軸上截距保持不變（km不變）。c5 酶活性的調(diào)節(jié)（regulation of enzyme activity）1、 反饋調(diào)節(jié)（feedback regulation） 1.反饋抑制（feedback inhibition）：是指最終產(chǎn)物抑制作用，即在代謝途徑中，代謝途徑的終產(chǎn)物對該途徑前斷的某種酶的抑制，這種抑制稱為反饋抑制。2、 變構酶（allosteric enzymes） 1.一般性質(zhì)：通常是多亞基蛋白質(zhì)，有多個活性部位；也有調(diào)節(jié)部位；抑制劑結(jié)合調(diào)節(jié)位點降低酶e活性，催化劑提高活性；其自身亞基通常是激活劑 2.特征：多為寡聚酶，含有兩個或多個亞基。其分子中包括兩個中心：一個是與底

10、物結(jié)合、催化底物反應的活性中心；另一個是與調(diào)節(jié)物結(jié)合、調(diào)節(jié)反應速度的別構中心。兩個中心可能位于同一亞基上，也可能位于不同亞基上。在后一種情況中，存在別構中心的亞基稱為調(diào)節(jié)亞基。別構酶是通過酶分子本身構象變化來改變酶的活性。 3.變構模型：序變模型、齊變模型 4.天冬氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶（aspartate transcarbamoylase atcase） (1)它催化嘧啶核苷酸合成途徑中的第一個中間物n-氨甲酰天冬氨酸的合成，atcase受其代謝途徑的終產(chǎn)物ctp的反饋抑制。atcase由6個催化亞基和6個調(diào)節(jié)亞基組成。當催化亞基和調(diào)節(jié)亞基混合時能迅速結(jié)合。（由atcase催化生成的n-氨甲酰天冬

11、氨酸是嘧啶生物合成中的關鍵步驟和關鍵調(diào)控點） (2)atcase參與嘧啶合成時受其代謝途徑的終產(chǎn)物ctp的反饋抑制和中間產(chǎn)物之一的激活劑atp的調(diào)節(jié)。調(diào)節(jié)的機制：激活劑atp含量高，傳遞給細胞的信號使提供給dna復制的能量充足，因此，atcase被激活，合成所需的嘧啶核苷酸；黨嘧啶足夠時，ctp含量高，抑制atcase，從而阻止該途徑中不需要的n-氨甲酰天冬氨酸和隨后的中間產(chǎn)物。5.可逆共價修飾：非蛋白質(zhì)基團和酶分子之間的共價鍵的形成和斷裂。6.蛋白水解的激活作用：一些酶合成時只是一個被稱為酶原的較大的無活性的前體，它們中的一個或幾個肽鍵經(jīng)不可逆地水解而被激活。7.酶合成與分解調(diào)節(jié)： （1）某

12、種特定酶在細胞或組織中的存在的量取決于其合成與降解速率。對編碼酶基因的誘導和阻遏程度、模板mrna的降解速率均可改變酶蛋白合成的速率。酶蛋白合成后，可改變其降解速率（半衰期）對酶活性進行調(diào)節(jié)。 （2）半衰期：蛋白質(zhì)被降解50%所需的時間，可反映某種酶的降解速率。d2 抗體：概述（antibodies: an overview）1、 輕鏈和重鏈： 1.抗體的組成：抗體分子含有以二硫鍵連接在一起的4條多肽鏈，即兩條相同的約220個氨基酸組成的輕鏈和兩條相同的約440個氨基酸組成的重鏈。 （1）基本結(jié)構：抗體分子由四條肽鏈通過鏈間二硫鍵組成h2l2結(jié)構。 （2）輕鏈和重鏈：重鏈：五類：a、g、m、d

13、、e；輕鏈：兩型：k、l。 2.抗原結(jié)合部位：由每條重鏈與它相鄰輕鏈的n端協(xié)同形成。故，每個抗體分子有兩個抗原結(jié)合部位，即是二價體；一分子抗體可結(jié)合兩分子抗原。（抗原結(jié)合部位由輕鏈和重鏈的高變部分繞在一起所形成）二、可變區(qū)和恒定區(qū) 1.三個功能區(qū)： （1）可變區(qū) (variable region, vh和vl)：抗原的識別、結(jié)合。 （2）恒定區(qū) (constant region, ch和cl)：含補體結(jié)合位點、巨噬細胞fc受體結(jié)合位點。（l鏈c端1/2處，h鏈c端3/4-4/5處） （3）鉸鏈區(qū)(hinge region)：結(jié)構柔軟，通過變構促進抗體-抗原結(jié)合、暴露補體結(jié)合位點和fc受體結(jié)合位

14、點, 引發(fā)免疫反應。 2.每一條輕鏈和重鏈都有一個n端的可變區(qū)和一個c端的恒定區(qū)。 3.可變區(qū)的變異性主要局限于3個高變區(qū)，其余部分的變異性小，稱為構架區(qū)。 （1）高變區(qū)也稱為互補決定區(qū), 在與抗原的識別、結(jié)合中起重要的作用。 （2）構架區(qū)通常不與抗原直接接觸。d4 作為工具的抗體1、 酶聯(lián)免疫吸附測定法 (elisa)-對樣品中特定的蛋白質(zhì)抗原進行定量 1.原理：將抗體固定在惰性多聚體載體上，然后與樣品接觸，洗去未結(jié)合的蛋白質(zhì)，加入可與抗原其他表位結(jié)合的第二抗體，在第二抗體上結(jié)合有酶，可將無色底物轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩a(chǎn)物，第二抗體的結(jié)合量即為原樣品中存在的蛋白質(zhì)抗原量，根據(jù)產(chǎn)物顏色強度可進行定量測定。

15、（elisa利用第二抗體上連接的酶將無色的底物轉(zhuǎn)化成有色的產(chǎn)物） 2.步驟：（1）一抗結(jié)合到固相支持物上；（2）加入含有抗原的樣品，孵育，漂洗以去除未結(jié)合的分子；（3）加入結(jié)合有酶的二抗；（4）漂洗以去除未結(jié)合的二抗，與酶作用底物共同孵育。2、 免疫印跡法 (immunoblotting)-測定混合物中一種以上的抗原 1.原理：將蛋白質(zhì)樣品用單向sds-page進行分離，或用雙向page分離，再把分離出的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移（印跡）到硝酸纖維素膜或尼龍膜上，與此蛋白質(zhì)的特異抗體共同孵育，然后洗去未結(jié)合的抗體，與抗體結(jié)合的蛋白質(zhì)用放射自顯影術進行測定，或使用已標記的第二抗體使其與第一抗體結(jié)合，再進行測定。

16、 2.蛋白質(zhì)印記法 (western blotting) （1)蛋白質(zhì)sds-page電泳分離;(2)將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上(印跡)-電轉(zhuǎn)移 ;(3)膜與抗體溶液溫浴;(4)洗去未結(jié)合抗體;(5)檢測結(jié)合的抗體-使用放射性標記的二或酶標二抗 (elisa)f3 原核生物中dna的復制( dna replication in bacteria)1、 dna聚合酶 (dna polymerase) 1.dna聚合酶i（dna polymerase i）（1） 來源：大腸桿菌；（2）需要4種dntp(datp、dgtp、dttp、dctp)作為前體，mg2+;dna模板和由酶延伸的3'-oh端的

17、引物。（3）活性：5 3聚合酶活性；3 5外切核酸酶活性；5 3外切核酸酶活性（4） dna聚合酶i是受模板指導的酶，它識別dna模板上的下一個核苷酸，并將一個與該核苷酸互補的核苷酸加到引物的3'-oh端，形成3，5-磷酸二酯鍵，釋放出焦磷酸。2、 岡崎片段（okazaki fragments） 1.leading strand (前導鏈)：在3 5鏈為模板時，以5 3方向連續(xù)合成的新生dna。 2.okazaki fragments（岡崎片段）：在方向為5 3的模板鏈上，dna聚合酶以5 3方向合成小片段dna，這些連接起來的片段即稱為岡崎片段 3.：lagging strand (

18、滯后鏈)：不連續(xù)合成的dna鏈3、 rna引物（rna primer） 1.primase(引物酶):合成一段rna引物,為岡崎片段和前導鏈的合成提供3'-oh。引物酶由rna聚合酶聚合而成。 2.與所有rna聚合酶一樣，引物酶不需要引物就可以開始合成，它能直接在單鏈dna模板上合成rna。 3.引物酶合成的引物有dna聚合酶進行延伸。dna聚合酶負責前導鏈和岡崎片段的合成。4、 dna解旋、復制需的酶和蛋白質(zhì)： 1.dna解旋：dna解旋酶（helicase）、拓撲異構酶 i （topoisomerase i ）、拓撲異構酶 ii（topoisomerase ii）、單鏈結(jié)合蛋白（s

19、sb protein） 2.dna復制：dna聚合酶和、引物酶、dna連接酶、其他蛋白質(zhì)g2 原核生物中基因的轉(zhuǎn)錄（transcription in prokaryotes）1、 轉(zhuǎn)錄的三個階段（three phases of transcription） 1.反義鏈（antisense(-)strand）【模板鏈（template strand）】：轉(zhuǎn)錄中作為模版使用的dna鏈。 2.正義鏈（sense(+)strand）【編碼鏈（coding strand）】：與轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物rna具有相同序列的dna鏈。 3.大腸桿菌rna聚合酶進行的三個轉(zhuǎn)錄階段：起始（initiation）、延伸（elon

20、gation）和終止（termination）2、 啟動子和起始（promoters and initiation） 1.promoter(啟動子) ：是指rna聚合酶識別、結(jié)合并開始轉(zhuǎn)錄的一段dna序列,位于基因上游(5端)。 2.啟動子的識別需要因子，它可增加rna聚合酶和啟動子的特異性結(jié)合，減少非特異性結(jié)合。 3.兩個重要的原核啟動子元件（promoter elements） （1）-35 sequence：亞基識別并結(jié)合位點；共有序列ttgaca （2）-10 sequence：亞基識別、有助于解旋；共有序列tataat 3、 延伸（elongation） 1.核心酶 (core en

21、zyme)：轉(zhuǎn)錄開始后，因子從轉(zhuǎn)錄復合體上脫落下來，所留下的酶即為核心酶。 （1）特點：需要dna模板；具有5 3的聚合酶活性，但沒有3核酸外切酶活性；4ntps（atp，gtp，ctp，utp）為底物；不需要底物；有dna解旋酶活性。 （2）伸長的rna鏈是由核心酶催化的 2.三重復合體：rna聚合酶、dna模板和新的rna轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物復合物。 3.轉(zhuǎn)錄泡(transcription bubble):轉(zhuǎn)錄過程中dna解旋的區(qū)域。4、 終止（termination） 1.轉(zhuǎn)錄持續(xù)進行直到到達終止序列。 2.termination sequence (終止序列)：提供轉(zhuǎn)錄終止信號的dna序列，也稱為

22、終止信號或終止位點；終止序列通常是一段富含gc的區(qū)域，使得解旋過程減緩或暫時停止。 3.原核基因典型的終止序列 (信號)：反向重復序列也稱回文序列。 （1）一段富含gc的回文序列(palindrome)以及隨后的一段寡聚a. 4.原核生物終止序列典型特征：富含gc的回文序列 5.缺少發(fā)夾結(jié)構的終止子需要另外的 終止因子（一種蛋白）去識別終止位點，停止轉(zhuǎn)錄。g3 操縱子（operons）1、 操縱子：入門 1.操縱子(operons):是成簇排列的結(jié)構基因受單個操縱位點控制，與調(diào)節(jié)基因一起包裝結(jié)構基因的表達受到協(xié)調(diào)調(diào)控。原核生物基因組中的一個表達調(diào)控序列（一個轉(zhuǎn)錄單位），由若干功能相關的結(jié)構基因

23、串聯(lián)在一起，其轉(zhuǎn)錄受到同一調(diào)控系統(tǒng)的調(diào)控。-form teacher 2.操縱子模型： （1）一系列結(jié)構基因（structural gene）：編碼調(diào)控蛋白質(zhì)的基因; （2）一個操縱基因位點（operator site）:調(diào)控結(jié)構基因轉(zhuǎn)錄的dna序列； （3）一個調(diào)控基因（regulator gene）:編碼識別操縱基因序列的蛋白質(zhì)。2、 乳糖操縱子（the lac operon） 1.編碼參與乳糖代謝的關鍵酶： （1）半乳糖苷透性酶（galactoside permease）-可使乳糖穿過細胞膜進入細胞；（2）-半乳糖苷酶（-galactosidase）-可水解乳糖生成葡萄糖、半乳糖。 2.

24、編碼的第三個酶：硫代半乳糖苷?；D(zhuǎn)移酶 3.誘導（induction）機制：在誘導前細胞內(nèi)極少-半乳糖苷酶可將乳糖分解成異乳糖，然后異乳糖打開lac操縱子上這三種基因細菌中許多編碼蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄開關。 4.lac操縱子誘導物：異乳糖、異丙基硫代半乳糖苷（iptg）（不是大腸桿菌的代謝產(chǎn)物）【誘導物：凡能誘導操縱子開啟的效應物稱為誘導物】 5.lac操縱子結(jié)構基因： （1）lacz-編碼-半乳糖苷酶 （2）lacy-編碼半乳糖苷透性酶 （3）laca-編碼硫代半乳糖苷?；D(zhuǎn)移酶 三種結(jié)構基因被轉(zhuǎn)錄成一條多順反子mrna(polycistronic mrna)。然后翻譯合成所以的三種酶【多順反子mr

25、na-確保了對三種基因產(chǎn)物產(chǎn)量的協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)】3、 乳糖阻遏蛋白（lac阻遏物） 1.laci基因具有能夠和rna聚合酶結(jié)合的自身啟動子（plac），轉(zhuǎn)錄出lac阻遏物mrna，從而合成lac阻遏物蛋白單體?！咀瓒粑铮悍材軐е虏倏v子關閉，阻遏轉(zhuǎn)錄過程的效應物稱為輔助阻遏物】 2.作用機制： （1）在沒有誘導物的情況下，laci基因被轉(zhuǎn)錄，生成的阻遏物蛋白結(jié)合于lac操縱子的操縱基因位點（olac），阻止lacz、lacy、laca基因的轉(zhuǎn)錄。 （2）誘導時，誘導物和阻遏物結(jié)合，引起阻遏物的構象改變，從而降低它與lac操縱基因位點的結(jié)合力，然后lac阻遏物從操縱基因位點解離下來，rna聚合酶（已位于

26、啟動子位點的鄰近位置）開始轉(zhuǎn)錄lacz、lacy、laca基因?！菊T導物使lac阻遏物失活，因而使結(jié)構基因得以轉(zhuǎn)錄】 （3）移去誘導物，lac阻遏物迅速與操縱基因位點結(jié)合，轉(zhuǎn)錄過程幾乎立即被抑制。4、 分解代謝物激活蛋白/camp受體蛋白（cap/crp） 1.lac操縱子高水平轉(zhuǎn)錄所需要的一個特點蛋白-分解代謝物激活蛋白（cap）或camp受體蛋白（crp）。 （1）該二聚體蛋白不能和dna結(jié)合，需和camp形成復合物 （2）crp-camp復合物和lac啟動子（恰好位于rna聚合酶結(jié)合位點上游）結(jié)合，可提高rna聚合酶結(jié)合力，繼而激活lac操縱子的轉(zhuǎn)錄。 2.只有當乳糖存在而葡萄糖缺乏時，

27、lacz、lacy、laca基因才會被轉(zhuǎn)錄。（原理：見書）5、 正調(diào)控和負調(diào)控 1.正調(diào)控（positive control/regulation）：指調(diào)控蛋白與dna結(jié)合后可以提高轉(zhuǎn)錄效率。 2.負調(diào)控(negative control/regulation）：阻遏物結(jié)合后阻止結(jié)構基因的轉(zhuǎn)錄。lac操縱子是基因表達負調(diào)控?！緇ac操縱子是同時受正、負調(diào)控的】g7 真核生物mrna前體的加工1、 概述 1.真核生物中，編碼蛋白質(zhì)的基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物是mrna前體，需經(jīng)過一系列的加工才能成為功能性mrna分子。 2.mrna前體加工過程：（1）5端加上5帽子【加帽】 （2)rna剪接；（3）3多聚腺

28、苷酸化【多聚腺苷酸化】二、5端加工：加帽帽子可以保護初級轉(zhuǎn)錄物的5端免受核糖核酸酶的攻擊；只有真核生物編碼蛋白質(zhì)的基因的rna轉(zhuǎn)錄物加帽，原核生物的mrna、真核生物rrna和trna都不加帽。3、 rna剪接（rna splicing） 1.rna剪接（rna splicing）:從dna模板鏈中出來的初級轉(zhuǎn)錄物除去內(nèi)含子，并將相鄰外顯子的末端連接起來形成功能性的mrna分子的過程。 2.剪接位點（splicing site）（1）5剪接位點-位于內(nèi)含子的5端，常為gu（2）3剪接位點-位于內(nèi)含子的3端，常為ag 3.反應：（1）分支點腺苷酸殘基的2'-oh攻擊5剪接位點的3，5&#

29、39;-磷酸二酯鍵使之斷裂；（2）內(nèi)含子的5端回轉(zhuǎn)與分支點序列的腺苷酸殘基形成異常2'，5'鍵。4. 兩步轉(zhuǎn)酯反應（transesterification reaction） （1）轉(zhuǎn)酯反應：在兩步rna剪接反應中，一個磷酸酯鍵與另一個發(fā)生交換的反應。 （2）因磷酸酯鍵數(shù)目沒變，故沒有atp的消化。 （3）剪接的兩步連續(xù)轉(zhuǎn)酯反應： a.第一步轉(zhuǎn)酯反應：分支點腺苷酸殘基的2'-oh攻擊5剪接位點的3，5'-磷酸二酯鍵使之斷裂，游離出來的5磷酸與分支位點腺苷酸殘基的2羥基連接。 b.第二步轉(zhuǎn)酯反應：外顯子的新3'-oh攻擊3剪接位點的磷酸二酯鍵，將兩個外顯子

30、連接起在一起并釋放套索狀的內(nèi)含子。5. 剪接體（spliceosome）:在將被去除的內(nèi)含子處所形成的一個多組分復合體，使內(nèi)含子環(huán)化。 （1）組成：含有5種rna（u1、u2、u4、u5、u6），統(tǒng)稱為核內(nèi)小rna（snrna），每種snrna長100300nt，與幾種蛋白質(zhì)形成復合物。這些rna-蛋白質(zhì)復合物稱作小核內(nèi)核糖蛋白（snrnp）四、3端加工：剪切和多聚腺苷酸化（cleavage and polyadenylation） 1.mrna多聚腺苷酸化：rna的3端剪切后加上約200個腺苷酸殘基組成的poly(a)尾。 2.多聚腺苷酸化信號序列（polyadenylation sifna

31、l sequnence）（1）位于：mrna前體的近3端（2）信號：5'-aauaaa-3 3.poly(a)尾可以保護成熟mrna免受核酸酶消化，并穩(wěn)定整個分子，也可增強mrna的翻譯。h1 遺傳密碼 (the genetic code)一the genetic code (遺傳密碼) 1.遺傳密碼（genetic code）：mrna上的核苷酸序列和多肽鏈氨基酸序列之間的關系 2.終止密碼子（stop codons）：不編碼任何氨基酸的密碼子-uaa、uag、uga 3.起始密碼子（start codon）：核糖體閱讀mrna的第一個密碼子-aug2、 遺傳密碼的特征（the fe

32、atures of the genetic code） 1.遺傳密碼是連續(xù)的三聯(lián)體密碼； 2.遺傳密碼是簡并的； 3.前兩個堿基通常足以確定一種特定氨基酸；（降低堿基突變引起的危害） 4.性質(zhì)相似的氨基酸的密碼子具有相似的序列；（降低堿基突變引起的危害） 5.64個密碼子中只有61個為氨基酸編碼； 6.遺傳密碼是通用的。h2 原核生物中的翻譯（translation in prokaryotes）1、 概述（overview） 1.核糖體從5 3端閱讀mrna分子上的核苷酸序列，從n端（氨基末端）到c端（羧基末端）由氨基酸合成相應的蛋白質(zhì)。 2.蛋白質(zhì)合成（翻譯）的三個階段：起始（initia

33、tion）、延伸（elongation）、終止（termination）。 3.許多核糖體每次同時翻譯一個mrna分子，形成一個稱為多核糖體的結(jié)構。2、 氨基酰-trna合成（synthesis of aminoacyl-trna） 1.消耗2 個atp等效物。 2.目的：（1）將atp水解的能量儲存于氨酰-trna分子中, 使得氨基酸能容易地參與形成肽鍵;（2）使氨基酸與mrna上相應的密碼子能“對號入座” 3.特異性：細胞中至少需要20種氨酰-trna合成酶，每種酶對一種特定氨基酸專一，同時對攜帶該種氨基酸的trna專一。 4.氨酰-trna合成酶（aminoacyl-trna synthetase）:氨基酸活化酶，催化氨基酸與trna的鏈接反應3、 蛋白質(zhì)合成的起始（initation of protein synthesis） 1.翻譯的起始指mrna和起始氨酰-trna與核糖體結(jié)合而形成70s翻譯起始復合物的過程。該過程由起始因子(initiation factors, ifs)催化,原核起始因子有if-1,if-2和if-3三種蛋白。 2.氨酰-trna結(jié)合位（或a位）aminoacyl-trna binding site:延長過程中與進入的氨酰-trna結(jié)合的部位。 3.肽酰-trn