第八章 自動(dòng)層析儀

1、2021-10-29現(xiàn)代儀器分析現(xiàn)代儀器分析modern Instrumental Analysis 第八章第八章 自動(dòng)層析儀自動(dòng)層析儀AKTA-Frac900AKTA-Frac900一、一、 離子交換色譜離子交換色譜固定相：陰離子離子交換樹脂或陽離子交換樹脂；固定相：陰離子離子交換樹脂或陽離子交換樹脂； 流動(dòng)相：陰離子交換樹脂作固定相，采用酸性水溶流動(dòng)相：陰離子交換樹脂作固定相，采用酸性水溶液；陽離子交換樹脂作固定相，采用堿性水溶液；液；陽離子交換樹脂作固定相，采用堿性水溶液；基本原理：組分在固定相上發(fā)生的反復(fù)離子交換反基本原理：組分在固定相上發(fā)生的反復(fù)離子交換反應(yīng)；組分與離子交換劑之間親和

2、力的大小與離子半應(yīng)；組分與離子交換劑之間親和力的大小與離子半徑、電荷、存在形式等有關(guān)。親和力大，保留時(shí)間徑、電荷、存在形式等有關(guān)。親和力大，保留時(shí)間長(zhǎng)；長(zhǎng)；第一節(jié)自動(dòng)層析儀色譜柱的類型與原理第一節(jié)自動(dòng)層析儀色譜柱的類型與原理一、一、 離子交換色譜離子交換色譜陽離子交換：陽離子交換：RSO3H +M+ = RSO3 M + H + 陰離子交換：陰離子交換：RNR4OH +X- = RNR4 X + OH- 應(yīng)用：離子及可離解的化合物，氨基酸、核酸等。應(yīng)用：離子及可離解的化合物，氨基酸、核酸等。第一節(jié)自動(dòng)層析儀色譜柱的類型與原理第一節(jié)自動(dòng)層析儀色譜柱的類型與原理二、二、 排阻色譜色譜排阻色譜色譜

3、固定相固定相：凝膠(具有一定大小孔隙分布)； 原理：按分子大小分離。小分子可以擴(kuò)散到凝膠空隙，由其中通過，出峰最慢；中等分子只能通過 部分凝膠空隙,中速通過；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶劑分子小，故在最后出峰。 二、二、 排阻色譜色譜排阻色譜色譜 全部在死體積前出峰；可對(duì)相對(duì)分子質(zhì)量在100-105范圍內(nèi)的化合物按質(zhì)量分離。 三、親和色譜三、親和色譜 原理原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某種特異性親和力，進(jìn)行選擇性分離。先在載體表面鍵合上一種具有一般反應(yīng)性能的所謂間隔臂(環(huán)氧、聯(lián)胺等)，再連接上配基(酶、抗原等)，這種固載化的配基將只能和具有親和力特性吸附的生物大分子作用而被保留。改變淋洗液后洗脫。pH/C 900pH電導(dǎo)檢測(cè)器電導(dǎo)檢測(cè)器UV-900紫外檢測(cè)器紫外檢測(cè)器190-700nm任選三波長(zhǎng)任選三波長(zhǎng)P-900系統(tǒng)泵系統(tǒng)泵雙泵，四泵頭雙泵，四泵頭儲(chǔ)物盒和緩沖液托盤儲(chǔ)物盒和緩沖液托盤第二節(jié)第二節(jié) 自動(dòng)層析儀的構(gòu)成自動(dòng)層析儀的構(gòu)成側(cè)面圖側(cè)面圖三通閥三通閥系統(tǒng)泵系統(tǒng)泵雙泵，四泵頭雙泵，四泵頭梯度混合器梯度混合器在位過濾器在位過濾器上樣閥上樣閥接柱位接柱位擰開接頭，接層析柱擰開接頭，接層析柱紫外流動(dòng)池紫外流動(dòng)池電導(dǎo)流動(dòng)池電導(dǎo)流動(dòng)池pH流動(dòng)池收集閥收集閥部分收集器部分收集器主要用于蛋白、核酸純化。主要用于蛋白、核酸純化。藥物純化、化工、食品等領(lǐng)域藥物純化、化工、食品等領(lǐng)