項(xiàng)目十細(xì)菌生化檢驗(yàn)技術(shù)

1、項(xiàng)目十項(xiàng)目十 細(xì)菌生化檢驗(yàn)技術(shù)細(xì)菌生化檢驗(yàn)技術(shù)EIUSMOD細(xì)菌的數(shù)值分類（聚類分類）0404EIUSMOD0303微型、簡便、自動化檢測技術(shù)（API細(xì)菌數(shù)值鑒定系統(tǒng)，Biolog全自動檢測儀）EIUSMOD0202分子生物學(xué)指標(biāo)（DNA的堿基組成，即G+C mol%）EIUSMOD0101生物分類的傳統(tǒng)指標(biāo)（形態(tài)、染色狀況、營養(yǎng)類型、代謝產(chǎn)物等）微生物的鑒定方法微生物的鑒定方法一、微生物的生理生化反應(yīng)一、微生物的生理生化反應(yīng)大分子物質(zhì)水解實(shí)驗(yàn)0102糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)03IMViC實(shí)驗(yàn)04酶實(shí)驗(yàn)1.淀粉水解試驗(yàn)倒平板 分區(qū)標(biāo)記 接種 培養(yǎng) 觀察 加盧戈氏盧戈氏碘液，觀察無色透明圈 制固體淀粉培養(yǎng)基淀

2、粉培養(yǎng)基 枯草桿菌大腸桿菌自分離菌等 原理：淀粉遇碘為藍(lán)紫色，在淀粉酶作用下，淀粉分解為小分子的糊精等物質(zhì)，根據(jù)顏色變化判斷淀粉水解情況。2.明膠液化試驗(yàn)134頁標(biāo)記明膠培養(yǎng)基試管 穿刺穿刺接種 20培養(yǎng) 觀察（陽性和陰性的區(qū)別） 制明膠培養(yǎng)基 原理：有些細(xì)菌具有明膠酶（亦稱類蛋白水解酶），能將明膠先水解為多肽，又進(jìn)一步將多肽水解為氨基酸，明膠失去凝膠性質(zhì)，使培養(yǎng)基由固態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)25以下明膠為固體形式存在。大分子物質(zhì)微生物細(xì)胞小分子物質(zhì)明膠培養(yǎng)基 25以下 3.3.糖發(fā)酵試驗(yàn)糖發(fā)酵試驗(yàn) 糖發(fā)酵試驗(yàn)是常用的鑒別微生物的生化反應(yīng)，在腸道細(xì)菌的鑒定上尤為重要。利用微生物分解糖類的能力來對其進(jìn)行鑒別。

3、 有些細(xì)菌能分解某種糖產(chǎn)生有機(jī)酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和氣體（如氫氣、甲烷、二氧化碳等）；有些細(xì)菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。例如大腸桿菌能分解乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣；傷寒桿菌分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不能分解乳糖；普通變形桿菌分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不能分解乳糖。 發(fā)酵培養(yǎng)基配方發(fā)酵培養(yǎng)基配方：蛋白胨，指示劑（溴甲酚紫），倒置的德漢氏小管和不同的糖類。當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)酸時(shí)，溴甲酚紫指示劑可由紫色（pH6.8）變?yōu)辄S色(pH5.2)。氣體的產(chǎn)生可由倒置的德漢氏試管中有無氣泡來證明。實(shí)驗(yàn)步驟糖類物質(zhì) 細(xì)菌 有機(jī)酸氣體溴甲酚紫指示劑 黃色 pH6.8pH5.2 德漢氏小管 實(shí)驗(yàn)步驟 糖發(fā)酵試驗(yàn)接種 培養(yǎng) 觀察 各試管顏色變化

4、及德漢氏小管中有無氣泡 標(biāo)記 發(fā)酵培養(yǎng)基名稱和所接種細(xì)菌菌名 IMViC 吲哚(indol test)試驗(yàn) 甲基紅(methyl red test)試驗(yàn)伏-普(Voges-Prokauer test)試驗(yàn)檸檬酸鹽(citrate test)試驗(yàn)這四個(gè)試驗(yàn)主要是用來快速鑒別大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌，這四個(gè)試驗(yàn)主要是用來快速鑒別大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌，多用于水的細(xì)菌學(xué)檢查多用于水的細(xì)菌學(xué)檢查 4.IMVC實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理蛋白胨中蛋白胨中的色氨酸的色氨酸 吲哚（無色）吲哚（無色） 丙酮酸丙酮酸 對二甲基氨基苯甲醛對二甲基氨基苯甲醛 玫瑰吲哚玫瑰吲哚 細(xì)菌細(xì)菌 色氨酸酶色氨酸酶 （1）吲哚（靛基質(zhì)）實(shí)驗(yàn)）吲哚（靛基質(zhì)）實(shí)驗(yàn)吲哚試驗(yàn)原理吲哚試驗(yàn)原理葡萄糖 有機(jī)酸 甲基紅指示劑 紅色（陽性） （2 2）甲基紅試驗(yàn)（）甲基紅試驗(yàn)（M.R.M.R.試驗(yàn)）試驗(yàn)）細(xì)菌細(xì)菌 （甲酸、乙酸、乳酸等）葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇 二乙酰 蛋白胨中精氨酸的胍基 紅色化合物 OH（3）乙酰甲基甲醇（）乙酰甲基甲醇（V.P.）試驗(yàn)）試驗(yàn)兩分子丙酮酸經(jīng)過縮合和脫羧3737培養(yǎng)培養(yǎng)1-2d1-2d原理原理檸檬酸鹽和磷酸銨 培養(yǎng)基變?yōu)閴A性 1溴麝香草酚藍(lán)指示劑 綠色變?yōu)樯钏{(lán)色（陽性）（4）檸檬酸鹽利用）檸檬酸鹽利用有的細(xì)菌如產(chǎn)氣桿菌，能利用檸檬酸鈉為碳源，因此能在檸檬酸鹽培養(yǎng)基上生長，并分解檸檬酸鹽后產(chǎn)生碳酸鹽，使培養(yǎng)基變