分析實驗基本操作

1、分析實驗基本操作分析實驗基本操作分析實驗的基本過程u稱量u溶解u定容u過濾u稀釋u測定-容量分析（滴定）、重量分析、儀器分析（UV、HPLC、GC等）稱量v根據(jù)稱量準(zhǔn)確度的要求選擇合適的天平。一般樣品（50mg以上）可用萬分之一天平（分度值為0.1mg）稱量。對照品等量少而準(zhǔn)確度又要求高的樣品一般用十萬分之一天平（分度值為0.01mg），且稱量的量最好不要少于5mg。l電子天平使用前需預(yù)熱30分鐘。可以在準(zhǔn)備稱量前先去把天平打開，再準(zhǔn)備稱量所需的物品：藥品、藥匙、容量瓶or錐形瓶 l稱量前，先檢查一下天平水平儀是否調(diào)平，調(diào)平后，不能移動天平，否則要重新調(diào)平。 l稱量時，要輕拿輕放，避免磕碰天平

2、托盤或其他部位影響天平的準(zhǔn)確度。稱量l讀數(shù)時一定要關(guān)緊艙門，最好不要打開上蓋稱量和讀數(shù)。l避免藥粉撒落在天平托盤上或其他部位。（每個天平最好配一個小毛刷，以便刷去不小心撒落的藥粉。） 稱量溶解l以容量瓶為例，可先加少量溶劑（1/3 1/2），稍加振搖，觀察一下溶解情況，如果較易溶解，再加溶劑至滿刻度的3/4處，振搖使溶解，（注意沒定容注意沒定容之前不要塞上瓶塞反復(fù)顛倒振搖，之前不要塞上瓶塞反復(fù)顛倒振搖，這樣會使較濃的溶液附著在刻度線以上和瓶塞上，使定容后濃度不準(zhǔn)確.）。如果溶質(zhì)不易溶解，再加溶劑到至滿刻度的3/4處，超聲溶解，（注意超聲會使瓶內(nèi)溶液溫注意超聲會使瓶內(nèi)溶液溫度升高，超聲完成后一定

3、要放冷至室溫再定容度升高，超聲完成后一定要放冷至室溫再定容）。l也可將準(zhǔn)確稱量好的固體溶質(zhì)放在燒杯中，用少量溶劑溶解。然后把溶液沿玻璃棒轉(zhuǎn)移到容量瓶里。為保證溶質(zhì)能全部轉(zhuǎn)移到容量瓶中，要用溶劑多次洗滌燒杯，并把洗滌溶液全部轉(zhuǎn)移到容量瓶里(見圖a)。 l向容量瓶內(nèi)加入液體液面離標(biāo)線1厘米左右時，應(yīng)改用滴管小心滴加，最后使液體的彎月面與標(biāo)線正好相切。l塞緊瓶塞，用倒轉(zhuǎn)和搖動的方法使瓶內(nèi)的液體混合均勻(見圖b)。 定容l定容時不能手拿容量瓶瓶體，以防溫度升高（尤其尤其是有機(jī)溶劑是有機(jī)溶劑）影響溶液體積，應(yīng)用左手的拇指和食指輕捏輕捏瓶頸（刻度線上部分刻度線上部分），提離桌面，（使瓶使瓶體自然懸垂體自然

4、懸垂），眼睛視線與刻度齊平，用滴管沿瓶口緩慢滴加溶劑至凹液面的最低點（實線實線）恰與刻度相切。（注意：觀察時不要把瓶子放在桌面上，彎腰或半蹲去看刻度是否平齊，因為一來很難保證視線與刻度同一水平面，二來桌子也不太可能完全水平。） 過濾l過濾時（無論是濾紙過濾或膜過濾），首先都要棄去初濾液棄去初濾液，一般要棄23次（以保證濾紙或濾膜的吸附達(dá)到飽和），棄去的同時先潤洗一下接濾液的容器（錐形瓶or液相的進(jìn)樣瓶等），以防止容器壁的吸附。 稀釋l移液管與刻度吸管的選擇：如果取樣量為1、2、5、10ml這樣的整數(shù)體積，一般用校正過的移液管（大肚吸管）吸取，如果是其他體積（3、4、8ml等）也可用刻度吸管吸取

5、。l左手拿洗耳球，右手拿移液管，以右手拇指及中指拿住管頸標(biāo)線上方l先吸取少量待量取的溶液蕩洗蕩洗2 2次次移液管，左手拿洗耳球輕輕將溶液吸上，眼睛注意正在上升的液面的位置，當(dāng)管內(nèi)液面上升至刻度標(biāo)線以上時，迅速用右手食指堵住管口，取出移液管，用濾紙擦干移液管外壁用濾紙擦干移液管外壁，并使與地面垂直，稍微松開右手食指，使液面緩緩下降，此時視線應(yīng)平視標(biāo)線，直到彎月面與標(biāo)線相切，立即緊按食指，使液體不再流出，再將移液管移入準(zhǔn)備接受溶液的容器中，使管垂直管尖靠著容器使管垂直管尖靠著容器內(nèi)壁，內(nèi)壁，放開右手食指，讓管內(nèi)溶液自然地全部沿器壁流下，再等待再等待15s15s后后，取出移液管，切勿把殘留在管尖的溶

6、液吹出。v使用同一移液管量取不同濃度溶液時要注意充分蕩洗，應(yīng)先量取較稀的溶液，然后量取較濃的。在吸取第一份溶液時，高于標(biāo)線的距離最好不超過1cm，然后再往下放至標(biāo)線，這樣吸取第二份不同濃度的溶液時，可以吸得再高一些蕩洗內(nèi)壁，以消除第一份的影響。注意事項l容量儀器最好校正后再使用（刻度吸管例外），以確保測量體積的準(zhǔn)確性。l滴定管、容量瓶、移液管及刻度吸管均不可用毛刷或其他粗糙東西擦洗內(nèi)壁，以免造成內(nèi)壁劃痕，容量不準(zhǔn)或損壞。l每次用畢應(yīng)及時用自來水將內(nèi)壁沖凈，瀝干后再用重鉻酸鉀洗液洗滌，用自來水沖洗干凈，再用蒸餾水沖內(nèi)壁3次，外壁13次，倒掛，自然瀝干，不應(yīng)在烘箱中烘烤。l做分析實驗的儀器在洗干凈

7、后一定要用蒸餾水蕩洗，這一點很重要也是最最基本的。測定l容量分析（滴定）l重量分析l儀器分析（UV、HPLC、GC等）紫外-可見分光光度法測定UV-注意事項l石英吸收池的配對：在吸收池中裝入同一溶劑，于規(guī)定波長測定各吸收池的透光率，如透光率相差在0.3%以下者可配對使用，否則必須加以校正。 UV-注意事項l取吸收池時，手指拿毛玻璃面的兩側(cè)。l裝樣品溶液的體積以池體積的4/5為度。l使用揮發(fā)性溶液時應(yīng)加蓋。l先用濾紙吸干吸收池外壁液體，透光面再用擦鏡紙由上而下擦拭干凈。l吸收池放入樣品室時應(yīng)注意每次放入方向相同。l使用后用溶劑及水沖洗干凈，晾干防塵保存。l吸收池如污染不易洗凈時可用硫酸-發(fā)煙硝酸

8、（3:1v/v）混合液稍加浸泡后，洗凈備用。如用重鉻酸鉀清潔液清洗時，吸收池不宜在清潔液中長時間浸泡，否則清潔液中的鉻酸鉀結(jié)晶會損壞吸收池的光學(xué)表面，并應(yīng)充分用水沖洗，以防鉻酸鉀吸附于吸收池表面。 UV-注意事項l測定前應(yīng)先檢查所用的溶劑在測定波長附近是否符合要求，可用1cm石英吸收池盛溶劑以空氣為空白（即參比光路中不放置任何物質(zhì)）測定其吸光度，應(yīng)符合下表規(guī)定，并不得在溶劑的截止使用波長以下測定。以空氣為空白測定溶劑在不同波長處的吸光度的規(guī)定波長范圍(nm)220240241250251300300以上吸光度 0.4 0.2 0.1 0.05UV-注意事項l配制測定溶液時稀釋轉(zhuǎn)移次數(shù)應(yīng)盡可能少

9、，轉(zhuǎn)移稀釋時所取容積一般應(yīng)不少于5ml。含量測定時供試品應(yīng)稱取2份，平行操作，每份結(jié)果對平均值的偏差應(yīng)在0.5%以內(nèi)。如為對照品比較法，對照品一般也應(yīng)稱取2份。作鑒別或檢查可取樣品1份。l供試品溶液的濃度，應(yīng)以吸光度在0.30.7之間為宜，吸光度讀數(shù)在此范圍誤差較小，并應(yīng)結(jié)合所用儀器吸光度線性范圍，配制合適的濃度。UV-注意事項l選用儀器的狹縫譜帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶半高寬的10%，否則測得的吸光度值會偏低，或以減小狹縫寬度時供試品溶液的吸光度不再增加為準(zhǔn)，對于中國藥典紫外測定的大部分品種，可以使用2nm縫寬，但當(dāng)吸收帶的半高寬小于20nm 時，則應(yīng)使用較窄的狹縫，例如青霉素鉀及鈉的吸光度檢

10、查需用1nm縫寬或更窄，否則其264nm的吸光度會偏低。UV-注意事項l測定時除另有規(guī)定外，應(yīng)在規(guī)定的吸收峰2nm處，再測幾點的吸光度，以核對供試品的吸收峰位置是否正確，并以吸光度最大的波長作為測定波長，除另有規(guī)定外吸光度最大波長應(yīng)在該品種項下規(guī)定的波長2nm以內(nèi)，否則應(yīng)考慮試樣的同一性、純度以及儀器波長的準(zhǔn)確度。l用于制劑含量測定時，應(yīng)注意供試液與對照液的pH值是否一致，如pH值對吸收有影響，則應(yīng)調(diào)溶液的pH值一致后再測定吸光度。HPLC測定色譜柱的使用及保存 l使用前注意事項色譜柱的儲存液一般均為有機(jī)溶劑，反相柱常用甲醇、乙腈或者高比例的甲醇/乙腈-水溶液，正相柱常用脫水處理后的純正己烷。

11、使用前，一定要注意色譜柱的儲存液與待分析樣品的流動相之間是否互溶。有些色譜柱（如氨基柱或氰基柱），既可用于正相體系，也可用于反相體系，如色譜柱中的貯存液為正相（環(huán)己烷）而使用條件為反相時，必須用異丙醇先置換掉色譜柱內(nèi)的儲存液，然后再用于反相條件，否則將會明顯減少色譜柱的使用壽命。在反相色譜中，如果流動相中緩沖鹽的濃度較高（0.1mmol/L），必須先用低濃度的甲醇/乙腈-水溶液（10%20%）沖洗20min，否則緩沖鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出，從而使色譜柱堵塞，無法恢復(fù)。l色譜柱使用方向裝色譜柱時應(yīng)使流動相流路的方向與色譜柱標(biāo)簽上箭頭所示方向一致。除另有規(guī)定外，不宜反向使用，否則會導(dǎo)致色譜

12、柱柱效明顯降低，無法恢復(fù)。l流動相流動相中所使用的各種有機(jī)溶劑應(yīng)盡可能使用色譜純，水最好為超純水或重蒸餾水。流動相配制好后還應(yīng)經(jīng)0.45um或0.22um的濾膜過濾。另外，裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)的在線過濾器等裝置應(yīng)清潔，否則將影響色譜柱壽命。以硅膠為基質(zhì)的各種鍵合相對酸和堿都很敏感，一般pH使用范圍為2.57.5，應(yīng)參閱色譜柱使用說明書，配制好流動相后，必要時測定pH值，防止pH 過酸過堿，以免色譜柱填料不可逆性損壞。l樣品樣品溶液應(yīng)經(jīng)0.45um或0.22um的濾膜過濾，或用固相萃取小柱（SPE）對樣品溶液進(jìn)行預(yù)處理；如樣品成分復(fù)雜，部分組分有可能吸附在色譜柱上，最好使用前置保護(hù)柱。在用正

13、相色譜分析樣品時，如無特殊要求，所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴(yán)格脫水。l反相色譜柱用后的保存如使用緩沖液或含鹽溶液作為流動相，每天實驗結(jié)束后，應(yīng)用10倍柱體積（對150mm柱長，約15ml）的低濃度的甲醇/乙腈-水溶液（10%20%）沖洗，使色譜柱內(nèi)的鹽完全溶解洗脫出，再用較高濃度的甲醇/乙腈-水溶液（50%）沖洗，最后用高濃度的甲醇/乙腈-水溶液（80%100%）沖洗，使色譜柱中的強(qiáng)吸附物質(zhì)沖洗出來。色譜柱的保養(yǎng)l反相柱，可以儲存于甲醇或乙腈中，正相柱可以儲存于經(jīng)脫水處理后的正己烷中，離子交換柱可以貯存于含5%甲醇或含0.05%疊氮化鈉的水中，并將色譜柱兩端的堵頭堵上，以免干枯，室溫保存。色譜柱的長期保存色譜柱的再生l色譜柱使用一段時間后，會發(fā)生柱壓上升、柱效降低的現(xiàn)象。這主要是柱床上端或過濾片處積累了污染物，可通過再生予以消除。正相柱按極性增大的順序，依次用2030倍柱體積的正己烷、二氯甲烷和異丙醇沖洗色譜柱，然后，按反順序沖洗，最后用干燥的正己烷平衡。反相柱首先用蒸餾水沖洗，再分別用2030倍柱體積的甲醇和二氯甲烷沖洗，然后按相反順序沖洗，最后用流動相平衡。離子交換柱在低離子強(qiáng)度的緩沖液中長期使用會導(dǎo)致色譜柱失活，用稀酸緩沖液沖洗可使陽離子交換柱再生，而用