化學(xué)發(fā)光法的原理技術(shù)要點(diǎn)及評價應(yīng)用

1、2021/6/161 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 發(fā)光與化學(xué)發(fā)光劑發(fā)光與化學(xué)發(fā)光劑第二節(jié)第二節(jié) 發(fā)光酶免疫測定（發(fā)光酶免疫測定（C CLEIALEIA）（chemiluminescence enzyme immunoasssaychemiluminescence enzyme immunoasssay） 第三節(jié)第三節(jié) 化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)(CLIA)(CLIA)（chemiluminescence immunoassaychemiluminescence immunoassay） 第四章第四章 電化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)電化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)( (ECLI)E

2、CLI)(electrochemiluminescence immunoassay)(electrochemiluminescence immunoassay)2021/6/162 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)：化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)：集靈敏的化學(xué)集靈敏的化學(xué) 發(fā)光分析和特異的抗原抗體免疫測發(fā)光分析和特異的抗原抗體免疫測 定于一體的檢測技術(shù)。定于一體的檢測技術(shù)。概概 念念 特點(diǎn)：特點(diǎn)： 特異性高、敏感性高、分離簡便、特異性高、敏感性高、分離簡便、 快速、試劑無毒、安全穩(wěn)定、快速、試劑無毒、安全穩(wěn)定、 可自動化。可自動化。2021/6/163化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的類型化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的類型 按發(fā)光劑不同分為按發(fā)光劑不

3、同分為 1.1.發(fā)光酶免疫測定（發(fā)光酶免疫測定（C CLEIALEIA） chemiluminescence enzymeimmunoasssaychemiluminescence enzymeimmunoasssay 2. 2.化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)(CLIA)(CLIA) chemiluminescence immunoassay chemiluminescence immunoassay 3. 3.電化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)電化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)( (ECLI)ECLI) electrochemiluminescence immunoassay electrochemilu

4、minescence immunoassay 按分離方法不同分按分離方法不同分 1.1.微粒子化學(xué)發(fā)光免疫測定微粒子化學(xué)發(fā)光免疫測定 2.2.磁顆?；瘜W(xué)發(fā)光免疫測定磁顆?；瘜W(xué)發(fā)光免疫測定2021/6/164第一節(jié)第一節(jié) 發(fā)光與化學(xué)發(fā)光劑發(fā)光與化學(xué)發(fā)光劑一、發(fā)光一、發(fā)光 一種物質(zhì)由電子激發(fā)態(tài)回復(fù)到基態(tài)時，一種物質(zhì)由電子激發(fā)態(tài)回復(fù)到基態(tài)時， 釋放出的能量表現(xiàn)為光的發(fā)射。釋放出的能量表現(xiàn)為光的發(fā)射。1.1.光照發(fā)光光照發(fā)光: :發(fā)光劑經(jīng)短波長入射光照射后進(jìn)入激發(fā)光劑經(jīng)短波長入射光照射后進(jìn)入激 發(fā)態(tài)，當(dāng)回復(fù)至基態(tài)時發(fā)出較長波長的可見光。發(fā)態(tài)，當(dāng)回復(fù)至基態(tài)時發(fā)出較長波長的可見光。2.2.生物發(fā)光生物發(fā)光

5、: :反應(yīng)底物在熒光素酶的催化下利用反應(yīng)底物在熒光素酶的催化下利用 ATPATP產(chǎn)能，生成激發(fā)態(tài)的氧化熒光素，后者在回產(chǎn)能，生成激發(fā)態(tài)的氧化熒光素，后者在回 復(fù)到基態(tài)時多余的能量以光子形式放出。復(fù)到基態(tài)時多余的能量以光子形式放出。3.3.化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光: :在常溫下由化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的光的發(fā)射。在常溫下由化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的光的發(fā)射。 化學(xué)發(fā)光是一個多步驟的過程?；瘜W(xué)發(fā)光是一個多步驟的過程。2021/6/165 熒光素酶熒光素酶ATP；O2；Mg2+氧化螢火蟲熒光素氧化螢火蟲熒光素螢火蟲熒光素螢火蟲熒光素光光 + AMP+ O2 + CO2 +2021/6/166化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光 機(jī)制：機(jī)制：某些化合

6、物可以利用化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的能某些化合物可以利用化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的能 量使其產(chǎn)物分子或反應(yīng)中間態(tài)分子上升至電子量使其產(chǎn)物分子或反應(yīng)中間態(tài)分子上升至電子 激發(fā)態(tài)。當(dāng)此產(chǎn)物分子或中間態(tài)分子衰退至基激發(fā)態(tài)。當(dāng)此產(chǎn)物分子或中間態(tài)分子衰退至基 態(tài)時，以發(fā)射光子的形式釋放能量（即發(fā)光）。態(tài)時，以發(fā)射光子的形式釋放能量（即發(fā)光）。 化學(xué)發(fā)光劑或發(fā)光底物：化學(xué)發(fā)光劑或發(fā)光底物：在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中參在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中參 與能量轉(zhuǎn)移并最終以發(fā)射光子的形式釋放能量與能量轉(zhuǎn)移并最終以發(fā)射光子的形式釋放能量 的化合物。的化合物。 發(fā)光劑分為發(fā)光劑分為熒光素、生物發(fā)光劑、化學(xué)發(fā)光劑熒光素、生物發(fā)光劑、化學(xué)發(fā)光劑2021/6/167

7、能參與化學(xué)發(fā)光反應(yīng)；能參與化學(xué)發(fā)光反應(yīng)； 與抗原或抗體偶聯(lián)后形成穩(wěn)定的結(jié)合物試劑；與抗原或抗體偶聯(lián)后形成穩(wěn)定的結(jié)合物試劑； 偶聯(lián)后仍保留高的量子效應(yīng)和反應(yīng)動力；偶聯(lián)后仍保留高的量子效應(yīng)和反應(yīng)動力； 應(yīng)不改變或極少改變被標(biāo)記物的理化特性，應(yīng)不改變或極少改變被標(biāo)記物的理化特性， 特別是免疫活性。特別是免疫活性?；瘜W(xué)發(fā)光劑應(yīng)符合以下幾個條件化學(xué)發(fā)光劑應(yīng)符合以下幾個條件2021/6/1681.1.酶促反應(yīng)的發(fā)光底物酶促反應(yīng)的發(fā)光底物 是指經(jīng)酶的降解作用而發(fā)出光的一類發(fā)光底物。是指經(jīng)酶的降解作用而發(fā)出光的一類發(fā)光底物。 CLEIACLEIA中常用的酶有中常用的酶有HRPHRP和和APAP HRP HRP

8、的發(fā)光底物有魯米諾、對的發(fā)光底物有魯米諾、對- -羥基苯乙酸羥基苯乙酸 APAP的發(fā)光底物有的發(fā)光底物有AMPPDAMPPD、4-MUP4-MUP（熒光底物）（熒光底物） 特點(diǎn)：可作標(biāo)記物、也可作過氧化物酶的底物特點(diǎn)：可作標(biāo)記物、也可作過氧化物酶的底物 1.1 1.1 魯米諾魯米諾H2O2 /OH HRP+N2 + H2O +光光2021/6/169對對- -羥基苯乙酸（羥基苯乙酸（HPAHPA） HPA HPA在在H H2 2O O2 2存在下被存在下被HRPHRP氧化成氧化二聚體（熒光氧化成氧化二聚體（熒光 物質(zhì)），在物質(zhì)），在350nm350nm激發(fā)光作用下，發(fā)出激發(fā)光作用下，發(fā)出450

9、nm450nm波長波長 的熒光，可用熒光光度計測量。的熒光，可用熒光光度計測量。 1.2 HPA 1.2 HPAH2O2HRP+熒熒 光光COOHHOCHCOOHHOCH22氧化二聚體氧化二聚體2021/6/1610AMPPDAMPPD AMPPD AMPPD在堿性條件下，被在堿性條件下，被APAP酶解生成相當(dāng)穩(wěn)定的酶解生成相當(dāng)穩(wěn)定的 AMP-DAMP-D陰離子，其有陰離子，其有2 230min30min的分解半衰期，發(fā)的分解半衰期，發(fā) 出波長為出波長為470nm470nm的持續(xù)性光，在的持續(xù)性光，在15min15min時其強(qiáng)度時其強(qiáng)度 達(dá)到高峰，達(dá)到高峰，151560min60min內(nèi)光強(qiáng)度

10、保持相對穩(wěn)定。內(nèi)光強(qiáng)度保持相對穩(wěn)定。 光光AP /OH HPO4 2O OOCH3O- 1.3 AMPPD 1.3 AMPPD2021/6/16114-MUP4-MUP 4-MUP 4-MUP被被APAP催化生成催化生成4-4-甲基傘形酮，在甲基傘形酮，在360nm360nm的的 激發(fā)光的作用下，發(fā)出激發(fā)光的作用下，發(fā)出448nm448nm的熒光，可用熒的熒光，可用熒 光光度計進(jìn)行測量。光光度計進(jìn)行測量。熒熒光光AP 1.4 4-MUP 1.4 4-MUP4-MU4-MU360nm360nm激發(fā)光激發(fā)光H H3 3POPO4 4 + +2021/6/16122.2.直接化學(xué)發(fā)光劑直接化學(xué)發(fā)光劑

11、特點(diǎn)：特點(diǎn)：不需催化劑，只需改變?nèi)芤旱牟恍璐呋瘎?，只需改變?nèi)芤旱膒HpH等條件等條件 就能發(fā)光的物質(zhì)。反應(yīng)迅速、背景低、就能發(fā)光的物質(zhì)。反應(yīng)迅速、背景低、 信比高，發(fā)光量與信比高，發(fā)光量與AEAE濃度呈線性關(guān)系。濃度呈線性關(guān)系。 常用試劑：常用試劑：吖啶酯（吖啶酯（acridinium，AEAE）+ CO+ CO2 2+ + 光光NCH3COORHO+2-NCH3C OORONCH3C OOO2021/6/16133.3.電化學(xué)發(fā)光劑電化學(xué)發(fā)光劑 是指通過在電極表面進(jìn)行電化學(xué)反應(yīng)而發(fā)出是指通過在電極表面進(jìn)行電化學(xué)反應(yīng)而發(fā)出 光的物質(zhì)。光的物質(zhì)。特點(diǎn)：特點(diǎn)：反應(yīng)在電極進(jìn)行；反應(yīng)在電極進(jìn)行； 電子

12、供體為：三丙胺（電子供體為：三丙胺（TPATPA） 化學(xué)發(fā)光劑：三聯(lián)毗啶釕化學(xué)發(fā)光劑：三聯(lián)毗啶釕三聯(lián)毗啶釕三聯(lián)毗啶釕分子結(jié)構(gòu)圖分子結(jié)構(gòu)圖NNNNNNRuOONOO2021/6/1614第二節(jié)第二節(jié) 發(fā)光酶免疫測定發(fā)光酶免疫測定（CLEIA）一、原理一、原理 屬于酶免疫測定的一種。只是最后一屬于酶免疫測定的一種。只是最后一 步酶反應(yīng)所用底物為發(fā)光劑，通過發(fā)光反應(yīng)步酶反應(yīng)所用底物為發(fā)光劑，通過發(fā)光反應(yīng) 發(fā)出的光在特定的儀器上進(jìn)行測定。發(fā)出的光在特定的儀器上進(jìn)行測定。二、技術(shù)類型二、技術(shù)類型 根據(jù)酶促反應(yīng)底物不同可分為：根據(jù)酶促反應(yīng)底物不同可分為： 1.1.熒光酶免疫測定技術(shù)熒光酶免疫測定技術(shù) 2.

13、2.化學(xué)發(fā)光酶免疫測定技術(shù)化學(xué)發(fā)光酶免疫測定技術(shù) 根據(jù)免疫學(xué)反應(yīng)模式分根據(jù)免疫學(xué)反應(yīng)模式分 1.1.雙抗體夾心法和雙抗原夾心法雙抗體夾心法和雙抗原夾心法 3.3.固相抗原競爭法：固相抗原競爭法： 2021/6/1615熒光酶免疫測定技術(shù)反應(yīng)原理圖熒光酶免疫測定技術(shù)反應(yīng)原理圖EEEEE 洗滌洗滌棄上清棄上清EE堿性磷酸酶 標(biāo)記抗體E抗體包被塑料微珠樣本抗原 4MU激發(fā)熒光E 是利用理想的酶熒光底物，生成的產(chǎn)物穩(wěn)定并有是利用理想的酶熒光底物，生成的產(chǎn)物穩(wěn)定并有 強(qiáng)的熒光強(qiáng)度，通過測定熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量。強(qiáng)的熒光強(qiáng)度，通過測定熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量。2021/6/1616化學(xué)發(fā)光酶免疫測定技術(shù)反應(yīng)原理圖化學(xué)

14、發(fā)光酶免疫測定技術(shù)反應(yīng)原理圖EEEEE 洗滌洗滌棄上清棄上清EE堿性磷酸酶 標(biāo)記抗體E抗體包被塑料微珠樣本抗原AMPPDEAMPPD發(fā)光 是利用酶對發(fā)光底物催化作用而直接發(fā)光，是利用酶對發(fā)光底物催化作用而直接發(fā)光， 通過光強(qiáng)度的測定而直接進(jìn)行定量。通過光強(qiáng)度的測定而直接進(jìn)行定量。2021/6/1617電化學(xué)發(fā)光原理圖電化學(xué)發(fā)光原理圖 這一過程可在電極表面周而復(fù)始地進(jìn)行這一過程可在電極表面周而復(fù)始地進(jìn)行 產(chǎn)生許多光子，使光信號增強(qiáng)產(chǎn)生許多光子，使光信號增強(qiáng) 激發(fā)態(tài)激發(fā)態(tài)不穩(wěn)定不穩(wěn)定TPA+TPARu(bpy)3+Ru(bpy)Ru(bpy)2+光子(620nm)333*基態(tài)基態(tài)電極電極2021/

15、6/16181.1.抗原抗體結(jié)合反應(yīng)抗原抗體結(jié)合反應(yīng) 將已包被了抗體的乳膠微將已包被了抗體的乳膠微 粒和待測標(biāo)本加入反應(yīng)杯中，經(jīng)溫育一定時間粒和待測標(biāo)本加入反應(yīng)杯中，經(jīng)溫育一定時間 后后, ,再加入再加入APAP標(biāo)記抗體，溫育標(biāo)記抗體，溫育, ,形成固相包被抗形成固相包被抗 體體- -抗原抗原- -酶標(biāo)抗體復(fù)合物酶標(biāo)抗體復(fù)合物 技術(shù)要點(diǎn)技術(shù)要點(diǎn) 2.2.分離技術(shù)分離技術(shù) 將復(fù)合物轉(zhuǎn)移到玻璃纖維上，用緩將復(fù)合物轉(zhuǎn)移到玻璃纖維上，用緩 沖液洗滌，沒結(jié)合的抗原被洗脫，酶標(biāo)抗體沖液洗滌，沒結(jié)合的抗原被洗脫，酶標(biāo)抗體- -抗抗 原原- -膠乳微?？贵w復(fù)合物則被保留在纖維膜上。膠乳微?？贵w復(fù)合物則被保留在

16、纖維膜上。3.3.酶促發(fā)光反應(yīng)酶促發(fā)光反應(yīng) 加入加入4-MUP4-MUP，酶標(biāo)抗體上，酶標(biāo)抗體上APAP將將 4-MUP4-MUP分解，形成分解，形成4-MU4-MU，它在，它在360nm360nm激發(fā)光的照激發(fā)光的照 射下，發(fā)出射下，發(fā)出448nm448nm的熒光，經(jīng)熒光儀記錄，放大，的熒光，經(jīng)熒光儀記錄，放大， 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線由電腦計算出所測物質(zhì)的含量根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線由電腦計算出所測物質(zhì)的含量2021/6/16191.1.磁顆粒分離法：磁顆粒分離法：用抗原或抗體包被磁顆粒用抗原或抗體包被磁顆粒, ,與標(biāo)與標(biāo) 本中相應(yīng)抗原或抗體和酶標(biāo)的抗體或抗原通過本中相應(yīng)抗原或抗體和酶標(biāo)的抗體或抗原通過 一定模

17、式的免疫學(xué)反應(yīng)后一定模式的免疫學(xué)反應(yīng)后, ,最終通過磁場將結(jié)合最終通過磁場將結(jié)合 酶標(biāo)記物酶標(biāo)記物ICIC和游離酶標(biāo)記物進(jìn)行分離的技術(shù)。和游離酶標(biāo)記物進(jìn)行分離的技術(shù)。 分離技術(shù)分離技術(shù)2.2.微粒子捕獲法：微粒子捕獲法：所用顆粒是無磁性微粒子作為所用顆粒是無磁性微粒子作為 抗體或抗原的包被載體抗體或抗原的包被載體, , 然后用纖維膜柱子進(jìn)然后用纖維膜柱子進(jìn) 行酶標(biāo)記物的結(jié)合狀態(tài)和游離狀態(tài)的分離。行酶標(biāo)記物的結(jié)合狀態(tài)和游離狀態(tài)的分離。3.3.包被珠分離法：包被珠分離法：用聚苯乙稀等材料制成小珠用聚苯乙稀等材料制成小珠, ,在在 小珠上包被抗原或抗體小珠上包被抗原或抗體, ,經(jīng)抗原抗體反應(yīng)后經(jīng)抗原

18、抗體反應(yīng)后, ,將將 結(jié)合狀態(tài)和游離狀態(tài)的酶標(biāo)記物進(jìn)行分離結(jié)合狀態(tài)和游離狀態(tài)的酶標(biāo)記物進(jìn)行分離. . 2021/6/1620第三節(jié)第三節(jié) 化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)（CLIA）一、原理一、原理 用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗原或抗體用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗原或抗體, ,與與 待測標(biāo)本中相應(yīng)待測標(biāo)本中相應(yīng)AbAb或或AgAg、磁顆粒性的、磁顆粒性的AgAg或或AbAb反反 應(yīng)，通過磁場把結(jié)合狀態(tài)（沉淀部分）和游離應(yīng)，通過磁場把結(jié)合狀態(tài)（沉淀部分）和游離 狀態(tài)的化學(xué)發(fā)光劑標(biāo)記物分離開來，然后加入狀態(tài)的化學(xué)發(fā)光劑標(biāo)記物分離開來，然后加入 發(fā)光促進(jìn)劑進(jìn)行發(fā)光反應(yīng)，通過對發(fā)光強(qiáng)度的發(fā)光促進(jìn)劑進(jìn)行發(fā)光

19、反應(yīng)，通過對發(fā)光強(qiáng)度的 檢測進(jìn)行定量或定性檢測檢測進(jìn)行定量或定性檢測 。二、技術(shù)類型二、技術(shù)類型 1.1.分離方法分離方法 常用磁顆粒分離技術(shù)常用磁顆粒分離技術(shù) 2.2.免疫學(xué)反應(yīng)模式免疫學(xué)反應(yīng)模式 同酶發(fā)光免疫測定技術(shù)同酶發(fā)光免疫測定技術(shù) 3.3.不同只是相應(yīng)標(biāo)記物是吖啶酯而不是酶不同只是相應(yīng)標(biāo)記物是吖啶酯而不是酶 2021/6/16211.1.抗原抗體結(jié)合反應(yīng)抗原抗體結(jié)合反應(yīng) 將包被將包被McAbMcAb的磁顆粒和待的磁顆粒和待 測標(biāo)本加入到反應(yīng)管中，標(biāo)本中待測測標(biāo)本加入到反應(yīng)管中，標(biāo)本中待測AgAg與磁珠與磁珠 上上AbAb結(jié)合，再加上結(jié)合，再加上AEAE標(biāo)記標(biāo)記AbAb，經(jīng)過溫育，形成

20、，經(jīng)過溫育，形成 磁珠磁珠AbAb- -AgAg-AE-AE標(biāo)記標(biāo)記AbAb復(fù)合物。復(fù)合物。 技術(shù)要點(diǎn)技術(shù)要點(diǎn) 2.2.分離技術(shù)分離技術(shù) 在電磁場中進(jìn)行在電磁場中進(jìn)行2-32-3次洗滌后，很快次洗滌后，很快 地將未結(jié)合的多余地將未結(jié)合的多余AgAg和標(biāo)記和標(biāo)記AbAb洗去。洗去。3.3.化學(xué)發(fā)光反應(yīng)化學(xué)發(fā)光反應(yīng) 經(jīng)洗滌的磁經(jīng)洗滌的磁珠珠中，加入中，加入H H2 2O O2 2和和 pHpH糾正液糾正液NaOHNaOH，這時，這時AEAE不需要催化劑即分解并不需要催化劑即分解并 發(fā)光，由集光器接收，經(jīng)光電倍增管放大，記發(fā)光，由集光器接收，經(jīng)光電倍增管放大，記 錄錄1 1S S內(nèi)所產(chǎn)生的光子能，其

21、積分與被測物含量內(nèi)所產(chǎn)生的光子能，其積分與被測物含量 成正比，按標(biāo)準(zhǔn)曲線，儀器可計算出被測物含量。成正比，按標(biāo)準(zhǔn)曲線，儀器可計算出被測物含量。 2021/6/1622 1.AE 1.AE其低背景噪音、化學(xué)反應(yīng)簡單、快速而無催其低背景噪音、化學(xué)反應(yīng)簡單、快速而無催 化劑。化劑。方法評價方法評價 2.AE2.AE與大分子的結(jié)合并無減少所產(chǎn)生的光量，與大分子的結(jié)合并無減少所產(chǎn)生的光量， 從而增加靈敏度，靈敏度可達(dá)從而增加靈敏度，靈敏度可達(dá)10-15g/ml10-15g/ml。3.AE3.AE標(biāo)記試劑有效期長，可達(dá)一年。標(biāo)記試劑有效期長，可達(dá)一年。4.4.固相分離劑為極為幼細(xì)的磁粉，除增大包被固相分離

22、劑為極為幼細(xì)的磁粉，除增大包被 面積，加快反應(yīng)外，亦同時使清洗及分離更面積，加快反應(yīng)外，亦同時使清洗及分離更 簡易、快捷。簡易、快捷。2021/6/1623第四節(jié)第四節(jié) 電化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)電化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)（ECLI）一、原理一、原理 是一種在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特是一種在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特 異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，實(shí)際上包括了電化學(xué)和化異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，實(shí)際上包括了電化學(xué)和化 學(xué)發(fā)光二個過程。學(xué)發(fā)光二個過程。ECLECL是電啟動發(fā)光反應(yīng)，而是電啟動發(fā)光反應(yīng)，而CLCL 是通過化合物混合啟動發(fā)光反應(yīng)。用化學(xué)發(fā)光是通過化合物混合啟動發(fā)光反應(yīng)。用化學(xué)發(fā)光 劑三聯(lián)吡啶釕劑三聯(lián)吡啶釕Ru(b

23、py)3Ru(bpy)32+2+標(biāo)記標(biāo)記AbAb，通過，通過Ag-AbAg-Ab 反應(yīng)和磁珠分離技術(shù)，根據(jù)三聯(lián)吡啶釕在電極反應(yīng)和磁珠分離技術(shù)，根據(jù)三聯(lián)吡啶釕在電極 上發(fā)出的光強(qiáng)度對待測的上發(fā)出的光強(qiáng)度對待測的AgAg或或AbAb進(jìn)行定量進(jìn)行定量/ /定性。定性。二、技術(shù)類型二、技術(shù)類型 1.1.分離方法分離方法 常用磁顆粒分離技術(shù)常用磁顆粒分離技術(shù) 2.2.免疫學(xué)反應(yīng)模式免疫學(xué)反應(yīng)模式 同酶發(fā)光免疫測定技術(shù)同酶發(fā)光免疫測定技術(shù) 3.3.相應(yīng)標(biāo)記物是三聯(lián)吡啶釕而不是酶相應(yīng)標(biāo)記物是三聯(lián)吡啶釕而不是酶 2021/6/1624 1. 1.三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記抗體和生物素標(biāo)記抗體與待測標(biāo)本三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記抗體和生物素標(biāo)記抗體與待測標(biāo)本 同時加入一個反應(yīng)杯中孵育反應(yīng)同時加入一個反應(yīng)杯中孵育反應(yīng) 技術(shù)要點(diǎn)技術(shù)要點(diǎn) 2. 2.將鏈霉親和素（將鏈霉親和素（SASA）包被磁珠加入反應(yīng)杯中，再次）包被磁珠加入反應(yīng)杯中，再次 孵育，使生物素（孵育，使生物素（B B）通過與親和素（）通過與親和素（A A）的結(jié)合，）的結(jié)合， 將磁珠、將磁珠、AbAb連接為一體，形成雙連接為一體，形成雙AbAb夾心法。夾心法。 3. 3.蠕動泵將形成的蠕動泵將形成的 Ru(bpy)Ru(bpy)3 3 2+2+-Ab-Ag-Ab-B-SA-Ab-Ag-Ab-B-SA-磁珠磁珠 復(fù)合體吸