實驗9細(xì)菌代謝產(chǎn)物

1、|1 1、掌握細(xì)菌糖發(fā)酵試驗、掌握細(xì)菌糖發(fā)酵試驗、IMViCIMViC試驗、硫試驗、硫化氫試驗、尿素分解試驗的原理、結(jié)果判化氫試驗、尿素分解試驗的原理、結(jié)果判斷及醫(yī)學(xué)意義；斷及醫(yī)學(xué)意義；|2 2、熟悉上述試驗的操作方法。、熟悉上述試驗的操作方法。 |一、糖發(fā)酵試驗一、糖發(fā)酵試驗|二、二、IMViCIMViC試驗試驗|三、硫化氫試驗三、硫化氫試驗|四、尿素分解試驗四、尿素分解試驗|五、細(xì)菌的色素產(chǎn)生五、細(xì)菌的色素產(chǎn)生|六、其他六、其他 材料材料 |1 1、菌種：大腸桿菌、傷寒沙門菌、痢疾桿菌、菌種：大腸桿菌、傷寒沙門菌、痢疾桿菌、變形桿菌培養(yǎng)物；金黃色葡萄球菌、白色葡變形桿菌培養(yǎng)物；金黃色葡萄球

2、菌、白色葡萄球菌、檸檬色葡萄球菌培養(yǎng)物；銅綠假單萄球菌、檸檬色葡萄球菌培養(yǎng)物；銅綠假單胞菌培養(yǎng)物；胞菌培養(yǎng)物；|2 2、培養(yǎng)基：、培養(yǎng)基：SSSS平板、平板、EMBEMB、克氏雙糖培養(yǎng)基、克氏雙糖培養(yǎng)基、生化反應(yīng)管、普通瓊脂平板、血平板；生化反應(yīng)管、普通瓊脂平板、血平板；|其他：接種環(huán)、接種針、酒精燈、培養(yǎng)箱等。其他：接種環(huán)、接種針、酒精燈、培養(yǎng)箱等。標(biāo)本標(biāo)本膿血便、肛拭子膿血便、肛拭子選擇選擇/ /鑒別培基鑒別培基生化反應(yīng)生化反應(yīng)血清學(xué)鑒定血清學(xué)鑒定玻片凝玻片凝集試驗集試驗SSSS平板平板, , EMBEMB平板平板（1 1）營養(yǎng)物質(zhì)：營養(yǎng)物質(zhì)：牛肉膏、蛋白胨牛肉膏、蛋白胨（2 2）抑制劑：

3、抑制劑：膽鹽、枸椽酸鹽、煌綠等，抑制非致膽鹽、枸椽酸鹽、煌綠等，抑制非致病菌的生長；但膽鹽能同時促進(jìn)病原菌的生長。病菌的生長；但膽鹽能同時促進(jìn)病原菌的生長。（3 3）鑒別用糖：鑒別用糖：乳糖乳糖（4 4）指示劑：指示劑：中性紅中性紅（5 5）原理：原理：腸道桿菌均能分解葡萄糖產(chǎn)酸，但大多腸道桿菌均能分解葡萄糖產(chǎn)酸，但大多數(shù)非致病菌又能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，而致病菌不數(shù)非致病菌又能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，而致病菌不分解乳糖。據(jù)此，在培養(yǎng)基中加入乳糖和指示劑，分解乳糖。據(jù)此，在培養(yǎng)基中加入乳糖和指示劑，制成鑒別培養(yǎng)基。中性紅為指示劑，酸性時呈現(xiàn)制成鑒別培養(yǎng)基。中性紅為指示劑，酸性時呈現(xiàn)紅色，堿性時呈淡黃色。

4、紅色，堿性時呈淡黃色。|大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸，通過中性紅顯色，菌落大而混大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸，通過中性紅顯色，菌落大而混濁，呈現(xiàn)紅色濁，呈現(xiàn)紅色 |志賀氏菌屬和沙門氏菌屬的細(xì)菌不分解乳糖，而分解蛋志賀氏菌屬和沙門氏菌屬的細(xì)菌不分解乳糖，而分解蛋白質(zhì)產(chǎn)生堿性物質(zhì)，菌落形態(tài)為光滑微黃透明，園形、白質(zhì)產(chǎn)生堿性物質(zhì)，菌落形態(tài)為光滑微黃透明，園形、中等大小，邊緣整齊的菌落。中等大小，邊緣整齊的菌落。|由于宋內(nèi)氏痢疾桿菌有分解膽鹽中的某些物質(zhì)和發(fā)酵乳由于宋內(nèi)氏痢疾桿菌有分解膽鹽中的某些物質(zhì)和發(fā)酵乳糖糖( (產(chǎn)酸產(chǎn)酸) )較慢等特點，而使菌落呈淡紅或紅色的較大或邊較慢等特點，而使菌落呈淡紅或紅色的較大或邊緣

5、不整齊的扁平菌落。某些沙門氏菌屬及變形桿菌因緣不整齊的扁平菌落。某些沙門氏菌屬及變形桿菌因 產(chǎn)產(chǎn)生硫化氫，使菌落呈現(xiàn)黑色中心。生硫化氫，使菌落呈現(xiàn)黑色中心。組成：無糖培養(yǎng)基乳糖伊紅美藍(lán)組成：無糖培養(yǎng)基乳糖伊紅美藍(lán) 底物底物 指示劑、抑菌劑指示劑、抑菌劑 原理：原理： 細(xì)菌細(xì)菌 乳糖乳糖 產(chǎn)酸：伊紅美藍(lán)產(chǎn)酸：伊紅美藍(lán) 紫黑紫黑/ /紫紅紫紅 結(jié)果：結(jié)果： 分解乳糖細(xì)菌分解乳糖細(xì)菌 菌落變黑，有金屬光澤菌落變黑，有金屬光澤 不分解乳糖細(xì)菌不分解乳糖細(xì)菌 菌落無色、半透明（粉色）菌落無色、半透明（粉色）分解 原理：原理：細(xì)菌具有多種酶系統(tǒng)能分解糖類，產(chǎn)酸產(chǎn)氣。細(xì)菌具有多種酶系統(tǒng)能分解糖類，產(chǎn)酸產(chǎn)氣。

6、不同的細(xì)菌對各種糖類的分解不同，因而可以利用不同的細(xì)菌對各種糖類的分解不同，因而可以利用糖發(fā)酵進(jìn)行各種細(xì)菌糖發(fā)酵進(jìn)行各種細(xì)菌( (特別是腸道細(xì)菌特別是腸道細(xì)菌) )的鑒別。的鑒別。|大腸桿菌能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸；分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣；大腸桿菌能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸；分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣；|痢疾桿菌、沙門氏菌、變形桿菌則不能乳糖（乳糖痢疾桿菌、沙門氏菌、變形桿菌則不能乳糖（乳糖除宋內(nèi)氏遲產(chǎn)酸外均不產(chǎn)酸產(chǎn)氣）；分解葡萄糖產(chǎn)除宋內(nèi)氏遲產(chǎn)酸外均不產(chǎn)酸產(chǎn)氣）；分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣酸不產(chǎn)氣( (僅福氏僅福氏6 6型可產(chǎn)少量氣型可產(chǎn)少量氣) ) |葡萄糖發(fā)酵試驗|乳糖發(fā)酵試驗 原理：原理： IMViCIMViC試驗試驗是一組

7、用于腸桿菌科細(xì)菌鑒別的實是一組用于腸桿菌科細(xì)菌鑒別的實驗，由靛基質(zhì)試驗、甲基紅試驗、驗，由靛基質(zhì)試驗、甲基紅試驗、VPVP試驗和枸櫞酸試驗和枸櫞酸鹽利用試驗組成。鹽利用試驗組成。靛基質(zhì)試驗：靛基質(zhì)試驗：大腸桿菌陽性；變形桿菌陽性；痢疾桿大腸桿菌陽性；變形桿菌陽性；痢疾桿菌陰性、沙門菌陰性；菌陰性、沙門菌陰性；甲基紅試驗：甲基紅試驗：四種腸道桿菌均為陽性；四種腸道桿菌均為陽性；VPVP試驗：試驗：除變形桿菌部分菌株陽性外，其余均為陰性；除變形桿菌部分菌株陽性外，其余均為陰性；枸櫞酸鹽利用試驗：枸櫞酸鹽利用試驗：大腸桿菌和痢疾桿菌陰性，變形大腸桿菌和痢疾桿菌陰性，變形桿菌以陽性為主，傷寒沙門菌陰性

8、，副傷寒沙門菌桿菌以陽性為主，傷寒沙門菌陰性，副傷寒沙門菌和其它沙門菌部分陽性。和其它沙門菌部分陽性。陽陽性性陰陰性性對對照照大腸桿菌、變形桿菌陽性；大腸桿菌、變形桿菌陽性；痢疾桿菌、沙門菌陰性；痢疾桿菌、沙門菌陰性；四種腸道桿菌四種腸道桿菌VP均為陽性均為陽性四種腸道桿菌四種腸道桿菌VP均為陰性均為陰性原理：某些細(xì)菌能分解培養(yǎng)基中硫氨基酸（如胱胺酸）產(chǎn)生疏化氫、硫化氫與硅酸亞鐵中的亞鐵離子結(jié)合形成黑色的硫化鐵，|變形桿菌，傷寒桿菌能產(chǎn)生硫化氫，生成黑色沉淀物；|大腸桿菌、痢疾桿菌不產(chǎn)生硫化氫；硫化氫試驗陰性。原理：原理：|變形桿菌含有尿素酶，經(jīng)變形桿菌含有尿素酶，經(jīng)2 24 4小時培養(yǎng)能分解

9、培養(yǎng)小時培養(yǎng)能分解培養(yǎng)基中較多量尿素產(chǎn)生大量基中較多量尿素產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)基的氨，使培養(yǎng)基PHPH變?yōu)辂|變?yōu)辂|性，而呈現(xiàn)紅色。即陽性性，而呈現(xiàn)紅色。即陽性反應(yīng)，陽性反應(yīng)可棄之。反應(yīng)，陽性反應(yīng)可棄之。|痢疾桿菌屬及沙門氏菌屬痢疾桿菌屬及沙門氏菌屬之細(xì)菌不能分解尿素而不之細(xì)菌不能分解尿素而不呈現(xiàn)堿性反應(yīng)即陰性反應(yīng)，呈現(xiàn)堿性反應(yīng)即陰性反應(yīng)，陰性反應(yīng)陰性反應(yīng) 需繼續(xù)作生化反需繼續(xù)作生化反應(yīng)及血清學(xué)試驗。應(yīng)及血清學(xué)試驗。（五）（五） 克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基反應(yīng)試驗克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基反應(yīng)試驗組成：基礎(chǔ)培養(yǎng)基組成：基礎(chǔ)培養(yǎng)基1 1份葡萄糖份葡萄糖1010份乳糖鐵鹽酚紅份乳糖鐵鹽酚紅 營養(yǎng)營養(yǎng) 底物底物

10、底物底物 底物底物 指示劑指示劑( (酚紅指示劑酚紅指示劑: :酸性時黃色酸性時黃色, ,堿性時紅色堿性時紅色) )原理：原理：(1)(1)只分解葡萄糖只分解葡萄糖 產(chǎn)酸（葡萄糖少，產(chǎn)酸量少）產(chǎn)酸（葡萄糖少，產(chǎn)酸量少）(2)(2)分解葡萄糖乳糖分解葡萄糖乳糖 產(chǎn)酸（乳糖多，產(chǎn)酸多）產(chǎn)酸（乳糖多，產(chǎn)酸多） 上下層均為黃色上下層均為黃色(3)(3)產(chǎn)生產(chǎn)生H H2 2S S鐵鹽鐵鹽 FeS FeS 培養(yǎng)基成黑色培養(yǎng)基成黑色分解葡萄糖和乳糖只分解葡萄糖分解葡萄糖產(chǎn)生硫化氫對照管|動力試驗：動力試驗：分別取四種腸道桿菌的培養(yǎng)物，用穿分別取四種腸道桿菌的培養(yǎng)物，用穿刺接種方法接種于刺接種方法接種于4 4支半固體培養(yǎng)培養(yǎng)基，支半固體培養(yǎng)培養(yǎng)基，3737培培養(yǎng)養(yǎng)18-24h18-24h以后觀察結(jié)果。以后