細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)報(bào)告范文

1、細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)報(bào)告 【實(shí)驗(yàn)題目】 動(dòng)物細(xì)胞融合 【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?1.了解動(dòng)物細(xì)胞融合的常用方法。 2.學(xué)習(xí)化學(xué)融合的基本操作過程。 3.觀察動(dòng)物細(xì)胞融合過程中細(xì)胞的行為與變化。 【實(shí)驗(yàn)材料與用品】 1、材料 雞血紅細(xì)胞 2、試劑 50%peg、gkn 溶液、alsevers 細(xì)胞保存液、0.85%氯化鈉溶液。 3、 器材 倒置顯微鏡、離心機(jī)、載玻片、蓋玻片、離心管、廢液缸、滴管等。 【實(shí)驗(yàn)原理】 細(xì)胞融合是指在自發(fā)或者誘導(dǎo)條件下，兩個(gè)或兩個(gè)以上細(xì)胞合并為雙核或者多核細(xì)胞的過程。目前人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有很多方法可以誘導(dǎo)細(xì)胞融合，包括：病毒誘導(dǎo)融合、化學(xué)誘導(dǎo)融和和電激誘導(dǎo)融合。 1、病毒誘導(dǎo)融合 仙臺病毒、

2、牛痘病毒、新城雞瘟病毒和皰疹病毒等可以介導(dǎo)細(xì)胞的融時(shí)也可介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞的融合。用紫外線滅活后，這些病毒即可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生融合。 2、化學(xué)誘導(dǎo)融合 很多化學(xué)試劑能夠誘導(dǎo)細(xì)胞融合，如聚乙二醇(peg)、二甲基亞砜、山梨醇、 甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰絲氨酸等。這些物質(zhì)能夠改變細(xì)胞膜脂質(zhì)分子的排列，在去除這些物質(zhì)之后，細(xì)胞膜趨向于恢復(fù)原有的有序結(jié)構(gòu)。在恢復(fù)過程中想接觸的細(xì)胞由于接口處脂質(zhì)雙分子層的相互親和與表面張力，細(xì)胞膜融合，胞質(zhì)流通，發(fā)生融合?；瘜W(xué)誘導(dǎo)方法，操作方便，誘導(dǎo)融合的概率比較高，效果穩(wěn)定，適用于動(dòng)、植物細(xì)胞，但對細(xì)胞具有一定的毒性。peg 是廣泛使用的化學(xué)融合劑。 3、電激誘導(dǎo)融合 包括

3、電誘導(dǎo)、激光誘導(dǎo)等。其中，電誘導(dǎo)是先使細(xì)胞在電場中極化成為偶極子，沿電力線排布成串，再利用高強(qiáng)度、短時(shí)程的電脈沖擊破細(xì)胞膜，細(xì)胞膜的脂質(zhì)分子發(fā)生重排，由于表面張力的作用，兩細(xì)胞發(fā)生融合。電誘導(dǎo)方法具有融合過程易控制、融合概率高、無毒性、作用機(jī)制明確、可重復(fù)性高等優(yōu)點(diǎn)。 【 實(shí)驗(yàn)步驟】 在本次實(shí)驗(yàn)中采用的是化學(xué)誘導(dǎo)融合的方法，利用 peg 使雞血紅細(xì)胞發(fā)生融合。具體實(shí)驗(yàn)步驟如下： 1、 取雞血 2ml+2mlalsever 液，再加入 6mlalsever 液，混勻后制懸液（4保存）【老師已做好，可直接使用】 2、 ?。?）中懸液 1ml+4ml 的 0.85%的 nacl 溶液，進(jìn)行以下三次離

4、心處理： 1200r/min 下離心 5min，去掉上清液，再加入 0.85%的 nacl 溶液至 5ml； 1000-1200r/min 下離心 5min，去掉上清液，再加入 0.85%的 nacl 溶液至 5ml； 1000-1200r/min 下離心 7min 【因時(shí)間關(guān)系此次實(shí)驗(yàn)只離心一次】 3、 將離心后的沉降血球（去上清后約 0.1-0.2ml）加入 gkn 至 1-2ml，使之成為 10%的細(xì)胞懸液； 4、 取上述10%的血球懸液1ml,加入3mlgkn液，使每毫升含血球15000000個(gè)； 5、分別?。?）1ml+0.5ml50%peg，（4）0.5ml+0.5ml50%peg

5、，（4）0.5ml+1.0ml50%peg， 2-3min 后，顯微鏡下觀察。 【 實(shí) 驗(yàn) 結(jié)果】 1、 實(shí)驗(yàn)中可觀察到兩個(gè)和多個(gè)細(xì)胞發(fā)生質(zhì)膜融合現(xiàn)象,可看到不同融合狀態(tài)的細(xì)胞： 呈現(xiàn)啞鈴狀； 細(xì)胞融合完成形成含有雙核或者多核的細(xì)胞，呈圓形。 比較典型的細(xì)胞融合時(shí)的形態(tài)如下圖： 圖 1 圖 2 圖 3 初 步 接 觸 融 合 圖 4 圖 5 圖 6 圖 7 圖 8 2、 在三種不同濃度的細(xì)胞懸液中，所觀察到的細(xì)胞發(fā)生質(zhì)膜融合的比率不同，如下圖所示： 細(xì) 胞 進(jìn) 一 步 融 合 融 合 完 成 圖 1： 1 號溶液中細(xì)胞融合整體圖像 圖 2： 2 號溶液中細(xì)胞融合整體圖像 圖 3： 3 號溶液細(xì)

6、胞融合整體圖像 【討論與結(jié)論】 1、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 經(jīng)過 peg 的介導(dǎo)融合，雞血紅細(xì)胞中有少部分細(xì)胞發(fā)生了融合，且多處于融合剛開始的階段。大部分細(xì)胞仍處于離散狀態(tài)，另外，視野中還發(fā)現(xiàn)有細(xì)胞聚集成團(tuán)的現(xiàn)象。 另外，本次實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了細(xì)胞懸液三個(gè)不同濃度的融合實(shí)驗(yàn)，1ml+0.5ml50%peg，0.5ml+0.5ml50%peg，0.5ml+1.0ml50%peg，前兩組的細(xì)胞融合率明顯沒有第三組的細(xì)胞融合率高，因此可以得出結(jié)論：在一定范圍內(nèi)，peg的濃度越高，細(xì)胞融合率越高。另外，由于本次實(shí)驗(yàn)中的細(xì)胞懸液濃度偏低，因此無法直觀的對前兩組進(jìn)行融合率的比較，但從理論上分析，在 peg 濃度一定時(shí)應(yīng)該是細(xì)

7、胞濃度高的融合率高（細(xì)胞間的接觸幾率增大）。 2、 結(jié)果分析 積較大，易于實(shí)驗(yàn)觀察。 心，目的是充分清洗細(xì)胞表面，使細(xì)胞接觸面積達(dá)到最大，有利于細(xì)胞間的融合。每次離心前都要將樣品小心混勻，否則有可能出現(xiàn)聚集成團(tuán)的細(xì)胞。 過高。 視野中經(jīng)常會(huì)看到兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞接觸在一起，此時(shí)不一定就是融合的細(xì)胞，需要轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋對接觸部分進(jìn)行觀察，通過觀察接觸部位細(xì)胞膜的有無判斷其為融合細(xì)胞還是重疊在一起的細(xì)胞。 本次實(shí)驗(yàn)采用的是 peg 介導(dǎo)，融合效果受到以下幾個(gè)因素的影響：peg 分子的分子量和濃度、peg 作用時(shí)間、融合溫度、ph 值。在一定范圍內(nèi)適當(dāng)調(diào)節(jié)這些條件，可以將融合率提高。但在進(jìn)行科研時(shí)還應(yīng)考

8、慮到，peg 分子對細(xì)胞存活的影響（peg 具有一定的毒性，且分子量越大毒性越大），因此取分子量 800-1000較適合。 1 號試管中的細(xì)胞懸液出現(xiàn)類似血絲的懸濁物，可能是加入 peg 之后沒有及時(shí)混合均勻，細(xì)胞大量聚集。因此在加入 peg 后先反應(yīng) 30s 左右后小心混勻，否 則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞融合不充分。且在加入時(shí)盡量避免震動(dòng)。 附：細(xì)胞融合的應(yīng)用 動(dòng)物細(xì)胞融合是從細(xì)胞水平來改變動(dòng)物細(xì)胞的遺傳性，可用于生產(chǎn)單克隆抗體、疫苗等特定的生物制品。在培育動(dòng)物新品種時(shí)，縮短動(dòng)物的育種過程。動(dòng)物細(xì)胞融合的應(yīng)用范圍已廣及生物學(xué)的各個(gè)分支學(xué)科。 動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)對于研究細(xì)胞分化、基因定位、腫瘤發(fā)生機(jī)制等方面都

9、有重要意義。在實(shí)際應(yīng)用方面，動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)在藥物定向釋放系統(tǒng)、細(xì)胞治療以及抗腫瘤免疫等方面起到重要的作用。 1、 生產(chǎn)單克隆抗體 單克隆抗體技術(shù)的核心是用骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)特定抗原免疫刺激的 b 淋巴細(xì)胞融合得到雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞既能像骨髓瘤細(xì)胞那樣在體外無限增殖，又具有 b 淋巴細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體的能力。因此，單克隆抗體技術(shù)又稱為雜交瘤技術(shù)。 2、 用于基因定位和繪制人類基因圖譜 雜種細(xì)胞中某一染色體或其片段的存在與否與細(xì)胞的某一性狀表達(dá)與否相聯(lián)系，從而可以實(shí)現(xiàn)把基因定位于某一染色體或某一區(qū)段上。 3、 動(dòng)物育種 體細(xì)胞核移植技術(shù)是將細(xì)胞核移植到另一細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的生物技術(shù)。動(dòng)物體細(xì)胞融合

10、后，雜種細(xì)胞難以發(fā)育再生為一個(gè)個(gè)體。但借助于細(xì)胞核移植的方法將融合后雜種細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核成熟卵內(nèi)，可培育新的雜種。另外，細(xì)胞核移植技術(shù)的建立，還為目前進(jìn)行的哺乳動(dòng)物體細(xì)胞克隆和轉(zhuǎn)基因技術(shù)做了良好的鋪墊。 4、 細(xì)胞療法 將患者的任何體細(xì)胞與去核卵細(xì)胞融合，融合子進(jìn)行有絲分裂形成囊胚，囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)是多能干細(xì)胞，對多能干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)使其定向分化可形成所需的組織和器官用于器官移植，不僅解決了器官和組織來源問題，而且也避免宿主對外來物的免疫排斥。 5、 植物細(xì)胞融合 植物細(xì)胞融合在育種上有重要的應(yīng)用價(jià)值，在生產(chǎn)研究應(yīng)用方面，通過誘導(dǎo)不同種屬間甚至不同科間原生質(zhì)體的融合，可能打破有性雜交不親和性的界限，廣泛地組合各種基因型，從而有可能形成有性雜交方法所無法獲得的新型雜交植株。 植物細(xì)胞融合可以將細(xì)胞器、dna、質(zhì)粒、病毒、細(xì)菌等外源遺傳物質(zhì)引入原生質(zhì)體，從而有可能引起細(xì)胞遺傳性的改變，為某些珍稀動(dòng)物的復(fù)壯等提供了可行的方法，應(yīng)用于植物育種、種質(zhì)保存、無性系的