血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳及其定量實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、南方底科女曇生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告姓 名: 學(xué) 號: 專業(yè)年級: 組 另I:生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心實(shí)驗(yàn)日期實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)合作者評分教師簽名批改日期指導(dǎo)老師一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?學(xué)習(xí)醋酸纖維薄膜電泳的根本原理和操作方法；.了解電泳技術(shù)的一般原理；.掌握電泳別離血清蛋白質(zhì)及其定性定量的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理.血清中各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同，一般都低于。它們在的緩沖液中均解離帶負(fù)電荷，在電場中向正極移動。由于血清中各種蛋白質(zhì)分子大小、形狀及所帶的電荷量不同， 在醋酸纖維素薄膜上電泳的速度也不同。因此可以將它們別離為清蛋白Albumin、a1-球蛋白、a 2-球蛋白、B -球蛋白、丫 -球蛋白5條區(qū)帶。.血清中不同蛋

2、白質(zhì)的等電點(diǎn)、分子量及含量血清蛋白質(zhì)等電點(diǎn)分子量占總蛋白的清蛋白69,0005772a 1 球蛋白200,00025a 2 球蛋白300,00049B球蛋白90,000150,00012丫一球蛋白156,000950,0001220緩沖液pH= pl v pHo血清蛋白帶負(fù)電荷，在電場中向正極移動預(yù)測血清蛋白電泳區(qū)帶圖血清蛋白依次分為清蛋白，球蛋白的a1、a 2、B、丫五個(gè)區(qū)帶.膜條經(jīng)過氨基黑10B染色后顯出清晰色帶；各色帶蛋白質(zhì)含量與染料結(jié)合量 根本成正比；可將各色帶剪開，分別溶于堿性溶液中；用分光光度法計(jì)算各種蛋白 質(zhì)的百分?jǐn)?shù)。三、材料與方法：.實(shí)驗(yàn)材料：實(shí)驗(yàn)試劑：樣品：健康人血清新鮮、無

3、溶血；巴比妥 -巴比妥鈉緩沖液， 離子強(qiáng)度L;氨基黑10B染色液；漂洗液；洗脫液：NaOH溶液。實(shí)驗(yàn)器材：V-1100分光光度計(jì)X 1；恒溫水浴箱X 1；試管X 6、 試管架X 1；1000卩L加樣槍X 1、加樣槍架X 1；醋酸纖維薄膜2cm*8cm 厚度120卩m:培養(yǎng)皿X 5;點(diǎn)樣器或載玻片X 1；平頭鑷子X 2； 剪刀X 1；電泳槽X 1； ?直流穩(wěn)壓電泳儀X 1小組標(biāo)記樣品標(biāo)記廠2.電泳：放置膜條點(diǎn)樣面向下，點(diǎn)樣端置于陰極；膜條貼緊濾紙，拉直膜 條；平衡五分鐘；通電調(diào)節(jié)電壓 120v/電流，時(shí)間：4560 min;關(guān)閉電源電泳槽解剖圖:醋酸纖維素薄膜電極槽支架濾紙橋電極槽支架濾紙橋3.

4、染色、漂洗：通電完畢；取出膜條；浸于染色液氨基黑10B中，5min；4.定量洗脫比色法因?qū)嶒?yàn)室等原因，未做四、結(jié)果與討論:圖一染色后的膜條.結(jié)果分析本次實(shí)驗(yàn)得到的圖譜只能夠清晰的看出清蛋白和Y球蛋白的區(qū)帶，其余無法區(qū)別。原因可能如下： 醋酸纖維薄膜質(zhì)量缺乏 薄膜過濕，樣品擴(kuò)散迅速，導(dǎo)致樣品別離不成區(qū)帶 點(diǎn)樣太少，區(qū)帶顯色不明顯。 電泳時(shí)間缺乏。 薄膜在緩沖液中浸泡的時(shí)間缺乏。 取出電泳后的薄膜過程中曾不慎將薄膜掉到地上。 染色時(shí)，因?yàn)楝F(xiàn)場混亂，可能導(dǎo)致醋酸纖維薄膜不是一張一張放入染色液的，在染色 固定前，薄膜與薄膜之間重疊，造成薄膜上還未固定的血清蛋白彼此粘連。.課后思考題1. 電泳時(shí)，點(diǎn)樣端置于電場的正極還是負(fù)極為什么答：點(diǎn)樣端置于電場的負(fù)極。因?yàn)槿梭w血清的蛋白質(zhì)會因電槽中溶質(zhì)呈堿性而帶負(fù)電，要成功別離出各類各類蛋白質(zhì)，理應(yīng)將點(diǎn)樣端置于電場的負(fù)極。2. 電泳后各區(qū)帶應(yīng)明顯分開，如別離不清或不整齊，試分析其可能存在的原因答：醋酸纖維薄膜質(zhì)量缺乏；薄膜過濕，樣品擴(kuò)散迅速，導(dǎo)致樣品別離不成區(qū)帶;點(diǎn)樣太少，區(qū)帶顯色不明顯；染色時(shí)，醋酸纖維薄膜不是一張一張