血清直接膽紅素測定.doc

1、血清直接膽紅素（D-BIL ）測定1. 實驗原理直接膽紅素與 2,4- 二氯苯胺重氮鹽形成重氮化合物，在酸性條件下呈紅色。2. 標本：2.1病人準備：無特殊要求。最好用禁食的標本以減少乳糜血的干擾。2.2類型：血清、肝素或 EDTA血漿，應避光保存。3. 標本存放： 15 25保存可穩(wěn)定 2天； 28保存可穩(wěn)定 7天； -20 保存可穩(wěn)定 3個月，如冰凍保存，不可反復凍融！ 。4. 標本運輸： 常溫條件下避光保存運輸。5. 標本拒收標準： 標本溶血、細菌污染、脂血、非避光保存運輸?shù)臉吮尽?. 實驗材料6.1試劑：申能總膽紅素試劑盒： 141 0827170 1試劑試劑 26.1.1試劑組成試劑

2、1： 16 64mlEDTA-Na20.07mmol/L氯化鈉6.6g/L氨基磺酸70mmol/L試劑2： 6 16ml2,4-二氯苯胺重氮鹽0.09mmol/L鹽酸130mmol/LEDTA-Na0.02mmol/L26.1.2試劑準備：試劑為即用式。6.1.3試劑穩(wěn)定性與貯存：試劑避光保存于2 8，若無污染，可穩(wěn)定至失效期。試劑有效期為18個月。試劑2必需避光保存。試劑不可冰凍。6.1.4變質(zhì)指示：當試劑有濁度時，表明有細菌污染，不能繼續(xù)使用。6.1.5注意事項：此試劑為體外診斷用。警告！腐蝕劑！不要入口。避免和眼睛，皮膚或衣服接觸。如果接觸到，立即用大量的水沖洗受損害的部位15分鐘。接觸

3、到眼睛或吞服，立即尋找醫(yī)療保護。6.2校準品：使用 DiaSys公 司 提 供 的 TruCal U校 準 品 對 自 動 分 析 儀 進 行 校 準 ， 參見生化檢驗校準品和質(zhì)控品.SOP文件6.3質(zhì)控品：參見生化檢驗校準品和質(zhì)控品.SOP文件7. 儀器：奧林巴斯 AU680生化分析儀8. 操作步驟8.1項目基本參數(shù)：參見生化檢驗貝克曼AU680生化分析儀項目測定參數(shù).SOP文件8.2儀器操作步驟：參見生化檢驗貝克曼AU680生化分析儀操作規(guī)程.SOP文件檢驗結果的判斷與分析10.質(zhì)量控制： 在每一批標本中都應把非定值血清水平I 與 II 質(zhì)控做為未知標本進行分析，以 2S為質(zhì)控警告限， 3

4、S為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控。質(zhì)控規(guī)則參見生化室室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程.SOP文件。11.計算方法以 TruCal U復 合 校 準 品 校 準 儀 器 后 ， 在 病 人 結 果 可 報 告 范 圍 內(nèi) ， 儀 器 直 接 報告 可 靠 的 檢 測 結 果 無 需 手 工 計 算 ， 以 mol/L報 告 。手工測定計算方法為： Au直接膽紅素( mol/L) =-校準液濃度 As12. 參考值范圍： 6.8 mol/L參考值因性別、年齡、飲食和地域的不同而有所差別。根據(jù)好的實驗室經(jīng)驗，每個實驗室應建立自己的參考值。13. 臨床意義： 膽紅素是血紅蛋白的降解產(chǎn)物。游離膽紅素非極性很強，幾乎

5、不溶解于水。在血液中與白蛋白形成復合物由脾臟向肝臟運輸。在肝臟中，膽紅素與葡萄糖醛酸結合, 生成可溶性膽紅素葡萄糖醛酸酯由膽管排入腸道。溶血（肝前黃疸） 、實質(zhì)的肝損傷（肝性黃疸）和膽管堵塞（肝后黃疸）都會導致血液膽紅素增高，形成高膽紅素血癥。人群中常見先天性慢性高膽紅素血癥，稱為Gilbert綜合癥。由于膽紅素降解酶的功能滯后以及出生后紅細胞破碎增多，使6070%的嬰兒血液出現(xiàn)總膽紅素增高。常用的膽紅素檢測方法能檢測總膽紅素和直接膽紅素。直接膽紅素的測定主要檢測水溶性的結合膽紅素，因此可以根據(jù)總膽紅素和直接膽紅素的差來估計游離膽紅素的含量。14. 操作性能14.1線性范圍： 1.7 171m

6、ol/L14.2精密度： 精密度的評估是根據(jù) NCCLS推薦的標準方法5，AU680批內(nèi)精密度小于4%或SD 0.04 ，總精密度小于 5%或 SD 0.07 。用于分析的質(zhì)控血清和數(shù)據(jù)處理符合以上的NCCLS的規(guī)則。批內(nèi)精密度xsCV批間精密度xsCVn=20( mol/L)( mol/L)(%)n=20( mol/L)( mol/L)(%)樣品 16.00.203.34樣品 16.20.193.12樣品 212.80.121.00樣品 213.00.191.46樣品 336.40.260.71樣品 335.40.461.3014.3方法學比較：本公司的試劑盒(y) 與某商品化試劑盒 (x)

7、 ，同時對 85個樣品進行 DBIL檢測，將檢測結果作方法學比較，其統(tǒng)計結果如下：y=0.95x+0.68 mol/L ； r=0.995 。14.4靈敏度： 1.7 mol/L 。14.5病人結果可報告范圍：1.7 171 mol/L15 超出范圍結果處理本法線性上限為171mol/L 。樣品測定值超過上限時，應將樣品用0.9 氯化鈉溶液作 1:1 稀釋，重新測定，結果乘以2。16.病危報警值的處理無。17. 方法局限性17.1本法線性上限為171mol/L 。樣品測定值超過上限時，應將樣品用0.9 氯化鈉溶液作1:1 稀釋，重新測定，結果乘以2。17.2 干擾物質(zhì)：當樣品中抗壞血酸濃度17

8、04 mol/L，甘油三酯濃度22.6mmol/L 時沒有觀察到干擾。血紅蛋白濃度0.50g/L 將產(chǎn)生干擾。18. 補救措施： 當儀器發(fā)生故障時，迅速聯(lián)系儀器廠家進行維修。19. 參考文獻：Tietz, N.W.(Ed), Fundamentals of Clinical Chemistry, 3rdEdition, W.B. Saunders,1987.Van den Bergh, A. and Mueller, P., Biochem Z,77:90,1916NCCLS, Interference Testing in Clinical Chemistry, EP7-P,1986.Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 4thEdition, AACC Press, 1995.NCCLS, Evaluation Protocol EP5-T2,1992.Rand, R. N., DI Pasque, A., Clin Chem 1962; 8: 570Henry,J.,Cannon, D. C.,Winkelmann, J.V.,Clinicalchemistry,p