第六章食品添加劑分析

1、第六章第六章 食品添加劑分析食品添加劑分析6.1 6.1 食品添加劑的概況食品添加劑的概況v食品添加劑是用于改善食品的品質(zhì)、延長食品食品添加劑是用于改善食品的品質(zhì)、延長食品保存期、便于食品加工和增強食品營養(yǎng)成分的保存期、便于食品加工和增強食品營養(yǎng)成分的一類化學(xué)合成或天然物質(zhì)。一類化學(xué)合成或天然物質(zhì)。v它在食品的制造加工、包裝處理及感官評定等它在食品的制造加工、包裝處理及感官評定等方面起了很大的作用。方面起了很大的作用。v世界各國為確保食品添加劑的安全使用，制定世界各國為確保食品添加劑的安全使用，制定了有關(guān)食品添加劑的法規(guī)。食品添加劑的定量、了有關(guān)食品添加劑的法規(guī)。食品添加劑的定量、定性分析，是

2、食品安全的一個至關(guān)重要的方面。定性分析，是食品安全的一個至關(guān)重要的方面。食品添加劑的分類食品添加劑的分類v按來源分：按來源分：天然的和化學(xué)合成的天然的和化學(xué)合成的v按功能分：按功能分： 防腐劑、漂白劑、發(fā)色劑、著色劑、酸度調(diào)節(jié)防腐劑、漂白劑、發(fā)色劑、著色劑、酸度調(diào)節(jié)劑、抗結(jié)劑、消泡劑、抗氧化劑、膨松劑、穩(wěn)劑、抗結(jié)劑、消泡劑、抗氧化劑、膨松劑、穩(wěn)定劑和凝固劑、膠姆糖基礎(chǔ)劑、乳化劑、酶制定劑和凝固劑、膠姆糖基礎(chǔ)劑、乳化劑、酶制劑、增味劑、被膜劑、水分保持劑、營養(yǎng)強化劑、增味劑、被膜劑、水分保持劑、營養(yǎng)強化劑、甜味劑、增稠劑、香料及其它，共劑、甜味劑、增稠劑、香料及其它，共22類。類。幾種食品添加劑

3、舉例：幾種食品添加劑舉例：防腐劑：防腐劑：苯甲酸和苯甲酸鈉、山梨酸和山梨酸鉀苯甲酸和苯甲酸鈉、山梨酸和山梨酸鉀漂白劑：漂白劑：過氧化苯甲酰、過氧化苯甲酰、so2發(fā)色劑：發(fā)色劑：亞硝酸鈉（火腿腸中含有，能使肉鮮紅，且有防腐的作用）亞硝酸鈉（火腿腸中含有，能使肉鮮紅，且有防腐的作用）抗氧化劑：抗氧化劑：bha, bht, tbhq, 維生素維生素e, 維生素維生素c被膜劑：被膜劑：紫膠（用于巧克力糖的外膜涂層，防止巧克力受潮發(fā)粘）紫膠（用于巧克力糖的外膜涂層，防止巧克力受潮發(fā)粘）營養(yǎng)強化劑：營養(yǎng)強化劑：食鹽中的碘，食鹽中的碘， 氨基酸，氨基酸， 維生素，維生素， 礦物質(zhì)，如、鈣、鐵、鋅。礦物質(zhì)，如

4、、鈣、鐵、鋅。食品添加劑的作用食品添加劑的作用 食品添加劑的發(fā)展大大地促進了食品工業(yè)的發(fā)食品添加劑的發(fā)展大大地促進了食品工業(yè)的發(fā)展，其所以如此，是因為食品添加劑具有以下展，其所以如此，是因為食品添加劑具有以下作用：作用：(1)增加食品的保藏性，防止腐敗變質(zhì)增加食品的保藏性，防止腐敗變質(zhì)(2)改善食品的感官性狀改善食品的感官性狀(3)有利于食品加工操作，適應(yīng)生產(chǎn)的機械化和有利于食品加工操作，適應(yīng)生產(chǎn)的機械化和連續(xù)化連續(xù)化(4)保持或提高食品的營養(yǎng)價值保持或提高食品的營養(yǎng)價值(5)滿足其他特殊需要滿足其他特殊需要食品添加劑的一般要求食品添加劑的一般要求 根據(jù)多年來的工作，由動物實驗對添加劑已作根據(jù)

5、多年來的工作，由動物實驗對添加劑已作出出 毒理學(xué)的評價，從而規(guī)定了添加劑的毒理學(xué)的評價，從而規(guī)定了添加劑的“每日允每日允許攝取量許攝取量”（accepted daily intake),即即adi值。值。adi值，是指人每天允許食用的量，就是說，某種值，是指人每天允許食用的量，就是說，某種化學(xué)物質(zhì)某種化學(xué)物質(zhì)一個人每天食用同樣的數(shù)量，化學(xué)物質(zhì)某種化學(xué)物質(zhì)一個人每天食用同樣的數(shù)量，并且長期不斷食用下去，對人體也不致產(chǎn)生危害的并且長期不斷食用下去，對人體也不致產(chǎn)生危害的劑量。這是通過動物試驗的結(jié)果將它應(yīng)用到人類而劑量。這是通過動物試驗的結(jié)果將它應(yīng)用到人類而制定的。制定的。任何對人體有重要作用的不可

6、缺少的物質(zhì)，都是任何對人體有重要作用的不可缺少的物質(zhì)，都是有一定限量的，超過就會對人體有害。有一定限量的，超過就會對人體有害。6.2 6.2 某些食品添加劑的檢測某些食品添加劑的檢測6.2.1 6.2.1 防腐劑防腐劑能抑制食品中微生物的繁殖，防止食品腐敗變質(zhì)，延長能抑制食品中微生物的繁殖，防止食品腐敗變質(zhì)，延長食品保存期。常用的防腐劑有苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸食品保存期。常用的防腐劑有苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸及其鉀鹽、對羥基苯甲酸酯，以上三種防腐劑主要用于及其鉀鹽、對羥基苯甲酸酯，以上三種防腐劑主要用于醬油、醋、果汁、汽水、果醬、果子露和罐頭等。此外醬油、醋、果汁、汽水、果醬、果子露和罐頭等。此

7、外還有二氧化硫，用于葡萄酒、果酒。丙酸鈣主要用于面還有二氧化硫，用于葡萄酒、果酒。丙酸鈣主要用于面包、糕點、醬油、醋、黃油和乳制品。包、糕點、醬油、醋、黃油和乳制品。苯甲酸、山梨酸及對羥基苯甲酸酯苯甲酸、山梨酸及對羥基苯甲酸酯樣品處理樣品處理v從食品中提取苯甲酸、山梨酸最常用的方法是蒸氣從食品中提取苯甲酸、山梨酸最常用的方法是蒸氣蒸餾法或乙醚萃取法。蒸餾法或乙醚萃取法。v當(dāng)樣品加酸酸化后，其中的苯甲酸鈉鹽、山梨酸鈉當(dāng)樣品加酸酸化后，其中的苯甲酸鈉鹽、山梨酸鈉鹽轉(zhuǎn)變?yōu)楸郊姿岷蜕嚼嫠?，在酸性條件下可隨水蒸鹽轉(zhuǎn)變?yōu)楸郊姿岷蜕嚼嫠幔谒嵝詶l件下可隨水蒸氣餾出，導(dǎo)入堿性吸收液中，然后酸化。用乙醚萃氣餾出

8、，導(dǎo)入堿性吸收液中，然后酸化。用乙醚萃取游離酸，揮干乙醚，加適當(dāng)?shù)娜軇┤芙鈿堅?，便取游離酸，揮干乙醚，加適當(dāng)?shù)娜軇┤芙鈿堅?，便可進行測定?？蛇M行測定。v有時食品中的其它干擾物質(zhì)存在時對提取會造成麻煩，有時食品中的其它干擾物質(zhì)存在時對提取會造成麻煩，因此在提取苯甲酸、山梨酸之前應(yīng)先進行樣品處理，因此在提取苯甲酸、山梨酸之前應(yīng)先進行樣品處理，目的是為了防止提取過程中出現(xiàn)乳化現(xiàn)象而損失苯甲目的是為了防止提取過程中出現(xiàn)乳化現(xiàn)象而損失苯甲酸、山梨酸，并消除苯甲酸、山梨酸以外的酸性物質(zhì)酸、山梨酸，并消除苯甲酸、山梨酸以外的酸性物質(zhì)給測定帶來的誤差。具體處理方法如下：給測定帶來的誤差。具體處理方法如下： 除

9、二氧化碳除二氧化碳 碳酸飲料中二氧化碳可用超聲法除去。碳酸飲料中二氧化碳可用超聲法除去。 除酒精除酒精 因酒精既可溶于乙醚，又可溶于水，當(dāng)用乙醚因酒精既可溶于乙醚，又可溶于水，當(dāng)用乙醚提取苯甲酸時便容易乳化，故應(yīng)先加熱揮去酒精，再提取苯甲酸時便容易乳化，故應(yīng)先加熱揮去酒精，再將樣品酸化后用乙醚提取苯甲酸。將樣品酸化后用乙醚提取苯甲酸。 除脂肪除脂肪 因脂肪易溶于乙醚，而脂肪酸也能消因脂肪易溶于乙醚，而脂肪酸也能消耗堿，當(dāng)用酸堿滴定法分析苯甲酸時會帶來正耗堿，當(dāng)用酸堿滴定法分析苯甲酸時會帶來正誤差。通常在堿性條件下用乙醚提取出脂肪，誤差。通常在堿性條件下用乙醚提取出脂肪，然后再加酸酸化，并用乙醚

10、提取苯甲酸。然后再加酸酸化，并用乙醚提取苯甲酸。 除蛋白質(zhì)除蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì)是高分子化合物，結(jié)構(gòu)既有蛋白質(zhì)是高分子化合物，結(jié)構(gòu)既有親脂基團又有親水基團，當(dāng)用乙醚提取苯甲酸親脂基團又有親水基團，當(dāng)用乙醚提取苯甲酸時，蛋白質(zhì)的存在會導(dǎo)致乳化而給分離苯甲酸時，蛋白質(zhì)的存在會導(dǎo)致乳化而給分離苯甲酸帶來困難。除蛋白質(zhì)的方法很多，例如鹽析、帶來困難。除蛋白質(zhì)的方法很多，例如鹽析、加蛋白質(zhì)沉淀劑、透析等。加蛋白質(zhì)沉淀劑、透析等。v樣品經(jīng)酸化后，蒸餾法提取山梨酸、苯甲酸樣品經(jīng)酸化后，蒸餾法提取山梨酸、苯甲酸和對羥基苯甲酸酯，這一方法在基體復(fù)雜的和對羥基苯甲酸酯，這一方法在基體復(fù)雜的食品中得到廣泛應(yīng)用。通過對大量

11、不同樣品食品中得到廣泛應(yīng)用。通過對大量不同樣品的分析，蒸餾法的提取率一般在的分析，蒸餾法的提取率一般在75-95之之間。蒸餾法可以將防腐劑從含氯化鈉和酒石間。蒸餾法可以將防腐劑從含氯化鈉和酒石酸的基質(zhì)中提取出來，導(dǎo)入至二氯甲烷酸的基質(zhì)中提取出來，導(dǎo)入至二氯甲烷-水的水的混合溶液（混合溶液（75：25）中，防腐劑被提取到有）中，防腐劑被提取到有機相中，經(jīng)濃縮后進行機相中，經(jīng)濃縮后進行g(shù)c分析。分析。（）氣相色譜法（）氣相色譜法 苯甲酸和山梨酸可以被氣相色譜法直接測定，一般用極性固苯甲酸和山梨酸可以被氣相色譜法直接測定，一般用極性固定相進行分離。如果將苯甲酸、山梨酸衍生為酯（甲酯、丁定相進行分離。

12、如果將苯甲酸、山梨酸衍生為酯（甲酯、丁酯）或硅醚的形式，則用非極性固定相分離。酯）或硅醚的形式，則用非極性固定相分離。 例：例： graveland用用3磷酸磷酸-乙醚溶液提取面包里的山梨酸和苯甲乙醚溶液提取面包里的山梨酸和苯甲酸，離心后上清液作為樣液進行酸，離心后上清液作為樣液進行g(shù)c測定，色譜柱為測定，色譜柱為2m2mm的玻璃柱，內(nèi)填的玻璃柱，內(nèi)填carbowax 20m/對苯二甲酸固定對苯二甲酸固定液涂漬在液涂漬在60-80目目chromosorb w 擔(dān)體上，柱溫以擔(dān)體上，柱溫以5/min從從100升高到升高到210，載氣為氮氣，載氣為氮氣65ml/min。丙酸、山梨。丙酸、山梨酸和苯

13、甲酸在酸和苯甲酸在25min內(nèi)完成分離，最低檢出量為內(nèi)完成分離，最低檢出量為5ng。（2）液相色譜法 苯甲酸、山梨酸和對羥基苯甲酸酯可以用苯甲酸、山梨酸和對羥基苯甲酸酯可以用hplc直接測定。直接測定。添加劑樣品提取方法流動相及色譜柱回收率/%苯甲酸、山梨酸苯甲酸、山梨酸苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、對羥基苯甲酸酯、丙酸苯甲酸、山梨酸調(diào)味品等飲料果醬、調(diào)味品、飲料、腌菜、人造黃油果汁、飲料、乳制品、醬、冷食等膜過濾超聲脫氣、膜過濾飽和硫酸銨水蒸氣蒸餾膜濾及乙醚提取25mmol/l nah2po4-甲醇（3：7）；tskgel ods-80tm柱甲醇0.02mol/l乙酸銨（3：7）；c18柱0.0

14、25mol/l磷酸（ph7.2）-甲醇（95：5）；inertsil-ph柱甲醇-0.02mol/l乙酸銨（5：95）；ods c18柱104-10898-11382-10195-101（3）薄層色譜法薄層色譜法苯甲酸、苯甲酸鈉經(jīng)分離提純后，用薄層層析分離，在苯甲酸、苯甲酸鈉經(jīng)分離提純后，用薄層層析分離，在紫外光下或顯色后與標(biāo)準比較定性與概略定量。紫外光下或顯色后與標(biāo)準比較定性與概略定量。（4 4）紫外分光光度法紫外分光光度法苯甲酸、苯甲酸鈉在酸性溶液中蒸發(fā)出來后，在重鉻酸苯甲酸、苯甲酸鈉在酸性溶液中蒸發(fā)出來后，在重鉻酸鉀硫酸溶液中氧化除去揮發(fā)性的雜質(zhì)及山梨酸，再進行鉀硫酸溶液中氧化除去揮發(fā)性

15、的雜質(zhì)及山梨酸，再進行蒸餾分離，蒸餾液在波長蒸餾分離，蒸餾液在波長 225 nm處測光密度與標(biāo)準比處測光密度與標(biāo)準比較定量本法適用于醬油、醬菜、果汁、果醬等樣品。較定量本法適用于醬油、醬菜、果汁、果醬等樣品。6.2.2 6.2.2 發(fā)色劑發(fā)色劑v發(fā)色作用，抑菌作用發(fā)色作用，抑菌作用v亞硝酸鹽是添加劑種急性毒性較強的物質(zhì)之一，其次亞硝亞硝酸鹽是添加劑種急性毒性較強的物質(zhì)之一，其次亞硝酸鹽為亞硝基化合物的前體，具有致癌性，因此對其用量酸鹽為亞硝基化合物的前體，具有致癌性，因此對其用量及殘留量有嚴格的要求。及殘留量有嚴格的要求。v抗壞血酸與亞硝酸鹽有高度親和力，在體內(nèi)能防止亞硝化抗壞血酸與亞硝酸鹽有

16、高度親和力，在體內(nèi)能防止亞硝化作用，因此在肉類腌制時添加適量的抗壞血酸，有可能防作用，因此在肉類腌制時添加適量的抗壞血酸，有可能防止生成致癌物質(zhì)。止生成致癌物質(zhì)。v雖然硝酸鹽和亞硝酸鹽的使用受到了很大限制，但至今國雖然硝酸鹽和亞硝酸鹽的使用受到了很大限制，但至今國內(nèi)外仍在繼續(xù)使用。其原因是亞硝酸鹽對保持腌制肉制品內(nèi)外仍在繼續(xù)使用。其原因是亞硝酸鹽對保持腌制肉制品的色、香、味有特殊作用，迄今未發(fā)現(xiàn)理想的替代物質(zhì)。的色、香、味有特殊作用，迄今未發(fā)現(xiàn)理想的替代物質(zhì)。更重要的是亞硝酸鹽對肉毒梭狀芽孢桿菌的抑制作用。更重要的是亞硝酸鹽對肉毒梭狀芽孢桿菌的抑制作用。v硝酸鹽和亞硝酸鹽的測定方法硝酸鹽和亞硝

17、酸鹽的測定方法 主要有比色法、氣相色譜法和液相色譜法。主要有比色法、氣相色譜法和液相色譜法。（1）鹽酸萘乙二胺法（測亞硝酸鹽）鹽酸萘乙二胺法（測亞硝酸鹽） 樣品經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)，除去脂肪后，在弱酸條件下，樣品經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)，除去脂肪后，在弱酸條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸重氮化后，再與鹽酸萘亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸重氮化后，再與鹽酸萘乙二胺偶合形成紅紫色染料，與標(biāo)準比較定量。乙二胺偶合形成紅紫色染料，與標(biāo)準比較定量。本法檢出下限為本法檢出下限為0.1mg/kg。（2）鎘柱法（測硝酸鹽用） 樣品經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)，除去脂肪后，溶液通過鎘柱，使樣品經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)，除去脂肪后，溶液通過鎘柱，使其中的硝酸根離子還原成

18、亞硝酸根離子，在弱酸性條其中的硝酸根離子還原成亞硝酸根離子，在弱酸性條件下，亞硝酸根與對氨基苯磺酸重氮化后，再與鹽酸件下，亞硝酸根與對氨基苯磺酸重氮化后，再與鹽酸萘乙二胺偶合形成紅紫色染料，測得亞硝酸鹽總量，萘乙二胺偶合形成紅紫色染料，測得亞硝酸鹽總量，由總量減去亞硝酸鹽含量即得硝酸鹽含量。由總量減去亞硝酸鹽含量即得硝酸鹽含量。（3 3）氣相色譜法）氣相色譜法 測定前要進行衍生化以形成易揮發(fā)性的物質(zhì)。測定前要進行衍生化以形成易揮發(fā)性的物質(zhì)。 硝酸鹽的測定通常是將其衍生為硝基苯，用熱裂解檢硝酸鹽的測定通常是將其衍生為硝基苯，用熱裂解檢測器測定，檢測限為測器測定，檢測限為100-200100-20

19、0g/kgg/kg。 亞硝酸根衍生物的分離一般采用非極性固定相。亞硝酸根衍生物的分離一般采用非極性固定相。（4）液相色譜法v硝酸根和亞硝酸根的液相色譜測定方法，大多硝酸根和亞硝酸根的液相色譜測定方法，大多采用陰離子交換法分離，然后以抑制型電導(dǎo)或采用陰離子交換法分離，然后以抑制型電導(dǎo)或紫外檢測。用離子交換色譜法分析食品中硝酸紫外檢測。用離子交換色譜法分析食品中硝酸根和亞硝酸根不僅簡便、快速，而且選擇性好、根和亞硝酸根不僅簡便、快速，而且選擇性好、準確度高。準確度高。6.2.3 6.2.3 甜味劑甜味劑v甜味劑是指能賦予食品甜味的一種食品添加劑。甜味劑是指能賦予食品甜味的一種食品添加劑。v天然甜味

20、劑主要是從植物組織中提取出來的甜味物質(zhì)，近天然甜味劑主要是從植物組織中提取出來的甜味物質(zhì)，近年也采用人工合成法獲得。它可分為糖醇類和非糖類。年也采用人工合成法獲得。它可分為糖醇類和非糖類。 糖醇類：木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、乳糖醇等糖醇類：木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、乳糖醇等 非糖類：甜菊糖苷、甘草、奇異果素、索馬甜等。非糖類：甜菊糖苷、甘草、奇異果素、索馬甜等。v人工甜味劑主要是一些具有甜味但又不是糖類的物質(zhì)。它人工甜味劑主要是一些具有甜味但又不是糖類的物質(zhì)。它的品種很多，其中的品種很多，其中磺胺類有糖精、甜蜜素等；磺胺類有糖精、甜蜜素等；二肽類二肽類有阿斯巴甜、阿力甜等；有阿斯巴甜、阿力

21、甜等；蔗糖的衍生物有三氯蔗糖、帕蔗糖的衍生物有三氯蔗糖、帕拉金糖、果糖低聚糖等。拉金糖、果糖低聚糖等。糖精糖精v糖精是廣泛使用的人工甜味劑，我國規(guī)定糖精最大使糖精是廣泛使用的人工甜味劑，我國規(guī)定糖精最大使用量為用量為0.15g/kg。v糖精的甜味是蔗糖的糖精的甜味是蔗糖的500倍，但食后會有一種金屬余味，倍，但食后會有一種金屬余味，通常與甜蜜素配伍使用。由于糖精對人體并無營養(yǎng)作通常與甜蜜素配伍使用。由于糖精對人體并無營養(yǎng)作用，也不是食品中的天然成分，應(yīng)盡量少或不用。對用，也不是食品中的天然成分，應(yīng)盡量少或不用。對嬰幼兒食品、病人食品和大量食用的主食食品不得使嬰幼兒食品、病人食品和大量食用的主食

22、食品不得使用。用。（）比色法（）比色法 糖精經(jīng)氯仿、苯提取分離后，與酚和硫酸于糖精經(jīng)氯仿、苯提取分離后，與酚和硫酸于175加加熱，轉(zhuǎn)化成酚磺酞，然后用碳酸氫鈉處理，形成的紅熱，轉(zhuǎn)化成酚磺酞，然后用碳酸氫鈉處理，形成的紅色在色在558nm波長測定波長測定 ，和標(biāo)準比較而定量。，和標(biāo)準比較而定量。（）紫外吸收光譜法（）紫外吸收光譜法 食品中的糖精鈉用透析法進行透析，用乙醚提取，轉(zhuǎn)食品中的糖精鈉用透析法進行透析，用乙醚提取，轉(zhuǎn)至至ahco3溶液中加鹽酸和鋅粉進行還原生成二氧化溶液中加鹽酸和鋅粉進行還原生成二氧化苯并異噻唑啉，此還原生成物用紫外吸收光譜法進行苯并異噻唑啉，此還原生成物用紫外吸收光譜法進

23、行定性定量測定。定性定量測定。（）薄層層析法（）薄層層析法 糖精在酸性條件下，用乙醚提取，濃縮后經(jīng)薄層層析分糖精在酸性條件下，用乙醚提取，濃縮后經(jīng)薄層層析分離，自薄層板上刮下，定量溶解，酸化后在波長離，自薄層板上刮下，定量溶解，酸化后在波長207nm測測定。定。（）納氏比色法（）納氏比色法 糖精先經(jīng)薄層分離，自薄層板上刮下，定量溶解后，加糖精先經(jīng)薄層分離，自薄層板上刮下，定量溶解后，加 2so4 和和h2o2 消化，使成為銨鹽，然后和碘化汞、碘化消化，使成為銨鹽，然后和碘化汞、碘化鉀的復(fù)鹽鉀的復(fù)鹽(hgi22ki)反應(yīng)生成黃色化合物，用銨鹽為標(biāo)準，反應(yīng)生成黃色化合物，用銨鹽為標(biāo)準，間接求出糖精

24、的含量。間接求出糖精的含量。（5）氣相色譜法）氣相色譜法 gc法測定糖精（鈉）是將樣品酸化后，用乙酸乙酯提取法測定糖精（鈉）是將樣品酸化后，用乙酸乙酯提取糖精，提取液濃縮后，用甲基化試劑衍生成甲基化合物，糖精，提取液濃縮后，用甲基化試劑衍生成甲基化合物，用用gc測定。測定。（6）液相色譜法）液相色譜法 hplc法測定汽水、果汁、配制酒類中糖精鈉為我國國法測定汽水、果汁、配制酒類中糖精鈉為我國國家標(biāo)準方法中的第一法（家標(biāo)準方法中的第一法（gb/t 5009.28-2003),樣品處樣品處理相對簡單，將樣品加溫除去二氧化碳和乙醇，用氨水理相對簡單，將樣品加溫除去二氧化碳和乙醇，用氨水（1：1）調(diào)）

25、調(diào)ph值約值約7，過濾后就可以進樣分析。，過濾后就可以進樣分析。6.2.4 6.2.4 色素色素v食用色素按其性質(zhì)和來源，可分為食用天然色素和食用食用色素按其性質(zhì)和來源，可分為食用天然色素和食用合成色素兩大類。合成色素兩大類。v天然色素安全性較高，但染色力弱，穩(wěn)定性較差：葉綠天然色素安全性較高，但染色力弱，穩(wěn)定性較差：葉綠素，類胡蘿卜素花色苷等。目前已經(jīng)有素，類胡蘿卜素花色苷等。目前已經(jīng)有170多種不同原多種不同原料的天然色素，常見的有葉綠素、類胡蘿卜素、花色苷、料的天然色素，常見的有葉綠素、類胡蘿卜素、花色苷、紫膠、胭脂蟲紅、紅花素、梔子黃、焦糖色等。紫膠、胭脂蟲紅、紅花素、梔子黃、焦糖色等

26、。v合成色素著色能力強，且穩(wěn)定性好，但大多數(shù)對人體有合成色素著色能力強，且穩(wěn)定性好，但大多數(shù)對人體有害（一般毒性、致瀉性和致癌性）：莧菜紅，胭脂紅，害（一般毒性、致瀉性和致癌性）：莧菜紅，胭脂紅，日落黃，檸檬黃等。日落黃，檸檬黃等。v合成色素多以苯、甲苯、萘等化工產(chǎn)品為原合成色素多以苯、甲苯、萘等化工產(chǎn)品為原料，經(jīng)過磺化、硝化、偶氮化等一系列有機料，經(jīng)過磺化、硝化、偶氮化等一系列有機反應(yīng)化合而成。因此，食用合成色素多為含反應(yīng)化合而成。因此，食用合成色素多為含有有r-n=n-r鍵、苯環(huán)或氧雜蒽結(jié)構(gòu)化合物，鍵、苯環(huán)或氧雜蒽結(jié)構(gòu)化合物，它們對人體存在一定的不安全性或者產(chǎn)生有它們對人體存在一定的不安全

27、性或者產(chǎn)生有害作用。害作用?！疤K丹紅蘇丹紅”風(fēng)波風(fēng)波“蘇丹紅蘇丹紅”型色素是一種人造化學(xué)制劑，全型色素是一種人造化學(xué)制劑，全球多數(shù)國家都禁止將其用于食品生產(chǎn)。這種球多數(shù)國家都禁止將其用于食品生產(chǎn)。這種色素常用于工業(yè)方面，比如溶解劑、機油、色素常用于工業(yè)方面，比如溶解劑、機油、蠟和鞋油等產(chǎn)品的染色。科學(xué)家通過實驗發(fā)蠟和鞋油等產(chǎn)品的染色。科學(xué)家通過實驗發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)，“蘇丹紅蘇丹紅”會導(dǎo)致鼠類患癌，它在人類會導(dǎo)致鼠類患癌，它在人類肝細胞研究中也顯現(xiàn)出可能致癌的特性。肝細胞研究中也顯現(xiàn)出可能致癌的特性。v蘇丹紅是一種人工合成的偶氮類、油溶性的化工蘇丹紅是一種人工合成的偶氮類、油溶性的化工染色劑，染色劑，1

28、896年科學(xué)家達迪將其命名為蘇丹紅年科學(xué)家達迪將其命名為蘇丹紅并沿用至今。蘇丹紅被大量地用在工業(yè)、化學(xué)和并沿用至今。蘇丹紅被大量地用在工業(yè)、化學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，用于機油、汽車蠟和鞋油等工業(yè)產(chǎn)品，醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，用于機油、汽車蠟和鞋油等工業(yè)產(chǎn)品，以及生化毒理學(xué)研究的著色劑等。以及生化毒理學(xué)研究的著色劑等。v目前，蘇丹紅系列常見目前，蘇丹紅系列常見4種，其中二號、三號和種，其中二號、三號和四號均為一號的化學(xué)衍生物。蘇丹紅一號為暗紅四號均為一號的化學(xué)衍生物。蘇丹紅一號為暗紅色；二號為紅色；三號為有綠色光澤的棕紅色；色；二號為紅色；三號為有綠色光澤的棕紅色；四號為深褐色。四號為深褐色。1995年，歐盟和其他一些

29、國家已開始禁止在食品年，歐盟和其他一些國家已開始禁止在食品中添加蘇丹紅一號；我國中添加蘇丹紅一號；我國1996年出臺的年出臺的食品添食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準中不包含蘇丹紅及其系列色中不包含蘇丹紅及其系列色素（標(biāo)準中沒有公布的添加劑不準用于食品中）。素（標(biāo)準中沒有公布的添加劑不準用于食品中）。2003年年6月，歐盟規(guī)定所有進口的辣椒及其制品月，歐盟規(guī)定所有進口的辣椒及其制品必須檢測蘇丹紅項目，確定未添加后方可進口，必須檢測蘇丹紅項目，確定未添加后方可進口，并要求成員國對市場上銷售的辣椒及其制品進行并要求成員國對市場上銷售的辣椒及其制品進行隨機抽樣檢測。隨機抽樣檢測。2005年年3月

30、，國內(nèi)已經(jīng)證實的月，國內(nèi)已經(jīng)證實的“涉紅涉紅”產(chǎn)品名單：產(chǎn)品名單：肯德基肯德基 肯德基新奧爾良烤翅、新奧爾良烤雞腿堡調(diào)料肯德基新奧爾良烤翅、新奧爾良烤雞腿堡調(diào)料亨氏美味源亨氏美味源(廣州廣州)食品有限公司食品有限公司 美味源桂林辣椒油和美味源金嘜桂林美味源桂林辣椒油和美味源金嘜桂林辣椒醬辣椒醬麥當(dāng)勞麥當(dāng)勞 麥當(dāng)勞西部燒烤調(diào)味汁麥當(dāng)勞西部燒烤調(diào)味汁 調(diào)味料調(diào)味料麥當(dāng)勞地戎芥末蛋黃醬麥當(dāng)勞地戎芥末蛋黃醬 調(diào)味料調(diào)味料麥當(dāng)勞凱馓調(diào)味汁麥當(dāng)勞凱馓調(diào)味汁(普通脂肪型普通脂肪型) 調(diào)味料調(diào)味料麥當(dāng)勞凱馓調(diào)味汁麥當(dāng)勞凱馓調(diào)味汁(低脂肪型低脂肪型) 調(diào)味料調(diào)味料廣州田洋食品有限公司廣州田洋食品有限公司 田洋牌

31、田洋牌“辣椒紅一號辣椒紅一號”復(fù)合食品添加劑復(fù)合食品添加劑河北邯鄲中進天然色素有限公司河北邯鄲中進天然色素有限公司 辣椒精辣椒精珠海市珠海市“公仔公仔doll”牌產(chǎn)品牌產(chǎn)品 公仔日式碗面公仔日式碗面牛肉味公仔米粉牛肉味公仔米粉 勁辣牛肉味公仔面勁辣牛肉味公仔面公仔拉面屋紅燒牛肉公仔拉面屋紅燒牛肉(兩種兩種) 公仔拉面屋紅油排骨公仔拉面屋紅油排骨 牛肉味公仔面牛肉味公仔面長沙長沙“壇壇鄉(xiāng)壇壇鄉(xiāng)”調(diào)料食品有限公司調(diào)料食品有限公司 “壇壇鄉(xiāng)壇壇鄉(xiāng)”牌風(fēng)味辣椒蘿卜含有牌風(fēng)味辣椒蘿卜含有“蘇丹紅四號蘇丹紅四號”v2006年年11月，河北白洋淀的月，河北白洋淀的“紅心鴨蛋紅心鴨蛋”蘇蘇丹紅事件丹紅事件v2

32、006年年12月，陜西出產(chǎn)辣椒面再現(xiàn)蘇丹紅月，陜西出產(chǎn)辣椒面再現(xiàn)蘇丹紅 食品中蘇丹紅染料的檢測方法食品中蘇丹紅染料的檢測方法 高效液相色譜法高效液相色譜法(gb/t 196812005)范圍范圍v本標(biāo)準適用于食品中蘇丹紅染料的檢測。本標(biāo)準適用于食品中蘇丹紅染料的檢測。v本標(biāo)準規(guī)定了食品中蘇丹紅本標(biāo)準規(guī)定了食品中蘇丹紅、蘇丹紅、蘇丹紅、蘇丹紅、蘇丹紅、蘇丹紅蘇丹紅的高效液相色譜測定方法。的高效液相色譜測定方法。v方法最低檢測限：蘇丹紅方法最低檢測限：蘇丹紅、蘇丹紅、蘇丹紅、蘇丹紅、蘇丹紅、蘇、蘇丹紅丹紅均為均為 10 ug/kg 。方法要點方法要點v樣品經(jīng)溶劑提取、固相萃取凈化后，用反相高效液相

33、色樣品經(jīng)溶劑提取、固相萃取凈化后，用反相高效液相色譜譜紫外可見光檢測器進行色譜分析，采用外標(biāo)法定量。紫外可見光檢測器進行色譜分析，采用外標(biāo)法定量。樣品處理樣品處理1. 紅辣椒粉等粉狀樣品紅辣椒粉等粉狀樣品 稱取稱取1 g5g（準確至（準確至0.001g）樣品于三角瓶中，加入）樣品于三角瓶中，加入10ml30ml正己烷，超聲正己烷，超聲5min，過濾，用，過濾，用10ml正己烷正己烷洗滌殘渣數(shù)次，至洗出液無色，合并正己烷液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)洗滌殘渣數(shù)次，至洗出液無色，合并正己烷液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至儀濃縮至5ml以下，慢慢加入氧化鋁層析柱中，為保證層以下，慢慢加入氧化鋁層析柱中，為保證層析效果，在柱中

34、保持正己烷液面為析效果，在柱中保持正己烷液面為2mm左右時上樣，在全左右時上樣，在全程的層析過程中不應(yīng)使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗濃縮程的層析過程中不應(yīng)使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗濃縮瓶，一并注入層析柱。控制氧化鋁表層吸附的色素帶寬宜小瓶，一并注入層析柱。控制氧化鋁表層吸附的色素帶寬宜小于于0.5cm，待樣液完全流出后，視樣品中含油類雜質(zhì)的多少，待樣液完全流出后，視樣品中含油類雜質(zhì)的多少用用10ml30ml正己烷洗柱，直至流出液無色，棄去全部正己烷洗柱，直至流出液無色，棄去全部正己烷淋洗液，用含正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液丙酮的正己烷液60ml洗脫，收集、洗脫，收集、濃縮后，用丙酮

35、轉(zhuǎn)移并定容至濃縮后，用丙酮轉(zhuǎn)移并定容至5ml，經(jīng)，經(jīng)0.45m有機濾膜過有機濾膜過濾后待測。濾后待測。2. 紅辣椒油、火鍋料、奶油等油狀樣品紅辣椒油、火鍋料、奶油等油狀樣品 稱取稱取0.5 g2g（準確至（準確至0.001g）樣品于小燒杯中，加入適量）樣品于小燒杯中，加入適量正己烷溶解（約正己烷溶解（約1 ml10ml），難溶解的樣品可于正己烷），難溶解的樣品可于正己烷中加溫溶解。按中加溫溶解。按1中中“慢慢加入到氧化鋁層析柱慢慢加入到氧化鋁層析柱 過濾后過濾后待測待測”操作。操作。3. 辣椒醬、番茄沙司等含水量較大的樣品辣椒醬、番茄沙司等含水量較大的樣品 稱取稱取10 g20g（準確至（準確

36、至0.01g）樣品于離心管中，加）樣品于離心管中，加10ml20ml水將其分散成糊狀，含增稠劑的樣品多加水，水將其分散成糊狀，含增稠劑的樣品多加水，加入加入30ml正己烷：丙酮正己烷：丙酮 = 3：1，勻漿，勻漿5min, 3000rpm離心離心10min, 吸出正己烷層，于下層再加入吸出正己烷層，于下層再加入20ml2次正己烷勻次正己烷勻漿，離心，合并漿，離心，合并3次正己烷，加入無水硫酸鈉次正己烷，加入無水硫酸鈉5g 脫水，過濾脫水，過濾后于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干并保持后于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干并保持5分鐘，用分鐘，用5ml正己烷溶解殘正己烷溶解殘渣后，按渣后，按1中中“慢慢加入到氧化鋁層析柱慢慢加入

37、到氧化鋁層析柱 過濾后待測過濾后待測”操作。操作。4. 香腸等肉制品香腸等肉制品 稱取粉碎樣品稱取粉碎樣品10g20g（準確至（準確至0.01g）于三角）于三角瓶中，加入瓶中，加入60ml正己烷充分勻漿正己烷充分勻漿5min，濾出清，濾出清液，再以液，再以20ml2次正己烷勻漿，過濾。合并次正己烷勻漿，過濾。合并3次次濾液，加入濾液，加入5g無水硫酸鈉脫水，過濾后于旋轉(zhuǎn)蒸無水硫酸鈉脫水，過濾后于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸至發(fā)儀上蒸至5ml以下，按以下，按1中中“慢慢加入到氧化鋁慢慢加入到氧化鋁層析柱中層析柱中 過濾后待測過濾后待測”操作。操作。推薦色譜條件推薦色譜條件1. 儀器條件儀器條件 色譜柱：色譜柱

38、： zorbax sb-c18 3.5 m 4.6mm150mm （或相當(dāng)型號色譜柱）（或相當(dāng)型號色譜柱） 流動相：溶劑流動相：溶劑a 0.1%甲酸的水溶液：乙腈甲酸的水溶液：乙腈 = 85：15; 溶劑溶劑b 0.1%甲酸的乙腈溶液：丙酮甲酸的乙腈溶液：丙酮=80：20 梯度洗脫：流速梯度洗脫：流速:1ml/min 柱溫：柱溫：30 檢測波長：蘇丹紅檢測波長：蘇丹紅 478nm ；蘇丹紅；蘇丹紅、蘇丹、蘇丹紅紅、蘇丹紅、蘇丹紅 520nm ；于蘇丹紅；于蘇丹紅出峰后切換。進樣量出峰后切換。進樣量10l。2. 標(biāo)準曲線標(biāo)準曲線 吸取標(biāo)準儲備液吸取標(biāo)準儲備液0、0.1、0.2、0.4、0.8、1

39、.6ml ，用正己烷定容至，用正己烷定容至25ml，此標(biāo)準系列濃，此標(biāo)準系列濃度為度為0、0.16、0.32、0.64、1.28、2.56g/ml,繪制標(biāo)準曲線。繪制標(biāo)準曲線。3. 計算計算 按公式（按公式（1）計算蘇丹紅含量）計算蘇丹紅含量 r=cv /m （1） r樣品中蘇丹紅含量，單位為毫克每千克（樣品中蘇丹紅含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；）； c由標(biāo)準曲線得出的樣液中蘇丹紅的濃度由標(biāo)準曲線得出的樣液中蘇丹紅的濃度 (g/ml)； v樣液定容體積，單位為毫升（樣液定容體積，單位為毫升（ml）；）； m樣品質(zhì)量，單位為克（樣品質(zhì)量，單位為克（g）。）。蘇丹紅標(biāo)準色譜圖蘇丹紅標(biāo)準色譜

40、圖孔雀石綠 一種帶有金屬光澤的綠色結(jié)晶體，又名堿性綠、孔雀綠，一種帶有金屬光澤的綠色結(jié)晶體，又名堿性綠、孔雀綠，易溶于水，溶液呈藍綠色?？兹甘G是一種有效殺滅霉易溶于水，溶液呈藍綠色。孔雀石綠是一種有效殺滅霉菌的染料類藥物，具有相當(dāng)好的殺真菌效果。由于魚類菌的染料類藥物，具有相當(dāng)好的殺真菌效果。由于魚類在運輸中易發(fā)生碰撞，造成魚鱗脫落而引起魚體真菌感在運輸中易發(fā)生碰撞，造成魚鱗脫落而引起魚體真菌感染，以致出現(xiàn)霉?fàn)€、死亡等現(xiàn)象，孔雀石綠恰恰可以治染，以致出現(xiàn)霉?fàn)€、死亡等現(xiàn)象，孔雀石綠恰恰可以治療這些魚類碰撞傷。因價格廉、容易得、用量少、療效療這些魚類碰撞傷。因價格廉、容易得、用量少、療效高，在過

41、去水產(chǎn)養(yǎng)殖疾病防治中曾被廣泛使用。一些不高，在過去水產(chǎn)養(yǎng)殖疾病防治中曾被廣泛使用。一些不法商販濫用孔雀石綠，包括在運輸前使用孔雀石綠溶液法商販濫用孔雀石綠，包括在運輸前使用孔雀石綠溶液對車廂進行消毒，不少儲放活魚的魚池也采用這種方式對車廂進行消毒，不少儲放活魚的魚池也采用這種方式進行消毒。進行消毒。v 科研結(jié)果表明，孔雀石綠具有高毒素、高殘留和致癌、科研結(jié)果表明，孔雀石綠具有高毒素、高殘留和致癌、致畸、致突變等副作用，有致畸、致突變等副作用，有“蘇丹紅第二蘇丹紅第二”之稱。鑒之稱。鑒于孔雀石綠的危害性，美國、英國、日本等許多國家于孔雀石綠的危害性，美國、英國、日本等許多國家已禁止將其用于水產(chǎn)養(yǎng)

42、殖業(yè)。我國也于已禁止將其用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。我國也于2002年年5月將孔月將孔雀石綠列入雀石綠列入食品動物禁用的獸藥及其化合物清單食品動物禁用的獸藥及其化合物清單中，禁止用于所有食品動物。中，禁止用于所有食品動物。v 但是但是,事實上包括我國和英國在內(nèi)的許多禁用孔雀石綠事實上包括我國和英國在內(nèi)的許多禁用孔雀石綠的國家，從對市場上銷售的魚類等水產(chǎn)品中孔雀石綠的國家，從對市場上銷售的魚類等水產(chǎn)品中孔雀石綠的監(jiān)測情況來看的監(jiān)測情況來看,仍有在魚場中非法使用孔雀石綠的現(xiàn)仍有在魚場中非法使用孔雀石綠的現(xiàn)象。象。 被孔雀石綠浸過的甲魚被孔雀石綠浸過的甲魚 水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留量的測定水產(chǎn)品中孔雀石綠和

43、結(jié)晶紫殘留量的測定gb/t 198572005范圍范圍 v本標(biāo)準規(guī)定了水產(chǎn)品中孔雀石綠及其代謝物隱色孔本標(biāo)準規(guī)定了水產(chǎn)品中孔雀石綠及其代謝物隱色孔雀石綠（雀石綠（leucomalachite green）、結(jié)晶紫及其）、結(jié)晶紫及其代謝物隱色結(jié)晶紫代謝物隱色結(jié)晶紫(leucocrystal violet)殘留量的殘留量的液相色譜液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜和高效液相色譜的測定方法。串聯(lián)質(zhì)譜和高效液相色譜的測定方法。 v本標(biāo)準適用于鮮活水產(chǎn)品及其制品中孔雀石綠及其本標(biāo)準適用于鮮活水產(chǎn)品及其制品中孔雀石綠及其代謝物隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫及其代謝物隱色結(jié)晶代謝物隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫及其代謝物隱色結(jié)晶紫殘留量的檢驗

44、。紫殘留量的檢驗。 原理原理 v試樣中的殘留物用乙腈試樣中的殘留物用乙腈-乙酸銨緩沖溶液提乙酸銨緩沖溶液提取，乙腈再次提取后，液液分配到二氯甲取，乙腈再次提取后，液液分配到二氯甲烷層，經(jīng)中性氧化鋁和陽離子固相柱凈化烷層，經(jīng)中性氧化鋁和陽離子固相柱凈化后用液相色譜后用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定，內(nèi)標(biāo)法定串聯(lián)質(zhì)譜法測定，內(nèi)標(biāo)法定量。量。 液相色譜液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法串聯(lián)質(zhì)譜法 樣品制備樣品制備 1 鮮活水產(chǎn)品鮮活水產(chǎn)品 a) 提取提取 稱取稱取5.00g已搗碎樣品于已搗碎樣品于50ml離心管中，加入離心管中，加入200l混混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準溶液，加入合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準溶液，加入11ml乙腈，超聲波振蕩提取乙腈，超

45、聲波振蕩提取2min，8000r/min 勻漿提取勻漿提取30s，4000 r/min離心離心5min，上清液轉(zhuǎn)移至，上清液轉(zhuǎn)移至25ml比色管中；另取一比色管中；另取一50 ml離離心管加入心管加入11ml乙腈，洗滌勻漿刀頭乙腈，洗滌勻漿刀頭10s，洗滌液移入，洗滌液移入前一離心管中，用玻棒搗碎離心管中的沉淀，漩渦混勻前一離心管中，用玻棒搗碎離心管中的沉淀，漩渦混勻器上振蕩器上振蕩30s，超聲波振蕩，超聲波振蕩5min，4000r/min離心離心5min，上清液合并至上清液合并至25ml比色管中，用乙腈定容至比色管中，用乙腈定容至25.0ml，搖勻備用。搖勻備用。 b) 凈化凈化 移取移取5

46、.00ml樣品溶液加至已活化的中性氧化樣品溶液加至已活化的中性氧化鋁柱上，用鋁柱上，用kd濃縮瓶接收流出液，濃縮瓶接收流出液，4ml乙腈洗乙腈洗滌中性氧化鋁柱，收集全部流出液，滌中性氧化鋁柱，收集全部流出液，45旋轉(zhuǎn)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約蒸發(fā)至約1ml，殘液用乙腈定容至，殘液用乙腈定容至1.00ml，超，超聲振蕩聲振蕩5min, 加入加入1.0ml5mmol/l乙酸銨，超乙酸銨，超聲振蕩聲振蕩1min，樣液經(jīng)，樣液經(jīng)0.2m濾膜過濾后供液相濾膜過濾后供液相色譜色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。串聯(lián)質(zhì)譜測定。2 加工水產(chǎn)品加工水產(chǎn)品 c) 提取提取 稱取稱取5.00g已搗碎樣品于已搗碎樣品于100ml離心管中，加入離心

47、管中，加入200l混混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準溶液，依次加入合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準溶液，依次加入1ml鹽酸羥胺、鹽酸羥胺、2ml 對對-甲苯甲苯磺酸、磺酸、2ml 乙酸銨緩沖溶液和乙酸銨緩沖溶液和40ml乙腈，勻漿乙腈，勻漿2min(10000r/min)，離心，離心3min(3000r/min)，將上清液轉(zhuǎn)，將上清液轉(zhuǎn)移到移到250ml分液漏斗中，用分液漏斗中，用20ml乙腈重復(fù)提取殘渣一次，乙腈重復(fù)提取殘渣一次，合并上清液。于分液漏斗中加入合并上清液。于分液漏斗中加入30二氯甲烷、二氯甲烷、35ml水，振搖水，振搖2min，靜置分層，收集下層有機層于，靜置分層，收集下層有機層于150ml梨梨形瓶中，再用形瓶中，再用

48、20ml二氯甲烷萃取一次，合并二氯甲烷層，二氯甲烷萃取一次，合并二氯甲烷層，45旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干。 d) 凈化凈化 將中性氧化鋁柱串接在陽離子交換柱上方。將中性氧化鋁柱串接在陽離子交換柱上方。6ml乙腈分三乙腈分三次（每次次（每次2ml），用旋渦震蕩器渦旋溶解上述提取物，并），用旋渦震蕩器渦旋溶解上述提取物，并依次過柱，控制陽離子交換柱流速不超過依次過柱，控制陽離子交換柱流速不超過0.6ml/min，再，再用用2ml乙腈淋洗中性氧化鋁柱后，棄去中性氧化鋁柱。依乙腈淋洗中性氧化鋁柱后，棄去中性氧化鋁柱。依次用次用3ml 2%（v/v）甲酸溶液、）甲酸溶液、3ml乙腈淋洗陽離子交乙腈淋洗

49、陽離子交換柱，棄去流出液。用換柱，棄去流出液。用4ml 5%（v/v）乙酸銨甲醇溶液）乙酸銨甲醇溶液 洗脫，洗脫流速為洗脫，洗脫流速為1ml/min，用，用10ml刻度試管收集洗脫刻度試管收集洗脫液，用水定容至液，用水定容至10.0ml，樣液經(jīng)，樣液經(jīng)0.2m濾膜過濾后供液濾膜過濾后供液相色譜相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。串聯(lián)質(zhì)譜測定。液相色譜液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件串聯(lián)質(zhì)譜條件 a) 色譜柱：色譜柱：c18柱，柱，50mm2.1mm（i.d.），粒度），粒度3m； b) 流動相：乙腈流動相：乙腈 + 5mmol/l乙酸銨乙酸銨 = 75+25(v/v)； c) 流速：流速：0.2ml/min； d)

50、柱溫：柱溫：35； e) 進樣量：進樣量：10l； f) 離子源：電噴霧離子源：電噴霧esi，正離子；，正離子； g) 掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測mrm； h) 霧化氣、窗簾氣、輔助加熱氣、碰撞氣均為高純氮氣；使用前應(yīng)調(diào)節(jié)各氣體流量霧化氣、窗簾氣、輔助加熱氣、碰撞氣均為高純氮氣；使用前應(yīng)調(diào)節(jié)各氣體流量以使質(zhì)譜靈敏度達到檢測要求；以使質(zhì)譜靈敏度達到檢測要求；i) 噴霧電壓、去集簇電壓、碰撞能等電壓值應(yīng)優(yōu)化至最優(yōu)靈敏度；噴霧電壓、去集簇電壓、碰撞能等電壓值應(yīng)優(yōu)化至最優(yōu)靈敏度； j) 監(jiān)測離子對：孔雀石綠監(jiān)測離子對：孔雀石綠m/z 329/313（定量離子）、（定量離子）、329/20

51、8；隱色孔雀石綠；隱色孔雀石綠m/z 331/316（定量離子）、（定量離子）、331/239; 結(jié)晶紫結(jié)晶紫m/z 372/356（定量離子）、（定量離子）、372/251；隱色結(jié)晶紫隱色結(jié)晶紫m/z 374/359（定量離子）、（定量離子）、374/238；氘代孔雀石綠；氘代孔雀石綠 m/z 334/318（定量離子）（定量離子）; 氘代隱色孔雀石綠氘代隱色孔雀石綠 m/z 337/322（定量離子）。（定量離子）。 液相色譜液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定串聯(lián)質(zhì)譜測定 v按照液相色譜按照液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件測定樣品和混合標(biāo)準串聯(lián)質(zhì)譜條件測定樣品和混合標(biāo)準工作溶液，以色譜峰面積按內(nèi)標(biāo)法定量，孔雀石

52、工作溶液，以色譜峰面積按內(nèi)標(biāo)法定量，孔雀石綠和結(jié)晶紫以氘代孔雀石綠為內(nèi)標(biāo)物計算，隱色綠和結(jié)晶紫以氘代孔雀石綠為內(nèi)標(biāo)物計算，隱色孔雀石綠和隱色結(jié)晶紫以氘代隱色孔雀石綠為內(nèi)孔雀石綠和隱色結(jié)晶紫以氘代隱色孔雀石綠為內(nèi)標(biāo)物計算。標(biāo)物計算。 在上述色譜條件下孔雀石綠、氘代孔在上述色譜條件下孔雀石綠、氘代孔雀石綠、結(jié)晶紫、氘代隱色孔雀石綠、隱色孔雀雀石綠、結(jié)晶紫、氘代隱色孔雀石綠、隱色孔雀石綠和隱色結(jié)晶紫的參考保留時間分別為石綠和隱色結(jié)晶紫的參考保留時間分別為2.27min、2.30min、2.88min、5.21min、5.31min、5.61min?？兹甘G、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫、氘代孔雀

53、石綠和氘代隱色孔雀石孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫、氘代孔雀石綠和氘代隱色孔雀石綠標(biāo)準的離子流圖綠標(biāo)準的離子流圖 液相色譜液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜確證串聯(lián)質(zhì)譜確證 v按照液相色譜按照液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件測定樣品和串聯(lián)質(zhì)譜條件測定樣品和標(biāo)準工作溶液，分別計算樣品和標(biāo)準工作標(biāo)準工作溶液，分別計算樣品和標(biāo)準工作溶液中非定量離子對與定量離子對色譜峰溶液中非定量離子對與定量離子對色譜峰面積的比值，僅當(dāng)兩者數(shù)值的相對偏差小面積的比值，僅當(dāng)兩者數(shù)值的相對偏差小于于25%時方可確定兩者為同一物質(zhì)。時方可確定兩者為同一物質(zhì)。 高效液相色譜法高效液相色譜法 原理原理 v試樣中的殘留物用乙腈試樣中的殘留物用

54、乙腈-乙酸鹽緩沖混合液乙酸鹽緩沖混合液提取，乙腈再次提取后，液液分配到二氯提取，乙腈再次提取后，液液分配到二氯甲烷層并濃縮，經(jīng)酸性氧化鋁柱凈化后，甲烷層并濃縮，經(jīng)酸性氧化鋁柱凈化后，高效液相色譜高效液相色譜-pbo2柱后衍生測定，外標(biāo)法柱后衍生測定，外標(biāo)法定量。定量。 樣品制備樣品制備 1. 提取提取 v稱取稱取5.00 g樣品于樣品于50 ml離心管內(nèi)，加入離心管內(nèi)，加入1.5 ml 20%的的鹽酸羥胺溶液、鹽酸羥胺溶液、2.5 ml 1.0 mol/l的對的對-甲苯磺酸溶液、甲苯磺酸溶液、5.0 ml乙酸鹽緩沖溶液，用勻漿機以乙酸鹽緩沖溶液，用勻漿機以10 000 r/min的速度的速度均

55、質(zhì)均質(zhì)30 s，加入，加入10 ml乙腈劇烈震搖乙腈劇烈震搖30 s。加入。加入5g酸性氧酸性氧化鋁，再次震蕩化鋁，再次震蕩30 s。 3 000 r/min離心離心10 min。把上清。把上清液轉(zhuǎn)移至裝有液轉(zhuǎn)移至裝有10 ml 水和水和2 ml 二甘醇的二甘醇的100 ml離心管離心管中。然后在中。然后在50 ml離心管中加入離心管中加入10 ml乙腈，重復(fù)上述操乙腈，重復(fù)上述操作，合并乙腈層。作，合并乙腈層。 2. 凈化凈化 v在離心管中加入在離心管中加入15 ml 二氯甲烷二氯甲烷,振蕩振蕩10 s， 3 000 r/min離心離心10 min， 將二氯甲烷層轉(zhuǎn)移至將二氯甲烷層轉(zhuǎn)移至10

56、0 ml的梨形瓶中，的梨形瓶中，再用再用5 ml乙腈、乙腈、10 ml 二氯甲烷重復(fù)上述操作一次，合二氯甲烷重復(fù)上述操作一次，合并二氯甲烷層于并二氯甲烷層于100 ml梨形瓶中。梨形瓶中。45旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約1 ml，用，用2.5 ml乙腈溶解殘渣。乙腈溶解殘渣。 v將酸性氧化鋁柱安裝在固相萃取裝置上，將梨形瓶中的溶將酸性氧化鋁柱安裝在固相萃取裝置上，將梨形瓶中的溶液轉(zhuǎn)移到柱上，再用乙腈洗滌瓶兩次，每次液轉(zhuǎn)移到柱上，再用乙腈洗滌瓶兩次，每次2.5 ml, 把洗把洗滌液依次通過柱，控制流速不超過滌液依次通過柱，控制流速不超過0.6ml/min，收集全部，收集全部流出液，流出液，45旋轉(zhuǎn)蒸

57、發(fā)至近干，殘液準確用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，殘液準確用0.5 ml乙腈乙腈溶解，過溶解，過0.45m 濾膜，濾液供液相色譜測定。濾膜，濾液供液相色譜測定。 液相色譜條件液相色譜條件 a) 色譜柱：色譜柱： c18柱，柱，250 mm 4.6mm（i.d.），）， 粒度粒度5m，在，在c18色譜柱和檢測器之間連接色譜柱和檢測器之間連接25% pbo2氧化柱氧化柱; b) 流動相：乙腈和乙酸銨緩沖溶液流動相：乙腈和乙酸銨緩沖溶液 ； c) 流速：流速：1.0 ml/min; d) 柱溫：室溫柱溫：室溫; e) 檢測波長：檢測波長：618 nm(孔雀石綠孔雀石綠); 588 nm(結(jié)晶紫結(jié)晶紫); f) 進

58、樣量：進樣量：50 l。 液相色譜測定液相色譜測定 v根據(jù)樣液中被測孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶根據(jù)樣液中被測孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫或隱色結(jié)晶紫含量情況，選定峰高相近的標(biāo)準紫或隱色結(jié)晶紫含量情況，選定峰高相近的標(biāo)準工作溶液。標(biāo)準工作溶液和樣液中孔雀石綠、隱工作溶液。標(biāo)準工作溶液和樣液中孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫或隱色結(jié)晶紫響應(yīng)值均應(yīng)在色孔雀石綠、結(jié)晶紫或隱色結(jié)晶紫響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測線性范圍內(nèi)。對標(biāo)準工作溶液和樣液等儀器檢測線性范圍內(nèi)。對標(biāo)準工作溶液和樣液等體積參插進樣測定。在上述色譜條件下，孔雀石體積參插進樣測定。在上述色譜條件下，孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色孔雀石綠和隱色結(jié)晶紫的保留

59、綠、結(jié)晶紫、隱色孔雀石綠和隱色結(jié)晶紫的保留時間約為時間約為6.10min、7.88min、17.77min、18.22min?？兹甘G、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫標(biāo)準的液相色譜圖孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫標(biāo)準的液相色譜圖 合成色素的檢測合成色素的檢測樣品的處理和吸附分離樣品的處理和吸附分離1.1.樣品應(yīng)先除去酒精、脂肪、蛋白質(zhì)、淀粉和二氧樣品應(yīng)先除去酒精、脂肪、蛋白質(zhì)、淀粉和二氧化碳。酒精可用加熱法除去，二氧化碳可用振搖化碳。酒精可用加熱法除去，二氧化碳可用振搖法或超聲法除去，淀粉吸附的色素可用洗脫法將法或超聲法除去，淀粉吸附的色素可用洗脫法將色素洗下來。色素洗下來。2.

60、2.然后在酸性條件下（然后在酸性條件下（ph4ph45)5)用脫脂羊毛或聚酰胺用脫脂羊毛或聚酰胺吸附色素。吸附色素。3.3.反復(fù)用檸檬酸酸化的反復(fù)用檸檬酸酸化的phph為為4 4的熱水清洗吸附物，以的熱水清洗吸附物，以除去水溶性雜質(zhì)。除去水溶性雜質(zhì)。4.4.用用10%10%氨水氨水- -乙醇溶液洗脫色素，收集洗脫液。乙醇溶液洗脫色素，收集洗脫液。（1 1）薄層色譜法（定性）薄層色譜法（定性）v是目前國家標(biāo)準方法是目前國家標(biāo)準方法gb/t 5009.35-2003推薦的推薦的色素的吸附與解吸附方法。在酸性條件下，聚色素的吸附與解吸附方法。在酸性條件下，聚酰胺或脫脂羊毛能與水溶性酸性色素結(jié)合，在酰