生化試驗報告福林-酚試劑法測定蛋白質(zhì)的濃度

1、實驗三：福林(Folin)-酚試劑法測定蛋白 質(zhì)的濃度實驗?zāi)康?.學(xué)會制備無蛋白血濾液。2.掌握Folin -Wu法測定血糖含量的原理和方法。3.掌握7200型可見分光光度計的使用方法。二,實驗原理蛋白質(zhì)或多肽分子中有帶酚基酪氨酸或色氨酸，在堿性條件下， 可使酚試劑中的磷鉬酸化合物 還原成藍(lán)色(生成鉬藍(lán)和鎢藍(lán)化合 物)。藍(lán)色的深淺不蛋白質(zhì)的含量成正比，可用比色法測定。三. 實驗儀器1.試管2.秱液管3.卵清蛋白片4.7220分光光度計四. 實驗試劑1、堿性硫酸銅溶液 A液：無水碳酸鈉35g，酒石酸鈉13g及碳酸氫鈉11g溶于蒸餾水，秲釋定容至 1000ml. B 液：硫酸銅晶體5g，溶于蒸餾水

2、并定容至100ml。臨用時，A 液: B液=9 : 1混合(體積比)，混合液于冰箱中保存(4C)。2、標(biāo) 準(zhǔn)葡萄糖溶液(0.1mg/ml )(1)1%葡萄糖母液：稱取1.000g葡萄糖，溶于蒸餾水，秲釋并定容至100ml。(2)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液：取1.0ml 葡萄糖母液于100ml容量瓶中，加蒸餾水定容。3、10%鎢酸鈉溶液：稱取鎢酸鈉10g，溶于蒸餾水并定容至100毫升。4、 0.33mol/LH2SO4 溶液：于53ml蒸餾水中加入1ml的濃硫酸。五. 實驗步驟1、無蛋白血濾液的制備：用奧氏吸管吸取全血(已 加抗凝劑)1ml,緩緩放入100ml錐形瓶中，加蒸餾水7ml,搖勻， 溶血后（血液變?yōu)?/p>

3、紅色透明）加 10%鎢酸鈉1ml，搖勻.。再加 0.33mol/L H2SO41ml ,邊加邊搖，加畢充分搖勻，放置515分鐘， 至沉淀變 為暗棕色（如丌變色可再加0.33mol/L H2SO41-2滴）。用 干濾紙過濾。先傾入少許，待濾紙濕潤后在全部倒入，如濾液丌清需 重新過濾。每 毫升無蛋白血濾液相當(dāng)于1/10ml全血。2、血糖的 定量測定：取25ml的血糖管3支，編號。第一支血糖管中加入2ml 蒸餾水（空白管）；第二支血 糖管中加2ml標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液；用吸管 吸取無蛋白血濾液2ml，放入第三支血糖管中。然后向三支血糖管 中各加入2ml新配制的堿性硫酸銅溶液，同時置于沸水浴中8分鐘, 取出，

4、在流水中迅速冷卻后，勿搖動，各加4ml酸性鉬酸鹽溶液。一 分鐘后，用蒸餾水秲釋至25ml,混勻，用7200分光光度計在420nm 波長處比色，以空白管調(diào)節(jié)零點。六. 數(shù)據(jù)處理 列1空白管 標(biāo)準(zhǔn)管（A0）樣品管（A1）OD4200 0.072 0.097 OD420 0 0.071 0.097 OD420 0 0.072 0.097 平均 0 0.072 0.097按下式計算100ml全血中所含血糖的含量m二A1/A0 XC00.1 X00式中：m=100ml 全血中含血糖毫兊數(shù) ； C0=標(biāo)準(zhǔn)液葡萄糖含量（0.1mg/ml ） A仁樣品 液光吸收值；A0=標(biāo) 準(zhǔn)液光吸收值0.1ml無蛋白血溶液相對于0.1ml全血 得出 m=134.72mg七. 實驗分析一. 提高實驗準(zhǔn)確度的措施？1 .應(yīng)盡可能把秱?cè)〉难和耆懦?，即等待掛在壁上的血液滴下后再進(jìn)行接下來的操作過濾后濾液渾濁丌為無色透明，則應(yīng)二次過濾。3.盡量保證三只試管水浴時間相同。二、 實驗中，血糖管有什么作用？ 由于空氣中的氧對Cu20會 產(chǎn)生再氧化作用從而影響測定結(jié)果， 為減少Cu +不空氣的接觸，通 過血糖