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文檔簡(jiǎn)介
1、選彳3現(xiàn)代生物科技專題知識(shí)點(diǎn)總結(jié)基因工程基因工程的概念概念:按照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì),通過(guò)體外dna重組和轉(zhuǎn)基因技術(shù),賦予生物新的遺傳特性,創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。基本原理:讓目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定且高效的表達(dá)理論基礎(chǔ):dna是生物遺傳物質(zhì)的發(fā)現(xiàn),dna雙螺旋結(jié)構(gòu),遺傳信息傳遞方式 核心:構(gòu)建重組 dn冊(cè)子(一 )1如工程的基本工具1. ”分子手術(shù)刀”一一限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)(1)來(lái)源:主要是從原核生物中分離純化出來(lái)的。(2)功能:能夠 識(shí)別雙鏈dna分子的某種 特定的核甘酸序列,并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核甘酸之間的磷酸二酯鍵 斷開(kāi),因此具有專一性。(
2、3) 結(jié)果:經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的dna片段末端通常有兩種形式:黏性末端和平末端。注意:用同種限制酶分別切割目的基因和載體從而形成相同的粘性末端,然后用dna!接酶將目的基因和載體連接起來(lái),有時(shí)用不同限制酶也可以形成相同的粘性末端,用兩種限制酶切割使目的基因和載體兩端各形成兩種粘性末端,防止載體和目的基因自身環(huán)化2. ”分子縫合針” 一一dna1接酶(1)兩種dna1接酶(e - colidna連接酶和t,-dna1接酶)的比較:相同點(diǎn):都縫合 磷酸二酯鍵。區(qū)別:e - colidna連接酶來(lái)源于大腸桿菌,只能將雙鏈dna段互補(bǔ)的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來(lái);而t,dna連接酶能縫合兩種末端,
3、但連接平末端的之間的效率較低。3. )與dna聚合酶作用的異同:dna聚合酶只能將單個(gè)核甘酸加到已有的核甘酸片段的末端,形成磷酸二酯鍵。dna1接酶是連接兩個(gè) dna段的末端,形成磷酸二酯鍵。dnai接酶dna聚合酶小同點(diǎn)連接的dna一雙鏈單鏈模板不要模板要模板連接的對(duì)象2個(gè)dnm段單個(gè)脫氧核甘酸加到已存在的單鏈dna段上相同點(diǎn)作用實(shí)質(zhì)形成磷酸二酯鍵化學(xué)本質(zhì)蛋白質(zhì)3. ”分子運(yùn)輸車(chē)”一一載體(1)載體具備的條件:能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存。具有一至多個(gè)限制酶切點(diǎn),供外源dna段插入。具有標(biāo)記基因,供重組dna勺鑒定和選擇。(2)最常用的載體是 質(zhì)粒,它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的、獨(dú)立于細(xì)菌染色
4、體之外,并具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀dna子。(3)其它載體:入噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒(二)基因工程的基本操作程序第1頁(yè)共10頁(yè)第一步:目的基因的獲取1 .目的基因是指:編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。2 .原核基因采取 直接分離獲得,真核基因是 人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反轉(zhuǎn)錄法_和化學(xué)合成法_。3 .pcr技術(shù)擴(kuò)增目的基因(1) pcr勺含義:是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定dna片段的核酸合成技術(shù)。(2)目的:獲取大量的目的基因(3)原理:dnaz鏈復(fù)制(4)過(guò)程:第一步:加熱至 9095cdnab鏈為單鏈,斷裂氫鍵;第二步:冷卻到 5560 c,引物與兩條單鏈 dna吉合,形成局部雙鏈
5、dna第三步:加熱至 7075c,熱穩(wěn)定dn咪合酶(taq酶)從引物起始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成。(5)特點(diǎn):指數(shù)(2n)形式擴(kuò)增(6)使用的前提:已知目的基因的一段核甘酸序列第二步:基因表達(dá)載體的構(gòu)建 (核心)1 .目的:使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳至下一代,使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。2 .組成:目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因(1)啟動(dòng)子:是一段有特殊結(jié)構(gòu)的dna片段,位于基因的首端,是rnam合酶識(shí)別和結(jié)合的部位,能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mrna最終獲得所需的蛋白質(zhì)。(2)終止子:也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的dnm段,位于基因的尾端。(3)標(biāo)記基因的作用:是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基
6、因,從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)。常用的標(biāo)記基因是抗生素基因。注意:載體與表達(dá)載體的區(qū)別:二者都有標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)兩部分dna片段。表達(dá)載體在載體基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動(dòng)子、終止子三部分結(jié)構(gòu)用到的工具酶:既用到限制酶切割載體,又用到dna連接酶將目的基因和載體拼接,兩種酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵啟動(dòng)子、終止子對(duì)于目的基因表達(dá)必不可少目的基因不能單獨(dú)進(jìn)入受體細(xì)胞,必需以表達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。 第三步:將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 _1 .轉(zhuǎn)化的概念:是目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程。2 .常用的轉(zhuǎn)化方法:將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞:采用最多的方法是 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法(
7、農(nóng)桿菌特點(diǎn):易感染雙子葉植物和裸子植物,對(duì)大多數(shù)單子葉植物沒(méi)有感染能力。原理:ti質(zhì)粒上的t-dna可以轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞,并整合到受體細(xì)胞染色體的dna)其次還有 基因槍法 和 花粉管通道法 等。將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞:最常用的方法是顯微注射技術(shù)。方法的受體細(xì)胞多是受精卵。將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞:原核生物作為受體細(xì)胞的原因是繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少,最常用的原核細(xì)胞是 大腸桿菌,其轉(zhuǎn)化方法是:先用 ca2+處理細(xì)胞,使其成為 感受態(tài)細(xì)胞,再將重組表達(dá)載體 dna分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合,在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收dn酚子,完成轉(zhuǎn)化過(guò)程。3 .重組細(xì)胞導(dǎo)入受體細(xì)胞后,篩
8、選含有基因表達(dá)載體受體細(xì)胞的依據(jù)是標(biāo)記基因是否表達(dá)。 第四步:目的基因的檢測(cè)和表達(dá)1 .首先要檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的染色體dna是否插入了目的基因,方法是采用dna分子雜交(dna-dna肢術(shù)。第2頁(yè)共10頁(yè)2 .其次還要檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出 mrna方法是采用分子雜交(dna-rna菽術(shù)。3 .最后檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì),方法是采用抗原一抗體雜交 技術(shù)。4 .有時(shí)還需進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定。如生物抗蟲(chóng)或抗病的鑒定等。(三)基因工程的應(yīng)用1 .植物基因工程:抗蟲(chóng)、抗病、抗逆轉(zhuǎn)基因植物,利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì)。2 .動(dòng)物基因工程:提高動(dòng)物生長(zhǎng)速度、改善畜產(chǎn)品品質(zhì)、用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物(重點(diǎn)
9、:乳腺生物反應(yīng)器看課本)。3 .基因治療:把正常的外源基因?qū)氩∪梭w內(nèi),使該基因表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮作用。4 .基因診斷:又稱為 dn陽(yáng)斷,是采用基因檢測(cè)的方法來(lái)判斷患者是否出現(xiàn)了基因異常或攜帶病原體。(四)蛋白質(zhì)工程的概念蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ),通過(guò)基因修飾或基因合成,對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造,或制造一種新的蛋白質(zhì),以滿足人類的生產(chǎn)和 生活的需求。(基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì))蛋白質(zhì)工程 dma合成 ,分子成什 吊而加刊&首基因.eh -? 丁基啊 i士二式且恩 si出i轉(zhuǎn)再謝后一多肽攘i播繇i三維結(jié)狗生物功能中心法則蛋白質(zhì)工程的基本途徑:從預(yù)期
10、的蛋白質(zhì)功能出發(fā)設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核甘酸序列(基因)蛋白質(zhì)工程與基因工程區(qū)別備白質(zhì)工程基因工程實(shí)質(zhì)通過(guò)改造基因,以定向改造天然蛋白 質(zhì),甚至創(chuàng)造自然界不存在的蛋白質(zhì)將目的基因從供體轉(zhuǎn)移到受障細(xì) 胞,并在受體細(xì)胞中表達(dá)結(jié)果合成自然界丕在在的蛋白質(zhì)只能生產(chǎn)自然界已正在的蛋白質(zhì)聯(lián)系備白質(zhì)工程是在基因工程基礎(chǔ)上,延伸出的第二代基因工程專題2 細(xì)胞工程(一)植物細(xì)胞工程1 .理論基礎(chǔ)(原理):細(xì)胞全能性全能性概念:具有某種生物全部遺傳信息的任何一個(gè)細(xì)胞,都具有發(fā)育成完整生物個(gè)體的潛能,也就是說(shuō),每個(gè)生物細(xì)胞都具有全能性的特點(diǎn)。 現(xiàn)實(shí)表現(xiàn):在生物的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中,細(xì)胞
11、并不會(huì)表現(xiàn)出全能性,而是分化成各種組織和器官原因:在特定的時(shí)間和空間條件下,細(xì)胞中的基因會(huì)有選擇性地表達(dá)出各種蛋白質(zhì),分化形成不同的細(xì)胞,從而構(gòu)成生物體的不同組織和器官。 全能性表達(dá)的難易程度:受精卵生殖細(xì)胞干細(xì)胞體細(xì)胞;植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞2 .植物組織培養(yǎng)技術(shù) (1)原理:植物細(xì)胞的全能性(2)過(guò)程:離體的植物器官、組織或細(xì)胞一-愈傷組織一-試管苗一-植物體脫分化和再分化(3)植物組織培養(yǎng)條件:離體的植物細(xì)胞、組織、器官無(wú)菌和人工控制培養(yǎng)在人工制備的培養(yǎng)基上給予適宜的培養(yǎng)條件(4)用途:微型繁殖、作物脫毒、制造人工種子、單倍體育種、細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)(具體的應(yīng)用看課本38頁(yè))。1 5)地位:
12、是培育轉(zhuǎn)基因植物、植物體細(xì)胞雜交培育植物新品種的最后一道工序。3、植物體細(xì)胞雜交技術(shù)概念:不同種植物的體細(xì)胞融合成一個(gè)雜種細(xì)胞,雜種細(xì)胞發(fā)育成新的植物體的方法理論基礎(chǔ):細(xì)胞膜的流動(dòng)性和植物細(xì)胞的全能性過(guò)程:見(jiàn)課本過(guò)程注意:去掉細(xì)胞壁的方法:酶解法(纖維素酶和果膠酶)原生質(zhì)體融合的方法:誘導(dǎo)融合:物理法(離心、振動(dòng)、電激)化學(xué)法(peg,聚乙二醇)意義:因?yàn)椴煌N生物之間存在生殖隔離,此項(xiàng)技術(shù)在克服不同生物遠(yuǎn)緣雜交的障礙上,取得了巨大的突破。(二)動(dòng)物細(xì)胞工程2 .動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)(1)概念:動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個(gè)細(xì)胞,然后放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖
13、。(2)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流程:取動(dòng)物組織塊(動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織)一剪碎一用胰蛋白酶或膠原蛋白酶 處理分散成單個(gè)細(xì)胞一制成細(xì)胞懸液一轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)一貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)。(3)細(xì)胞貼壁和接觸抑制:懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上,稱為細(xì)胞貼壁。細(xì)胞數(shù)目不斷增多,當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互抑制時(shí),細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖,這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。(4)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足以下條件無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境:培養(yǎng)液應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素,以防培養(yǎng)過(guò)程中的污染。此外,應(yīng)定期更換培養(yǎng)液,防止代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自
14、 身造成危害。營(yíng)養(yǎng):合成培養(yǎng)基成分:糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等。通常需加入血清、血漿等天然成分。溫度:適宜溫度:哺乳動(dòng)物多是 36.5 c+ 0.5 c; ph: 7.27.4。氣體環(huán)境:95溢氣+ 5%co q是細(xì)胞代謝所必需的,co的主要作用是維持培養(yǎng)液的ph。(5)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用:制備病毒疫苗、制備單克隆抗體、檢測(cè)有毒物質(zhì)、培養(yǎng)醫(yī)學(xué)研究的各種細(xì)胞。3 .動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物(1)哺乳動(dòng)物核移植可以分為胚胎細(xì)胞核移植(比較容易)和體細(xì)胞核移植(比較難)。(2)選用去核卵(母)細(xì)胞的原因:卵(母)細(xì)胞比較大,容易操作;含有促使體細(xì)胞細(xì)胞核表現(xiàn)全能性的物質(zhì)和營(yíng)
15、養(yǎng)(3)體細(xì)胞核移植的大致過(guò)程是:(右圖)遇擇 供體母牛 受體母牛i i-同胡發(fā)情處理i知縫排卵i分換臉修ia的稚華,保護(hù)瀕危物種,增大存活數(shù)量; 作為異種移植的供體;,妊*l.出蟲(chóng)胚胎移植 丁,絆羊.上利(4)體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用:加速家畜遺傳改良進(jìn)程,促進(jìn)良畜群繁育;生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白;用于組織器官的移植等。1 5)體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問(wèn)題:克隆動(dòng)物存在著健康問(wèn)題、表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷等。3 .動(dòng)物細(xì)胞融合(1)動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交,是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。融合后形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞,稱為雜交細(xì)胞。(2)動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合
16、的原理基本相同,誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法與植物原生質(zhì)體融合的方法類似,常用的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇、滅活的病毒、電刺激等。(3)動(dòng)物細(xì)胞融合的意義:克服了遠(yuǎn)緣雜交的不親和性 ,成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物生物新品種培育的重要手段。4 .單克隆抗體(1)抗體:一個(gè)b淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。從血清中分離出的抗體產(chǎn)量低、純度低、特異性差。(2)單克隆抗體的制備過(guò)程:兩次篩選:第一次篩選出雜交瘤細(xì)胞,第二次篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。(3)雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn):既能大量繁殖,又能產(chǎn)生專一的抗體。(4)單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn): 特異性強(qiáng),靈敏度高,并能大量制備。(5)在腹腔內(nèi)增殖的優(yōu)點(diǎn):不需要特
17、定的培養(yǎng)基,不需要嚴(yán)格的外界條件。(6)篩選的時(shí)候用: 特定的選擇性培養(yǎng)基 進(jìn)行篩選。經(jīng)選擇性培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞,還需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè),經(jīng)多次篩選,就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的第7頁(yè)共10頁(yè)(5)單克隆抗體的作用:作為診斷試劑:準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)的細(xì)微差異,并跟一定抗原發(fā)生特異性結(jié)合,具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)。用于治療疾病和運(yùn)載藥物:主要用于治療癌癥治療,可制成“生物導(dǎo)彈”(借助單克隆抗體的導(dǎo)向作用),也有少量用于治療其它疾病。專題3胚胎王沛r3.1體內(nèi)受精和早期胚胎發(fā)育1胚胎工程的建立/場(chǎng)所:睪丸的曲細(xì)精管時(shí)間:從初情期開(kāi)始,到生殖機(jī)能衰退精子的發(fā)di r)精原細(xì)胞一多
18、個(gè)初級(jí)精母細(xì)胞(通過(guò)數(shù)次有絲分裂)i過(guò)程1)1個(gè)初級(jí)精母細(xì)胞一 2個(gè)次級(jí)精母細(xì)胞一 4個(gè)精子細(xì)胞(通過(guò)減數(shù)分裂,即mi和mii),線粒體聚集在尾的基部形成線3)精子細(xì)胞一精子(通過(guò)變形:其中細(xì)胞核變?yōu)榫宇^的主要部分,高爾基體發(fā)育為頭部的頂體,中心體演變?yōu)榫拥奈擦sw鞘。同時(shí)細(xì)胞內(nèi)的其他物質(zhì)濃縮為球狀,叫做原生質(zhì)滴,隨精子的成熟過(guò)程向后移動(dòng),直到最后脫落。)廣場(chǎng)所:卵巢時(shí)間:從胎兒時(shí)期開(kāi)始(胎兒時(shí)期完成了卵泡的形成和在卵巢內(nèi)的儲(chǔ)備,這是精子和卵子在發(fā)生上的重要區(qū)別)卵子的發(fā)生 1)卵原細(xì)胞一初級(jí)卵母細(xì)胞過(guò)12)1個(gè)初級(jí)卵母細(xì)胞一 1個(gè)次級(jí)卵母細(xì)胞+第一極體(排卵前后完成) 3) 1個(gè)次級(jí)卵母細(xì)
19、胞一 1個(gè)卵子+第二極體(精子和卵子結(jié)合過(guò)程中完成當(dāng)在卵細(xì)胞膜和透明帶的間隙可以觀察到兩個(gè)極體時(shí),說(shuō)明卵子已經(jīng)完成了受精,這是判斷卵子是否受精的重要標(biāo)志)概念:精子和卵子結(jié)合成合子(受精卵)的過(guò)程。受精 場(chǎng)所:雌性的輸卵管內(nèi)11)受精前的準(zhǔn)備階段 1:精子獲能i過(guò)n 2 )受驚前的準(zhǔn)備階段 2:卵子的準(zhǔn)備(到 減數(shù)第二次分裂中期,具備與精子受精的能力)aa.精子穿越放射冠和透明帶:頂體反應(yīng)(頂體釋放頂體酶可直接溶解卵丘細(xì)胞之間的物質(zhì),形成精子穿越放射冠的通路),透明帶反應(yīng)(在jt精子觸及卵細(xì)胞膜的瞬間,會(huì)產(chǎn)生阻止后來(lái)的精子進(jìn)入透明帶的生理反應(yīng),這是防止多精入卵受精的第一道屏障)3)受精階卜 b
20、.進(jìn)入卵黃膜:卵細(xì)胞膜反應(yīng)(這是防止多精入卵受精的第二道屏障)c.原核形成和配子結(jié)合r卵裂期:細(xì)胞在透明帶中進(jìn)行 有絲分裂,細(xì)胞數(shù)量不斷增加,但胚胎的總體體積并不增加,或略有減小。早期胚胎發(fā)育 桑棋胚:胚胎細(xì)胞達(dá)32個(gè)左右,每一個(gè)細(xì)胞都是 全能細(xì)胞囊胚:有囊胚腔,出現(xiàn)孵化過(guò)程。內(nèi)細(xì)胞團(tuán),將來(lái)發(fā)育成胎兒的各種組織。滋養(yǎng)層將發(fā)育成胎膜和胎盤(pán)。i 原腸胚:內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞形成外胚層和內(nèi)胚層,滋養(yǎng)層發(fā)育成胎膜和胎盤(pán),內(nèi)胚層包圍著原腸腔r3.2體外受精和早期胚胎培養(yǎng)1,試管動(dòng)物技術(shù):通過(guò)人工操作使卵子和精子在體外條件下成熟和受精,并通過(guò)培養(yǎng)發(fā)育為早期胚胎(桑甚胚或囊胚)后,再經(jīng)移植產(chǎn)生后代的技術(shù)。方法一:用
21、促性腺激素處理,使其超數(shù)排卵,從中輸卵管沖取精子(針對(duì)z卵母細(xì)胞的種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,家畜豬、羊等)方法二:從屠宰母畜卵巢中采集l方法三:借助超聲波探測(cè)儀、內(nèi)窺鏡、腹腔鏡等工具直接從活體母畜卵巢中吸取(針對(duì)大家畜或大型動(dòng)物,如牛)體外受m卵母細(xì)胞的培養(yǎng):在體外人工培養(yǎng)成熟(減數(shù)第二次分裂中期)精子的采集:方法有假陰道法、手握法和電刺激法等精子的獲能:方法有培養(yǎng)法(通過(guò)獲能培養(yǎng)液)、化學(xué)誘導(dǎo)法(通過(guò)肝素或鈣離子載體a23187)【獲能溶液或?qū)S玫氖芫芤篿受精:獲能的精子 +培養(yǎng)成熟的卵亍完成受精胚胎早期培養(yǎng)(條件:受精卵在發(fā)育培養(yǎng)液中培養(yǎng)血清等(兩鹽,兩素,兩酸,水 血清)培養(yǎng)液成分:無(wú)機(jī)鹽、有機(jī)鹽、
22、維生素、激素、氨基酸、核甘酸、當(dāng)胚胎發(fā)育到適宜的階段時(shí),可將其取出向受體移植,或冷凍保存。不同動(dòng)物胚胎移植的時(shí)間不同,牛羊一般要培養(yǎng)到桑棋胚階段或囊胚階段才進(jìn)行移植,人的體外 受精胚胎,即試管胚胎,可在 8到16個(gè)細(xì)胞階段移植r3.3胚胎工程的應(yīng)用及前景/概念:是指將雌性動(dòng)物體內(nèi)的早期胚胎,或者通過(guò)體外受精及其他方式得到的胚胎物的體內(nèi),使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)。其中提供胚胎的個(gè)體叫供體(核移植技術(shù)和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物),移植到同種的、生理狀態(tài)相同的其他雌性動(dòng)(遺傳特性和生產(chǎn)性能優(yōu)秀),接受胚胎的個(gè)體叫受體(有健康的體質(zhì)和正常繁殖能力)。應(yīng)用:胚胎移植是轉(zhuǎn)基因、核移植、或體外受精等技術(shù)的最后一道“工序
23、”現(xiàn)狀:在牛的胚胎移植中,技術(shù)方法更為簡(jiǎn)便、實(shí)用。意義:可 充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個(gè)體繁殖潛力 。供體主要職能 只是產(chǎn)生優(yōu)良特性的胚胎,縮短繁殖周期實(shí)質(zhì):見(jiàn)課本胚胎移植胚胎移植成功與否關(guān)系到:供體和受體的生理狀況1)供、受體生殖器官的生理變化相同,為胚胎提供相同的生理環(huán)境生理學(xué)基 2 )早期胚胎沒(méi)有與母體子宮建立組織聯(lián)系,為胚胎收集提供可能3)受體對(duì)外來(lái)胚胎基本不發(fā)生免疫排斥反應(yīng),為胚胎的存活提供可能i 4)胚胎能與受體子宮建立正常的生理和組織聯(lián)系,但其遺傳物質(zhì)在孕育過(guò)程中不受影響1)供、受體的選擇(選擇的條件,見(jiàn)課本)和處理(使用激素進(jìn)行 同期發(fā)情 處理、(促性腺激素)超數(shù)排卵 處理)i2)配種或
24、人工受精基本吟 3 )胚胎收集(沖卵(早期胚胎)、檢查(胚胎發(fā)育到 桑棋胚或囊胚)、培養(yǎng)或保存(196c的液氮)4)胚胎移植:手術(shù)法(引出子宮和卵巢將其注入);非手術(shù)法(用移植管將其送入子宮)i 5)移植后的檢查(是否妊娠)等r概念:指采用機(jī)械方法將早期胚胎切割成2、4或8等份等,經(jīng)移植獲得同卵雙胎或多胎的技術(shù)。廣儀器設(shè)備:實(shí)體顯微鏡和顯微操作儀意義:來(lái)自同一胚胎的后代具有相同的遺傳物質(zhì),屬于無(wú)性繁殖。 操作程序7 )選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的 桑棋胚或囊胚,移入盛有操作液的培養(yǎng)皿胚胎分割2 1)用分割針或分割刀切開(kāi)胚胎,吸出半個(gè),注入空透明帶或直接將裸半胚移植給受體。分割囊胚時(shí)要將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等
25、分割, 否則會(huì)影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育。此時(shí)還可用分割針?lè)指钭甜B(yǎng)層, 做胚胎dna分析性別鑒定。局限:剛出生的動(dòng)物體重偏低,毛色和斑紋上存在差異,同卵多胎的可能性有限。 概念:由早期胚胎或原始性腺 中分離出來(lái)的一類細(xì)胞。簡(jiǎn)稱es或ek細(xì)胞。特卡 形態(tài)上:體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯增殖而不發(fā)生分化;可冷凍保存;可進(jìn)行遺傳改造i 功能上:具有 發(fā)育的全能性,即可分化為成年動(dòng)物體任何一種組織細(xì)胞;在體外可第8頁(yè)共10頁(yè)胚胎干細(xì)胞11)移植es細(xì)胞修復(fù)壞死或退化部位,治愈糖尿病、肝(心)衰竭、成骨不良等病癥意義4 2 ) es細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化,可培育人造組織器官,解決供體器官不足和器官移植后免
26、疫排斥的問(wèn)題31)es細(xì)胞在牛黃酸、丁酰環(huán)腺甘酸等 分化誘導(dǎo)因子作用下可向不同類型組織細(xì)胞分化(一)動(dòng)物胚胎發(fā)育的基本過(guò)程1、胚胎工程是指對(duì)動(dòng)物早期胚胎或配子所進(jìn)行的多種顯微操作和處理技術(shù),如胚胎移植、體外受精、胚胎分割、胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)等技術(shù)。經(jīng)過(guò)處理后獲得的胚胎,還需移植到雌性動(dòng)物體內(nèi)生產(chǎn)后代,以滿足人類的各種需求。(二)胚胎干細(xì)胞3、胚胎干細(xì)胞的主要用途是:可用于研究哺乳動(dòng)物個(gè)體發(fā)生和發(fā)育規(guī)律;可以用于治療人類的某些頑疾,如帕金森綜合癥、少年糖尿病等;(三)胚胎工程的應(yīng)用1.體外受精和胚胎的早期培養(yǎng)不同動(dòng)物胚胎移植的時(shí)間不同。(牛、羊一般要培育到桑棋胚或囊胚階段才能進(jìn)行移植,小鼠、家兔等實(shí)
27、驗(yàn)動(dòng)物可在更早的階段移植,人的體外受精胚胎可在8-16個(gè)細(xì)胞階段移ito )專題4 生物技術(shù)的安全性和倫理問(wèn)題中國(guó)政府的態(tài)度: 禁止生殖性克隆,不反對(duì)治療性克隆。生物武器(1)種類:致病菌、病毒、生化毒劑,以及經(jīng)過(guò)基因重組的致病菌。(2)散布方式:吸入、誤食、接觸帶菌物品、被帶菌昆蟲(chóng)叮咬等。(3)特點(diǎn):致病力強(qiáng)、多數(shù)具傳染性、傳染途徑多、污染面廣、有潛伏期、不易被發(fā)現(xiàn)、危害時(shí)間長(zhǎng)等。(4)禁止生物武器公約及中國(guó)政府的態(tài)度專題5生態(tài)工程一、生態(tài)工程的基本原理1、生態(tài)工程的概念(1)原理技術(shù)應(yīng)用 生態(tài)學(xué)和系統(tǒng)學(xué)等學(xué)科的基本理論和方法通過(guò)系統(tǒng)設(shè)計(jì)、調(diào)控和技術(shù)組裝(2)操作對(duì) 已破壞的生態(tài)環(huán)境 進(jìn)行 修復(fù)、重建對(duì)已造成環(huán)境污染和破壞的傳統(tǒng)生產(chǎn)方式進(jìn)行改善(3)結(jié)果提高生態(tài)系統(tǒng)的生產(chǎn)力促進(jìn)人類社會(huì)和自然環(huán)境的和諧發(fā)展。2、生態(tài)工程所遵循的基本原理(1) .生態(tài)工程建設(shè)的目的:遵循自然界物
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