UltrasensitivehGH

1、BECKMAN COULTER超敏人生長激素檢測步驟用ACCESS ?免疫分析系統(tǒng)對人血清或血漿中的人生長激素進行定量測定內(nèi)容表檢測原理2標本采集2試劑和必須品3定標5質(zhì)量控制5步驟5檢測結(jié)果6開始檢測6檢測注意事項6參考文獻8Beckman Coulter, I nc. ? Fullerto n, CA 92834原理 檢測原理Access超敏人生長激素分析是同步一步法酶免分析。樣品和酶結(jié)合物，即標記了堿性磷酸酶的羊抗人生長激 素多抗以及包被了小鼠抗人生長激素單抗的磁性顆粒被一起加入反應管，血清或肝素抗凝血漿中的人生長激 素與固相上的抗人生長激素單抗結(jié)合，同時酶結(jié)合物與血清或血漿中的人生長激

2、素的不同抗原位點相結(jié)合。 而后，反應管被傳送到磁性分離區(qū)域進行多次沖洗，去處未和固相結(jié)合的其它成分。最后在反應管中加入化 學發(fā)光底物（Lumi-Phos* 530）,已與固相結(jié)合的堿性磷酸酶會使該底物發(fā)岀光子并被光電比色計所檢測。最后，對照儀器中儲存的多點定標曲線中所描述的光量子與標準品的對應關(guān)系而計算出樣品中的人生長激素濃 度。概述 人生長激素（hGH, somatotropin ），種191個氨基酸的單鏈多肽類激素，由主要位于垂體前頁側(cè)環(huán)的生長 激素細胞合成、儲存和分泌（1 ），循環(huán)中存在的大部分生長激素的分子量為22-KD的蛋白質(zhì)，大約還有10%的形式是由垂體釋放的20-KD的異質(zhì)體，它

3、缺少氨基酸殘基的3246位。血清中生長激素的濃度在24小時內(nèi)由于情緒的突然發(fā)作或生長激素的節(jié)律性分泌以及明顯的晝夜節(jié)律性和生長激素睡眠相關(guān)的變化而呈現(xiàn)明顯的不同（2）。另外，許多環(huán)境因素和代謝因素，包括（但不局限于此）氮的攝入、鍛煉、體育活動或運動強度、壓力、創(chuàng)傷、年齡，通過影響生長激素的分泌和清除來影響血清中生 長激素存在的濃度。用傳統(tǒng)的RIA或IRMA的免疫分析通常不能檢測岀血清中基礎(chǔ)生長激素，超敏生長激素檢測提供的靈敏度最低達0.005 ng/mL，可以區(qū)分人群中原先不可檢測的那些濃度（2）。超敏檢測生長激素可用于評估生長激素軸的功能（2，3）。由于生長激素的低水平和節(jié)律性分泌，激發(fā)試驗

4、最常用來評估生長激素缺乏與否（1）。激發(fā)試驗包括用藥物刺激來刺激垂體生長激素細胞分泌生長激素，胰島素、可樂定、精氨酸、L-多巴、促生長激素釋放激素和普奈洛爾都可用于刺激生長激素的釋放，不出現(xiàn)生長激素的峰值提示是刺激無效的。生長激素升高的個體可通過抑制試驗來確診生長激素過量（指端肥大癥）（4）。抑制實驗可通過用葡萄糖來制造一個高血糖狀態(tài)，進而測定生長激素水平的改變。高血糖狀態(tài)不能抑制生長激素的分泌則提示為生長激 素過量。生長激素測定通常用于垂體前頁疾病的診斷和治療。標本米集A. 血清或肝素抗凝血漿是推薦的樣品。B. 遵循國家臨床實驗室標準委員會推薦的以下標本處理、運行和儲存步驟（19，10）:1

5、. 用真空采樣管采集所有血液標本時須遵守常規(guī)注意事項。2. 離心前使標本完全自然形成凝塊。3. 全程保證樣品管的密閉狀態(tài)。4. 離心獲得血清后的兩小時內(nèi)，至少將500 l血清或血漿轉(zhuǎn)移到一個密閉的儲存試管中備用5. 儲存樣品，保持樣品管完全密閉，在室溫 （15到30 C）條件下不超過8小時。6. 如果8小時內(nèi)不能完成檢測即應將標本放入2到8 冰箱冷藏。7. 如果24小時內(nèi)不能完成檢測即應將標本放入-20 冰箱凍藏。C. 標本最多復融兩次。試劑和必須品Beckma n Coulter, I nc.4300 S. Harbor Blvd.Fullert on, CA 92834A. R1: Acc

6、ess超敏人生長激素試劑盒Cat. No. 33580: 100個測試，2盒,50個測試/盒?，F(xiàn)成可用，在2到10 C冰箱中頂端朝上存放，可一直保存到標簽中注明的失效期。試劑盒必須在2到10C冰箱保存2小時后才能放入儀器中使用或保存。試劑盒被吸取使用后，在2到10C條件下可穩(wěn)定28天，一旦發(fā)現(xiàn)有試劑盒上彈性體破裂或質(zhì)控結(jié)果超岀范圍等現(xiàn)象岀現(xiàn)即代表試劑盒失效。1. R1a:包被了羊抗小鼠IgG抗體的磁性顆粒，小鼠抗人生長激素混合物，小牛血清白蛋白（BSA ）， 0.1% 的疊氮鈉和 0.1% ProClin* 300。2. R1b:羊抗人生長激素堿性磷酸酶（牛源性）酶結(jié)合物，小牛血清白蛋白（BS

7、A ），0.1%的疊氮鈉和 0.1% ProClin* 300。3. R1c:蛋白緩沖液（牛源性、小鼠源性、羊源性 ），0.1%的疊氮鈉和0.5% ProClin* 300 。B. Access超敏人生長激素定標液Cat. No. 33585: S0-S5, 2.0 mL/ 瓶定量檢測的定標是用已知分析濃度的標本進行檢測以觀察光量子值。光量子值和已知濃度之間的數(shù)學關(guān)系就構(gòu)成了定標曲線。定標曲線儲存于儀器中，可將樣本檢測中得到的光量子值轉(zhuǎn)化成特定的分析 濃度。提供的是凍干品，每瓶用 2.0ml蒸餾水復溶，靜置 30分鐘以充分溶解，使用前輕輕混勻。凍干品在210C環(huán)境可穩(wěn)定到定標品瓶標簽上標岀的失

8、效期。在210 C冰箱可保存2個月，只能復溶一次，質(zhì)控結(jié)果落到允許的范圍之外或定標品不能完全溶解是定標品失效的信號。定標操作步驟請參見 Access免疫分析系統(tǒng)的操作指南和參考手冊。1. S0:以小牛血清白蛋白為基質(zhì)的緩沖液，含0.1%的疊氮鈉和0.5% ProClin* 300 ，凍干品。2. S1 -S5:以小牛血清白蛋白為基質(zhì)的緩沖液，含0.1%的疊氮鈉和0.5% ProClin* 300，人生長激素的濃度分別大概為0.1, 1.0, 10, 20, or 50 ng/mL （g/，凍干品。3. 定標卡：1張C. Access 底物貨號為81906: 4 瓶x 130 ml/瓶。現(xiàn)成可用

9、，下表注明了儲存條件和穩(wěn)定性，底物本底檢測值的增高提示底物的不穩(wěn)定。Formatted per NCCLS Document GP2-A3Copyright 2001 Beckman Coulter, Inc.105462C前提儲存穩(wěn)定性未開瓶2 到 8C可一直保存到標簽注明的 失效期使用前的平衡（未開瓶）15到30 C （室溫條件）至少18小時最長14天使用中（已開瓶）內(nèi)部底物支持位置最長5天使用中（已開瓶）外部液體架的底物位置最長14天R2底物：Lumi-Phos 530 （緩沖液中包含有 dioxetane Lumigen* PPD,熒光素和離子表面活性劑量）。按照Access儀器操作指

10、南中介紹的使用方法使用。D. Access 沖洗緩沖液貨號：81907 4 x 1950 ml/ 箱現(xiàn)成可用。在室溫條件下（15到30C）可穩(wěn)定到包裝上注明的失效期。底物本底檢測值的增高或在“雙 抗體夾心法中的0點定標品的相關(guān)發(fā)光值的增高則提示沖洗緩沖液的不穩(wěn)定。R3沖洗緩沖液：Tris鹽緩沖液，離子表面活性劑， 0.1 %的疊氮鈉和0.1% ProClin 300。按照Access儀器操作指南中介紹的使用方法使用。E. Access樣品稀釋液 A貨號：81908: 4 mL/ 瓶病人標本中的濃度可能超過定標品的S5點的值，如果此時需要定量結(jié)果須用稀釋液稀釋標本以得到準確的分析結(jié)果?，F(xiàn)成可用，

11、在室溫下靜置10分鐘，使用前輕輕混勻，避免產(chǎn)生氣泡，在2 10 C可一直保存到瓶標簽上標明的失效期。在可檢測范圍內(nèi)，樣品可被準確定量，如果病人標本中的濃度超過定標品的S5點的值，則按照 特殊檢測之“操作注意事項”中注明的稀釋方法對樣品進行稀釋，參見Access系統(tǒng)手冊和/或系統(tǒng)幫助來了解如何在要求測試中輸入稀釋因子。Access樣品稀釋液 A:以BSA為緩沖基質(zhì)的緩沖液，含離子表面活性劑， 0.1 %的疊氮鈉和0.1%ProClin 300。F. Access免疫分析系統(tǒng)和消耗品G. 注意事項1. 只用于體外診斷。2. 病人樣品和血制品應按照闡述的最底危險性的常規(guī)操作進行操作，將這些物品當作潛

12、在的傳染物 品，按照常規(guī)操作注意點和優(yōu)秀實驗室的操作常規(guī)進行處理，無論該些物質(zhì)是原型、處理物或得 到保證前。用合適的消毒劑進去污。按照各實驗室規(guī)定和操作規(guī)程存放和處理該些物品及其容 as3. 試劑中所含的疊氮鈉可以和鉛和銅反應形成有高度腐蝕性的重氮金屬鹽，如果被濺到含該物質(zhì)的液體，則可用大量水沖洗來防止重氮的堆積（7）。4. Xi.刺激物：0.5% ProCiin 300.R 43:皮膚接觸后會引起致敏。S 28-37:皮膚接觸后立即用大量的肥皂和水沖洗，可戴合適的手套來避免接觸。5. 病人樣品和血制品應按照闡述的最底危險性的常規(guī)操作進行操作，將這些物品當作潛在的傳染物 品，按照常規(guī)操作注意點

13、和優(yōu)秀實驗室的操作常規(guī)進行處理，無論該些物質(zhì)是原型、處理物或離 心前。用合適的消毒劑進去污。按照各實驗室規(guī)定和操作規(guī)程存放和處理該些物品及其容器（8 ）。6. 底物暴露在空氣中容易衰變，應保持瓶口緊蓋，不要將不同瓶的底物相混后使用。7. 提供材料安全數(shù)據(jù)表（MSDS ）備索。定標對所有的測試來講，有效的定標曲線是必須的。Access超敏人生長激素分析的定標曲線有效期為56天，參見Access系統(tǒng)手冊和/或系統(tǒng)幫助來得到關(guān)于定標理論、設置定標品、定標要求的輸入和定標曲線的回顧等 資料。提供的Access超敏人生長激素定標品包括6個濃度，0和大概0.1,1.0,10, 20 or 50 ng/mL

14、，溶解在以BSA為基質(zhì)的緩沖液中。定標品由WHO的垂體激素人生長激素80/505加入到人血清中制備而得，定標曲線的有效期為56天。定標品須雙份檢測。質(zhì)控 質(zhì)控品與樣品的性質(zhì)類似，是監(jiān)測免疫化學分析正常工作的必須品。因為樣品可在有隨機檢測能力的儀器中隨機檢測而非批量檢測，所以質(zhì)控品應該包含在整個24小時的時間段內(nèi)（9）。質(zhì)控品包括 Access AFP三濃度質(zhì)控品（貨號：33219）或至少包括三各濃度值的其它可購得得商用質(zhì)控品，按照廠家規(guī)定進行復溶和保存。在正式使用前每個實驗室均應建立各自得平均值和可接受范圍，質(zhì)控結(jié)果沒有落在可接收范圍提示檢驗結(jié)果 無效。重新檢查位于上一次有效質(zhì)控值到這次無效質(zhì)

15、控值之間所有得檢測結(jié)果。參見系統(tǒng)手冊和系統(tǒng)幫助來 了解如何回顧質(zhì)控結(jié)果。操作步驟A. Access 儀器參見Access免疫分析系統(tǒng)的系統(tǒng)手冊和系統(tǒng)幫助來準備和操作。B. 分析步驟1. 從主菜單進入測試要求屏幕。2. 對每個樣品，設置一個樣品架上的位置，輸入樣品信息和需檢測的測試名稱3. 將樣品管（杯）放入樣品架中已設定的位置。Formatted per NCCLS Document GP2-A3Copyright 2001 Beckman Coulter, Inc.105462C4. 按下運行鍵(Run )開始檢測5. 儀器會提醒操作者運行所需的定標。8. 系統(tǒng)會自動計算檢測結(jié)果檢測結(jié)果A.

16、 病人的檢測結(jié)果由儀器軟件自動通過通過加權(quán)四參數(shù)曲線計算方式進行統(tǒng)計，樣品中檢測到的光量子值會與儲存的標準曲線對應求得相應結(jié)果，病人檢測結(jié)果可通過“樣品結(jié)果菜單” (SampleResults screen )回顧，詳情請參見Access系統(tǒng)手冊和/或系統(tǒng)幫助，B. 參考值1. 每個實驗室均應針對各種有代表性的特殊人群建立自己的參考范圍。2. 用Access超敏人生長激素分析方法對當前健康的男性和女性的血清和血漿標本進行檢測，得到 的各人群的人生長激素的濃度如下所述：參考人群例數(shù)平均年齡(歲)年齡范圍平均檢測結(jié)果(n g/mL)95%可信區(qū)間女性2324321 -730.8250.014 -5

17、.219男性2424118 -660.1660.004 -1.406開始檢測A.關(guān)于安裝介紹、開機、操作原理、系統(tǒng)主要特點、操作指導、定標步驟、操作限制和注意事項、危險 事項、保養(yǎng)和故障的排除等請參見操作指南和參考手冊。B. 在裝入儀器前，將試劑輕輕的顛倒混勻幾次，不要顛倒已用試劑，通過輕輕旋轉(zhuǎn)的方式混勻試劑。C. 每次測試使用25 I的樣品，但要考慮到樣品杯和樣品管的死體積，各種容器的死體積大小請參見操作 手冊中的的樣品容器章節(jié)。D. 樣品結(jié)果的報告單位為ng/ml，另外，系統(tǒng)也可按照國際單位4/L)報告結(jié)果。設置請參見系統(tǒng)手冊和/或系統(tǒng)幫助的詳細描述。手工進行單位換算時將ng/ml乘以1即

18、可得到國際單位。檢測注意事項A.樣品可在分析范圍內(nèi)被準確測定大概為0.003 -50 ng/mL ( /L)。?如果樣品含量低于最低檢測限，則報告結(jié)果為小于該最低檢測限如 0.003 ng/mL ( g/L)。?如果樣品含量超過Access超敏人生長激素的S5定標品上所標明的數(shù)值則報告結(jié)果為大于該值如 50 ng/mL ()/L)。或者用S0定標品或樣品稀釋液A按1: 1稀釋后重新檢測，以得到確切數(shù)值。參見Access系統(tǒng)手冊和/或系統(tǒng)幫助來設置稀釋系數(shù)，系統(tǒng)將自動進行稀釋校正而直接報告最 終結(jié)果。B.人抗大鼠抗體(HAMA)可能會岀現(xiàn)在已接受大鼠源性單抗免疫藥物治療的病人體內(nèi)(13，14)。

19、這個分析方法已通過特殊的方法來盡量減少這些抗體對該分析方法的影響。但是，在已知病人含有這些抗體 時須小心評估檢測結(jié)果。Formatted per NCCLS Document GP2-A3105462CCopyright 2001 Beckman Coulter, Inc.C. Access 超敏生長激素測試的結(jié)果應結(jié)合病人所有的的臨床表現(xiàn)來使用，包括臨床病史、其它試驗結(jié) 過和其它有用的信息。D. 樣品中至多含有 20mg/dl 的膽紅素和脂血標本中含有相當于 3000mg/dl 的甘油三脂、 溶血標本含有 最多 1000mg/dl 的血紅蛋白外不影響生長激素檢測的結(jié)果。另外，在標本中的內(nèi)源性

20、白蛋白基礎(chǔ)上加 入 6 g/dl 的人白蛋白也不影響檢測結(jié)果。Access is a trademark of Beckman Coulter, Inc.*Lumi-Phos 530 and Lumigen are trademarks of Lumigen, Inc.*ProClin 300 is a trademark of Rohm and Haas Company, or its subsidiaries or affiliates.Formatted per NCCLS Document GP2-A3Copyright 2001 Beckman Coulter, Inc.105462

21、C參考文獻Beckma n Coulter, I nc. Access Ultrase nsitive hGH product in sert, Fullert on, CA 92834, 105435.Beckman Coulter, Inc. Access Substrate product insert, Fullerton, CA 92834, 170279.Beckman Coulter, Inc. Access Wash Buffer product insert, Fullerton, CA 92834, 170278.1. Melmed S, Adashi EY, Rock J

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