花粉生活力測定(終)

1、實驗五實驗五 花粉發(fā)芽試驗和花粉發(fā)芽試驗和生活力的測定生活力的測定 指導教師：姜喜指導教師：姜喜2014.6.19學習和掌握果樹發(fā)芽學習和掌握果樹發(fā)芽試驗和花粉生活力測試驗和花粉生活力測定的技術。定的技術。花 粉 一、實驗目的一、實驗目的n果樹雜交工作中，往往會遇到父母本花期不遇，必須采果樹雜交工作中，往往會遇到父母本花期不遇，必須采集花粉短暫貯藏，經(jīng)貯藏的花粉及其生活力如何，必須集花粉短暫貯藏，經(jīng)貯藏的花粉及其生活力如何，必須經(jīng)過測定，以保證雜交效果。經(jīng)過測定，以保證雜交效果。n正常條件下花粉在雌蕊上萌發(fā)的能力，就是花粉的生活正常條件下花粉在雌蕊上萌發(fā)的能力，就是花粉的生活力。力。n花粉生活

2、力的高低直接影響植物授粉、受精乃至坐果?；ǚ凵盍Φ母叩椭苯佑绊懼参锸诜?、受精乃至坐果。 二、實驗原理二、實驗原理1 1、材料、材料: : 正在開花的植株花粉2 2、器具、器具: : 蓋玻片 載玻片 培養(yǎng)皿 滴管 鑷子 解剖針 吸水紙 水浴鍋 恒溫箱 天平 燒杯 玻棒 電爐 普通顯微鏡3 3、藥品、藥品: : 蒸餾水 硼酸 蔗糖 瓊脂 聯(lián)苯胺 -奈酚 碳酸鈉 過氧化氫 磷酸氫二鈉 磷酸二氫鉀 氯化三苯基四氮 三、實驗材料與用具三、實驗材料與用具配置培養(yǎng)基配置培養(yǎng)基（ 1%瓊脂瓊脂+0.01%硼酸硼酸+ 5%-20%蔗糖蔗糖 ） 煮沸溶化煮沸溶化用玻棒分裝與凹玻片中用玻棒分裝與凹玻片中 播撒花粉

3、播撒花粉置于培養(yǎng)皿中置于培養(yǎng)皿中20-25恒溫培養(yǎng)數(shù)小時恒溫培養(yǎng)數(shù)小時 保持濕度保持濕度 鏡檢計數(shù)鏡檢計數(shù) 四、實驗方法與步驟四、實驗方法與步驟（一）花粉發(fā)芽試驗（一）花粉發(fā)芽試驗顯微鏡顯微鏡隔一定時間檢查一次隔一定時間檢查一次隨機調查隨機調查5 5個視野，若發(fā)現(xiàn)花粉已發(fā)芽時，就記錄花粉?？倐€視野，若發(fā)現(xiàn)花粉已發(fā)芽時，就記錄花粉粒總數(shù)和發(fā)芽數(shù)，算出平均值，將觀察結果填入表內。數(shù)和發(fā)芽數(shù)，算出平均值，將觀察結果填入表內。 花粉發(fā)芽的標準：以花粉管伸長超出花粉直徑為準。若花粉花粉發(fā)芽的標準：以花粉管伸長超出花粉直徑為準。若花粉發(fā)芽率在發(fā)芽率在5%5%以下，為極弱，不能采用。以下，為極弱，不能采用。

4、花粉發(fā)芽率花粉發(fā)芽率= =發(fā)芽花粉總數(shù)發(fā)芽花粉總數(shù)/ /花粉總數(shù)花粉總數(shù)* *100100 優(yōu)點：能夠統(tǒng)計出百分率，準確度高 缺點缺點：操作相對復雜，而且花粉發(fā)芽條件與實際不完全相符易受培養(yǎng)基配方的影響導致結果的偏差。【注意事項注意事項】1.不同種類植物的花粉萌發(fā)所需溫度、蔗糖和硼酸濃度不同，應依植物種類而改變培養(yǎng)條件。2.此法也可用于觀察花粉管在培養(yǎng)基上的生長速度以及不同蔗糖濃度，離體時間，環(huán)境條件等因素對花粉活力的影響。3.不是所有植物的花粉都能在此培養(yǎng)基上萌發(fā)，本法適用于易于萌發(fā)的植物花粉活力的測定。4 h密密集集24 h1 過氧化物酶法：過氧化物酶法： 具有生活力的花粉含有活躍的過氧化

5、物酶。此酶能利用過氧化氫使各種多酚及芳香族胺發(fā)生氧化而產(chǎn)生顏色，依據(jù)顏色可知花粉有無活性。實驗中甲液成分為聯(lián)苯胺，-萘酚、碳酸鈉，乙液成分為過氧化氫。H2O2 + 酚 醌 +H2O過氧化氫酶過氧化氫酶 （無色） （紅色、玫瑰紅色）（二）花粉生活力的測定將適量花粉置于載玻片上先滴1滴甲液，再滴1滴乙液 充分反應顯微鏡下鏡檢計數(shù)，紅色的為有活力的花粉優(yōu)點：染色法用時短，見效快優(yōu)點：顏色判斷易受個人因素影響，導致結果有較大差別?！咀⒁馐马椬⒁馐马棥康渭蛹滓汉鸵乙汉螅瑫a(chǎn)生大量的氣泡，待氣泡基本消失后方可觀察。統(tǒng)計生活力的方法同前。TTC即2、3、5-三苯基四唑氯化物。主要原理在于檢驗花粉呼吸過程中脫

6、氫酶的活性。2、3、5-氯化三苯基四氮唑(TTC)的氧化狀是無色的，被氫還原時成紅色的TTF。有活力2 TTC法：（1）取少量花粉放在載玻片上，并在花粉上滴上12滴配制液，用玻璃棒混合蓋上蓋玻片。（2）將載玻片置于恒溫箱中（3540）約1520分鐘。（3）在顯微鏡下觀察：凡具有生活力的花粉呈紅色，部分喪失生活力的呈淡紅色，無色的是死的和不育的花粉粒。（4）觀察和測定結果：每片觀察3個視野，并統(tǒng)計具有生活力的花粉的百分率。以碘碘化鉀溶液（ 0.3g 碘 1.3g 碘化鉀溶于 100ml 蒸餾水）染色后于顯微鏡下觀察。 有活力無活力3、碘碘化鉀法法1、將培養(yǎng)基法和染色法兩種方法測得的結果列表記錄，并計算花粉的生