氣相色譜儀原理及應(yīng)用試驗(yàn)指導(dǎo)書.doc

1、氣相色譜儀原理及應(yīng)用實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書貴州大學(xué)精細(xì)化工研究開(kāi)發(fā)中心（綠色農(nóng)藥與生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室）1. 實(shí)驗(yàn)類型 ：設(shè)計(jì)型實(shí)驗(yàn)（研究性實(shí)驗(yàn)）2. 課時(shí)安排 ：6 課時(shí)。 并運(yùn)用其數(shù)據(jù)資料的能力以及歸納總結(jié)的能力等。3. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵饬x 通過(guò)學(xué)習(xí)氣相色譜儀的構(gòu)成和使用方法，及其在定性、定量分析中的應(yīng)用，培養(yǎng)學(xué)生嚴(yán) 謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度、細(xì)致的工作作風(fēng)、實(shí)事求是的數(shù)據(jù)報(bào)告和良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣（準(zhǔn)備充分、操作 規(guī)范，記錄簡(jiǎn)明，臺(tái)面整潔、實(shí)驗(yàn)有序，良好的環(huán)保和公德意識(shí)） 。培養(yǎng)培養(yǎng)學(xué)生的動(dòng)手能力、 理論聯(lián)系實(shí)際的能力、統(tǒng)籌思維能力、創(chuàng)新能力、獨(dú)立分析解決實(shí)際問(wèn)題的能力、查閱手冊(cè) 資料并運(yùn)用其數(shù)據(jù)資料的能力以及歸納總結(jié)的能

2、力等。4. 實(shí)驗(yàn)原理 氣相色譜分離是利用試樣中各組分在色譜柱中的氣相和固定相間的分配系數(shù)不同，當(dāng)汽 化后的試樣被載氣帶入色譜柱中運(yùn)行時(shí)，組分就在其中的兩相間進(jìn)行反復(fù)多次（103-106）的分配（吸附脫附放出）由于固定相對(duì)各種組分的吸附能力不同（即保存作用不同） ，因此 各組份在色譜柱中的運(yùn)行速度就不同，經(jīng)過(guò)一定的柱長(zhǎng)后，便彼此分離，順序離開(kāi)色譜柱進(jìn) 入檢測(cè)器，產(chǎn)生的離子流信號(hào)經(jīng)放大后，在記錄器上描繪出各組分的色譜峰。5. 實(shí)驗(yàn)設(shè)備 氣相色譜儀、色譜柱、容量瓶、分析實(shí)驗(yàn)室常用玻璃儀器、氮?dú)?、農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品。6. 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 了解并初步掌握氣相色譜儀的基本原理與構(gòu)造；了解氣相色譜儀常用的幾種檢測(cè)器工作

3、原理和使用范圍；學(xué)習(xí)氣相色譜法分離化合物和檢測(cè)化合物的含量的方法；通過(guò)測(cè)定對(duì)樣品 的定性、定量測(cè)定，初步掌握獲得氣相色譜譜圖和數(shù)據(jù)的一般操作程序與技術(shù)；學(xué)習(xí)樣品制 備的方法；了解影響分析測(cè)定的重要因素，學(xué)會(huì)優(yōu)化分析條件；學(xué)習(xí)譜圖和數(shù)據(jù)的處理方法； 結(jié)合實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目，完成一個(gè)分析檢測(cè)項(xiàng)目。1）樣品制備樣品制備過(guò)程中，要同時(shí)考慮將被分析的樣品中，可能干擾欲測(cè)組分定量的物質(zhì)盡可能 的分離出去。當(dāng)欲測(cè)組分含量很低時(shí)，還要考慮通過(guò)樣品制備使欲測(cè)組分在試驗(yàn)樣品中的含 量得以提高，便于進(jìn)行色譜分析。2) 定性、定量方法 保留時(shí)間定性；峰高、峰面積定量(歸一法、外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法、標(biāo)準(zhǔn)加入法) 。3) 方法可行性的

4、驗(yàn)證聯(lián)用技術(shù)進(jìn)一步定性；準(zhǔn)確度(添加回收率實(shí)驗(yàn)) 、精密度實(shí)驗(yàn)。3) 數(shù)據(jù)處理實(shí)驗(yàn)中所有測(cè)量數(shù)據(jù)都要隨時(shí)記在專用的記錄本上，不可記在其他任何地方，記錄的數(shù)據(jù)不得隨意進(jìn)行涂改；其平行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)之間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD) 般不應(yīng)大于5%;實(shí)驗(yàn)結(jié)果的誤差應(yīng)不超過(guò) 2%。4) 儀器操作a. 準(zhǔn)備與開(kāi)機(jī)b. 編輯 GC 分析方法c. 樣品分析與采集數(shù)據(jù)d. 報(bào)告輸出e. 關(guān)機(jī)7. 注意事項(xiàng)1) 實(shí)驗(yàn)之前必須交預(yù)習(xí)報(bào)告，實(shí)驗(yàn)完后每人寫一份實(shí)驗(yàn)報(bào)告。2) 嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度。3) 做好實(shí)驗(yàn)記錄工作。8. 思考題1) 常用的氣相色譜檢測(cè)器有哪幾種，簡(jiǎn)述其使用原理及應(yīng)用范圍。2) 樣品測(cè)定前要為何要確定檢測(cè)

5、器的線性范圍，如何確定？3) 影響氣相分離的因素有哪些？附：參考實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目蔬菜或水果中農(nóng)藥殘留量的測(cè)定一、目的要求1、 了解氣相色譜儀及相關(guān)檢測(cè)器的使用范圍；2、了解電子捕獲檢測(cè)器（ECD）的檢測(cè)原理和使用方法。3、掌握農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方法。二、基本原理ECD 是一種選擇性檢測(cè)器，對(duì)含 X、 S、 P、 N、 O 電負(fù)性強(qiáng)的物質(zhì)，影響很大，而對(duì) 非電負(fù)性物質(zhì)，則影響很小。放射源（3H或63Ni）產(chǎn)生的B射線將載氣N2電離成正離子 和電子，這些離子和電子在電場(chǎng)作用下形成“基流” 。當(dāng)電負(fù)性樣品進(jìn)入檢測(cè)器后，便捕 獲自由電子，形成的負(fù)離子和載氣的正離子結(jié)合為中性分子，以使基流下降，產(chǎn)生對(duì)應(yīng)的 負(fù)信號(hào)

6、倒峰。在一定范圍內(nèi)，檢測(cè)器的響應(yīng)信號(hào)和樣品組分的濃度成正比。六六六、 DDT 目前雖然已經(jīng)禁用， 但其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定， 半衰期長(zhǎng)， 施用后殘留在大氣、 土壤、水體、植物中不易講解，嚴(yán)重危害人體健康。本法利用己烷提取樣品，采用石英毛細(xì)管氣相色譜柱進(jìn)行分離， ECD 檢測(cè)器，外標(biāo)法三、儀器與試劑儀器：氣相色譜儀（配 ECD 檢測(cè)器） ；HP-5 石英毛細(xì)管色譜柱；離心機(jī)；布氏漏斗； 0.5*22cm 玻璃層析柱； 500mL 分液漏斗 2 只試劑：無(wú)水硫酸鈉、硫酸鈉、正己烷、丙酮、濃硫酸（均為AR）; a666、3-666、丫666、$666、p, p- DDE、o, p-DDT、p, pz -DD

7、D , p, pz -DDT。四、實(shí)驗(yàn)步驟1、 試樣的提取和凈化：將水果或蔬菜樣品置于多用食品加工機(jī)中攪碎，稱取 20.0 g于250 mL分液漏斗中，加入100 mL丙酮一正己烷混合液（1:1）,振搖數(shù)分鐘，中間放氣。再振蕩40 min，轉(zhuǎn)移，抽濾，殘 渣用50mL丙酮一正己烷混合液（1:1）洗滌，洗滌液過(guò)濾，并于另一分液漏斗中，以50 mL 20 g/L 硫酸鈉溶液洗滌 2次，以除去丙酮。正己烷相過(guò)無(wú)水硫酸鈉漏斗脫水并濾入梨形瓶中，用少 量正己烷洗滌分液漏斗及無(wú)水硫酸鈉漏斗，洗脫液合并于梨形瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮至約5 mL。2、色譜條件:色譜柱，HP-5彈性石英毛細(xì)管柱(30 mx0.

8、32 mm i.d., 025卩m)色譜柱升溫程序，初溫80?C保持1 min,升溫速率50 ?C /min，升溫至160?C，再以0.5?C/min升溫至165?C，保持1min, 再以20?C /min升溫至220?C，保持20 min;氣化室溫度，220?C檢測(cè)器；溫度，300E ；載氣、 尾吹氣均為氮?dú)?，純度?9.999%;載氣流速為5 mL/min，尾吹氣流速為60 mL/min ;柱頭 壓，138 kPa；進(jìn)樣方式，不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量，1此。3、標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:用己烷配制 a666、伕666、y666、666、p, p- DDE、o, p-DDT、p, pz -DDD，p, pz-DDT 各為 l00ppm 的貯備液，操作溶液濃度與樣品濃度相近。4、色譜測(cè)定:(1) 用各種濃度的六六六、 DDT 標(biāo)準(zhǔn)溶液注入色譜儀，確定 ECD 的線性范圍；(2) 進(jìn)樣品溶液，根據(jù)樣品的峰高，用標(biāo)準(zhǔn)貯備液配制濃度相近的操作溶液；(3) 在相同色譜條件下，依次進(jìn)樣品和標(biāo)樣，記錄 tR 和色譜圖。五、數(shù)據(jù)處理根據(jù)色譜圖測(cè)量蜂高，按下式計(jì)算蔬菜、水果