普通遺傳學(xué)第十七章基因組自學(xué)自出試題及答案詳解第一套資料

1、名詞解釋1、蛋白質(zhì)工程2、基因組文庫3.多克隆位點4. Southern 雜交5.基因治療6.轉(zhuǎn)基因動物7.顯微注射技術(shù)8. Klenow 片段9.yH-：、【/.曰.Cd熒光定量 PCR10.基因芯片11、cDNA文庫12、基因槍13.融合蛋白14.表達載體15.限制性核酸內(nèi)切酶16.Northern雜交17.逆轉(zhuǎn)錄 PCR18.轉(zhuǎn)基因植物19.體細胞核移植20.DNA 改組21、多克隆位點：22、穿梭載體：23.DNA 連接酶：24.核酸分子雜交：25.融合蛋白：26.基因敲除：27.反義核酸技術(shù)：28.yH-：、【/.曰.Cd熒光定量 PCR29.基因治療30.顯微注射技術(shù)31.基因組D

2、NA文庫：32.DNA的復(fù)性：33.Tm：34.選擇標記基因：35.基因和基因組 :36.分子雜交 ：37.生物技術(shù)：38.載體：39.cDNA文 庫：40.轉(zhuǎn)化 :41.黏性末端42.重疊基因：43.基因組文庫：44. 同尾酶：45. 酶切位點 二、選擇題1、構(gòu)建 cDNA 文庫時，選用下列哪種載體較好？ ( )質(zhì)粒SV40病毒Ti質(zhì)粒YAC (酵母人工染色體)2 、在 Northern 雜交中，探針主要用什么來進行標記？ ( )同位素EB (溴化乙錠) 染料DNA3、 構(gòu)建GST蛋白表達系統(tǒng)的載體是為了是目標蛋白以哪種方式表達？-()融合表達分泌表達獨立表達包含體表達4、 PCR反應(yīng)中Ta

3、q酶常常沒有錯配堿基糾錯功能，因為它沒有 ()5 -3 聚合酶活性5 - 3 外切酶活性3 -5 外切酶活性3 - 5 聚合酶活性5、 以下哪種酶需要引物？ ( )限制性核酸內(nèi)切酶末端轉(zhuǎn)移酶逆轉(zhuǎn)錄酶DNA連接酶6、II 型限制性核酸內(nèi)切酶的切割位點是 ( ) 識別序列內(nèi)識別序列 1000bp 以外識別位點下游24 26bp處DNA分子任一位點7、 Ti質(zhì)粒中能插入到植物基因組中的 DNA區(qū)段是 () 復(fù)制遠點區(qū)毒素蛋白區(qū)T-DNA區(qū)冠嬰堿代謝區(qū)8、 艾滋病病毒HIV是通過下列哪個基因編碼的產(chǎn)物識別人體T淋巴細胞的？ ( ) env pol gag LTR9、 T4DNA連接酶能催化下列哪種分子

4、相鄰的5端磷酸基團與3端羥基末端之間形成磷酸二酯鍵？ ( ) 雙鏈 DNA 單鏈 DNA mRNA rRNA10 、下列基因中，哪個不能作為基因工程載體的報告基因？ ( ) lacZ GFPAmpr ori11、基因治療的載體采用下列哪種載體比較合適？ ( )逆轉(zhuǎn)錄病毒Ti質(zhì)粒噬菌體 質(zhì)粒 pBR32212 、采用原核細胞表達系統(tǒng)的優(yōu)點之一是可以與下面什么過程直接相連 ( )發(fā)酵工程 轉(zhuǎn)基因動物轉(zhuǎn)基因植物 基因治療13、以mRNA為模板合成cDNA時，所用的工具酶是 ()DNA聚合酶IDNA連接酶逆轉(zhuǎn)錄酶 核酸酶14、YAC是()酵母人工染色體 人工 Y 染色體細菌人工染色體 粘粒15、 用S

5、anger雙脫氧法進行DNA測序時，凝膠上讀出的序列是 ()模板鏈的模板鏈的互補鏈的mRNA的cDNA的16 、同位素標記探針是指在探針上連接 ( )32P生物素熒光素酶17 、 Southern 雜交時，探針與膜上的什么成分雜交？ ( ) DNARNA蛋白質(zhì)染色體18 、同一種限制性核酸內(nèi)切酶分別切割目的基因 DNA 與載體 DNA 時，酶切片段不能互相連接的是 ( )目的基因與目的基因之間載體DNA與載體DNA之間目的基因與載體 DNA之間目的基因與 mRNA之間19 、 pBR322 是一種什么樣的載體？ ( )粘粒質(zhì)粒噬菌體 人工微小染色體20、 PCR引物成對存在，位于目的基因的 (

6、) 5 端 3 端 C 端 N 端21、 構(gòu)建CDNA文庫時，選用下列哪種載體較好？ ()質(zhì)粒SV40病毒Ti質(zhì)粒YAC (酵母人工染色體)22、Northern 雜交時，探針與膜上的什么成分雜交？ ( ) DNARNA蛋白質(zhì)染色體23、 以mRNA為模板合成CDNA時，所用的工具酶是 ()DNA聚合酶IDNA連接酶逆轉(zhuǎn)錄酶 核酸酶24、 BAC是 ()酵母人工染色體 人工 Y 染色體細菌人工染色體 粘粒25、 用酶促合成法進行 DNA測序時，凝膠上讀出的序列是 () 模板鏈的模板鏈的互補鏈的mRNA的cDNA的26、 同位素標記探針是指在探針上連接 ( )32P生物素熒光素酶27、 同一種限

7、制性核酸內(nèi)切酶分別切割目的基因DNA與載體DNA時，酶切片段不能互相連接的是 ( )目的基因與目的基因之間載體DNA與載體DNA之間目的基因與載體DNA之間目的基因與mRNA之間28、 下列基因中，哪個不能作為基因工程載體的報告基因？ ( ) lacZ GFP Ampr ori29、M13噬菌體是 ()雙鏈噬菌體單鏈噬菌體質(zhì)粒 粘粒30、 常規(guī)PCR反應(yīng)所用到的酶是 () 核酸酶 逆轉(zhuǎn)錄酶DNA連接酶Taq酶 三、填空題1. 世界上成功構(gòu)建的第一個體外重組DNA分子是在()年完成的。2. 質(zhì)粒載體能夠克隆( )大小的 DNA 片段，噬菌體能夠克隆( )大小 的DNA片段。3. 外源基因在動物的

8、血液中表達，從而可以在動物血液里直接提取外源基因的產(chǎn)物， 這種基因產(chǎn)品的生產(chǎn)方式叫( )。4. 用瓊脂糖凝膠電泳時，DNA片段越大，離點樣孔越()，而DNA片段越小，離點樣孔越( )。5. 用化學(xué)降解法進行 DNA 測序時，必須具有( )個反應(yīng)系統(tǒng)，用酶促合成法 法進行DNA測序時，必須具有()個反應(yīng)系統(tǒng)。6. 電轉(zhuǎn)化的原理是在受體細胞上施加短暫的高壓電流脈沖后，結(jié)果在細胞膜上形成許 多( )，從而使( )容易進入到受體細胞內(nèi)。7. 入噬菌體根據(jù)接受外源 DNA的方式不同，可以分為()和() 兩種類型載體。8. 互為同裂酶的兩種限制性核酸內(nèi)切酶來源( )，產(chǎn)生的粘性末端( )。9. 酵母雙雜交

9、系統(tǒng)通常含有兩個載體，一個載體含有酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4 的(),另一個載體必須含有 GAL4的()。10. 目前抗蟲轉(zhuǎn)基因植物常常用到的外源基因主要是()，從而達到殺死害蟲的目的。11. 在轉(zhuǎn)基因植物中，常用的顯色或發(fā)光標記的報告基因有()，( )，( )等。12. 基因工程誕生于( )年。13. 基因工程中外源DNA與載體DNA分子所形成的雜合分子叫()。14. 外源基因在人體表達，使人體能克服某一缺陷或疾病，這種基因工程技術(shù)叫( )。15. 將抗性基因轉(zhuǎn)入農(nóng)作物中，使之具有某種抗病能力，得到的農(nóng)作物叫()。16. 用載體制作轉(zhuǎn)基因植物時，最常用的載體是( )質(zhì)粒。17. 粘粒載體能夠克隆(

10、 )大小的 DNA 片段，人工酵母染色體 YAC 能夠克隆 ()大小的DNA片段。18. DNA 自動測序標記的是( )，常規(guī) Sanger 雙脫氧鏈終止法標記的是( )。19. 顯微注射技術(shù)一般是在顯微鏡下將目的DNA分子注射進入動物受精卵的()中，從而產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因動物。20. 基因工程構(gòu)建基因重組體是指將（ ）與（ ）的進 行連接重組。21. 用瓊脂糖凝膠電泳時，DNA片段越大，離點樣孔越（），而DNA片段越小，離點樣孔越（ ）。22. Northern 雜交的用途主要是用來檢測（ ）在特定組織的（ ） 情況。23. 粘粒載體是由（ ）和（ ）兩部分組成的。24. 質(zhì)粒載體能夠克隆（ ）大小

11、的 DNA 片段，噬菌體能夠克隆（ ）大小的DNA片 段。四、判斷題1、基因是不可分割的最小的重組單位和突變單位。 （）2、 B型雙螺旋DNA的穩(wěn)定因素為氫鍵和堿基堆砌力。（）3、 cDNA文庫不包含內(nèi)含子。（）4、Western雜交是 DNA-RNA之間的雜交。（）5、 DNA雙酶切時，要先低鹽緩沖液，后高鹽緩沖液。（）6、 如果需要得到真核生物基因的完整序列，必須用基因組文庫方能達到。（）7、 基因是不可分割的最小的重組單位和突變單位。（）8、 克隆的本質(zhì)特征是生物個體在遺傳組成上的完全一致性。（）9、 假基因不能合成功能蛋白質(zhì)，是相應(yīng)的正?；蛲蛔円鸬?。（）10、Northern 雜交

12、是 DNA-RNA之間的雜交。（）11、核酸Tm的高低與DNA分子中G+C的含量有關(guān)，堿基數(shù)相同的情況下，其含量越高，貝UTm越高。（）12、農(nóng)桿菌介導(dǎo)法和基因槍法是植物轉(zhuǎn)化的主要方法（）13、（）有一些來源不同的限制性內(nèi)切酶識別的是同樣的核苷酸序列，這類酶稱為同裂酶。14、 檢測外源基因的導(dǎo)入時，PCR的準確性要高于 Southern雜交的準確性。（）15、 轉(zhuǎn)基因食品目前存在的最大問題是我們無法檢測某種食品到底是不是轉(zhuǎn)基因食品。（）16、 轉(zhuǎn)基因生物直接食用的，稱為“轉(zhuǎn)基因食品”，而作為加工原料生產(chǎn)的食品，貝不能被稱為“轉(zhuǎn)基因食品” 。（）17、 質(zhì)粒DNA進行電泳時，其三種構(gòu)型中，開環(huán)D

13、NA跑的最快，共價閉環(huán)形 DNA跑得最慢。 （）18、 在生物技術(shù)的五大工程中，生化工程是核心技術(shù)，它能帶動其他技術(shù)的發(fā)展。（）19、 cDNA是以DNA為起始材料，經(jīng)過復(fù)制得到的互補DNA （）20、 DNA的復(fù)制是全保留不連續(xù)復(fù)制。（）21、 基因是一個功能單位，但不是一個不可分割的最小的重組單位和突變單位。（）22、Western雜交可以檢測外源 DNA的導(dǎo)入與否。（）23、生物技術(shù)是一門新興的學(xué)科。（）24、 生物技術(shù)是現(xiàn)實生產(chǎn)力，也是具有巨大經(jīng)濟效益的潛在生產(chǎn)力，它將是21 世紀高技術(shù) 革命的核心內(nèi)容。（）25、生物技術(shù)是由多學(xué)科綜合而成的一門新學(xué)科。（）26、自 1996年 11

14、月我國正式公布實施農(nóng)業(yè)生物基因工程安全管理實施辦法以來，我國已批準 6 種轉(zhuǎn)基因植物商品化。（）27、1977年，美國首先采用大腸桿菌生產(chǎn)了人類第一個基因工程藥物-人生長激素釋放 抑制劑激素。（）28、 生物技術(shù)是一門新興學(xué)科，它包括當代生物技術(shù)和現(xiàn)代生物技術(shù)兩部分. （）29、生物技術(shù)主要包括五項技術(shù)（工程）。（）30、現(xiàn)代生物技術(shù)是所有自然科學(xué)領(lǐng)域中涵蓋范圍最廣的學(xué)科之一。（）31、本世紀初，遺傳學(xué)的建立及其應(yīng)用，產(chǎn)生了遺傳育種學(xué)，并于60 年代取得了輝煌的成就，被譽為“第一次綠色革命”。( )32、人類基因組計劃英文簡稱為HGP. ()33、 無論用哪種轉(zhuǎn)化方法均可用PBR322作載體(

15、)34、 進入細菌的外來 DNA之所以被降解，是因為細菌只修飾自身DNA不修飾外來 DNA()35、只有粘粒端才可以被連接起來()36、用自身作引物合成的 cDNA鏈，往往cDNA并不完整()37、 所謂半保留復(fù)制就是以DNA親本鏈作為合成新子鏈 DNA的模板，這樣產(chǎn)生的雙鏈DNA分子由一條舊鏈和一條新鏈組成。()38、任何細胞都可用作受體細胞。()39、克隆子就是重組子。()40、原核生物細胞是最理想的受體細胞。()41、 目的基因來源于各種生物，其中真核生物染色體基因組是獲得目的基因的主要來源。 ()42、E.coli DNA連接酶只能催化雙鏈 DNA片斷互補黏性末端之間的連接。()五、簡

16、答題1. 堿性磷酸酯酶的主要作用是什么？它有哪些應(yīng)用？2. 什么是蛋白質(zhì)的分泌表達？它有什么優(yōu)缺點？3. 選擇T7噬菌體RNA聚合酶/啟動子的大腸桿菌表達系統(tǒng)有哪些優(yōu)點?4. 酵母作為真核基因的高效表達系統(tǒng)有什么優(yōu)缺點？5. 舉例說明轉(zhuǎn)基因動物在醫(yī)藥科學(xué)中有哪些應(yīng)用。6. 艾滋病是由于艾滋病病毒 HIV 感染引起。艾滋病的基因治療可以采取哪些措施？7什么是熒光定量 PCR?它有什么應(yīng)用?8.構(gòu)建cDNA文庫時需要用到哪些工具酶?9. 簡述進行菌落原位雜交的基本過程。10. 基因芯片的主要應(yīng)用是什么?11. 酵母作為真核基因的高效表達系統(tǒng)有什么優(yōu)缺點?12、基因工程操作過程的主要步驟有哪些？13

17、、一種理想的用作克隆載體的質(zhì)粒必須滿足的條件是什么？14、PCR反應(yīng)系統(tǒng)應(yīng)包括哪幾部分?15、載體DNA與外源基因片段的連接方法主要有哪幾種16、重組子篩選所用的核酸分析法的內(nèi)容是什么?17、基因工程研究的理論依據(jù)是什么?18、分離目的基因的途徑有哪些?19、談?wù)勀銓D(zhuǎn)基因食品的看法。20、目的基因克隆的基本方法有哪些？o21、請簡述PCR技術(shù)的原理。22、cDNA文庫和基因組文庫的主要差別有哪些?23、簡述一項可以授予專利的發(fā)明必須滿足的條件。24、重組 DNA 導(dǎo)入受體細胞方法25、簡述現(xiàn)代生物技術(shù)在人類生產(chǎn)生活中的作用六、問答題1. 試比較 Southern 雜交、 Northern 雜

18、交和 Western 雜交的相同點與不同點。2. 什么是基因敲除？基因敲除的基本流程是怎樣的？3. 試比較Sanger雙脫氧鏈終止法DNA測序與化學(xué)降解法DNA測序的異同點。4. 基因組文庫構(gòu)建的基本步驟是什么？構(gòu)建基因組文庫需要用到哪些載體？5. 腫瘤的產(chǎn)生可能是抑癌基因突變或表達失誤造成， 也可能是原癌基因突變或表達失誤造 成。對腫瘤患者進行基因治療時，應(yīng)該采取哪些策略？6. 有哪些方法可以將外源目的基因轉(zhuǎn)移到植物體內(nèi)？你認為轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物的潛在的安全 隱患主要表現(xiàn)在哪些方面 ?七、論述題1請介紹用于遺傳圖譜構(gòu)建的至少三種DNA分子標記，包括其名稱 (中英文)、基本原理及優(yōu)缺點。2、什么是基

19、因組詮釋( GenomeAnnotation )？可以從哪幾個水平進行？試舉例分析其對基 因組學(xué)研究的意義。3簡述研究蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用的方法。4. 基因工程中常用的工具酶通常有哪幾類？說明每一類中主要酶的特性或功能。5、重組子的篩選和鑒定方法。答案一、名詞解釋1、蛋白質(zhì)工程 基于對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的認識，進行分子設(shè)計，通過基因工程途徑定向地改造 蛋白質(zhì)或創(chuàng)造合乎人類需要的新的突變蛋白質(zhì)的理論或?qū)嵺`活動。2、基因組文庫把某種生物的基因組 DNA 切成適當大小，分別與載體結(jié)合，導(dǎo)入宿主細胞，形成克隆。匯集這些克隆，應(yīng)包含基因組中的各種DNA順序，每種順序至少有一份代表。這樣的克隆片段的總匯，

20、叫基因組文庫。3. 多克隆位點一段短的 DNA 序列，含有多種限制性核酸內(nèi)切酶的酶切位點，是外源基因插入的位 點。4. Southern 雜交 利用硝酸纖維素膜或經(jīng)特殊處理的濾紙或尼龍膜具有吸附 DNA 的功能，先作 DNA 片段的凝膠電泳，并將凝膠電泳中的 DNA 區(qū)帶吸附到膜上，然后直接在膜上進行同位 素標記核酸探針與被測樣品之間的雜交，再通過放射自顯影對雜交結(jié)果進行檢測。5. 基因治療 就是指向有功能缺陷的細胞補充相應(yīng)功能基因，以糾正或補償其基因缺陷，從而 達到治療的目的。6. 轉(zhuǎn)基因動物 借助基因工程技術(shù)把外源目的基因?qū)雱游锏纳臣毎⑴咛ジ杉毎蛟缙谂咛ィ?并在受體染色體上穩(wěn)定整合

21、，使之經(jīng)過各種發(fā)育途徑得到能把外源目的基因傳給子代 的個體，叫轉(zhuǎn)基因動物。7. 顯微注射技術(shù) 將在體外構(gòu)建的外源目的基因，在顯微操作儀下用極細的微吸管注射到處于原核 時期的受精卵原核中，外源基因在受精卵繁殖過程中通過 DNA 的復(fù)制而整合到動物基 因組中，再通過胚胎移植技術(shù)將整合有外源基因的受精卵移植到受體的子宮內(nèi)繼續(xù)發(fā) 育，進而得到轉(zhuǎn)基因動物。8. Klenow 片段DNA聚合酶的大亞基，具有 5 3聚合酶和5 3核酸外切酶的作用。9. 熒光定量 PCR 通過熒光染料或熒光標記的特異性探針，對 PCR 產(chǎn)物進行標記跟蹤，實時在線監(jiān) 控反應(yīng)過程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對產(chǎn)物進行分析。以實時檢測外源

22、基因的表達情況。10. 基因芯片將基因文庫的克隆以矩陣的方 式排 列在芯片上，利用不同熒光標記不同組織的 RNA 或cDNA或基因群，與芯片進行雜交，從而確定不同組織的差異表達基因或特定基因群 的方法。11、cDNA文庫將某一個組織中的全部mRNA都反轉(zhuǎn)錄成cDNA，分別與載體連接形成的克隆的集合體。12 、基因槍基因槍法，也稱微粒轟擊法，是將 DNA 包被到金?；蜴u粒中，然后把這些粒子加 速推進靶細胞。13. 融合蛋白 融合表達一般是將克隆化的基因引入某表達載體編碼的高表達蛋白一起融合表達。14. 表達載體 含有基因表達調(diào)控序列能將目的基因在人工控制下置于生物宿主中大量生產(chǎn)的載 體。15.

23、限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶是一類能識別雙鏈 DNA 分子中特異性核苷酸序列并由此特異切 割DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的水解酶。16. Northern 雜交又稱為 RNA 印跡法，是將 RNA 樣品通過瓊脂糖凝膠電泳進行分離，再轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素濾膜上，用同位素或生物素標記的DNA或RNA特異探針針對固定于膜上的 mRNA進行雜交，洗脫除去非特異性雜交信號，對雜交信號進行分析，以確定目的基因的表達組織。17. 逆轉(zhuǎn)錄 PCR以mRNA為模板用逆轉(zhuǎn)錄酶進行的 PCR反應(yīng)。18. 轉(zhuǎn)基因植物 含有外源目的基因并能穩(wěn)定遺傳的植物體。19. 體細胞核移植 將外源目的基因?qū)肽軅鞔囵B(yǎng)的動物體細胞（包括動物成體

24、體細胞、胎體成纖 維細胞等），以這些動物體細胞為核供體，通過顯微操作或電融合方法使核供體與去核 的原核胚細胞或去核的成熟卵母細胞核受體進行細胞重組融合，使其不經(jīng)過有性繁殖 過程。然后再對重組的胚胎進行胚胎移植，進而得到帶有外源基因的轉(zhuǎn)基因動物。20. DNA 改組用DNAasel先將一個DNA片段消化成許多小片段，然后不加引物進行PCR,使得消化后 DNA 小段之間重新按多種組合方式連接重組，然后利用原來整片段DNA 兩端的引物進行加引物的PCR擴增，以便得到一系列改組后的突變DNA序列。21 、多克隆位點：一段短的 DNA 序列，含有多種限制性核酸內(nèi)切酶的酶切位點，是外源基因插入的 位點。2

25、2 、穿梭載體： 能夠在兩種以上的受體細胞中繁殖和擴增的載體。23. DNA 連接酶：DNA連接酶負責雙鏈DNA中相鄰3-0H 與5-磷酸基團之間的磷酸二酯鍵的形成。24. 核酸分子雜交：主要是根據(jù)兩條單鏈DNA（或DNA與RNA）中互補堿基序列能專一配對的原理進行 的。在一定條件下，單鏈 DNA或RNA能與另一條單鏈DNA上互補的堿基形成氫鍵，從 而使兩條單鏈雜交形成雙鏈 DNA分子。通常利用已標記的某一 DNA或RNA片段或合成 一段寡核苷酸作為探針，探測重組 DNA分子中是否有DNA片段與探針發(fā)生同源性雜交， 然后利用放射自顯影方法進行檢測。25. 融合蛋白： 融合表達一般是將克隆化的基

26、因引入某表達載體編碼的高表達蛋白一起融合表達。26. 基因敲除： 利用同源重組的原理，通過載體將外源的失活的基因替換掉內(nèi)源的正常的基因，從 而使基因沉默而不表現(xiàn)突變性狀的方法。27. 反義核酸技術(shù)：利用反義DNA或反義RNA能夠與內(nèi)源mRNAS補雜交，從而抑制內(nèi)源基因表達的技 術(shù)。28. 熒光定量 PCR通過熒光染料或熒光標記的特異性探針，對 PCR 產(chǎn)物進行標記跟蹤，實時在線監(jiān) 控反應(yīng)過程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對產(chǎn)物進行分析。29. 基因治療 就是指向有功能缺陷的細胞補充相應(yīng)功能基因，以糾正或補償其基因缺陷，從而 達到治療的目的。30. 顯微注射技術(shù) 將在體外構(gòu)建的外源目的基因，在顯微操作儀下

27、用極細的微吸管注射到處于原核 時期的受精卵原核中，外源基因在受精卵繁殖過程中通過 DNA 的復(fù)制而整合到動物基 因組中，再通過胚胎移植技術(shù)將整合有外源基因的受精卵移植到受體的子宮內(nèi)繼續(xù)發(fā) 育，進而得到轉(zhuǎn)基因動物。46. 基因組DNA文庫：將某一種基因DNA用適當?shù)南拗泼盖袛嗪?，與載體DNA重組，再全部轉(zhuǎn)化宿主細胞，得到含全部基因組DNA的種群，稱為基因組 DNA文庫。47. DNA的復(fù)性：將變性DNA經(jīng)退火（低于變性溫度約 2530 C的條件下保溫一段時間）處理，使其重新形成雙螺旋結(jié)構(gòu)的過程，稱為DNA的復(fù)性。48. 克隆化：獲取同一拷貝的過程，即無性繁殖。49. Tm加熱DNA溶液，使其對2

28、60nm紫外光的吸收度突然增加，達到其最大值一半時的溫度，就是DNA的變性溫度（融解溫度，Tm）。50. 選擇標記基因： 是指該基因的表達產(chǎn)物對選擇劑產(chǎn)生抗性， 致使轉(zhuǎn)化細胞不受選擇劑影響，能正常生長、發(fā)育、分化，從而把轉(zhuǎn)化體選擇出來的一類基因。51. 基因和基因組：DNA分子中具有特定生物學(xué)功能的片段稱為基因。一個生物體的全部 DNA序列稱為基因組52. 7、分子雜交：不同來源的單鏈核酸 （DNA或 RNA,只要它們具有大致相同的堿基序列， 經(jīng)過退火處理，就能重新形成雜種雙螺旋，這一現(xiàn)象稱為分子雜交。53. 8、生物技術(shù)：也稱生物工程，是人們以現(xiàn)代生命科學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合先進的工程技術(shù)手 段和其

29、他基礎(chǔ)科學(xué)的科學(xué)原理， 按照預(yù)先的設(shè)計， 改造生物體或加工生物原料， 為人類 生產(chǎn)出所需產(chǎn)品或達到某種目的的一門新興的、綜合性的學(xué)科。54. 9、載體：把一個有用的目的DNA片段通過重組 DNA技術(shù)，送進受體細胞中去進行繁殖或表達的工具稱為載體。55. 10、cDNA文庫：即由 mRNA經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄成cDNA,然后來構(gòu)建文庫，構(gòu)建的文庫不包含內(nèi) 含子。56. 11、轉(zhuǎn)化：外源DNA導(dǎo)入宿主細胞的過程稱之為轉(zhuǎn)化。57. 12、黏性末端：指DNA分子在限制性內(nèi)切酶的作用下形成的具有互補堿基的單鏈延伸末 端結(jié)構(gòu)，它們能夠通過互補堿基間的配對而重新連接起來。58. 13、重疊基因：一個基因序列中，含有另

30、一基因的部分或全部序列。59. 14、基因組文庫： 把某種生物基因組的全部遺傳信息通過載體貯存在一個受體菌克隆子 群體中，這個群體即為這種生物的基因組文庫。60. 15、同尾酶：識別位點不同，但切割后產(chǎn)生相同末端的酶，稱為同尾酶。61. 16、酶切位點：DNA在限制性內(nèi)切核酸酶的作用下，使多聚核苷酸鏈上磷酸二酯鍵斷開 的位置被稱為酶切位點。、選擇題1. 2.3.4. 5.6.7.8.9.10.11. 12.1 3.1 4. 15.16.17.18.19.20.21. 22.2 3.2 4. 2 5.26.27.2 8.29.30. 三、填空題 （每空 1 分，共 20分）1. 1972 年2.

31、 10kb, 20kb3. 血液生物反應(yīng)器或生物反應(yīng)器4. 近， 遠5. 4 個， 4個6. 微孔， 外源基因 /DNA7. 插入型 / 置換型 , 插入型 / 置換型8. 不同 , 相同 / 相近 / 不同9. 激活結(jié)構(gòu)域 / 結(jié)合結(jié)構(gòu)域 , 激活結(jié)構(gòu)域 / 結(jié)合結(jié)構(gòu)域10. 毒素蛋白 /Bt/ 毒晶蛋白11. GUS, 熒光素酶 , GFP12. 1973 年13. 重組載體/重組DNA分子14. 基因治療15. 抗蟲轉(zhuǎn)基因作物16. Ti 質(zhì)粒17. 30 40kb, 1-2Mb18. ddNTP, 引物19. 雄原核20. 外源基因 /載體，載體 /外源基因21. 近 , 遠22. 目

32、的基因，表達23. 質(zhì)粒 /噬菌體，噬菌體 /質(zhì)粒24. 10kb， 20kb四、判斷題1. X2. V3. V4. X5. V6. V7. X8. V9. V10. V11. V12. V13. V14. X15. X16. X17. X18. X19. X20. X21. V22. X23. X24. V25. V26. V27. V28. V29. V30. V31. V32. V33. x34. x35. x36. x37. V38. x39. x40. V41. V42. V五、簡答題1. 堿性磷酸酯酶的主要作用是什么？它有哪些應(yīng)用？堿性磷酸酯酶的作用是從 DNA或RNA的三磷酸核苷

33、酸上除去 5磷酸根殘基。主要 用于在DNA 5端進行P32標記以及用于防止酶切片段及載體酶切片段的粘性末端的自 連。2. 什么是蛋白質(zhì)的分泌表達？它有什么優(yōu)缺點？ 是指周質(zhì)蛋白、細胞內(nèi)膜與外膜蛋白等以帶有 N 端信號肽的前體形式首先在細胞 質(zhì)中合成，隨后穿膜運送到周質(zhì)或定位到內(nèi)、外膜上的分泌過程。穿膜過程中，信號 肽被信號肽酶切除。將目的蛋白的基因置于原核蛋白信號肽的序列的下游可能實現(xiàn)分 泌型表達。分泌表達的優(yōu)點：信號肽被切除后的蛋白質(zhì)N末端的氨基酸序列與天然蛋白是一致的，周質(zhì)空間中的蛋白酶活性比細胞質(zhì)中的要低，從而使蛋白質(zhì)較穩(wěn)定地存在于 周質(zhì)中，周質(zhì)中只有少量的細菌蛋白，使分離純化更容易，周

34、質(zhì)空間存在一個氧 化的環(huán)境，使得二硫鍵更容易形成。分泌表達形式的缺點： 相對其它生物細胞而言，大腸桿菌的蛋白分泌機制并不健全。外源真核生物基因 很難在大腸桿菌中進行分泌型表達，少數(shù)外源基因既便能分泌表達，但其表達率通常 要比包涵體方式低很多，因此目前用于產(chǎn)業(yè)化的異源蛋白分泌型重組大腸桿菌盡管有， 但并不普遍。3. 選擇T7噬菌體RNA聚合酶/啟動子的大腸桿菌表達系統(tǒng)有哪些優(yōu)點？1) T7噬菌體RNA聚合酶合成RNA的速度高于大腸桿菌5倍；2) T7 噬菌體 RNA 聚合酶只識別自己的啟動子序列，不啟動大腸桿菌 DNA 任何序列的轉(zhuǎn) 錄；3) T7噬菌體RNA聚合酶對抑制大腸桿菌 RNA聚合酶的

35、抗生素有抗性；4) T7噬菌體RNA聚合酶/啟動子系統(tǒng)在一定條件下，基因表達產(chǎn)物可占細胞總蛋白的25 以上。4. 酵母作為真核基因的高效表達系統(tǒng)有什么優(yōu)缺點？ 克服大腸桿菌表達系統(tǒng)的不足，能繁殖快，高密度發(fā)酵，可以進行蛋白質(zhì)翻譯后 的修飾合加工。缺點：缺乏強有力的啟動子，分泌效率差，表達菌株不夠穩(wěn)定，表達質(zhì)粒易于丟失等。例如甲醇酵母系統(tǒng)，利用甲醇作為唯一碳源。乙醇氧化酶將甲醇氧化為甲醛，乙醇氧化酶的啟動子是強啟動子，編碼乙醇氧化酶的基因是A0X1合A0X2.A0X1基因的表達受甲醇嚴格調(diào)控，誘導(dǎo)表達水平可達30 以上。5. 舉例說明轉(zhuǎn)基因動物在醫(yī)藥科學(xué)中有哪些應(yīng)用。 異種器官移植：豬器官移植到

36、人身上，要克服受體對外源器官的超急性排斥反應(yīng)(HAP)的障礙，克服措施有：降低或消除補體反應(yīng)一一將人的補體調(diào)節(jié)蛋白因子基因CD55，CD59等通過轉(zhuǎn)基因方法導(dǎo)入器官供體動物，含有CD55基因豬的心臟移植到猴體內(nèi)后，豬心臟跳動了 10天；通過基因剔除來減少或改變供體器官的表面抗原，降低免 疫排斥反應(yīng)；使供體器官表達人體免疫抑制因子，使得該種豬器官移植后在移植部位 持續(xù)釋放免疫抑制因子，抑制機體對移植物的免疫排斥，形成局部免疫耐受。轉(zhuǎn)基因動物模型作為人類疾病模型、治療人類疾病的動物模型及新藥的篩選模型， 如老年癡呆癥動物模型的建立：將突變的淀粉樣前提蛋白基因通過轉(zhuǎn)基因方法導(dǎo)入小 鼠，使其在小鼠腦部

37、過量表達。對轉(zhuǎn)基因鼠的腦皮層和海馬部位進行組織切片分析， 發(fā)現(xiàn)大量的老年斑樣結(jié)構(gòu)。6. 艾滋病是由于艾滋病病毒 HIV 感染引起。艾滋病的基因治療可以采取哪些措施？阻斷 HIV 病毒進入進入細胞的策略就是用過量的 CD4 抗原分子和 HIV 的包膜糖 蛋白gp120，可以阻斷和抑制 HIV的感染能力，保護未受感染的 CD4 +細胞。將可溶性 的CD4 +(SCD4)分子的編碼基因?qū)氲襟w外培養(yǎng)的T淋巴細胞中，SCD4分子確實可以阻斷HIV 1的感染。另外，采用單鏈可變區(qū)抗體，負顯性抑制蛋白，RNA誘捕，細胞內(nèi)自殺或RNA干涉等方法均可以從不同方面來開展AIDS的基因治療。7什么是熒光定量 PC

38、R?它有什么應(yīng)用？熒光定量PCR是通過熒光染料或熒光標記的特異性探針，對PCR產(chǎn)物進行標記跟蹤，實時在線監(jiān)控反應(yīng)過程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對產(chǎn)物進行分析。應(yīng)用：定量檢測基因表達的水平。8. 構(gòu)建cDNA文庫時需要用到哪些工具酶？逆轉(zhuǎn)錄酶，DNA聚合酶I或Klenow 片斷，單鏈核酸酶 S1，末端轉(zhuǎn)移酶，限制性 核酸內(nèi)切酶，DNA連接酶9. 簡述進行菌落原位雜交的基本過程。噬菌斑雜交法的基本步驟是將重組噬菌體感染的宿主菌倒在平皿上，待生成噬菌 斑后，將與培養(yǎng)皿一樣大小的硝酸纖維素薄膜蓋在上面，每個噬菌斑中約1 05個噬菌體就影印轉(zhuǎn)移到膜上。膜揭下后，用堿處理除去蛋白質(zhì)外殼，使噬菌體DNA變性并同膜

39、共價結(jié)合，然后用同位素標記的探針與之雜交，放射自顯影檢測。按照膜與培養(yǎng)基上 預(yù)先做好的方法標記，將陽性噬菌斑挑出來擴增。10. 基因芯片的主要應(yīng)用是什么？1) 尋找正常樣本與異常樣本之間在 mRNA表達水平差異的基因(定量和定性);2) 尋找和研究參與某一特定功能的基因或基因群 ;3) 確定目的基因表達的時空性 ;4）測序與點突變的確定。11. 酵母作為真核基因的高效表達系統(tǒng)有什么優(yōu)缺點？ 優(yōu)點：克服大腸桿菌表達系統(tǒng)的不足，能繁殖快，高密度發(fā)酵，可以進行蛋白質(zhì)翻 譯后的修飾合加工。缺點：缺乏強有力的啟動子，分泌效率差，表達菌株不夠穩(wěn)定，表達質(zhì)粒易于丟失 等。例如甲醇酵母系統(tǒng)利用甲醇作為唯一碳源

40、。乙醇氧化酶將甲醇氧化為甲醛，乙醇氧化酶的啟動子是強啟動子，編碼乙醇氧化酶的基因是A0X1合A0X2.A0X1基因的表達受甲醇嚴格調(diào)控，誘導(dǎo)表達水平可達 30 以上。12、基因工程操作過程的主要步驟有哪些？ 分離或合成基因； 通過體外重組將基因插入載體； 將重組DNA導(dǎo)入細胞； 擴增克隆的基因； 篩選重組體克??； 對克隆的基因進行鑒定或測序； 控制外源基因的表達； 得到基因產(chǎn)物或轉(zhuǎn)基因動物、轉(zhuǎn)基因植物13、一種理想的用作克隆載體的質(zhì)粒必須滿足的條件是什么？（1）具有轉(zhuǎn)錄復(fù)制起始點。（ 2）具有抗菌素抗性基因。（ 3）具有若干限制酶切單一識別位點。（4）具有較小的分子量和較高的拷貝數(shù)。14、PC

41、R反應(yīng)系統(tǒng)應(yīng)包括哪幾部分？PCR反應(yīng)系統(tǒng)應(yīng)包括： 耐熱DNA聚合酶（Taq酶）: 模板DNA即待分析的目的 DNA 兩種引物：需要兩種引物，分別位于兩條互補模板DNA鏈的3-端。 四種脫氧核糖核苷酸 緩沖溶液； Mg2+ ；超純水或雙蒸水；15、載體DNA與外源基因片段的連接方法主要有哪幾種？ 粘性末端DNA分子間的連接（包括一種限制性內(nèi)切酶酶切位點的連接和不同限制性 內(nèi)切酶酶切位點的連接） ； 平末端DNA分子間的連接； 同聚物加尾法連接； 人工接頭連接法連接。16、重組子篩選所用的核酸分析法的內(nèi)容是什么？（一）核酸雜交法 菌落印跡原位雜交； 斑點印跡雜交； Southern 印跡雜交(二)

42、 聚合酶鏈式反應(yīng)法(三) DNA測序法17、基因工程研究的理論依據(jù)是什么？( 1)不同基因具有相同的物質(zhì)基礎(chǔ)。( 2)基因是可切割的( 3)基因是可以轉(zhuǎn)移的( 4)多肽與基因之間存在對應(yīng)關(guān)系( 5)遺傳密碼是通用的( 6)基因可以通過復(fù)制把遺傳信息傳遞給下一代18、分離目的基因的途徑有哪些？( 1 )酶切法(2) PCR法( 3 )化學(xué)合成法(4)基因組或cDNA文庫法19、談?wù)勀銓D(zhuǎn)基因食品的看法。轉(zhuǎn)基因食品的優(yōu)點：( 1)可延長蔬菜的貨架期及感官特性。( 2)提高食品的品質(zhì)。( 3)提高食品的營養(yǎng)。( 4)提高肉、奶和畜類產(chǎn)品的數(shù)量和質(zhì)量。( 5)增加農(nóng)作物抗逆能力，增加農(nóng)業(yè)產(chǎn)量。( 6)

43、生產(chǎn)可食性疫苗或藥物( 7)生物功能性食品轉(zhuǎn)基因食品的安全性( 1)目前有一些證據(jù)指出轉(zhuǎn)基因食品具有潛在的危險。( 2)但更多科學(xué)家的試驗表明轉(zhuǎn)基因食品是安全的任何一種轉(zhuǎn)基因食品在上市之前都進行了大量的科學(xué)試驗， 國家和政府有相關(guān)的法律法規(guī) 進行約束， 而科學(xué)家們也都抱有很嚴謹?shù)闹螌W(xué)態(tài)度。 一種食品會不會造成中毒主要是看它在 人體內(nèi)有沒有受體和能不能被代謝掉， 轉(zhuǎn)化的基因是經(jīng)過篩選的、 作用明確的， 所以轉(zhuǎn)基因 成分不會在人體內(nèi)積累，也就不會有害。20、目的基因克隆的基本方法有哪些？(1) 直接從染色體 DNA中分離： 僅適用于原核生物、葉綠體和線粒體基因的分離，較少采用。( 2)人工合成：根

44、據(jù)已知多肽鏈的氨基酸順序， 利用遺傳密碼表推定其核苷酸順序再進行人工合成。 適 應(yīng)于編碼小分子多肽的基因。(3) 從 mRNA合成 cDNA采用一定的方法釣取特定基因的 mRNA再通過逆轉(zhuǎn)錄酶催化合成其互補 DNA( cDNA , 除去RNA鏈后，再用DNA聚合酶合成其互補 DNA鏈，從而得到雙鏈 DNA這一方法通?？傻?到可表達的完整基因。(4) 利用PCR合成：如已知目的基因兩端的序列， 則可采用聚合酶鏈反應(yīng) (polymerase chain reaction,PCR) 技術(shù)，在體外合成目的基因。( 5)從基因文庫中篩選：首先建立基因組或 cDNA文庫，利用探針從文庫中篩選目的克隆。21

45、、請簡述PCR技術(shù)的原理。雙鏈DNA分子首先在高溫下變性分離成兩單鏈 DNA分子，然后降低溫度退火，引物結(jié)合 到模板DNA上,再次升高溫度，從引物開始，在DNA聚合酶作用下進行延伸。 經(jīng)過n次循環(huán)， 使靶DNA擴增10n倍。22、cDNA文庫和基因組文庫的主要差別有哪些？（1） 基因組文庫克隆的是任何基因，包括未知功能的DNA序列；cDNA文庫克隆的是具有 蛋白質(zhì)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)基因，包括調(diào)節(jié)基因。（2） 基因組文庫克隆的是全部遺傳信息，不受時空影響；cDNA文庫克隆的是不完全的編 碼DNA序列，因它受發(fā)育和調(diào)控因子的影響。（3） 基因組文庫中的編碼基因是真實基因，含有內(nèi)含子和外顯子，而cDNA文庫

46、克隆的是 不含內(nèi)含子的功能基因。23、簡述一項可以授予專利的發(fā)明必須滿足的條件。（ 1 ）具有新穎性（ 2）具有創(chuàng)造性（ 3）具有應(yīng)用價值（ 4）在申請專利說明書對發(fā)明做詳盡的描述，使在同一領(lǐng)域的其他人能夠了解執(zhí)行。24、重組 DNA 導(dǎo)入受體細胞方法（ 1 ）化合物誘導(dǎo)法（ 2）電穿孔法（ 3）農(nóng)桿菌介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)化法（葉盤法）（ 4 ）微彈轟擊法（ 5）超聲波處理法（ 6 ）脂質(zhì)體介導(dǎo)法（ 7 ）體內(nèi)注射轉(zhuǎn)化法（ 8）精子介導(dǎo)法25、簡述現(xiàn)代生物技術(shù)在人類生產(chǎn)生活中的作用（ 1 ）改善農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、解決食品短缺 提高農(nóng)作物產(chǎn)量及其品質(zhì)（培育抗逆的作物優(yōu)良品系、 植物種苗的工廠化生產(chǎn) 、提高糧食品質(zhì)

47、、生物固氮，減少化肥使用量 、生物農(nóng)藥，生產(chǎn)綠色食品 ） 發(fā)展畜牧業(yè)生產(chǎn)（動物的大量快速無性繁殖、培育動物的優(yōu)良品系）（ 2 ）食品生產(chǎn)、食品加工、食品檢測（ 3）提高生命質(zhì)量、延長人類壽命（開發(fā)制造奇特而又貴重的新型藥品、疾病的預(yù)防和診斷、基因治療 ）（ 4）解決能源危機、治理環(huán)境污染（解決能源危機、環(huán)境保護 ）（ 5）制造工業(yè)原料、生產(chǎn)貴重金屬（制造工業(yè)原料 、生產(chǎn)貴重金屬 ）六、問答題1. 試比較 Southern 雜交、 Northern 雜交和 Western 雜交的相同點與不同點。Southern blot ， Southern 印跡轉(zhuǎn)移試驗（ Southern blot ）又稱凝

48、膠電泳壓印雜交 技術(shù)，是 Southern于1975 年建立的一種 DNA 轉(zhuǎn)移方法。該法利用硝酸纖維素膜或經(jīng)特殊處理的濾紙或尼龍膜具有吸附 DNA 的功能，先作 DNA 片段的凝膠電泳，并將凝膠電泳 中的DNA區(qū)帶吸附到膜上，然后直接在膜上進行同位素標記核酸探針與被測樣品之間的 雜交，再通過放射自顯影對雜交結(jié)果進行檢測。Northern blot ， Northern 吸印雜交試驗（ Northern blot ） 又稱為 RNA 印跡法， 是對應(yīng)于 Southern blot 而命名的。它的特點是電泳結(jié)果為 RNA 圖譜而不是 DNA 圖譜， 即是將 RNA 樣品通過瓊脂糖凝膠電泳進行分離

49、，再轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素濾膜上，用同位素 或生物素標記的 DNA 或 RNA 特異探針針對固定于膜上的 mRNA 進行雜交，洗脫除去非 特異性雜交信號，對雜交信號進行分析，以確定目的基因的表達組織。Western 雜交: Western blot是指經(jīng)過 SDS-PAGE 分離（聚丙烯酰胺凝膠電泳）的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附 蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或 多肽作為抗原與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過 底物顯色或放射自顯影以檢查電泳分離的特異性的目的基因的表達的蛋白成分

50、。 相同點：雜交流程相同，探針種 類和標記方法相同，檢測方法相同 不同點：原理不同 , Southern 雜交和 Northern 雜交是核酸分子雜交 , 而 Western 雜交是 抗原抗體反應(yīng) .雜交對象不同： Southern blot 是與酶切后電泳的 DNA 片段雜交， Northern blot 是 與電泳后的RNA雜交， Western雜交是與膜上的蛋白質(zhì)雜交。檢測目的不同： Southern blot 是檢測目的基因的序列正確否或目的基因有無導(dǎo)入到受體細胞，Northern blot 和Western雜交是檢測目的基因的表達情況2. 什么是基因敲除？基因敲除的基本流程是怎樣的？

51、 基因敲除是指利用同源重組的原理，通過載體將外源的失活的基因替換掉內(nèi)源的正 常的基因，從而使基因沉默而不表現(xiàn)突變性狀的方法?；玖鞒蹋簶?gòu)建靶標載體一導(dǎo)入ES細胞一ES細胞篩選一帶有目標基因的ES細胞導(dǎo)入囊胚囊胚植入假孕母鼠后代與正常鼠回交雜合體自交鑒定純合體表型，確定 基因功能。3. 試比較Sanger雙脫氧鏈終止法DNA測序與化學(xué)降解法DNA測序的異同點。Sanger 雙脫氧鏈終止法原理：雙脫氧核糖核苷三磷酸（ ddNTP ）不會與正常的脫氧核糖核苷三磷酸（ dNTP） 形成磷酸二酯鍵，從而鏈的隨機終止；建立4個系統(tǒng)，就可得到 4 個套組（ nested sets ）；在一個膠板上同時電泳，

52、就可讀出模板鏈的互補鏈的順序。Maxam-Gilbert 化學(xué)修飾法 將雙鏈或單鏈DNA經(jīng)過不同的化學(xué)方法降解，得到隨機的短的DNA片段，再通過電泳分離讀取順序。每次只能在一個特定的核苷酸處降解：G反應(yīng)：硫酸二甲脂（DMS）使鳥嘌呤N7甲基化；A+G反應(yīng)：甲酸使嘌呤環(huán)上的氮質(zhì)子化導(dǎo)致糖苷鍵被削弱，進而嘌呤環(huán)被嘧啶取代；C+T反應(yīng)：肼能夠裂解嘧啶環(huán)，進而導(dǎo)致其脫落；C反應(yīng)：在一定濃度的條件下，肼只對胞嘧啶起作用相同點： 4個反應(yīng)系統(tǒng)，標記相同，一塊凝膠，4個泳道。不同點：原理不同，反應(yīng)不同，模板鏈不同。4. 基因組文庫構(gòu)建的基本步驟是什么？構(gòu)建基因組文庫需要用到哪些載體？ 步驟 載體的制備； 高

53、純度大分子量基因組DNA （ High molecular weight DNA, HMWDNA）的提取； HMW DNA 的部分酶切與脈沖電泳分級分離（ PFGE size selection）； 載體與外源片段的連接與轉(zhuǎn)化或侵染宿主細胞； 重組克隆的挑取和保存。載體的選擇：入噬菌體，YAC,BAC,粘粒等。5. 腫瘤的產(chǎn)生可能是抑癌基因突變或表達失誤造成，也可能是原癌基因突變或表達失 誤造成。對腫瘤患者進行基因治療時，應(yīng)該采取哪些策略？ 1）增強機體對腫瘤細胞的免疫能力2 ）植入敏感或自殺基因到腫瘤細胞。所謂自殺基因治療，就是將某些細菌、病毒和真菌 中特有的藥物敏感基因?qū)肽[瘤細胞，通過此

54、基因編碼的特異性酶類將原先對細胞無毒 或毒性極低的藥物前體在腫瘤細胞內(nèi)代謝成有毒性的產(chǎn)物，以達到殺死腫瘤細胞的目的。3） 阻斷癌基因的表達，主要用反義RNA法，RNA干涉技術(shù)，核酶技術(shù)等，如 Myc基因的 反義RNA片段。4）應(yīng)用腫瘤抑制基因如 p53 。人類惡性腫瘤中 p53 基因突變率較高，用野生型的 p53 基 因治療腫瘤在模型動物上取得了顯著的成功。5 ）誘導(dǎo)正常組織產(chǎn)生抗腫瘤物質(zhì)6 ）保護正常組織免受化療的影響一一耐藥基因治療。多藥耐受MDR是指腫瘤細胞接觸某一種抗癌藥物產(chǎn)生耐藥的同時，也對其他結(jié)構(gòu)和功能不同的藥物產(chǎn)生交叉耐藥性。耐藥 基因治療是指將一些耐藥基因轉(zhuǎn)移至造血干細胞，以降低化療藥物對骨髓的毒性，這樣 就可以用高劑量的藥物殺死腫瘤細胞而不破壞骨髓細胞。7）抑制腫瘤血管生成。腫瘤的生長和存活依賴于生成的血管為它所提供的氧氣和營養(yǎng)物 質(zhì)，沒有血管的生成，腫瘤最大也只能長至1 - 2mm3。通過阻斷腫瘤血管的生成來