2019年植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)講義2.doc

1、實(shí)驗(yàn)一植物組織滲透勢(shì)的測(cè)定（質(zhì)壁分離法）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模河^察植物組織在不同濃度溶液中細(xì)胞質(zhì)壁分離的產(chǎn)生過(guò)程及其用于測(cè)定植物組織滲透勢(shì)的方法。原理當(dāng)植物組織細(xì)胞內(nèi)的汁液與其周圍的某種溶液處于滲透平衡狀態(tài)，植物細(xì)胞內(nèi)的壓力勢(shì)為零時(shí)，細(xì)胞汁液的滲透勢(shì)就等于該溶液的滲透勢(shì)。該溶液的濃度稱為等滲濃度 。當(dāng)用一系列梯度濃度溶液觀察細(xì)胞質(zhì)壁分離現(xiàn)象時(shí)，細(xì)胞的等滲濃度將介于剛剛引起初始質(zhì)壁分離的濃度和尚不能引起質(zhì)壁分離的濃度之間的溶液濃度。代入公式即可計(jì)算出滲透勢(shì)。器材與試劑：1顯微鏡、載玻片及蓋玻片、鑷子、刀片2 100mL 濃度為 1mol/L 蔗糖溶液 : 用蒸餾水配成0.1、 0.15、 0.20、 0.2

2、5、0.30、0.35、0.40、 0.45、 0.50mol/L 的蔗糖溶液各50mL 。稱 34.23g 蔗糖用蒸餾水配成100ml ，其濃度為1mol/L（母液）。再配制成下列各種濃度：0.50mol/L ：吸母液25ml+ 水 25ml0.45mol/L ：吸母液22.5ml+ 水 27.5ml0.40mol/L ：吸母液20.0ml+ 水 30.0ml0.35mol/L ：吸母液17.5ml+ 水 32.5ml0.30mol/L ：吸母液15.0ml+ 水 35.0ml0.25mol/L ：吸母液12.5ml+ 水 37.5ml0.20mol/L ：吸母液10.0ml+ 水 40.0

3、ml0.15mol/L ：吸母液7.5ml+ 水 42.5ml0.10mol/L ：吸母液5.0ml+ 水 45.0ml3實(shí)驗(yàn)材料洋蔥鱗莖實(shí)驗(yàn)步驟：1將帶有色素的植物組織（葉片），一般選用有色素的洋蔥鱗片的外表皮、紫鴨跖草、苔蘚、紅甘藍(lán)或黑藻、 絲狀藻等水生植物，也可用蠶豆、 玉米、 小麥等作物葉的表皮。1撕取下表皮，迅速分別投入各種濃度的蔗糖溶液中，使其完全浸入，5 10 分鐘。2從 0.5mol/L開(kāi)始依次取出表皮薄片放在滴有同樣溶液的載玻片上，蓋上蓋玻片，于低倍顯微鏡下觀察，如果所有細(xì)胞都產(chǎn)生質(zhì)壁分離的現(xiàn)象，則取低濃度溶液中的制片作同樣觀察，并記錄質(zhì)壁分離的相對(duì)程度。3實(shí)驗(yàn)中必須確定一個(gè)

4、引起半數(shù)以上細(xì)胞原生質(zhì)剛剛從細(xì)胞壁的角隅上分離的濃度，和不引起質(zhì)壁分離的最高濃度。4在找到上述濃度極限時(shí)，用新的溶液和新鮮的葉片重復(fù)進(jìn)行幾次，直至有把握確定為止。在此條件下，細(xì)胞的滲透勢(shì)與兩個(gè)極限溶液濃度之平均值的滲透勢(shì)相等。將結(jié)果記錄下表中。測(cè)出引起質(zhì)壁分離剛開(kāi)始的蔗糖溶液最低濃度和不能引起質(zhì)壁分離的最高濃度平均值之后，可按下列公式計(jì)算在常壓下該組織細(xì)胞質(zhì)液的滲透勢(shì)。s RTiCs 為細(xì)胞滲透勢(shì)。R 為氣體常數(shù) =0.083 105/L P /mol K 。T 為絕對(duì)溫度，單位K ，即 273 +t， t 為實(shí)驗(yàn)濕度。I 為解離系數(shù)，蔗糖為1。C 為等滲溶液的濃度，單位為mol/L 。則：s

5、 =0.083 105 (273 +t) 1 C作業(yè)與思考題：1 繪制細(xì)胞質(zhì)壁分離前后的細(xì)胞圖。2 計(jì)算植物細(xì)胞的滲透勢(shì)。實(shí)驗(yàn)二植物組織水勢(shì)的測(cè)定（小液流法）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模毫私庵参锝M織中水分狀況的另一種表示方法及用于測(cè)定的方法和它們的優(yōu)缺點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)原理：植物組織的水分狀況可用水勢(shì)來(lái)表示。植物體細(xì)胞之間、組織之間以及植物體與環(huán)境之間的水分移動(dòng)方向都由水勢(shì)差決定。將植物組織放在已知水勢(shì)的一系列溶液中，如果植物的2水勢(shì)小于溶液的滲透勢(shì)（溶質(zhì)勢(shì)），則組織吸水而使溶液濃度變大；反之，則植物細(xì)胞內(nèi)水分外流而使溶液濃度變??；若植物組織的水勢(shì)與溶液的滲透勢(shì)相等，則二者水分保持動(dòng)態(tài)平衡，所以外部溶液濃度不變，而溶液的

6、滲透勢(shì)即等于所測(cè)植物的水勢(shì)。組織的吸水或失水會(huì)使溶液的濃度、密度、電導(dǎo)率以及組織本身的體積與質(zhì)量發(fā)生變化。根據(jù)這些參數(shù)的變化情況可確定與植物組織等水勢(shì)的溶液?？梢岳萌芤旱臐舛炔煌浔戎匾膊煌脑韥?lái)測(cè)定試驗(yàn)前后溶液的濃度的變化，然后根據(jù)公式計(jì)算滲透勢(shì)。儀器藥品：試管、毛細(xì)滴管、移液管、剪刀、鑷子、甲烯藍(lán)、菠菜葉片操作步驟：1首先配制一系列不同濃度的蔗糖溶液（ 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mol/L ）各 10 ml 注入 8 支試管中，各管都加上塞子，并編號(hào)。按編號(hào)順序在試管架上排成一列，作為對(duì)照組。2另取 8 支試管，編好號(hào)，按順序放在試管架上，作為試驗(yàn)

7、組。然后由對(duì)照組的各試管中分別取溶液 4ml 移入相同編號(hào)的試驗(yàn)組試管中，再將各試管都加上塞子。3用剪刀將菠菜葉剪成約0.5cm2 大小相等的小塊6080 片。向試驗(yàn)組的每一試管中各加相等數(shù)目（約 10 片）的葉片小塊，塞好塞子，放置30 分鐘，在這段時(shí)間內(nèi)搖動(dòng)數(shù)次，到時(shí)間后，用大頭針沾取少許甲烯藍(lán)粉末加入每一試管中, 并振蕩 , 此時(shí)溶液呈藍(lán)色。4用毛細(xì)滴管從試驗(yàn)組的各試管中依次吸取著色的液體少許，然后伸入對(duì)照組的相同編號(hào)試管的液體的中部，緩慢從毛細(xì)滴管尖端橫向放出一滴藍(lán)色試驗(yàn)溶液，并觀察小液滴移動(dòng)的方向。 如果有色液滴向上移動(dòng)，說(shuō)明溶液從細(xì)胞液中吸出水分而被沖淡，比重比原來(lái)小了；如果有色液

8、向下移動(dòng)，則說(shuō)明細(xì)胞從溶液中吸了水，溶液變濃，比重變大；如果液滴不動(dòng)，則說(shuō)明試驗(yàn)溶液的密度等于對(duì)照溶液，即植物組織的水勢(shì)等于溶液的滲透勢(shì)。記錄液滴不動(dòng)的試管中蔗糖溶液的濃度。重復(fù)測(cè)定一次。按wRTiC 計(jì)算水勢(shì)。式中w 為細(xì)胞水勢(shì)。作業(yè)與思考題：3 計(jì)算植物細(xì)胞的水勢(shì)。34 為什么藍(lán)色試驗(yàn)液滴不動(dòng)說(shuō)明試驗(yàn)溶液的密度等于對(duì)照溶液?實(shí)驗(yàn)三 葉綠體色素的提取、分離及理化性質(zhì)的鑒定（紙層析法）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模毫私馊~綠素提取分離的原理以及它們的光學(xué)特性在光合作用中的意義。實(shí)驗(yàn)原理：葉綠體色素是植物吸收太陽(yáng)光能進(jìn)行光合作用的重要物質(zhì)，主要由葉綠素a、葉綠素 b、胡蘿卜素和葉黃素組成。從植物葉片中提取和分離色素是

9、對(duì)其認(rèn)識(shí)和了解的前提。利用葉綠體色素能溶于有機(jī)溶劑的特性，可用丙酮提取。 并可根據(jù)它們?cè)诓煌袡C(jī)溶劑中的溶解度不同以及在吸附劑上的吸附能力不同, 將它們彼此分離開(kāi)。分離色素的方法有多種，紙層析是其中最簡(jiǎn)便的一種。當(dāng)溶劑不斷地從層析濾紙上流過(guò)時(shí)，由于混合物中各成分在兩相（即流動(dòng)相和固定相）間具有不同的分配系數(shù)，它們的移動(dòng)速度不同，使樣品中的混合物得到分離。器材與試劑：大試管、臺(tái)天平、研缽、量筒、燒懷、漏斗、軟木層、新華濾紙；丙酮、四氯化碳、無(wú)水硫酸鈉、碳酸鈣、石英砂操作步驟1稱取新鮮葉子2 g，放入研缽中加丙酮5ml ，少許碳酸鈣和石英砂，研磨成勻漿，再加丙酮5 ml ，然后以漏斗過(guò)濾之，即為色

10、素提取液。2取準(zhǔn)備好的濾紙條 （寬 2 cm），將其一端剪去兩側(cè)，中間留一長(zhǎng)約1.5cm，寬約 0.5cm的窄條，如圖。43用毛細(xì)管取葉綠素溶液點(diǎn)于窄條的上方，注意一次所點(diǎn)溶液不可過(guò)多。如色素過(guò)淡，用電吹風(fēng)吹干后再點(diǎn)1一2次。4在大試管中加入四氯化碳3 5ml 及少許無(wú)水硫酸鈉。然后將濾紙條固定于軟木塞上，插入試管內(nèi)，使窄端浸入溶劑中（色素點(diǎn)要略高于液面，濾紙條邊緣不可碰到試管壁），蓋緊軟木塞，直立于陰暗處進(jìn)行層析。5經(jīng)過(guò) 0.5 一 1 小時(shí)后，觀察分離后色素帶的分布。最上端橙黃色為胡蘿卜素，其次黃色為葉黃素，再下面藍(lán)綠色為葉綠素a，最后的黃綠色為葉綠素b。6、銅代反應(yīng)取上述色素丙酮提取液少

11、許于試管中, 1 滴 1 滴加濃鹽酸 ,直至溶液出現(xiàn)褐綠色 , 此時(shí)葉綠素分子已遭破壞, 形成去鎂葉綠素。然后加醋酸銅晶體少許, 慢慢加熱溶液,則又產(chǎn)生鮮亮的綠色。此即形成了銅代葉綠素。作業(yè)與思考題：1 繪制葉綠體色素的柱層析圖譜2 提取葉綠素時(shí)為什么要加入少量CaCO3, 加多了會(huì)出現(xiàn)什么問(wèn)題?實(shí)驗(yàn)四葉綠素 a 和 b 含量的測(cè)定（分光光度法）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模菏煜ぴ谖唇?jīng)分離的葉綠體色素溶液中測(cè)定葉綠素a 和 b 的方法及其計(jì)算。實(shí)驗(yàn)原理：如果混合液中的兩個(gè)組分，它們的光譜吸收峰雖有明顯的差異，但吸收曲線彼此又有些重疊；在這種情況下要分別測(cè)定兩個(gè)組分，可根據(jù)Lambert-Beer 定律，通過(guò)代數(shù)方

12、法，計(jì)5算一種組分由于另一種組分存在時(shí)對(duì)吸光度的影響，最后分別得到兩種組分的含量。如圖葉綠素 a 和 b 的吸收光譜曲線，葉綠素 a 的最大吸收峰在 663nrn，葉綠素 b 在645nrn，吸收曲線彼此又在重疊。根據(jù) Lambert-Beer 定律，最大吸收光譜峰不同的兩個(gè)組分的混合液，它們的濃度C 與吸光度 A 之間有如下的關(guān)系：A 1=Ca ka1+Cb kb1A 2=Ca ka2+Cb kb2式中： Ca 為組分 a 的濃度， g L 。Cb 為組分 b 的波度， g L 。A l 為在波長(zhǎng) 1（即組分a 的最大吸收峰波長(zhǎng)）時(shí)，混合液的吸光度A 值。A 2 為在波長(zhǎng) 2（即組分b 的最

13、大吸收峰波長(zhǎng)）時(shí)，混合液的吸光度A 值。kal 為組分 a 的比吸收系數(shù)，即組分a 當(dāng)濃度為1g/L 時(shí)，于波長(zhǎng) 1 時(shí)的吸光度A 值。kb2 為組分 b 的比吸收系數(shù)，即組分b 當(dāng)濃度為1g L 時(shí)，于波長(zhǎng) 2 時(shí)的吸光度A 值。ka2 為組分 a（濃度為1 g/L ）在波長(zhǎng) 2 時(shí)的吸光度A 值。Kb1 為組分 b（濃度為1 g/L ）在波長(zhǎng) 1 時(shí)的吸光度A 值。從文獻(xiàn)中可以查得葉綠素a 和 b 的 80%丙酮溶液，當(dāng)濃度為1g/L 時(shí)，比吸收系數(shù)k 值如下：波長(zhǎng)（ nm）葉綠素 a葉綠素 b66382.049.27664516.7545.60將表中數(shù)值代入上式（1）、（ 2），則得：A

14、 663=82.04 Ca+9.27 CbA 645=16.75 Ca+45.60 Cb經(jīng)過(guò)整理之后，即得到下式：Ca=0.012 7A 6632.69A 645(3)Cb=22.9A 645 4.68A 663(4)CT=Ca+Cb=8.02A 663+20.21A 645(5)（ 5）式中 CT 為總?cè)~綠素濃度，單位為mg/L 。利用上面（ 3）、（4）、（ 5）式，即可計(jì)算出葉綠素a 和 b 及總?cè)~綠素的濃度。注：一般大學(xué)教學(xué)實(shí)驗(yàn)室所用的人光光度計(jì)多為721 型，屬低級(jí)類型，其單色光的半波寬值要比中級(jí)類型的751 型大得多，而葉綠素a 和 b 吸收峰的波長(zhǎng)相差僅18nm（663645nm

15、），難以達(dá)到精確測(cè)定。此外有時(shí)還由于儀器本身的標(biāo)稱波長(zhǎng)與實(shí)際波長(zhǎng)不符，測(cè)定的正確性就更差了。根據(jù)公式計(jì)算往往會(huì)得到葉綠素a b 值小于1，這就不很奇怪了。除向?qū)W生說(shuō)明其中原因外，還可以在實(shí)驗(yàn)前對(duì)儀器的波長(zhǎng)進(jìn)行校正，使標(biāo)稱波長(zhǎng)與實(shí)際波長(zhǎng)一致。校正可用純的葉綠素a 和 b 進(jìn)行，分別在波長(zhǎng) 650 670nm 和 630 650nm 之間，每隔1 2nm 測(cè)定葉綠素 a 或 b 的吸光度 A ，以確定葉綠素a 和 b 的吸收峰的波長(zhǎng)。如果測(cè)得的峰值與文獻(xiàn)上的峰值 663nm 和 645nm 不同，可按照儀器說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行校正，或者更方便的方法可以打開(kāi)儀器蓋子，松動(dòng)波長(zhǎng)刻度盤(pán)緊固螺絲，調(diào)節(jié)刻度盤(pán)使波

16、長(zhǎng)至正確值，而后旋緊螺絲復(fù)原儀器。為校正儀器波長(zhǎng)所需的葉綠素a 和 b 的用量是很少的，用紙層析法很快就能分離制得。取植物葉子約 1g，用乙醚提取葉綠體色素， 再用毛細(xì)管將色素溶液畫(huà)在3mm 厚濾紙上使成一直線，為使分離效果好，一般重復(fù)點(diǎn)樣一次即可。然后于密閉容器中進(jìn)行上行層析，溶劑為含 0.5%丙醇的石油醚。層析結(jié)束，用剪刀小心地剪下藍(lán)綠色的葉綠素a 和黃綠素的葉綠素 b，注意剪時(shí)盡量避開(kāi)有可能遭污染的地區(qū)。最后分別浸于80%丙酮中，洗下葉綠素a 和b。器材與試劑：1 高級(jí)型分光光度計(jì), 離心機(jī) , 臺(tái)天平 , 剪刀 , 研缽 , 漏斗 ,移液管72 實(shí)驗(yàn)試劑丙酮 , 碳酸鈣3 實(shí)驗(yàn)材料菠菜

17、葉片實(shí)驗(yàn)步驟：1. 色素的提取取新鮮葉片 , 剪去粗大的葉脈并剪成碎塊, 稱取 0.5g 放入研缽中加 純丙酮 5mL, 少許碳酸鈣和石英砂 , 研磨成勻漿 , 再加 80%丙酮 5mL ，將勻漿轉(zhuǎn)入離心管 , 并用適量 80%丙酮洗滌研缽 , 一并轉(zhuǎn)入離心管 , 離心后棄沉淀 , 上清液用 80%丙酮定容至 20mL 。2. 測(cè)定光密度取上述色素提取液1mL, 加 80%丙酮 4mL 稀釋后轉(zhuǎn)入比色杯中, 以 80%丙酮為對(duì)照 , 分別測(cè)定663nm、 645nm 處的光密度值。3. 按公式綠素 a+葉綠素 b 的濃度。再根據(jù)稀釋倍數(shù)分別計(jì)算每克鮮重葉片中色素的含量 。注意事項(xiàng)：1由于植物葉

18、子中含有水分, 故先用純丙酮進(jìn)行提取, 以使色素提取液中丙酮的最終濃度近似80%。2由于葉綠素a、葉綠素 b 的吸收峰很陡, 儀器波長(zhǎng)稍有偏差, 就會(huì)使結(jié)果產(chǎn)生很大的誤差 , 因此最好能用波長(zhǎng)較正確的高級(jí)型分光光度計(jì)。作業(yè)：計(jì)算葉綠素a 和葉綠素 b 的濃度實(shí)驗(yàn)五 過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定比色法實(shí)驗(yàn)?zāi)康模菏煜y(cè)定過(guò)氧化物酶活性的常用比色法及靈敏度較高的化學(xué)發(fā)光法及其測(cè)定原理。實(shí)驗(yàn)原理：過(guò)氧化物酶廣泛分布于植物的各個(gè)組織器官中。在有過(guò)氧化氫存在下，過(guò)氧化物酶能使愈創(chuàng)木酚氧化，生成茶褐色物質(zhì)，此產(chǎn)物在470 nm 處有最大光吸收值，故可通過(guò)測(cè) 470 nm 下的吸光度變化測(cè)定過(guò)氧化物酶的活性。器材與試

19、劑：1.實(shí)驗(yàn)儀器：分光光度計(jì)、離心機(jī)、秒表、研缽、天平2. 實(shí)驗(yàn)試劑（ 1） 100mmol/L 磷酸緩沖液（pH=6.0 ）： 0.2M 的 Na2HPO412.3mL和 NaH2PO487.7mL混合后8稀釋 2倍（ 2）反應(yīng)混合液：100mmol/L磷酸緩沖液 (pH6.0)50ml 于燒杯中，加入愈創(chuàng)木酚28 l ，于磁力攪拌器上加熱攪拌，直至愈創(chuàng)木酚溶解，待溶液冷卻后，加入30%過(guò)氧化氫 19l ，混合均勻，保存于冰箱中。3. 實(shí)驗(yàn)材料任何植物材料實(shí)驗(yàn)步驟：（ 1）粗酶液的提取稱取植物材料1g, 加 20mmol/LKH2PO45mL,于研缽中研磨成勻漿, 以 4000r/min 離

20、心 15min, 收集上清液保存在冷處 , 所得殘?jiān)儆?5mLKH2PO4 溶液提取一次 , 合并兩次上清液。（ 2）酶活性的測(cè)定取光徑 1cm 比色杯 2 只，于 1 只中加入反應(yīng)混合液3mL 和磷酸緩沖液 1mL（或加熱煮沸5 min的酶液），作為校零對(duì)照，另1 只中加入反應(yīng)混合液3ml，上述酶液 1ml（如酶活性過(guò)高可稀釋之），立即開(kāi)啟秒表記錄時(shí)間，于分光光度計(jì)上在波長(zhǎng)470nm下測(cè)量吸光度值，每隔0.5min （ 30S）讀數(shù)一次，連續(xù)讀數(shù)3 次。結(jié)果計(jì)算：以每分鐘內(nèi)A470 變化 0.01 為 1 個(gè)過(guò)氧化物酶活性單位（U ）式中： A470 反應(yīng)時(shí)間內(nèi)吸光度的變化；W 植物鮮重（

21、 g）；t 反應(yīng)時(shí)間（ min ）；VT 提取酶液總體積（mL ）；VS 測(cè)定時(shí)取用酶液體積（mL ）。注意事項(xiàng)酶液的的提取過(guò)程要盡量在低溫溫條件下進(jìn)行。H2O2 要在反應(yīng)開(kāi)始前加，不能直接加入。作業(yè)：計(jì)算過(guò)氧化物酶的活性。實(shí)驗(yàn)六 種子活力的快速測(cè)定9紅墨水染色法種子成熟采收之后,由于貯藏的條件不合適,往往會(huì)使種子的品質(zhì)變劣, 影響種子的發(fā)芽、幼苗的健壯生長(zhǎng),最終影響產(chǎn)量。這是由于貯藏條件不利, 使細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和生理功能受到損害所致。 以下幾種方法,能快速測(cè)定種子的正常生理代謝功能是否受到損害,胚是否存活,以了解種子是否還具有發(fā)芽的潛力。實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖煜しN子活力快速測(cè)定的各種方法。實(shí)驗(yàn)原理凡生活細(xì)胞

22、的原生質(zhì)膜具有選擇性吸收物質(zhì)的能力,而死的種胚細(xì)胞原生質(zhì)膜喪失這種能力 ,于是染料便能進(jìn)入死細(xì)胞而染色。器材與試劑1. 實(shí)驗(yàn)儀器 恒溫箱 , 燒杯 , 培養(yǎng)皿 , 漏斗 , 鑷子2. 實(shí)驗(yàn)試劑 5% 紅墨水3. 實(shí)驗(yàn)材料 大麥、小麥、秈谷或粳谷的種子實(shí)驗(yàn)步驟1.浸種將待測(cè)種子在30 35溫水中浸種米5h, 粳谷 2h) 。2.染色取已吸脹的種子200 粒 ,沿胚的中線切為兩半,將一半置于培養(yǎng)皿中,加入 5%紅墨水，染色后倒去紅墨水,用水沖洗多次 ,至沖洗液無(wú)色為止。檢查種子死活, 凡種胚不著色或著色很淺的為活種子;凡種胚與胚乳著色程度相同的為死種子。可用沸水殺死的種子作對(duì)照觀察。3. 計(jì)數(shù)種胚

23、不著色或著色淺的種子數(shù), 算出活種子百分率。作業(yè)：1、 計(jì)算活種子百分率。2、 思考還有其他的什么方法可以測(cè)量種子的活力。10實(shí)驗(yàn)七赤霉素3 的生物鑒定（水稻幼苗第二葉葉鞘伸長(zhǎng)的“點(diǎn)滴法”）實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)并掌握利用水稻幼苗第二葉葉鞘伸長(zhǎng)的“點(diǎn)滴法”測(cè)定赤霉素3) 的方法，了解赤霉素對(duì)葉鞘伸長(zhǎng)的作用實(shí)驗(yàn)原理赤霉素能刺激幼嫩禾本科植株的節(jié)間伸長(zhǎng)。將GA3 點(diǎn)滴于水稻胚芽鞘與第一葉之間，在一定的濃度范圍內(nèi)，第二葉葉鞘的伸長(zhǎng)與赤霉素濃度的對(duì)數(shù)成正比。通過(guò)測(cè)定第二葉葉鞘伸長(zhǎng)來(lái)進(jìn)行赤霉素含量的生物測(cè)定。器材與試劑1. 實(shí)驗(yàn)儀器 光照培養(yǎng)室、移液管 , 洗耳球 , 高壓滅菌鍋 , 小鑷子 , 刻度尺 , 移液

24、槍2.實(shí)驗(yàn)試劑飽和漂白粉溶液,瓊脂 , 500 mol/LGA3 母液（稱取8.6mgGA3 (GA3 相對(duì)分子質(zhì)量 :346.38)溶于少量無(wú)水或95%乙醇中，再用水濕稀釋至50ml；用蒸餾水稀釋母液配制 0.1 、 1、 10、 100 mol/L 的標(biāo)準(zhǔn)溶液）3. 實(shí)驗(yàn)材料 水稻種子實(shí)驗(yàn)步驟1. 水稻滅菌 30min （飽和漂白粉溶液） , 自來(lái)水沖洗。將種子置于墊有濾紙的培養(yǎng)皿中, 加水淹沒(méi)種子 , 在 30培養(yǎng)箱中黑暗萌發(fā) 2d, 此時(shí)大部分種子開(kāi)始露白。2. 配制 0.9%的瓊脂 , 高壓滅菌 , 倒入直徑 9cm 的培養(yǎng)皿中。3.選取芽長(zhǎng)2mm左右的種子 ,胚芽朝上且偏于一側(cè)排放

25、在培養(yǎng)皿中的瓊脂上,每皿 30粒。 在 30、光強(qiáng)5000-10000lx的培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室中,連續(xù)光照培養(yǎng),注意保持濕度。4.2d 后 ,選取剛伸出第二葉葉尖的幼苗（苗長(zhǎng)0.9-1.0cm )。用微量移液器將1 L不同濃度的GA3 標(biāo)準(zhǔn)溶液分別小心滴于幼苗的偏于一側(cè)的胚芽鞘與第一葉葉腋間與第一葉11之間 , 主意要使小液滴正好停留在胚芽鞘與第一葉之間， 不使滑落 , 如小液滴滑落 , 立即拔除這株幼苗。5 幼苗繼續(xù)培養(yǎng)3d 后 ,測(cè)定第二葉葉鞘長(zhǎng)度6.以 GA3 標(biāo)準(zhǔn)濃度的對(duì)數(shù)與葉鞘長(zhǎng)度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,可以看到在一定濃度范圍內(nèi),第二葉葉鞘的伸長(zhǎng)與GA3 濃度的對(duì)數(shù)成比例。將待測(cè)溶液處理后測(cè)得的葉

26、鞘伸長(zhǎng)數(shù)值,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得其相應(yīng)的GA3濃度 ,即算得樣品中 GA3 含量。注意事項(xiàng)：1. 用 GA3 處理幼苗時(shí) , 一定要使液滴停留于胚芽鞘和葉腋間。2. GA3 母液的配制要精確 , 稀釋也要準(zhǔn)確。作業(yè)：1、 繪制 GA3 標(biāo)準(zhǔn)濃度的對(duì)數(shù)與葉鞘長(zhǎng)度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2、 分別采用小麥和水稻為實(shí)驗(yàn)材料，比較和分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)八植物體內(nèi)丙二醛含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)?zāi)康模菏煜y(cè)定丙二醛（MDA）含量的常用方法12實(shí)驗(yàn)原理：植物器官在逆境條件下或衰老時(shí),往往發(fā)生膜脂過(guò)氧化作用,丙二醛是其產(chǎn)物之一,通常將其作為脂質(zhì)過(guò)氧化指標(biāo),用于表示細(xì)胞膜脂過(guò)氧化程度和植物對(duì)逆境條件反應(yīng)的強(qiáng)弱。在酸性和高溫的條件下,丙二

27、醛可與 硫代巴比妥酸 (TBA) 在酸性條件下加熱與組織中的丙二醛產(chǎn)生顯色反應(yīng)，生成紅棕色 的三甲川（ 3、 5、 5三甲基惡唑2、 4二酮），三甲川最大的吸收波長(zhǎng)在532nm。但是測(cè)定植物組織中丙二醛(MDA)時(shí)受多種物質(zhì)的干擾，其中最主要的是可溶性糖， 糖與硫代巴比妥酸顯色反應(yīng)產(chǎn)物的最大吸收波長(zhǎng)在450nm處，在 532nm處也有吸收。植物遭受干旱、 高溫、 低溫等逆境脅迫時(shí)可溶性糖增加，因此測(cè)定植物組織中丙二醛與硫代巴比妥酸反應(yīng)產(chǎn)物含量時(shí)一定要排除可溶性糖的干擾。低濃度的鐵離子能顯著增加硫代巴比妥酸與蔗糖或丙二醛顯色反應(yīng)物在532、 450nm處的吸光度值， 所以在蔗糖、 丙二醛與硫代巴比妥酸顯色反應(yīng)中需要有一定的鐵離子，通常植-1-13物組織中鐵離子的含量為100 300gg DW，根據(jù)植物樣品量和提取液的體積，加入 Fe 的終濃度為 0.5nmol L 1 。在 532nm和 450nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，即可計(jì)算出丙二醛含量。器材與試劑：1. 實(shí)驗(yàn)儀器 分光光度計(jì) , 離心機(jī) , 研磨器 , 恒溫水浴 , 具塞試管，電爐。2. 實(shí)驗(yàn)試劑 10%三氯乙酸 , 石英砂 , 硫代巴比妥酸 （TBA）溶液（用 10%TCA配置 0.6%的 TBA溶液）3. 實(shí)驗(yàn)材料 植物葉片。實(shí)驗(yàn)