血凝與血凝抑制試驗(yàn)

1、1.了解做試驗(yàn)的目的； 2.試驗(yàn)器材與試劑； 3.血凝試驗(yàn)的原理； 4.血凝抑制試驗(yàn)原理； 5.血凝試驗(yàn)的操作方法；（紅細(xì)胞的配制） 6.血凝抑制的操作方法；（四單位的配制） 7.掌握試驗(yàn)的結(jié)果的判定。 血凝試驗(yàn)與血凝抑制實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?用已知抗原來(lái)檢測(cè)被檢血清中有無(wú)相應(yīng) 的特異性抗體和滴定該特異性抗體的水 平。 實(shí)驗(yàn)器材： 微量移液器 普通離心機(jī) 微量振蕩器 禽用采血器 96孔v型血凝反應(yīng)板 試驗(yàn)主要試劑： 新城疫標(biāo)準(zhǔn)抗原、陽(yáng)性血清、陰性血清與待檢血清 1%雞紅細(xì)胞懸液 四單位抗原 生理鹽水 抗凝劑 血凝試驗(yàn)原理： 二、血凝試驗(yàn)（HA)實(shí)驗(yàn)原理 一些病毒表面有血凝素，能使雞、鵝或人的紅細(xì)胞發(fā) 生

2、凝集，叫做血凝試驗(yàn)。 + + 四、血凝試驗(yàn)操作步驟 (1)先做標(biāo)記；(2)按表中順序加樣。 倒倒 加加 血凝試驗(yàn)操作步驟： 1%紅細(xì)胞的配制： 1.為避免有些雞只的紅細(xì)胞有自凝現(xiàn)象，因此配制1% 紅細(xì)胞懸液時(shí)應(yīng)最好選擇采取3只SPF雞或未進(jìn)行過(guò) 任何免疫過(guò)的成年公雞血液。（抗凝劑與血液比例為 1:4） 2.采血完畢后將血加入至10ml離心管中，加3-4倍體積 生理鹽水以20003000r/min，510min離心3-5次。 3.棄去上液和紅細(xì)胞上層的白細(xì)胞薄膜，再加入十倍以 上血量的PBS液，上下緩慢顛倒（切忌用力過(guò)大使 紅細(xì)胞破裂），使其充分混勻，再離心棄去上清液， 反復(fù)幾次直至上清液清亮透

3、明為止。 4.吸取壓積紅細(xì)胞泥與生理鹽水以1:99進(jìn)行配制1%雞 紅細(xì)胞懸液。 5.在加紅細(xì)胞過(guò)程中還須不斷輕搖以確保紅細(xì)胞均勻， 使其每孔加入相同數(shù)量的紅細(xì)胞。 6.制備好的紅細(xì)胞液如果放置后上清液變紅，說(shuō)明有溶 血，不可再使用。 (血凝抑制試驗(yàn)（HI)原理 病毒的懸液中加入特異性抗體，紅細(xì)胞的凝集現(xiàn) 象被抑制，稱(chēng)為紅細(xì)胞的血凝抑制。 ？ + + + 血凝抑制試驗(yàn)操作步驟： 五、血凝抑制試驗(yàn)操作步驟 4單位抗原的制備： 根據(jù)血凝試驗(yàn)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)抗原的血凝效 價(jià)，判定4個(gè)血凝單位的稀釋倍數(shù)。 方法舉例為：如病毒HA效價(jià)為8log2，其4個(gè) 血凝單位為6log2，則病毒稀釋64倍即可。 根據(jù)樣品數(shù)確定所需抗原量做稀釋。 血凝抑制試驗(yàn)結(jié)果判定： 以完全抑制紅細(xì)胞凝集的血清最大稀釋度為該血清的 HI滴度（注：看結(jié)果時(shí)96孔板傾斜45度）。 注意：確定度數(shù)的孔要與前一孔的流速及形狀完全一 樣，即淚珠樣流掛。讀數(shù)要快，可以讀到結(jié)束，一組 （一板）時(shí)間不要超過(guò)30秒。 實(shí)驗(yàn)器材： 微量移液器 普通離心機(jī) 試驗(yàn)主要試劑： 新城疫標(biāo)