醫(yī)用超聲部分知識和產(chǎn)前超聲診斷規(guī)則

1、醫(yī)用超聲波診斷基本常識一、 超聲的初步認識:1. 什么是波超聲？頻率在2兆赫茲以上機械振動波醫(yī)學診斷用超聲波頻率是兆赫級，稱高頻超聲波，常用范圍210兆赫. 2.超聲成像的種類 ： (1).B型診斷法將電信號采用 灰度調(diào)制顯示 以亮點的亮度來表示回聲的大小以聲束進行一維掃查，形成與聲束方向一致的二維切面圖聲像圖內(nèi)見到亮暗不等、疏密不等、排列多樣的光點，直觀構(gòu)成組織器官的形態(tài)結(jié)構(gòu)切面圖，可以 實時 動態(tài) 觀察和照相。 （2）M 型診斷法 是將聲束的回聲信號在水平方向上以時間掃描展開，顯示運動器官結(jié)構(gòu)的位置隨時間的變化曲線。 （3）多普勒診斷法 主要用于測量血流速度 確定血流方向和性質(zhì)等，獲得最大

2、速度 平均速度 壓差 阻力指數(shù)等有關(guān)血流動力學的參數(shù)。它也是在二維切面圖的基礎(chǔ)上進一步的檢查。 （4）三維成像法 三維、四維超聲檢查法將連續(xù)不同平面二維超聲圖像進行計算機處理得到一個重建后清晰、直觀、有立體感圖像, 醫(yī)生與病人同樣會看三維超聲圖像便成動態(tài)圖像時稱四維超聲在婦產(chǎn)科應(yīng)用最多面部、骨、腦體積的測量專家們稱它是無可替代的非侵入性診斷方法它的潛能將隨著經(jīng)驗的積累更加完善，應(yīng)用范圍更廣四、四、彩色多普勒超聲檢查它是一種無創(chuàng)、實時反映血流動態(tài)的工具彩色多普勒和頻譜多普勒同屬于脈沖多普勒它是一種面積顯像技術(shù)在同一面積內(nèi)有很多的聲束發(fā)射和被接收回來利用靶識別技術(shù)經(jīng)過計算機的編碼朝向探頭編碼為紅色

3、，背離探頭編碼為藍色構(gòu)成一幅血流顯像圖頻譜多普勒的曲線縱向表示血流的方向朝向探頭的血流在基線之上，背離探頭的血流顯示在基線之下形成頻譜圖并將其量化后，用于疾病的診斷婦產(chǎn)科常用檢查方法：經(jīng)腹和腔內(nèi)探頭經(jīng)腹探頭（.5兆赫）經(jīng)腹、經(jīng)會陰腔內(nèi)探頭（7.5兆赫）經(jīng)陰道、未婚經(jīng)直腸五、應(yīng)用上述超聲診斷方法，可以診斷婦產(chǎn)科疾病了解胎兒宮內(nèi)生長發(fā)育產(chǎn)前超聲篩查胎兒畸形和某些染色體異常疾病六、型超聲對人體有害嗎？有市場準入質(zhì)控體系1.美國FDA根據(jù)國際電工委員會在IEC60601-2-37標準中2.對胎兒檢查的安全參數(shù)是：3.熱指數(shù)TI: 1 機械指數(shù)MI: 14.超聲聲強最大值在100mW/cm2以下 多普勒

4、發(fā)射功率小于50mW/cm2以保證胎兒的安全要想證明超聲檢查的絕對安全性是很難的！甚至幾乎是不可能的需要大樣本和長時間觀察，特別是在人體醫(yī)生掌握： 以最小 功率， 盡可能少的時間完成檢查早期妊娠： 滑行移動掃查 一般在3 5分鐘內(nèi)完成檢查為宜中晚期妊娠： 1520分鐘完成檢查為宜早期妊娠盡可能避免應(yīng)用彩色多普勒超聲檢查！七、診斷早期妊娠有幾種輔助方法？1、B型超聲診斷法:是診斷早期妊娠快速、準確的方法優(yōu)點：確定宮內(nèi)、宮外妊娠，胚胎是否存活？2、尿妊娠試驗：早早孕試紙法優(yōu)點：妊娠后79天即可被檢出，廉價、方便缺點：不能確定宮內(nèi)、宮外妊娠和胚胎是否存活？八、早期妊娠（指要求生育婦女）（一）什么情況

5、下可以不做B超？無特殊情況，無異常臨床表現(xiàn)（二）什么情況下必須做B超檢查？適應(yīng)癥主要指：1.流產(chǎn)：先兆流產(chǎn)、確定胚胎存活、過期流產(chǎn)2.可疑異位妊娠3.父母有遺傳性疾病或家族遺傳史者（測量頸項透明層厚度）4.急腹癥九、超檢查對于產(chǎn)前診斷的價值如何體現(xiàn)？超聲診斷是產(chǎn)前篩查的重要內(nèi)容之一出生缺陷主要指胎兒結(jié)構(gòu)異常超聲診斷胎兒結(jié)構(gòu)異常是目前影像學首選快速便捷、無創(chuàng)傷，可多次進行檢查控制人口數(shù)量，提高人口素質(zhì)，阻止低智兒、畸形兒的出生對提高中華民族整體素質(zhì)意義重大，我國人口基數(shù)大，每年出生人口眾多健康寶寶出生家庭歡樂無比但是每年約有80120萬缺陷兒出生發(fā)生率約占所有新生兒的4%5%給社會和家庭帶來眾多

6、不幸和嚴重負擔它不是能以金錢來衡量的中華人民共和國母嬰保健法中產(chǎn)前篩查被列為重要內(nèi)容2002年12月衛(wèi)生部頒布產(chǎn)前診斷技術(shù)管理辦法對我國的產(chǎn)前診斷技術(shù)工作進行了規(guī)范由衛(wèi)生行政部門審核、批準產(chǎn)前診斷醫(yī)院人員必須進行嚴格培訓非產(chǎn)前診斷醫(yī)院必須嚴格執(zhí)行會診、轉(zhuǎn)診制度省二院婦產(chǎn)科是重點學科，被批準為產(chǎn)前診斷醫(yī)院它是目前省內(nèi)唯一最全面的產(chǎn)前診斷醫(yī)院兩名遺產(chǎn)咨詢專家（博士生和主任醫(yī)師）兩名產(chǎn)前超聲診斷專家（主任醫(yī)師和主治醫(yī)師）實驗室技術(shù)員兩名產(chǎn)前超聲診斷的內(nèi)容包括：對胎兒生長發(fā)育的評估胎兒先天性缺陷的診斷（包括胎兒結(jié)構(gòu)異常、染色體異常標記）對高危胎兒在超聲引導(dǎo)下的標本采集例如：根據(jù)目前超聲技術(shù)水平，衛(wèi)生部

7、規(guī)定妊娠1824周 應(yīng)診斷的致命性畸形包括：無腦兒嚴重腦膨出嚴重開放性脊柱裂嚴重胸腹壁缺損、內(nèi)臟外翻單腔心致命性軟骨發(fā)育不全染色體異常要求早期篩查唐氏綜合癥產(chǎn)前超聲在診斷胎兒染色體異常中所起到的作用產(chǎn)前超聲不能直接診斷胎兒染色體異常某些染色體異常必須由實驗室才能診斷這種檢查是有創(chuàng)的,如:抽臍血、羊水產(chǎn)前超聲能夠發(fā)現(xiàn)胎兒染色體異常標記蛛絲馬跡有選擇性、針對性的去進行羊穿和抽臍血（在超聲引導(dǎo)下）相對的降低流產(chǎn)、早產(chǎn)、出血、死胎發(fā)生胎兒染色體異常有哪些標記呢？胎兒頸部透明層增厚它是唐氏綜合癥胎兒的主要體征之一診斷21三體敏感性54%診斷13三體、18三體敏感性為62%即使核型正常，胎兒逐漸生長、發(fā)育

8、后也可能出現(xiàn)某些結(jié)構(gòu)異常、流產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局。脈絡(luò)叢囊腫：35mm大者 10 mm，結(jié)合母親年齡和血生化指標，如孕26W不消失，可視為染色體核型分析指征，它與18三體更密切后顱窩池：10mm單一不能說明什么結(jié)合發(fā)現(xiàn)其它異常+FGR+羊水多應(yīng)染色體核型分析胸腔積液：在頸部水腫或囊腫胎兒發(fā)生是核型分析指征胎兒心內(nèi)強回聲灶：有強回聲灶較無強回聲灶者唐氏綜合癥發(fā)生率明顯提高胎兒腸道強回聲：如果能除外胎糞性腸梗阻、胎兒腹膜炎、胎兒宮內(nèi)感染、囊性纖維化，應(yīng)視為羊穿指征核型正常也應(yīng)視為高危人群進行連續(xù)、密切超聲觀察胎兒腎盂擴張：1725%唐氏綜合癥胎兒有上述特征20%的正常胎兒也有此現(xiàn)象泌尿系統(tǒng)機構(gòu)異常胎兒

9、也可出現(xiàn)此聲像圖單臍動脈：單臍動脈如合并其他機構(gòu)異常，需行染色體核型分析。胎兒生物學測量：月經(jīng)規(guī)則婦女，中孕早期CRL測量如 孕周7天以上，患染色體異常危險性增加（比母親年齡高出3倍）相差越大，患致死性整倍體畸形可能性越大，與唐氏無統(tǒng)計學意義。十、妊娠期如何進行超聲檢查？可以診斷哪些疾?。吭缙谌焉锴懊嬉呀?jīng)講過，對于早期篩查染色體有重要意義還可診斷胎兒某些嚴重畸形，如無腦兒等檢查時間：早孕期1113+6周檢查內(nèi)容：胎兒頸項透明層厚度測量胎兒鼻骨的有無與測量靜脈導(dǎo)管血流血流測定結(jié)合母親年齡決定是否羊穿、抽臍血進行染色體檢查檢查方法：經(jīng)腹、經(jīng)外陰必要時經(jīng)陰道檢查中孕期1824周該期羊水充足，胎兒有一

10、定活動空間，大部分能夠檢出大多數(shù)胎兒結(jié)構(gòu)異常和染色體異常的標記。常規(guī)超聲檢查內(nèi)容：估計孕周、胎兒生長評估、評價胎兒體表與內(nèi)臟結(jié)構(gòu)、羊水評估、胎盤分級及定位檢查項目：雙頂徑、頭圍、心臟（心律和心率條件允許可觀察四腔心）、腹圍系統(tǒng)產(chǎn)前超聲診斷：懷疑有胎兒畸形、有胎兒畸形因素或有條件者必須在有產(chǎn)前診斷資質(zhì)的醫(yī)院中進行檢查項目：頭頸部：顱骨環(huán)、腦中線、透明隔腔、側(cè)腦室、脈絡(luò)叢、小腦、枕大池、頸項皺褶厚度、唇胸部：.心臟位置，四腔心結(jié)構(gòu)，左、右室流出道有適應(yīng)癥者需行超聲心動圖檢查.肺 腹部：胃、腎、膀胱、臍帶（結(jié)構(gòu)、數(shù)目）脊柱：股骨長（肱骨長）：檢查方法：經(jīng)腹部針對性檢查：在先前完成系統(tǒng)檢查基礎(chǔ)上進行對

11、胎兒、孕婦特殊問題需要進行針對性檢查如腎盂、枕大池、肢體、唇等有可疑點時晚孕期3234周進一步篩查該期才能出現(xiàn)的胎兒畸形（腸、腦積水等）了解胎兒生長發(fā)育情況超聲診斷報告應(yīng)于上述標準一致陽性結(jié)果要有圖像記錄，計算機工作站保存因胎兒、孕婦等因素對胎兒解剖評價受限制的情況要記錄在報告上，必要時進行隨訪檢查。十一、超聲可以診斷哪些胎兒畸形？神經(jīng)系統(tǒng)：無腦兒、小頭畸形、嚴重露腦畸形、腦膨出、腦積水、脊柱裂等面部：唇裂、獨眼畸形、喙鼻頸部：NT增厚、頸淋巴囊腫等心臟：單腔心、左右心發(fā)育不良、法洛氏四聯(lián)癥、三尖瓣閉鎖、肺動脈、主動脈閉鎖、大動脈轉(zhuǎn)位、心內(nèi)膜墊缺損等肺：先天性肺囊腺瘤、隔離肺等胸腔積液：先天性

12、膈疝消化系統(tǒng)：食道閉鎖、十二指腸閉鎖、腸道狹窄等泌尿系統(tǒng)：雙腎發(fā)育不良、腎缺如、輸尿管狹窄等肢體畸形：致死性成骨、軟骨發(fā)育不全，短肢畸形，肢體缺失，手足缺失等胎兒水腫、地中海貧血病、雙胎輸血綜合癥、羊膜帶綜合癥還有某些胎兒畸形是超聲不可能診斷的，如動脈導(dǎo)管未閉、房間隔缺損（繼發(fā)孔型）先天性巨結(jié)腸、尿道下裂可復(fù)性表現(xiàn)，在超聲檢查時期內(nèi)剛好恢復(fù)到正常位置，臍疝、膈疝等兩性畸形、子宮先天畸形皮膚血管瘤、皮膚微小異常、胎兒周圍神經(jīng)系統(tǒng)肌肉方面的異常染色體異常、基因異常等疾病胎兒代謝性疾?。ㄌ悄虿?、甲減等）胎兒行為方面異常十二、影響胎兒畸形檢出因素：產(chǎn)前超聲檢查有很多不確定因素影響胎兒結(jié)構(gòu)的顯示，影響胎

13、兒結(jié)構(gòu)畸形的產(chǎn)前檢出率。不是所有的畸形都可以在產(chǎn)前超聲檢查中全部檢查出想要在一次超聲檢查把所有畸形全部檢查出來是不可能的。那么哪些因素影響胎兒畸形檢出？錯誤認為：胎兒越大，超聲檢查越清楚、越容易以為作超聲就像“照”鏡子一樣，可以看到胎兒的全貌就診時間太晚，不適合胎兒肢體檢查孕婦肥胖、腹壁疤痕影響胎兒圖象質(zhì)量胎位因素也干擾胎兒畸形畸形檢出率美國威廉姆斯產(chǎn)科學告誡人們：目前世界上沒有任何一種儀器和優(yōu)秀的診斷醫(yī)師能將所有的胎兒畸形檢出十三、要求產(chǎn)前診斷醫(yī)師必須嚴格產(chǎn)前超聲的質(zhì)量控制完成胎兒最基準的切面和標準化切面，使每一位孕婦在檢查當中能夠得到同樣的服務(wù)。十四、妊娠晚期超聲檢查對孕婦和胎兒有何幫助？

14、妊娠晚期超聲檢查可以了解胎產(chǎn)勢、胎方位、胎先露、羊水多少、胎盤分級、有無臍帶繞頸、臍動脈血流頻譜，為孕婦分娩方式提供信息產(chǎn)前超聲診斷是產(chǎn)科醫(yī)生不可缺少的診斷方法！是影像學診斷胎兒畸形唯一的檢查方法！超聲診斷在產(chǎn)科的應(yīng)用非常廣泛, 臨床上存在過分依賴和濫用超聲檢查的現(xiàn)象。與此同時, 診斷超聲的安全性問題也越來越受到關(guān)注, 相關(guān)研究非?；钴S, 已進入分子水平, 且不乏陽性報道 1 。人類流行病學調(diào)查雖無明確發(fā)現(xiàn), 但是也不能排除已觀察到的出生時低體重、說話遲等現(xiàn)象與孕期超聲檢查的關(guān)系 2 。彩色多普勒超聲( 簡稱彩超) 是在二維圖像的基礎(chǔ)上疊加了多普勒超聲, 其能量較普通二維超聲為大, 有關(guān)彩超對

15、中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用的分子水平的研究報道較少, 明確彩超是否對中樞神經(jīng)系統(tǒng)構(gòu)成影響, 具有重要意義。 cfos 是一種重要的即刻早期基因, 存在于正常的細胞核內(nèi), 其轉(zhuǎn)錄、翻譯后的表達產(chǎn)物為cfos 蛋白。Fos 蛋白在細胞對外界刺激轉(zhuǎn)錄耦聯(lián)的信息傳遞過程中起著核內(nèi)第三信使的作用, 因而可反映神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)細微活性的功能動力學狀態(tài)。本研究旨在了解彩色多普勒超聲對胎鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)cfos基因表達的影響, 為彩超的產(chǎn)科安全應(yīng)用提供新的佐證。1 材料與方法1. 1 實驗動物分組 健康性成熟SD 大鼠41 只( 第四軍醫(yī)大學動物中心提供) , 其中雄性5 只, 體重370 420g, 雌性36只, 體重300

16、 350g。將雌雄鼠按照21 比例合籠后, 次日起每日查陰栓及陰道涂片, 鏡檢到活精子之日記為受孕0 日, 依此推算孕齡。孕鼠在受孕第18 天隨機分為12 組, 每組3 只。按照取標本時間# 組分別為照射后即刻、照射后30min、2h、4h、8h 和24h, % &組分別為# 組的對照組。1. 2 動物模型制備 受孕18 天的母鼠仰臥固定于木板上,于下腹部外涂耦合劑, 沿孕鼠子宮的體表投影區(qū)緩慢滑行移動。照射時間為30min, 對照組進行假照射。1. 3 儀器 美國Acuson 公司128XP/ 10 型彩色超聲診斷儀,探頭彩色頻率2. 5MHz, Ispta= 92mW/ cm2, Ispp

17、a= 154W/ cm2,Im= 266W/ cm2 , 全部聲學參數(shù)由Acuson 公司提供。cfos 免疫組化試劑盒及DAB 顯色劑由博士德公司提供。 260 中國醫(yī)學影像技術(shù)2003 年第19 卷第3 期 Chin J Med Imaging T echnol, 2003, Vol 19, No 31. 4 腦組織標本的留取 孕鼠輻照后按既定時間點用1% 戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉( 4ml/ kg) 后, 剖腹剖宮取胎, 每只孕鼠隨機取2 只胎鼠, 迅速斷頭取出腦組織, 于10% 中性福爾馬林固定24h, 常規(guī)石蠟包埋, 連續(xù)冠狀切片, 切片貼于涂有多聚賴氨酸的涂膠片上烘干。1. 5 Fo

18、s 蛋白的免疫組化染色 組織切片常規(guī)脫蠟、梯度酒精至水后, 蒸餾水新鮮配制的3% H2O2 孵育10min, 水洗, 抗原修復(fù)液作用20min, 水洗, 羊血清封閉20min。cfos 抗體4 ( 孵育24h, 羊抗兔IgG 37)C 孵育2h, ABC 復(fù)合物37)C 孵育2h, 以上各步之間需用0. 01mol/ L PBS 洗滌。DAB 顯色劑A、B、C 各一滴加蒸餾水至1ml, 滴加于切片上顯色, 鏡下控制顯色程度。常規(guī)脫水、透明、封片, 光鏡下觀察, 著棕黃色者為陽性細胞。陰性對照組以0. 01mol/ L PBS 取代cfos 抗體。1. 6 統(tǒng)計學處理 每份標本統(tǒng)計3 張陽性細胞

19、最多的切片,每張切片統(tǒng)計1 個Fos 陽性細胞集中的區(qū)域, 記數(shù)每高倍鏡視野陽性細胞數(shù), 取平均值, 采用多個樣本均數(shù)比較的方差分析。圖1 照射后2h 可見密集分布的深染Fos 細胞圖2 照射后30min 僅見極少量淡染的Fos 弱陽性細胞2 結(jié)果2. 1 超聲輻照組, 2h 及24h 取材組胎鼠腦海馬、皮層、基底節(jié)及邊緣葉可見密集分布的深染Fos 蛋白強陽性細胞( 圖1) , 而即刻及30min 組僅見極少量著色淡的Fos 弱陽性細胞( 圖2) ,4h 及8h 組陽性細胞數(shù)逐漸減少, 其記數(shù)結(jié)果見表1。表1 Fos 陽性細胞記數(shù)結(jié)果組別取材時間陽性細胞數(shù)( 個/HP)# 即刻0. 4 0.

20、61+ 30m in 0. 8 0. 92, 2h 98. 9 19. 72 4h 64. 9 8. 67. 8h 22. 4 3. 76 24h 80. 6 12. 93注: 六組之間比較F = 314. 87, P 0. 05) , 其余各組之間均有顯著性差異( P 0. 05)超微結(jié)構(gòu)亦未見明顯異常。照射20 min、3 0 m in 時: 單次照射組及重復(fù)照射組P53 蛋白表達均增強, 與對照組有顯著差異( P 0. 05) ; 且重復(fù)照射組與單次照射組之間也有顯著性差異( P 20 min) 可對各種胚胎組織構(gòu)成影響2, 3 。由于產(chǎn)科超聲應(yīng)用的早期化及多次化, 控制產(chǎn)科超聲劑量的重

21、要性不容忽視, 相應(yīng)的安全性研究亟待加強。本實驗用診斷劑量彩超對晚孕期大鼠進行不同時間的單次及重復(fù)照射, 觀察照射對中國醫(yī)學影像技術(shù)2005 年第21 卷第8期 C hin J M ed Imagin g T echnol, 2005, Vol 21, No 8 ! 1169 !圖1 A. 單次照射30 min 組P53 染色, 可見陽性細胞( 400) ; B. 重復(fù)照射30 min 組P53 染色,陽性細胞較多( 400) 圖2 A. 重復(fù)照射30 min 組較多神經(jīng)元細胞體積縮小, 胞漿內(nèi)出現(xiàn)空泡, 線粒體腫脹( 6000) ; B. 重復(fù)照射30 min 組甚至可見到類似凋亡小體樣結(jié)構(gòu)

22、( 6000)胎鼠腦組織P53 蛋白表達及其超微結(jié)構(gòu)的影響, 以期為產(chǎn)前超聲檢查的合理應(yīng)用提供指導(dǎo)。1 材料與方法1. 1 實驗動物分組 健康性成熟SD 大鼠60 只( 第四軍醫(yī)大學動物試驗中心提供) 其中雄性12 只, 體重350 400 g,雌性48 只, 體重300 350 g。按雌雄比4 #1 合籠喂養(yǎng), 次日起每日查陰栓及陰道涂片, 鏡檢到活精子之日記為受孕0 天,與腹部觸診相結(jié)合推算孕齡。在孕鼠受孕第16 天, 按照射次數(shù)分為單次照射和重復(fù)照射兩大組, 以上兩大組再按每次照射時限的不同各自劃分為照射10 min 組、20 min 組、30 min及對照組。1. 2 動物模型制備 孕

23、16 天SD 大鼠體重300 350 g, 1%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉, 劑量30 mg/ kg, 麻醉滿意后, 將孕鼠綁縛于實驗臺上, 下腹部浸透耦合劑, 用超聲探頭在孕鼠子宮體表投影區(qū)按既定時間分別進行滑行掃查, 重復(fù)照射組在首次照射后間隔48 h, 以相同聲場條件再照射一次。兩對照組亦按照既定時間分別進行假照射。1. 3 照射條件 儀器采用A cuson Sequoia 512 型彩色電腦聲像儀, 照射條件: 4V1 探頭, 二維頻率3. 0 MHz, 彩色頻率3. 0 MHz, 熱指數(shù)( TI ) = 1. 8, 機械指數(shù)( MI ) = 1. 6。1. 4 動物標本取材及組織標本的制

24、作 各組大鼠在完成既定的超聲照射后24 h, 1% 戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉, 劑量30mg/ k g, 麻醉滿意后, 將孕鼠綁縛于實驗臺上, 剖宮取胎, 每只孕鼠隨機取6 只胎鼠, 隨機分為電鏡組及P53 組, 每組3 只,迅速斷頭取出腦組織。用作免疫組化染色者立即置于10%中性福爾馬林液中固定24 h, 所取標本常規(guī)石蠟包埋, 連續(xù)冠狀切片, 切片粘于涂有多聚賴氨酸的涂膠片上烘干; 用作電鏡檢查者, 所取胎鼠腦組織標本置于2% 戊二醛中4 固定2 h, 常規(guī)電鏡包埋, 半超薄切片美蘭染色光鏡下定位, 超薄切片電子染色, JIM2000 型透射電鏡觀察。1. 5 指標測定 免疫組化: 選用博士

25、德公司P53 免疫組化試劑盒及DBA顯色劑。組織切片常規(guī)脫臘、梯度酒精至水后, 蒸餾水新鮮配置的3%H 2O2 孵育10 min, PBS 洗, 抗原修復(fù)液20 min, PBS 洗, 羊血清封閉20min。P53 抗體4 孵育24 h, 羊抗兔IgG37 孵育2 h, ABC 復(fù)合物37 孵育2 h。以上各步之間需用0. 01mol/ L PBS 洗滌。DAB 顯色劑A, B,C, 各一滴加蒸餾水至1 ml, 滴加于切片上顯色, 鏡下控制顯色程度。常規(guī)脫水、透明、封片, 光鏡下觀察, 著棕黃色者為陽性細胞。陰性對照組以0. 01mol/ L PBS 取代P53抗。1. 6 統(tǒng)計分析 每份標本

26、統(tǒng)計3 張切片, 每張切片選取10 個低倍鏡視野, 應(yīng)用HPIA S1000 型高清晰度病理圖文分析系統(tǒng)測定切片中P53 蛋白染色陽性率, 采用SPSS 10. 0 行方差分析。2 結(jié)果2. 1 P53 免疫組化染色結(jié)果 P53 蛋白表達結(jié)果見表1。表1 單次照射與重復(fù)照射組P53 標記照射條件10 min 組20 min 組30 min 組對照組單次照射122. 15% 6. 35 121. 68% 13. 66 135. 79% 4. 66 122. 2% 5. 28重復(fù)照射124. 98% 4. 61 137. 17% 6. 00* 148. 32% 7. 83# 122. 2% 5.

27、28* 與單次照射比較, P 0. 05; # 與單次照射比較, P 0. 05) , 30 min 組可觀察到胎鼠腦組織內(nèi)P53 蛋白表達增強, 與其對照組亦差異顯著( P 0. 05) , 20 min、30 min 組較對照組陽性表達明顯增強( P 0. 05) , 30 min 組較20 min 組陽性表達亦明顯增強( P 0. 05) , 重復(fù)照射20 min 及30 min 組較單次照射20 min 及30 min 組陽性表達明顯增強( P 0. 05,圖1A、1B) 。2. 2 超微結(jié)構(gòu)變化的觀察 輻照10 min 時: 單次照射組及重復(fù)照射組胎鼠腦組織內(nèi)僅見少數(shù)散在的神經(jīng)元細胞

28、胞體輕度腫脹, 線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細胞器無明顯改變; 輻照20 min 時:單次照射組及重復(fù)照射組均可見較多神經(jīng)元細胞體積縮小,胞漿內(nèi)出現(xiàn)空泡, 線粒體腫脹, 亦可見有較多的神經(jīng)細胞突起! 1170 ! 中國醫(yī)學影像技術(shù)2005 年第21 卷第8 期 Chin J Med Imaging Techn ol , 2005, Vol 21, No 8腫脹、變粗, 尤以重復(fù)照射組為甚; 輻照30 min 時: 單次照射組及重復(fù)照射組則可觀察到神經(jīng)元胞體內(nèi)出現(xiàn)大量空泡, 線粒體腫脹、嵴模糊, 細胞間隙增寬, 細胞核電子密度不均, 部分出現(xiàn)邊集現(xiàn)象( 圖2A ) , 并可觀察到類似凋亡小體樣結(jié)構(gòu)( 圖2B

29、) , 神經(jīng)細胞突起腫脹明顯, 重復(fù)照射組除神經(jīng)元細胞的上述改變外, 甚至觀察到部分血管內(nèi)皮細胞亦出現(xiàn)線粒體腫脹等病理改變。3 討論 超聲生物學效應(yīng)與超聲劑量相關(guān), 不過因劑量表示的復(fù)雜性, 超聲對各種細胞、各種分子具體的量效關(guān)系仍未確定。多數(shù)學者認為, 聲強越大, 照射時間越長, 引起的生物學效應(yīng)越嚴重。但不同孕期、不同劑量、單次或多次照射的多因素與胚胎影響的關(guān)系卻少有研究。近年來隨著分子生物學及生物化學的飛速發(fā)展及其向神經(jīng)生理等學科的滲透, 初步表明中樞學習記憶的生理和病理過程受基因調(diào)控, Enokido 等 4 研究發(fā)現(xiàn)p53 基因亦可能通過誘導(dǎo)神經(jīng)細胞的凋亡而引起中樞學習記憶功能障礙。

30、而應(yīng)用凋亡及超微結(jié)構(gòu)變化這些敏感的指標研究超聲照射對敏感組織的效應(yīng), 是目前超聲安全性研究的熱點。超聲輻照可以通過熱效應(yīng)、機械效應(yīng)、空化效應(yīng)等對機體產(chǎn)生影響, 從而造成組織細胞的凋亡57 。細胞凋亡不僅在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展的病理過程中起到非常重要的作用, 而且在胚胎發(fā)生、器官發(fā)育、細胞增殖等生理過程中具有決定性的作用7 。診斷劑量的超聲輻照可以誘導(dǎo)胚胎多種組織p53基因或蛋白表達上調(diào)及細胞凋亡現(xiàn)象 8 。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育過程中, 細胞凋亡始終貫穿于其中。因此, 胚胎發(fā)育期外界因素的干預(yù)( 如藥物、生物、理化等因素) 都有可能影響到細胞凋亡, 從而造成發(fā)育延遲或疾病的發(fā)生。p53 基因是公認的

31、凋亡誘導(dǎo)基因, 不僅作為抑癌基因發(fā)揮作用, 還參與基因轉(zhuǎn)錄、DNA 損傷與修復(fù)、細胞周期調(diào)控及細胞凋亡等, 主要功能是將細胞阻止于G1 期從而誘發(fā)細胞凋亡, p53 基因及其產(chǎn)物表達上調(diào)是促進細胞凋亡的因素之一。國內(nèi)外有研究表明,缺乏p53 基因的胸腺細胞對輻射不敏感, 用不同劑量的電離輻射照射小鼠卵巢細胞, 凋亡數(shù)量是未照射組的5 6 倍, 同時P53 蛋白表達量增加 9 。我科以往的研究表明, 在診斷劑量輻照條件下, 照射20 min 以上可以觀察到胎鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)細胞凋亡明顯增加 10 , 進一步的研究發(fā)現(xiàn), 其分子生物學基礎(chǔ)可能與超聲輻照導(dǎo)致cfos 等基因表達出現(xiàn)差異所致 11 ,

32、由于p53 基因在輻射誘導(dǎo)細胞凋亡過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用, 特別是通過誘導(dǎo)神經(jīng)細胞的凋亡可引起中樞學習記憶功能障礙, 我們相信, 在超聲誘導(dǎo)的細胞凋亡的分子生物學基礎(chǔ)中, p53 基因表達可能存在的變化是非常關(guān)鍵的原因之一。本實驗的結(jié)果顯示, 在診斷劑量超聲輻照條件下, 照射時間在20 min 以上時可觀察到胎鼠腦組織內(nèi)P53 蛋白表達增強, 與假照射組相比差異顯著; 重復(fù)照射一次后, 10 min 組較單次照射10 min 組, P53 蛋白陽性率亦有所增加, 但差異不顯著, 20 min 組及30 min 組較單次照射組及假照組陽性率明顯增強。超微結(jié)構(gòu)觀察發(fā)現(xiàn), 照射時間的延長及重復(fù)照射, 對

33、胎鼠腦組織神經(jīng)細胞的超微結(jié)構(gòu)損傷逐漸加重, 在30 min 重復(fù)照射組, 不僅觀察到神經(jīng)元及其突起的損傷, 而且部分血管內(nèi)皮細胞亦出現(xiàn)線粒體腫脹等病理改變。這些結(jié)果顯示, 超聲輻照后P53 蛋白表達的變化可能是其導(dǎo)致胎鼠腦組織細胞凋亡的分子基礎(chǔ)之一; 重復(fù)照射對胎鼠腦組織細胞損傷影響是十分明顯的, 我們的試驗結(jié)果顯示: 照射時程和是否重復(fù)照射可能是影響超聲輻照安全性的兩個重要方面。但由于中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織細胞凋亡是在胚胎發(fā)育過程的生理現(xiàn)象, 同時孕期重復(fù)照射一次與多次照射對胚胎產(chǎn)生的影響及其可逆性與否也卻乏證據(jù)。我們對p53 基因及其表達產(chǎn)物在胚胎發(fā)育過程中的變化情況了解并不全面, 故其變化情況

34、與細胞凋亡的關(guān)系及意義仍待進一步研究。 參考文獻 1 Barnet t SB, M aul ik D. Guidel ines an d recommendat ions f or safeus e of Doppler u lt ras ound in perinat al applicat ions J . J M at ernFet al Med, 2001, 10( 2) : 75 84. 2 Oh H , Lee SE, Yang JA, et al. Est ab lishm ent of a biological in dicat or f or the radiat ion a

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