臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)：緒論、生物安全

1、2021-6-81 臨床微生物學(xué)檢驗(yàn) 2021-6-82 緒緒 論論 學(xué)習(xí)目的和要求 1、了解教材內(nèi)容、本學(xué)期學(xué)習(xí)的內(nèi)容 2、復(fù)習(xí)并掌握微生物的概念與分類 3、熟悉臨床微生物學(xué)的概念與任務(wù) 4、了解臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)的現(xiàn)狀和發(fā)展 2021-6-83 實(shí)驗(yàn)課 2021-6-84 一、微生物學(xué)、醫(yī)學(xué)微生物和臨床微生物學(xué)一、微生物學(xué)、醫(yī)學(xué)微生物和臨床微生物學(xué) 微生物（微生物（microorganismsmicroorganisms）是廣泛分布于自然界 中的一群肉眼看不見、形體微小、結(jié)構(gòu)簡單肉眼看不見、形體微小、結(jié)構(gòu)簡單的微 小生物，常以單細(xì)胞、細(xì)胞群體或非細(xì)胞狀態(tài)存 在。在提供營養(yǎng)物質(zhì)和適宜環(huán)境的條件

2、下，一般 都能獨(dú)立生活，迅速生長繁殖。 微生物的測量單位：微生物的測量單位：m、 nm 微生物分類：？ 2021-6-85 根據(jù)分化、結(jié)構(gòu)和組成微生物可分為三類： 1、 原核細(xì)胞型微生物（種類、特點(diǎn)？） （procaryotic microorganism) 2、 真核細(xì)胞型微生物（種類、特點(diǎn)？） (eucaryotic microorganism) 3、 非細(xì)胞型微生物（種類、特點(diǎn)？） （non-cell microorganism) 2021-6-86 原核細(xì)胞型微生物 種類：種類：細(xì)菌、衣原 體、支原體、立克 次體、螺旋體、放 線菌。 特點(diǎn)：特點(diǎn)：小、原始核、 細(xì)胞器不完整。 真核細(xì)胞型

3、微生物 種類：種類：真菌、藻類。 特點(diǎn)：特點(diǎn)：較大、典型 核、細(xì)胞器完整。 2021-6-87 微生物學(xué)（microbiology)： 是生命科學(xué)的一門重要學(xué)科，是研究 微生物的種類、生物學(xué)特性以及與人類、 動植物等相互關(guān)系的科學(xué)。 2021-6-88 醫(yī)學(xué)微生物學(xué)(medical microbiology)： 主要是研究與醫(yī)學(xué)有關(guān)的病原微生物 的生物學(xué)特性、致病性、免疫性以及特異 性診斷和預(yù)防治療措施的學(xué)科。 2021-6-89 二、臨床微生物學(xué)的概念和任務(wù) 臨床微生物學(xué)(clinical microbiology)概念： 為感染性疾病的診斷、治療和預(yù)防提供實(shí) 驗(yàn)室科學(xué)依據(jù)的學(xué)科。 2021

4、-6-810 臨床微生物學(xué)的任務(wù) 1、研究感染性疾病的病原特征 感染？傳染？ 毒力、耐藥性 2、提供快速準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷 3、對合理使用抗菌藥物提出建議和指導(dǎo) 4、監(jiān)控醫(yī)院感染 2021-6-811 感染：感染：多指個(gè)體現(xiàn)象， 病原菌 個(gè)體 個(gè)體發(fā)病。 必備條件是：病原體、宿主 傳染：傳染：多指多指個(gè)體間現(xiàn)象，個(gè)體間現(xiàn)象， 病原菌 個(gè)體感染 下一個(gè)體感染 。 必備條件是：傳染源、傳播途徑、易感人群。 感染感染是個(gè)體內(nèi)部發(fā)生的變化,傳染傳染既有個(gè)體內(nèi)部 變化，又是個(gè)體之間的相互影響。 2021-6-812 中華人民共和國傳染病防治法（中華人民共和國傳染病防治法（20042004年修訂）年修訂）

5、本法規(guī)定的傳染病分為甲類、乙類和丙類。 甲類傳染病是指：甲類傳染病是指：鼠疫、霍亂。 乙類傳染病是指：乙類傳染病是指：傳染性非典型肺炎、艾滋病、 病毒性肝炎、脊髓灰質(zhì)炎、人感染高致病性禽流感、 麻疹、流行性出血熱、流行性腦脊髓膜炎、流行性乙 型腦炎、狂犬病、登革熱、炭疽、細(xì)菌性和阿米巴性 痢疾、肺結(jié)核、傷寒和副傷寒、百日咳、白喉、新生 兒破傷風(fēng)、猩紅熱、布魯氏菌病、淋病、梅毒、鉤端 螺旋體病、血吸蟲病、瘧疾。 丙類傳染病是指丙類傳染病是指：流行性感冒、流行性腮腺炎、 風(fēng)疹、急性出血性結(jié)膜炎、麻風(fēng)病、流行性和地方性 斑疹傷寒、黑熱病、包蟲病、絲蟲病，除霍亂、細(xì)菌 性和阿米巴性痢疾、傷寒和副傷寒以

6、外的感染性腹瀉 病。 2021-6-813 三、臨床微生物檢驗(yàn)技術(shù) 課程目標(biāo) 掌握微生物檢驗(yàn)的基本技術(shù)、臨床常見病 原微生物的鑒定方法（生物學(xué)特性、致病 性、免疫性） 、檢驗(yàn)程序、藥敏檢測。 熟悉臨床微生物實(shí)驗(yàn)室的生物安全和全面 質(zhì)量控制方法 了解臨床少見微生物的特性、檢測和藥敏。 2021-6-814 四、臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)的現(xiàn)狀與發(fā)展 規(guī)范化臨床微生物實(shí)驗(yàn)室的建立 感染性疾病目前現(xiàn)狀的特點(diǎn) 易感人群增加、新病原體出現(xiàn)（已控制的病原體 再現(xiàn)）、非感染性疾病中感染因子起作用 細(xì)菌的耐藥現(xiàn)象日益嚴(yán)重 發(fā)展：病原微生物診斷快速化、自動化、智 能化，微生物樣本庫的建立等 免疫、分子生物學(xué)技術(shù)和計(jì)算機(jī)技

7、術(shù)的 發(fā)展推動了臨床微生物學(xué)的進(jìn)步 2021-6-815 2021-6-816 2021-6-817 MALDI-TOF-MS（基質(zhì)輔助激光解吸/電離 飛行時(shí)間質(zhì)譜, 英文名Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time of Flight Mass Spectrometry） 組成： 基質(zhì)輔助激光解吸電離離子源（MALDI） 和飛行時(shí)間質(zhì)量分析器（TOF）。 2021-6-818 2021-6-819 2021-6-820 臨床微生物實(shí)驗(yàn)室臨床微生物實(shí)驗(yàn)室 安全防護(hù)安全防護(hù) 2021-6-821 學(xué)習(xí)目的和要求學(xué)習(xí)目的和要求 1、掌握微生物

8、危險(xiǎn)度4個(gè)級別的概念，實(shí)驗(yàn)室生 物安全防護(hù)水平的分級，、級生物安全 柜的特點(diǎn)及應(yīng)用范圍等。 2、熟悉個(gè)人防護(hù)設(shè)備的內(nèi)容、生物安全操作規(guī)范、 實(shí)驗(yàn)室暴露的處理和感染性廢棄物的處理 2021-6-822 第一節(jié) 微生物實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù) 實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)：采用合理的實(shí)驗(yàn) 室建筑設(shè)施、安全的防護(hù)設(shè)備、規(guī)范的微 生物操作技術(shù)防止相關(guān)人員、環(huán)境暴露于 實(shí)驗(yàn)室的感染性微生物和毒素。 2021-6-823 2021-6-824 2021-6-825 http:/ 2021-6-826 生物危害標(biāo)識 2021-6-827 引起實(shí)驗(yàn)室相關(guān)感染最常見引起實(shí)驗(yàn)室相關(guān)感染最常見 的微生物的微生物 (1)細(xì)菌：傷寒沙門菌

9、、結(jié)核分枝桿菌、傷寒沙門菌、結(jié)核分枝桿菌、 布魯菌屬、布魯菌屬、Q熱立克次體、鸚鵡熱衣原體熱立克次體、鸚鵡熱衣原體 等。等。 (2)病毒：病毒：血液傳播病毒、委內(nèi)瑞拉馬腦血液傳播病毒、委內(nèi)瑞拉馬腦 炎病毒等。炎病毒等。 (3) 真菌：真菌：皮炎芽生菌、球孢子菌等。皮炎芽生菌、球孢子菌等。 2021-6-828 如何預(yù)防實(shí)驗(yàn)室相關(guān)感染的發(fā)生 合理設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)室建筑設(shè)施 配備適宜的安全設(shè)備 制定標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程 培訓(xùn)合格的實(shí)驗(yàn)室工作人員 完善實(shí)驗(yàn)室管理 2021-6-829 當(dāng)建設(shè)使用傳染性或有潛在傳染性材料的實(shí)驗(yàn)室前，必須 進(jìn)行微生物危害評估。應(yīng)依據(jù)傳染性微生物致病能力的程度、 傳播途徑、穩(wěn)定性、感

10、染劑量、操作時(shí)的濃度和規(guī)模、實(shí)驗(yàn)對 象的來源、是否有動物實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、是否有有效的預(yù)防和治療方 法等諸因素進(jìn)行微生物危害評估。 通過微生物危害評估確定對象微生物應(yīng)在哪一級的生物安 全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行操作 根據(jù)危害評估結(jié)果，制定相應(yīng)的操作規(guī)程、實(shí)驗(yàn)室管理制 度和緊急事故處理辦法，必須形成書面文件并嚴(yán)格遵守執(zhí)行必須形成書面文件并嚴(yán)格遵守執(zhí)行。 一、微生物危險(xiǎn)度評估 2021-6-830 感染性微生物的危險(xiǎn)度等級分類（WHO) 危險(xiǎn)度危險(xiǎn)度1 1 級級（無或極低的個(gè)體和群體危險(xiǎn)） 不太可能引起人或動物致病的微生物。 危險(xiǎn)度危險(xiǎn)度2 2 級級（個(gè)體危險(xiǎn)中等，群體危險(xiǎn)低） 病原體能夠?qū)θ嘶騽游镏虏?，但對?shí)驗(yàn)

11、室工作人員、 社區(qū)、牲畜或環(huán)境不易導(dǎo)致嚴(yán)重危害。 實(shí)驗(yàn)室暴露也許會引起較嚴(yán)重感染，但對感染有有 效的預(yù)防和治療措施，并且疾病傳播的危險(xiǎn)有限。 危險(xiǎn)度危險(xiǎn)度3 3 級級（個(gè)體危險(xiǎn)高，群體危險(xiǎn)低） 病原體通常能引起人或動物的嚴(yán)重疾病，但一般不 會發(fā)生感染個(gè)體向其他個(gè)體的傳播，并且對感染有 有效的預(yù)防和治療措施。 危險(xiǎn)度危險(xiǎn)度4 4 級級（個(gè)體和群體的危險(xiǎn)均高） 病原體通常能引起人或動物的嚴(yán)重疾病，并且很容 易發(fā)生個(gè)體之間的直接或間接傳播，對感染一般沒 有有效的預(yù)防和治療措施。 毒力 傳染性 預(yù)防治療能力 +- - 2021-6-831 微生物微生物生物安全水平生物安全水平危險(xiǎn)等級危險(xiǎn)等級 結(jié)核分枝

12、桿菌33（已有疫苗） 羊流產(chǎn)布氏桿菌33 鼻疽伯克霍爾德菌33 類鼻疽伯克霍爾德菌2/33 立克次體33 鼠疫耶爾森菌2（有疫苗）、3 細(xì)菌中危險(xiǎn)度細(xì)菌中危險(xiǎn)度3級的微生物級的微生物 2021-6-832 二、實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)水平（WHO) 實(shí)驗(yàn)室可以分為： 一級生物安全防護(hù)水平（biosafety level 1,BSL1) 二級生物安全防護(hù)水平(BSL2) 三級生物安全防護(hù)水平(BSL3) 四級生物安全防護(hù)水平(BSL4) 根據(jù)操作不同危險(xiǎn)度等級微生物來決定實(shí)驗(yàn)室的生 物安全防護(hù)水平（實(shí)驗(yàn)室建筑設(shè)施、生物安全防 護(hù)設(shè)備、規(guī)范的微生物操作規(guī)程）。 2021-6-833 危險(xiǎn) 度等 級 生物

13、安全水平實(shí)驗(yàn)室類型實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范安全設(shè)備 1級級基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室 一級生物安 全水平 基礎(chǔ)的教學(xué)、研 究 GMT（常規(guī)的微生 物操作技術(shù)規(guī)范） 不需要，開放實(shí)驗(yàn)臺 2級級基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室 二級生物安 全水平 初級衛(wèi)生服務(wù)； 診斷、研究 GMT ，加防護(hù)服、 生物危害標(biāo)志 開放實(shí)驗(yàn)臺，此外需BSC 用于防護(hù)可能生成的氣溶氣溶 膠膠 3級級防護(hù)實(shí)驗(yàn)室 三級生物安 全水平 特殊的診斷、研 究 在二級生物安全防 護(hù)水平上增加特殊 防護(hù)服、進(jìn)入制度、 定向氣流 BSC 和或其他所有實(shí)驗(yàn) 室工作所需要的基本設(shè)備 4級級最高防護(hù)實(shí)驗(yàn) 室四級生 物安全水平 危險(xiǎn)病原體研究在三級生物安全防 護(hù)水平上增加氣鎖 入口、出口淋浴

14、、 污染物品的特殊處 理 級BSC 或級BSC并穿 著正壓服、雙開門高壓滅 菌器（穿過墻體）、經(jīng)過 濾的空氣 與微生物危險(xiǎn)度等級相對應(yīng)的相對應(yīng)的安全防護(hù)水平、操作和設(shè)施(WHO) 2021-6-834 生物安全基本設(shè)備是確保實(shí)驗(yàn)室工作人員不與 致病微生物及其毒素直接接觸的一級屏障。 包括：包括：生物安全柜、高壓滅菌器、緊急噴淋及 洗眼裝置和個(gè)人防護(hù)裝備 1. 生物安全柜（biosafety cabinet，BSC） 是處理危險(xiǎn)性微生物時(shí)所用的箱型空氣凈化安 全裝置。 三、實(shí)驗(yàn)室生物安全基本設(shè)備 2021-6-835 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按要求分別配備、級生物安全 柜。 所有可能使致病微生物及其毒素濺出或產(chǎn)

15、生氣溶 膠的操作，除實(shí)際上不可實(shí)施外，都必須在生物 安全柜內(nèi)進(jìn)行。不得用超凈工作臺代替生物安全 柜。 2021-6-836 氣溶膠 aerosol 懸浮于氣體介質(zhì)中粒徑一般為懸浮于氣體介質(zhì)中粒徑一般為 0.01m-100m0.01m-100m的固體、液體的固體、液體 微小粒子形成的膠溶狀態(tài)顆粒。微小粒子形成的膠溶狀態(tài)顆粒。 2021-6-837 生物安全柜（BSC）根據(jù)： 吸入空氣的速度 再循環(huán)空氣量和排出空氣量 排風(fēng)系統(tǒng) 壓力設(shè)置 等不同分成三級 2021-6-838 I I級生物安全柜級生物安全柜 （class I biosafety cabinet） 工作狀態(tài)時(shí)保證 工作人員和環(huán)境 不受

16、侵害，但不 保證實(shí)驗(yàn)對象不 受污染。（可用 于操作危險(xiǎn)度1、 2、3級病原體） 2021-6-839 級生物安全柜級生物安全柜 （class biosafety class biosafety cabinetcabinet） 工作狀態(tài)下遵守操作規(guī)程時(shí)既保證工 作人員不受侵害，又保證實(shí)驗(yàn)對象 不受污染?？捎糜诓僮魑ｋU(xiǎn)度1、2、 3級的微生物。（最常用） 2021-6-840 二級生物安全柜 CLASS II 級生物安全柜根據(jù)結(jié)構(gòu)以及氣流 分配不同（主要是外排氣流不同）分為： A型: A1和A2（30%氣流外排） B型: B1 （70%氣流接管道外排） B2 （100%氣流接管道外排） 2021-

17、6-841 2021-6-842 II級級B2型生物安全柜型生物安全柜 2021-6-843 III級生物安全柜 全封閉的、氣密結(jié)構(gòu)的通風(fēng)柜 通過與柜體聯(lián)結(jié)的橡膠手套進(jìn)行操作； 柜內(nèi)保持至少120Pa的負(fù)壓；送風(fēng)通過HEPA抽 入內(nèi)；外排的氣流經(jīng)過雙層雙層HEPA過濾或經(jīng) HEPA后再經(jīng)燃燒燃燒處理。 可處理危險(xiǎn)度1、2、3、4級微生物 2021-6-844 IIIBSC A：用于連接等臂長手套的 艙孔；B：窗口；C：兩個(gè) 排風(fēng)HEPA 過濾器；D：送 風(fēng)HEPA 過濾器；E：雙開 門高壓滅菌器或傳遞箱；F： 化學(xué)浸泡槽。安全柜需要 有與獨(dú)立的建筑物排風(fēng)系 統(tǒng)相連接的排風(fēng)接口。 級生物安全柜（

18、手套箱）示意圖 2021-6-845 2021-6-846 2021-6-847 2. 個(gè)人防護(hù)裝備個(gè)人防護(hù)裝備 要求要求： 實(shí)驗(yàn)室任何個(gè)人必須加強(qiáng)個(gè)人防護(hù)加強(qiáng)個(gè)人防護(hù)。裝備 應(yīng)符合國家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求標(biāo)準(zhǔn)的要求。在危害評估 的基礎(chǔ)上，按不同級別的防護(hù)要求選擇適 當(dāng)?shù)膫€(gè)人防護(hù)裝備。實(shí)驗(yàn)室對個(gè)人防護(hù)裝 備的選擇、使用、維護(hù)應(yīng)有明確的書面規(guī)應(yīng)有明確的書面規(guī) 定、程序和使用指導(dǎo)。定、程序和使用指導(dǎo)。 2021-6-848 2021-6-849 2021-6-850 2021-6-852 四、標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范（SOP) (Standard Oprating Procedure) （一）感染性或潛在感染性物質(zhì)的操作： 標(biāo)本采集、運(yùn)送、接受和接