高良姜解酒保肝的實驗研究

1、 中藥學(xué)院本科畢業(yè)論文題目： 高良姜解酒保肝的實驗研究年級專業(yè) 06藥學(xué)學(xué) 號 2006038068姓 名 蘇鶴桂指導(dǎo)教師 周園學(xué)歷職稱 大學(xué)本科教師單位 中藥學(xué)院藥理教研室填表日期 2010 年 5 月 6 日廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)位論文誠 信 聲 明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)術(shù)論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個人或集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名： 年 月 日目 錄摘 要 1前 言 3概 述 31 酒

2、精性疾病的研究概況 32 高良姜的研究進(jìn)展 42.1 高良姜的化學(xué)成分 42.2 高良姜的藥理作用 42.2.1 抗氧化作用 52.2.2 降血糖作用 52.2.3 抗促癌作用 52.2.4 促進(jìn)滲透性 52.2.5 對消化系統(tǒng)的作用 52.2.6 抗菌作用 62.2.7 抗?jié)冏饔?62.2.8 抗凝血和抗血小板聚集作用 62.3 高良姜的臨床用途 7研 究 部 分 71 實驗材料 7 1.1 藥物與試劑 7 1.2 實驗動物 7 1.3 主要儀器與設(shè)備 72 實驗方法與結(jié)果 7 2.1 高良姜水煎液的制備 8 2.2 高良姜水煎液對醉酒小鼠的潛伏期、潛伏期、醉酒率、死亡率 8 2.3 高良

3、姜水煎液對急性酒精中毒平衡感覺的影響 8 2.4 高良姜水煎液對急性酒精中毒小鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT），谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST) 含量的影響 9 3 討論 113.1 高良姜對醉酒小鼠的實驗研究 113.2 酒精性肝損傷損害 113.3 高良姜對酒精性肝損傷的保護(hù)機(jī)制 12 結(jié) 論 13參 考 文 獻(xiàn) 13致 謝 14廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院2009屆本科畢業(yè)論文高良姜解酒保肝的實驗研究 作者：蘇鶴桂（2006級藥學(xué)專業(yè) 2006038068） 指導(dǎo)老師：周園（廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院藥理教研室）【摘要】目的 探討高良姜解酒保肝的作用。方法 建立小鼠醉酒模型，觀察小鼠醉酒率、死亡率和平衡感覺的影響。建立

4、肝損傷模型，觀察高良姜對醉酒小鼠的ALT、AST影響。結(jié)果： 各濃度高良姜水煎液顯著延長小鼠醉酒潛伏期，縮短醉酒持續(xù)期，降低死亡率，對抗小鼠因酒精造成的平衡失調(diào)現(xiàn)象（P0.01），并明顯阻遏乙醇引起的肝臟ALT,AST的升高. 結(jié)論：高良姜水煎液能明顯延長小鼠醉酒潛伏期，縮短醉酒持續(xù)期，降低死亡率，提高醉酒小鼠的平衡能力，抑制ALT、AST升高,具有較好的解酒功效；對小鼠酒精性肝損傷具有顯著的保護(hù)作用，其對自由基的抑制可能是抗酒精性肝損傷的機(jī)制。【關(guān)鍵詞】高良姜；解酒保肝；酒精性肝損傷Empirical study on solving the wineshop attendant liver

5、 of Alpinia officinarum HanceGraduate: Su HeguiSupervisor:Zhou Yuan【Abstract】Objective Discusses the function of the high alpinia officinarum solution wineshop attendant liver. Methods Establish mouse alcoholic intoxication model, to observr mouse alcoholic intoxication rate, mortality rate and bala

6、nced feeling influence. Establish liver damage model, to observe the high alpinia officinarum to alcoholic intoxication mouses influence of ALT,AST. Results Various densities high alpinia officinarum Shui Jianye obviously lengthens the mouse alcoholic intoxication incubation period, reduces the alco

7、holic intoxication duration, cuts the mortality rate, the balanced being out of balance phenomenon which because the resistance mouse the ethyl alcohol creates, and baffles livers ALT, AST elevation which obviously the ethyl alcohol causes. Conclusion High alpinia officinarum Shui Jianye can lengthe

8、n the mouse alcoholic intoxication incubation period obviously, reduces the alcoholic intoxication duration, cuts the mortality rate, sharpens the alcoholic intoxication mouses balanced ability, suppresses ALT, AST to elevate 。It has well sobers up the effect; Has the remarkable protective function

9、to the mouse alcoholic liver damage. It suppresses to the free radical is possibly the mechanism which the anti-alcoholic liver damages.【Key words】Alpinia officinarum Hance; Solves wineshop attendant liver; alcoholic hepatic injury前言高良姜，為姜科植物高良姜 Alpinia officinarum Hance的干燥根莖。夏末秋初采挖，除去須根及殘留的鱗片，洗凈，切段

10、，曬干。主產(chǎn)于廣東湛江的徐聞、廣東惠陽、東莞等縣市，廣西區(qū)的陸川、博白等縣，海南省的陵水、儋縣、屯昌等縣市，此外臺灣及云南亦有小量的栽培，是我國傳統(tǒng)大宗中藥材，其藥用歷史悠久，早在古醫(yī)籍圖經(jīng)本草、本草綱目、名醫(yī)別錄等書籍中就有精辟論述，由于高良姜的藥用價值較高，具有廣闊的開發(fā)應(yīng)用前景，導(dǎo)致近年來高良姜的市場需求量逐年上漲。高良姜性味辛熱，歸脾、胃經(jīng)，善散脾胃寒邪，且有溫中止痛之功，臨床用于霍亂吐瀉、腳氣欲吐、 心脾冷痛、養(yǎng)脾溫胃，去冷消痰，寬胸下氣、脾虛寒瘧、雙目突然紅痛、風(fēng)牙痛腫。大明本草有記載：高良姜治轉(zhuǎn)筋瀉痢、反胃嘔食，解酒毒，消宿食?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，高良姜減少自由基生成，對自由基生成

11、的抑制率達(dá)9699，可能對酒精所致的過氧化損傷有保護(hù)作用。高良姜中主要的抗氧化活性物質(zhì)是黃酮醇類化合物，如山柰素4甲醚、高良姜素以及二芳基庚烷類化合物。故而本實驗利用醉酒模型，酒精性肝損傷模型來探討高良姜對作用，通過對小鼠醉酒時間、醒酒時間、醉酒率、死亡率、平衡感覺的影響的研究，并檢測酒精性肝損傷小鼠肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）含量，為高良姜的解酒保肝作用提供實驗依據(jù)和方向。概述 酒精性疾病的研究情況酒可入藥，黃帝內(nèi)經(jīng)早有記載。少量飲之，能通經(jīng)絡(luò)，活血脈，解疲乏，對身體有益；多飲則會“酒醉”、“中酒毒”，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)稱為酒精中毒，對身體十分有害。首先，酒精會對胃粘膜產(chǎn)生刺激，引起

12、胃潰瘍危及生命。其次，酒中很多有害物資，容易對肝臟造成損害，如脂肪在肝臟堆積引起脂肪肝。最后，大量飲酒還會影響孕婦胎兒發(fā)育和男性精子形成甚至大腦皮質(zhì)萎縮，容易給自身和周圍帶來傷害。長期飲酒容易對酒精產(chǎn)生依賴性，酗酒。長期飲酒會對身體各器官造成很大的傷害，特別是對肝臟的損害，容易引起酒精性肝損傷。酒精性肝損傷(alcoholic liver disease，ALD)是因攝入酒精過度致使肝臟中的乙醇（酒精）和乙醛含量大幅升高，最后使肝細(xì)胞反復(fù)發(fā)生脂肪變性、壞死的一種酒精性肝病。有資料顯示美國酒精性肝病死亡居第十位，我國近年來由酒精所致的肝損害亦呈逐年上升趨勢，在所有肝病中的比例在1996年已達(dá)21

13、、3，酒精已成為繼病毒性肝炎后導(dǎo)致肝損害的主要病因。酒精已成為繼病毒性肝炎后導(dǎo)致肝損害的第二大病因。酒精性肝損傷的臨床表現(xiàn)多樣，癥狀繁多，如乏力、食欲不振、惡心嘔吐和體重下降等，也可有嚴(yán)重癥狀如肝性腦病、腎功能衰竭和上消化道大出血等。解酒藥總體可以分為化學(xué)藥品、中藥制劑、保健品三種，其解酒功效隨藥性快慢有關(guān)系?；瘜W(xué)藥品，多是興奮劑、維生素與氨基酸等成分，能快速的起到解酒、醒酒作用，但大部分的化學(xué)藥品解酒機(jī)理是僅僅能促進(jìn)酒精分解，起到暫時性的緩解作用，很難起到護(hù)肝作用。如：克格勃RU21解酒藥，酒之伴強(qiáng)力醒酒護(hù)肝丸，酒無底等品種。中藥制劑，成分多為枳子、葛根花、白芍、肉豆蔻，這些中藥可以起到很好

14、解酒作用，同時全身調(diào)理的作用，但效果稍微遲緩。沒有副作用，在解酒醒酒同時還對肝膽疾病有著很好的療效。如：解酒護(hù)肝丸，醒酒王片，葛根花、草果、高良姜、菊花、竹茹、苦參、肉豆蔻等中藥制劑也能很好解酒。保健品，現(xiàn)在市場上賣的解酒護(hù)肝的保健品很多，應(yīng)該說這些作用是有限的。解酒護(hù)肝藥多為中成藥，成分還是是葛花、葛根、白芍、柴胡、枳椇子、桑椹和富硒野山茶等，這些中藥確有解酒護(hù)肝功效。 2 高良姜的研究進(jìn)展2.1 高良姜的化學(xué)成分高良姜的化學(xué)成分為：根莖含揮發(fā)油0515，其中主要成分是：姜黃素等二苯基庚烷類化合物，1，8-桉葉素和桂皮酸甲酯，丁香油酚、蒎烯、畢澄茄烯等。還含黃酮類化合物：高良姜素，槲皮素，山

15、柰酚，山柰素，異鼠李素，槲皮素-5-甲醚，高良姜素-3-甲醚，還可能含有鼠李檸檬素及7-羥基-3，5-二甲氧基黃酮。又含揮發(fā)油，內(nèi)有：匯報烯，蓽澄茄烯，桂皮酸甲酯。根尚含-谷甾醇-葡萄糖苷，豆甾醇葡萄糖苷,菜油甾醇葡萄糖苷。2.2 高良姜的藥理作用2.2.1 抗氧化作用 高良姜提取物有較強(qiáng)的抗脂質(zhì)過氧化作用，其中二苯基庚烷類化合物抗氧化效果顯著，對自由基生成的抑制率達(dá)96991 。Lee等 2研究發(fā)現(xiàn)，高良姜提取液能減輕氧化劑H202對V794細(xì)胞繁殖的抑制作用，用高良姜提取液(100ugmL)處理過的細(xì)胞比未處理過的成活率提高了48，并推測高良姜中主要的抗氧化活性物質(zhì)是黃酮醇類化合物，如山奈

16、素一4一甲醚、高良姜素以及二芳基庚烷類化合物。2.2.2 降血糖作用 Akhtar3等的研究表明，高良姜提取物具有明顯的降血糖作用。研究人員在正常雄性新西蘭家兔的降血糖實驗中，發(fā)現(xiàn)口服高良姜粉末3gkg時能明顯降低血糖，甲醇提取液和水提取液的降血糖作用更明顯，當(dāng)口服劑量為4 gkg時，8 h血糖顯著降低，推測其降血糖作用可能是通過促進(jìn)體內(nèi)胰腺分泌胰島素而實現(xiàn)的4。2.2.3 抗促癌作用 Moon5等報道高良姜素能有效降低甲基亞硝基脲，(MNU)對小鼠肺細(xì)胞染色體的致畸作用，高良姜提取物能抑制7，12-二甲基苯并蒽引起的小鼠細(xì)胞畸變作用，抑制率為571。陳南岳6等 研究了高良姜對蛋白激酶C （p

17、roteinkinase C，PKC)抑制劑存在下對鼻咽癌細(xì)胞生長的影響。PKC抑制劑staurosp0rine(sT)或sphingosine(SS)，能抑制人低分化鼻咽癌細(xì)胞CNE一2Z的生長，高良姜本身不影響CNE一2Z細(xì)胞的生長，但明顯協(xié)同ss抑制CNE一2Z細(xì)胞生長，提示高良姜本身可能也參與了改變某些與PKC激活途徑有關(guān)的環(huán)節(jié)(如鈣離子、作用底物、膜脂代謝等。高良姜的甲醇提取物對TPA誘發(fā)水腫的抑制率為70，提取物對DMBATPA二階段致癌過程有抑制作用 。2.2.4 促進(jìn)滲透性 沈琦7等研究了高良姜水煎液、化合物(高良姜油和桉葉素)對5一氟尿嘧啶(5一Fu)透皮吸收影響，研究結(jié)果表

18、明，高良姜水煎液有一定的促滲作用，而高良姜油和桉葉素具有極強(qiáng)的促滲作用。1和3的高良姜油能使5一Fu滲透分別提高110.21倍和10826倍，2的桉葉素也可提高6754倍。2.2.5 對消化系統(tǒng)作用 Borrelli8等通過小鼠鎮(zhèn)痛和家鴿止嘔藥效指標(biāo)模型，對高良姜不同化學(xué)部位(即水提液、醇提液、揮發(fā)油、水提乙酸乙酯萃取物、醇提乙酸乙酯萃取物)進(jìn)行了篩選，結(jié)果顯示各部位均具有鎮(zhèn)痛、止嘔雙重藥理作用，而且水煎液的活性強(qiáng)于水提物。陳佃9等研究發(fā)現(xiàn)高良姜水提物和水煎液對硫酸銅致家鴿嘔吐，均能明顯延長其嘔吐潛伏期和減少嘔吐次數(shù)，水煎液活性強(qiáng)于水提物。高良姜還具有很好的抗腹瀉作用，對于蓖麻油引起的小鼠腹瀉

19、，高良姜水煎液和水提物都能明顯減少其腹瀉次數(shù)9。對番瀉葉引起的小鼠腹瀉，高良姜水提物能明顯減少其腹瀉次數(shù)。胃腸運動受神經(jīng)和體液因素共同調(diào)節(jié)。其中膽堿能神經(jīng)對平滑肌運動起重要作用，主要是通過釋放乙酰膽堿(Ach)，刺激腸壁和肌問神經(jīng)叢M受體，通過細(xì)胞膜信號傳導(dǎo)系統(tǒng)，使胞內(nèi)ca2+ 升高，引起平滑肌收縮。研究表明，高良姜黃酮類具有明顯的胃腸解痙作用，可抑制Ach致平滑肌張力升高，因而具有止嘔抗腹瀉作用10。2.2.6 抗菌作用高良姜水煎液在10 mgmL和1 mgmL時對白色念珠菌、威克海姆原藻和啤酒酵母都有很強(qiáng)的抑制作用12，而且高良姜水煎液對晚疫病菌(phytophthora infestan

20、s)能達(dá)到1 00的抑制。同時，高良姜水煎液具有抑制引起齲齒的鏈球菌活性的作用13。與抗生素類藥物引起的副作用和抗藥性相比，高良姜可能是研究開發(fā)新的抗菌藥物的理想資源，但目前有關(guān)研究較少，并且還僅僅處于對粗提物的研究階段，為明確其中的活性成分，有待進(jìn)一步深入研究。2.2.7 抗?jié)冏饔脜乔搴?4等探討了高良姜超臨界萃取物對應(yīng)激性胃潰瘍模型大鼠潰瘍形成及血清表皮生長因子(EGF)和白介素一2(IL一2)的影響。研究小組以束縛一水浸應(yīng)激性胃潰瘍大鼠為對象，觀察了高良姜萃取物對大鼠潰瘍指數(shù)及血清EGF和IL一2水平的影響。研究結(jié)果表明，高良姜萃取物能降低束縛一水浸應(yīng)激型潰瘍大鼠的潰瘍指數(shù)，并可使該模

21、型大鼠血清IL一2和EGF水平明顯回升接近正常水平。研究人員認(rèn)為高良姜萃取物能提高應(yīng)激大鼠的TH1免疫應(yīng)答，增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能，可能是高良姜抗?jié)儥C(jī)制的一個重要方面。2.2.8 抗凝血和抗血小板聚集作用劉應(yīng)柯15等的研究結(jié)果表明，高良姜水提物100濃度即有明顯抗凝作用，1 50濃度可完全抗凝，與250 ugmL肝素抗凝作用相同，明顯強(qiáng)于高良姜水提物，其抗凝機(jī)理可能與高良姜具有抑制血小板聚集，阻礙凝血活酶的形成等因素有關(guān)。該研究工作的實驗還證實，高良姜水提物保護(hù)缺血缺氧心肌的SOD活性，降低MDA含量的作用與高良姜相似。高良姜醚提物和水提物能劑量依賴性地預(yù)防電刺激頸動脈引起的血栓，藥理作用涉及抗凝

22、血和抗血小板聚集兩個方面，可用于預(yù)防和阻止休克機(jī)體發(fā)生彌漫性血管內(nèi)凝血(DIC)。高良姜醚提物和水提物均有抗缺氧作用，機(jī)理可能分別為減慢機(jī)體耗氧速度和提高機(jī)體在缺氧條件下的氧利用能力16。2.3 高良姜的臨床用途高良姜可用于治療霍亂吐瀉、腳氣欲吐、 心脾冷痛（按：即胃痛）、養(yǎng)脾溫胃，去冷消痰，寬胸下氣、脾虛寒瘧（寒多熱少，不思飲食）、雙目突然紅痛、風(fēng)牙痛腫。研究內(nèi)容1 實驗材料1.1 藥物與試劑供試品：高良姜（廣州中醫(yī)藥大學(xué)采芝林，批號20100413）。 陽性藥：海王金樽（衛(wèi)生健字（2002）第0396號，批號：20090921；深圳市海王健康發(fā)展有限公司生產(chǎn)）： 聯(lián)苯雙酯滴丸（國藥準(zhǔn)字H4

23、4023176，批號：20090907；廣州星群股份有限公司生產(chǎn)）。試劑：GPT試劑盒（南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，批號：20100429）；GOT試劑盒（南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，批號：20100429）：考馬斯亮蘭試劑盒（南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，批號：20100429）：二鍋頭（北京明星酒業(yè)有限公司，批號：20090909）。1.2 實驗動物昆明小鼠，雌雄兼用，體重18-25g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供。1.3 主要儀器與設(shè)備HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市醫(yī)療儀器廠）；紫外可見光光度器（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司，型號：T6新世紀(jì)）；EL204 電子分析天平（梅特勒-托利多

24、儀器（上海）有限公司，型號：JB/T 5374-1991）；電子計重器（中山市金利電子電子衡器有限公司，型號：ACS-LT）；XZC-4B型轉(zhuǎn)棒式疲勞儀（山東省醫(yī)學(xué)科科學(xué)院設(shè)備站）。2 實驗方法與結(jié)果2.1 高良姜水煎液的制備 取高良姜藥材100g，將其粉碎成粗粉，用812倍蒸餾水浸泡0.5h，然后煎煮11.5h,溫度設(shè)定為120度，過濾，濾渣按同樣方法煎煮，合并兩次濾液，最后濃縮至100ml, 并配制成高、中、低劑量組（4.0g/kg、2.0g/kg、1.0g/kg）。2.2高良姜水煎液對醉酒小鼠的醉酒潛伏期、潛伏期、醉酒率、死亡率的影響；取60只小鼠隨機(jī)分為5組：高劑量組、中劑量組、低劑量

25、組，陽性對照組，模型組（56度），每組l0只。各組小鼠先禁食12 h，模型組按照0.2ml/10g的劑量灌胃生理鹽水；陽性對照組灌胃濃度1.0g/ml的海王金樽溶液，0.2ml/10g；高中低劑量組分別給予提取物4.0g/kg,2.0 g/kg,1.0 g/kg灌胃。30 min后各組小鼠均灌胃56度二鍋頭酒0.2ml/10g,記錄小鼠醉酒潛伏期、持續(xù)期，小鼠6h內(nèi)醉酒率，24h內(nèi)小鼠死亡率。數(shù)據(jù)以S表示，采用SPSS130軟件作統(tǒng)計學(xué)處理結(jié)果見表1表1高良姜水煎液對急性酒精中毒的醉酒潛伏期、持續(xù)期、醒酒率、死亡率的影響組別潛伏期/min持續(xù)期/min醉酒率/n(%)死亡率（24h）模型組85

26、4954810（100）80陽性藥組（海王金樽組）5520*21520*9（90）10*高劑量組3918* 23961*8（90）20*中劑量組2511*30746*10（100）40低劑量組196*34834*10（100）60與模型組比較：*P0.05,*P0.01由表1可知，與模型組比較，高良姜可明顯延長急性酒精性中毒小鼠的醉酒潛伏期，縮短持續(xù)期，高劑量組的效果與陽性藥組略差。而高良姜高劑量組可顯著降低急性酒精中毒小鼠的死亡率，與陽性藥組相仿。2.3 高良姜水煎液對急性酒精中毒平衡感覺的影響 轉(zhuǎn)棒法的基本原理：動物在旋轉(zhuǎn)的棒上為保持身體平衡不致跌下，需要向轉(zhuǎn)動的棒的相反方向運動，所以需要

27、四肢肌肉進(jìn)行協(xié)調(diào)活動。用大量中樞抑制藥后動物肌肉運動減弱，可縮短動物從棒上落下的時間。本法可用來測定藥物對中樞神經(jīng)的抑制作用。 將經(jīng)過預(yù)選3min內(nèi)不從轉(zhuǎn)棒上墜落的小鼠隨機(jī)分為5組：動物分組，給藥均同上。30 min后各組小鼠灌胃56度二鍋頭酒, 0.2ml/20g，分別于給乙醇后20 min、90 min、120 min時將動物放入16轉(zhuǎn)/min轉(zhuǎn)棒式疲勞儀內(nèi)，每室一只，記錄3min內(nèi)未從轉(zhuǎn)棒上墜落小鼠數(shù)，各組數(shù)據(jù)與模型組比較，觀察是否具有統(tǒng)計學(xué)差異，數(shù)據(jù)由卡方檢驗進(jìn)行處理。表2 高良姜水煎液對急性酒精中毒小鼠平衡的影響組別轉(zhuǎn)棒上未墜落小鼠數(shù)/3min20(min)90(min)120(mi

28、n)模型組322陽性藥組（海王金樽組）9*8*7*高劑量組12*9*9*中劑量組8*8*6低劑量組543與模型組比較：*P0.05,*P0.01由表4可知，與模型組相比，高良姜小鼠在給酒精后各時間轉(zhuǎn)棒上（3分鐘）未墜落鼠數(shù)量有明顯增加，其結(jié)果比陽性藥組略優(yōu)。2.4 高良姜水煎液對急性酒精中毒小鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）含量的影響。2.4.1 動物分組與處理： 參考文獻(xiàn)“五味子藤莖對小鼠酒精性肝損傷血清轉(zhuǎn)氨酶的影響”，把50只小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分成5組，每組10只，即模型組（生理鹽水組，0.9%）、陽性對照組(聯(lián)苯雙酯滴丸組，02 gkg)、高良姜低劑量組(1.0g/kg)、

29、高良姜中劑量組(2.0g/kg)、高良姜高劑量組(4.0g/kg)。均灌胃給藥，1次/d，連續(xù)10 d，灌胃容積為02 ml10 g.每日灌胃給藥30min后，其余各組小鼠均灌胃56度二鍋頭白酒0.16 ml10g。第10天給酒后禁食不禁水，24 h后稱重，采集肝臟標(biāo)本,作相關(guān)檢測。2.4.2 實驗方法（1） 剖殺前一天斷飼，小鼠取血后立即斷頸椎處死，剖腹取肝臟，用4生理鹽水沖洗，濾紙吸干，稱重。（2） ALT、AST按試劑盒說明書用比色法測定。（3） 數(shù)據(jù)使用方差分析t檢驗進(jìn)行分析比較。2.4.3 結(jié)果見表3表3 高良姜水煎液對急性酒精性中毒小鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT），谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）的含

30、量影響組別ALT(mgprot/ml)AST(mgprot/ml)模型組1183717032陽性藥組（聯(lián)苯雙酯滴丸組）5321*9121*高劑量組6922*11253*中劑量組8921*13144*低劑量組1152816144與模型組比較：*P0.05,*P0.01由表3和圖1可知，與模型組比較，陽性藥組和高中劑量組均能有效降低ALT,AST的升高，提示其可有效遏制乙醇引起的ALT,AST升高，對醉酒小鼠肝損傷具有保護(hù)作用，而低劑量組對抑制ALT,AST的升高沒顯著作用。 圖1 各組對醉酒小鼠ALT,AST含量的影響3. 討論3.1 高良姜對醉酒小鼠的實驗研究 酒作為日常生活飲品之一，自古以來

31、被稱為“百藥之長”。中醫(yī)理論認(rèn)為，酒性溫?zé)?，味甘、辛、苦，歸心、肝。胃肺經(jīng)，功效舒筋活絡(luò)，止痛散寒，溫通筋脈，引行藥勢，用于風(fēng)寒濕痹，筋脈痙攣。但飲酒過量會導(dǎo)致酒精中毒，輕者可產(chǎn)生頭暈、惡心嘔吐、意識模糊、記憶障礙、情緒異常、嗜睡；重者可出現(xiàn)昏迷、呼吸抑制、體溫下降，呼吸麻痹而死亡。今年來有報導(dǎo)，過量飲酒可導(dǎo)致食道癌、肝癌，因此開發(fā)有效的解酒藥物受到各國的重視17 18。本實驗通過研究醉酒小鼠的醉酒率、死亡率、小鼠平衡感覺的影響和檢測酒精性中毒小鼠肝勻漿中ALT，AST含量，來探討高良姜對肝臟的保護(hù)作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：高良姜水煎液可降低醉酒率，延長醉酒時間，可縮短醒酒時間，降低死亡率，降低小鼠下墜

32、只數(shù)，抑制ALT,AST升高，具有顯著解酒促醒的作用，根據(jù)不同濃度效果對比發(fā)現(xiàn)，高濃度高良姜水煎液其解酒效果比低濃度高良姜水煎液要顯著。說明高良姜具有解酒作用，揭示以下兩方面：高良姜水煎液可通過提高肝組織ADH活性，促進(jìn)乙醇代謝，降低血清乙醇濃度，加速其代謝產(chǎn)物的消除速率，減輕其對組織和細(xì)胞的損傷，發(fā)揮解酒促醒作用；高良姜水煎液可通過提高抗氧化和清除自由基的作用，不僅能清除鏈引發(fā)階段的自由基，而且可以直接捕獲自由基反應(yīng)鏈中的自由基，阻斷自由基鏈反應(yīng)，起到預(yù)防和斷鏈的雙層作用，從而使細(xì)胞免受氧化損傷而導(dǎo)致細(xì)胞分化異常，形成腫瘤，甚至死亡。3.2 酒精性肝損傷的損害由酒精性肝損傷引起的酒精性肝病(

33、alcoholicliver disease，ALD)已成為一種世界性的疾病。有資料顯示美國酒精性肝病死亡居第十位，我國近年來由酒精所致的肝損害亦呈逐年上升趨勢，在所有肝病中的比例在1996年已達(dá)21、3，酒精已成為繼病毒性肝炎后導(dǎo)致肝損害的主要病因19。ALD發(fā)病率高、后果嚴(yán)重，加之酒精中毒對神經(jīng)系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)的影響已成為一種嚴(yán)重危害人民健康的疾病。另外，ALl又常和乙型、丙型肝炎合并存在，迭加致病，更易并發(fā)肝硬化及肝癌20。因此，對ALD的防治應(yīng)予以高度重視，加強(qiáng)ALD的宣傳和防治研究已成為當(dāng)前面臨的重要課題。研究表明，機(jī)體大量攝入乙醇后，在乙醇脫氫酶的催化下大量脫氫氧化，使三羧酸循環(huán)障礙

34、和脂肪酸氧化減弱而影響脂肪代謝，致使脂肪在肝細(xì)胞內(nèi)沉積，同時乙醇能激活氧分子，產(chǎn)生氧自由基導(dǎo)致肝細(xì)胞膜的脂質(zhì)過氧化及體內(nèi)還原型谷胱甘肽的耗竭，同時研究證實酒精中毒可以直接引起肝纖維化。并由纖維化直接迸入肝硬化。研究發(fā)現(xiàn)，高良姜對酒精性肝損傷小鼠的肝腫脹大有一定抑制作用，能改善肝臟病變狀況，使血清ALT、AST、CHO、TG和肝組織SOD、GSHPx、MDA及NO向正常水平恢復(fù)21 。提示高良姜對酒精引起的肝損傷均具有保護(hù)作用，其確切機(jī)制有待進(jìn)一步研究。3.3 高良姜對酒精性肝損傷的保護(hù)機(jī)制高良姜，為姜科植物高良姜 Alpinia officinarum Hance的干燥根莖。高良姜性味辛熱，歸

35、脾、胃經(jīng)，善散脾胃寒邪，且有溫中止痛之功。高良姜提取物有較強(qiáng)的抗脂質(zhì)過氧化作用，其中二苯基庚烷類化合物抗氧化效果顯著，對自由基生成的抑制率達(dá)9699 。研究發(fā)現(xiàn)，高良姜提取液能減輕氧化劑H202對V794細(xì)胞繁殖的抑制作用，用高良姜提取液(100ugmL)處理過的細(xì)胞比未處理過的成活率提高了48，并推測高良姜中主要的抗氧化活性物質(zhì)是黃酮醇類化合物，如山奈素一4一甲醚、高良姜素以及二芳基庚烷類化合物22,23。因為高良姜中含有抗氧化活性物質(zhì)是黃酮醇類化合物，如山柰素4甲醚、高良姜素以及二芳基庚烷類化合物，所以對保肝解酒有一定療效。近年來，有關(guān)高良姜對肝損傷的作用研究比較少，但在臨床上取得了比較滿

36、意的效果，所以高良姜在保肝護(hù)肝方面的應(yīng)用也開始普及。研究證明，高良姜具有良好的保護(hù)肝細(xì)胞免受損傷、抗氧化和清除自由基作用。其機(jī)制主要為，高良姜中黃酮類化合物在抗氧化反應(yīng)中不僅能清除鏈引發(fā)階段的自由基，而且可以直接捕獲自由基反應(yīng)鏈中的自由基，阻斷自由基鏈反應(yīng)，起到預(yù)防和斷鏈的雙層作用。黃酮類化合物通過酚羥基與自由基反應(yīng)生成較穩(wěn)定的半醌式自由基，從而終止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，這是黃酮類化合物清除自由基的最主要機(jī)制。酚羥基是黃酮類化合物抗氧化作用的主要活性基團(tuán)，在一定程度上增加酚羥基，抗氧化活性增加；B環(huán)是黃酮類化合物抗氧化清除自由基的主要活性部位，當(dāng)該環(huán)存在鄰羥基時，抗氧化活性被大大地提高；2，3位雙鍵

37、有利于p環(huán)失電子后自旋形成更穩(wěn)定的自由基；4位羰基可以與鄰羥基形成氫鍵，使自由基中間體更穩(wěn)定；3，5位羥基屬增效酚羥基24。大明本草有治轉(zhuǎn)筋瀉痢、反胃嘔食，解酒毒，消宿食的記錄。古代醫(yī)學(xué)家對酒精性肝病早有研究，認(rèn)為多由酒毒蘊積濕熱熏蒸肝膽所致酒精性肝病，無論從病因、病理分析，都存在氧自由基對肝的破壞型連鎖反應(yīng)的因素。因此解酒毒與清除氧自由基并重，方可相得益彰。而高良姜的作用主要恰恰是清除氧自由基，這就為本實驗提供了一定的理論依據(jù)。結(jié)論綜上所述，高良姜水煎液能解酒毒和保護(hù)肝臟的作用，其作用機(jī)理是多方面，可能與其清除自由基，抗氧化作用直接相關(guān)。這些作用為高良姜在臨床上治療酒精性肝損傷提供一定的藥理

38、理論依據(jù)。但由于高良姜成分復(fù)雜，提取工藝繁鎖，很難提供有效單體用于藥理學(xué)研究，目前實驗研究不夠深入，只停留在一般的藥效學(xué)研究上，對于其有效成分的實驗研究還有待從細(xì)胞和分子水平進(jìn)一步探討?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1 劉小紅，張尊聽，段玉峰，等市售天然植物香料的抗氧化作用研究J食品科學(xué)，2002，23(1)：1432 Lee SE，HwangH J，tta J S，et a1Screening ofmedicinal plant extracts for antioxidant activityJLife Science，2003，73：1671793 Akhtar M S，Khan M A，Malik M

39、THypoglycaemic activity ofAlpinia galanga rhizome and its extracts in rabbitsJFitoterapia，2002，73：6236284 MS Akhtar，MA Khan，MT MalikHypoglycaemic activity of Alpinia galangarhizome and its extracts in rabbitsJ Fitoterapia，2002，73：6235 Moon Y H，Su J S，William W AAntigenotoxicity of galangin as a canc

40、er chemopreventive agentJcandidate Mutation Res，2001，488：13515O6 陳南岳，趙明倫PKG抑制劑與六種海洋生物和中草藥對鼻咽癌細(xì)胞生長的影響中國病理生理雜志，1996，12(6)：596-5997 沈琦，李文姬，徐蓮英高良姜等中藥對5-氟脲嘧啶的促滲作用中藥材，2000，23(11)：697699.8 Francesca B，AngeloA1Tim PlantKingdom as a Source ofAntiulce9 陳佃，何瑞，李彩君高良姜鎮(zhèn)痛止嘔有效成分的研究廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2001，18(3)：24024210 朱自平，

41、陳光娟，張明發(fā)，等高良姜的溫中止痛藥理研究中藥材，199I，14(10)：37-4111 操電群，吳清和 胃腸運動神經(jīng)調(diào)節(jié)與高良姜胃腸解痙的可能途徑甘肅中醫(yī)，2004，17(4)：7-912 張明發(fā)，沈雅琴溫里藥溫經(jīng)止痛除痹的藥理研究J中國中醫(yī)藥信息雜志，2000，7(1)：3013 官毓靜，安汝國，虞慧等164種中藥乙醇提取物抗真菌作用研究中草藥，2002，33(1)：4347Z,此文章來自華夏中醫(yī)藥網(wǎng) 14 吳清和，操電群，黃萍，等高良姜超臨界萃取物對應(yīng)激性潰瘍大鼠潰瘍形成及表皮生長因子和自介素一2水平的影響J中藥藥理與臨床，2004，20(6)：17-1815 劉應(yīng)柯，黃國峰高良姜抗凝實臉及對心肌脂質(zhì)過氧化的影響中國中醫(yī)藥科技，l997，4(1)：4716 張明發(fā)，沈雅琴高良姜的溫里藥理研究J陜西中醫(yī)，1996，17(7)：32432617 傅蘭，傅偉，沈偉等。宜康口服液醒酒實驗研究J。