03-雜質(zhì)檢查-藥物分析第7版

1、L/O/G/O 第三章第三章 藥物的雜質(zhì)檢查藥物的雜質(zhì)檢查 Contents 藥物的雜質(zhì)與限量藥物的雜質(zhì)與限量1 雜質(zhì)的檢查方法雜質(zhì)的檢查方法2 一般雜質(zhì)的檢查方法一般雜質(zhì)的檢查方法 3 特殊雜質(zhì)的檢查方法特殊雜質(zhì)的檢查方法 4 一、一、藥物的雜質(zhì)與純度藥物的雜質(zhì)與純度 第一節(jié)第一節(jié) 藥物的雜質(zhì)與限量藥物的雜質(zhì)與限量 雜質(zhì)雜質(zhì) 任何影響藥品純度的物質(zhì)均稱為雜質(zhì)。任何影響藥品純度的物質(zhì)均稱為雜質(zhì)。 雜質(zhì)雜質(zhì)無治療作用、或影響藥物的穩(wěn)定性和療效、無治療作用、或影響藥物的穩(wěn)定性和療效、 甚至對人體健康有害。甚至對人體健康有害。 藥品純度藥品純度 指藥物的純潔程度，是反映藥品質(zhì)量的一項重指藥物的純潔程

2、度，是反映藥品質(zhì)量的一項重 要指標(biāo)。要指標(biāo)。 主要由藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的主要由藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的“檢查檢查”項下的雜質(zhì)項下的雜質(zhì) 檢查來控制。檢查來控制。 注意注意 藥物純度與化學(xué)純度的區(qū)別藥物純度與化學(xué)純度的區(qū)別 藥物純度的評價藥物純度的評價 應(yīng)把藥物的性狀、理化常數(shù)、雜質(zhì)檢查、含量測應(yīng)把藥物的性狀、理化常數(shù)、雜質(zhì)檢查、含量測 定等作為一個有聯(lián)系的整體來評價藥物的純度。定等作為一個有聯(lián)系的整體來評價藥物的純度。 生產(chǎn)過程中引入生產(chǎn)過程中引入 藥物在合成過程藥物在合成過程 中未反應(yīng)的原料、中未反應(yīng)的原料、 中間體和副產(chǎn)物、中間體和副產(chǎn)物、 所用的試劑、溶所用的試劑、溶 劑、還原劑劑、還原劑 、金金

3、屬器皿、裝置等。屬器皿、裝置等。 貯藏過程中引入貯藏過程中引入 外界條件的變化或外界條件的變化或 微生物的作用可能微生物的作用可能 發(fā)生的水解、氧化、發(fā)生的水解、氧化、 異構(gòu)化、晶型轉(zhuǎn)化、異構(gòu)化、晶型轉(zhuǎn)化、 聚合等變化而產(chǎn)生聚合等變化而產(chǎn)生 的有關(guān)雜質(zhì)。的有關(guān)雜質(zhì)。 二、雜質(zhì)的來源二、雜質(zhì)的來源 胺化 Cl Cl Cl Cl SO2Cl SO2Cl Cl Cl SO2NH2 SO2Cl Cl Cl SO2NH2 SO2NH2 胺化 ClSO4H NH4OHNH4OH 氯磺化 示例：示例：雙氯非那胺的生產(chǎn)雙氯非那胺的生產(chǎn) 原料殘留：鄰二氯苯原料殘留：鄰二氯苯 中間體分解：氯化銨中間體分解：氯化銨

4、 分解分解 NH4Cl 原料藥生產(chǎn)中引入的雜質(zhì)原料藥生產(chǎn)中引入的雜質(zhì) 示例示例 腎上腺素注射液腎上腺素注射液 抗氧劑抗氧劑焦亞硫酸鈉焦亞硫酸鈉 穩(wěn)定劑穩(wěn)定劑EDTA-2Na HO HO C OH H CH2NHCH3 腎上腺素 腎上腺素磺酸腎上腺素磺酸 制劑生產(chǎn)中引入的雜質(zhì)制劑生產(chǎn)中引入的雜質(zhì) 腎上腺素腎上腺素 光學(xué)異構(gòu)體光學(xué)異構(gòu)體 例例. 腎上腺素左旋體的升壓作用是右旋體的腎上腺素左旋體的升壓作用是右旋體的12 倍倍 鹽酸普萘洛爾左旋異構(gòu)體的鹽酸普萘洛爾左旋異構(gòu)體的 - 受體阻斷受體阻斷 作用比右旋體大作用比右旋體大60倍。倍。 無效、低效異構(gòu)體或晶型無效、低效異構(gòu)體或晶型 幾何異構(gòu)體（順式

5、體，反式體）幾何異構(gòu)體（順式體，反式體） 例例. 維生素維生素A全反式的生物活性最高全反式的生物活性最高 多晶型多晶型 晶型不同，理化常數(shù)、溶解度、穩(wěn)定性、晶型不同，理化常數(shù)、溶解度、穩(wěn)定性、 體內(nèi)吸收和療效也不同。體內(nèi)吸收和療效也不同。 例例. 無味氯霉素有多晶現(xiàn)象，無味氯霉素有多晶現(xiàn)象，B晶型易被酯酶晶型易被酯酶 水解而吸收，為有效晶型，而水解而吸收，為有效晶型，而A晶型則不易被晶型則不易被 酯酶水解，活性很低。酯酶水解，活性很低。 藥物貯藏中引入的雜質(zhì)藥物貯藏中引入的雜質(zhì) 水解反應(yīng)水解反應(yīng)：吲哚美辛吲哚美辛酰胺鍵酰胺鍵 易發(fā)生水解反應(yīng)的結(jié)構(gòu)：易發(fā)生水解反應(yīng)的結(jié)構(gòu)：酯、內(nèi)酯、酰胺、酯、內(nèi)酯

6、、酰胺、 鹵代烴、苷類等鹵代烴、苷類等 易發(fā)生氧化反應(yīng)的結(jié)構(gòu)：易發(fā)生氧化反應(yīng)的結(jié)構(gòu)：醚、醛、酚羥基、醚、醛、酚羥基、 巰基、亞硝基、巰基、亞硝基、 雙鍵等雙鍵等 氧化反應(yīng)氧化反應(yīng)：利血平利血平氧化產(chǎn)物無降壓作用氧化產(chǎn)物無降壓作用 例例 卡比馬唑中甲巰咪唑的引入卡比馬唑中甲巰咪唑的引入 卡比馬唑的合成過程：卡比馬唑的合成過程： ClCH2CH OC2H5 OC2H5 CH3NH2, CH3OH 胺化 CH2CH OC2H5 OC2H5 H3CHN KSCN 環(huán)合 N N CH3 SH ClCOOC2H5,C5H5N 縮合 N N CH3 SCOOC2H5 N N COOC2H5 S CH3 (甲

7、巰咪唑） 甲巰咪唑即是卡比馬唑合成中的中間體，也是甲巰咪唑即是卡比馬唑合成中的中間體，也是 貯存過程中的分解產(chǎn)物。貯存過程中的分解產(chǎn)物。 嚴格控制藥品的貯藏條件，是保證臨床用藥安嚴格控制藥品的貯藏條件，是保證臨床用藥安 全、有效的一個重要方面。全、有效的一個重要方面。 三、雜質(zhì)的種類與分類三、雜質(zhì)的種類與分類 按來源分按來源分 一一 般般 雜雜 質(zhì)質(zhì) 在自然界中分布較廣泛，在多種在自然界中分布較廣泛，在多種 藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中容易引藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中容易引 入的雜質(zhì)。如酸、堿、水分、氯入的雜質(zhì)。如酸、堿、水分、氯 化物、硫酸鹽、重金屬、砷鹽等化物、硫酸鹽、重金屬、砷鹽等 特特 殊殊 雜

8、雜 質(zhì)質(zhì) 在個別藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中在個別藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中 引入的雜質(zhì)。如阿司匹林中的游引入的雜質(zhì)。如阿司匹林中的游 離水楊酸、甲硝唑中的離水楊酸、甲硝唑中的2-甲基甲基-5- 硝基咪唑等。硝基咪唑等。 按毒性分按毒性分 信號雜質(zhì)信號雜質(zhì) 本身一般無害，但其含量的本身一般無害，但其含量的 多少可以反映出藥物的純度多少可以反映出藥物的純度 水平，稱其為水平，稱其為“信號信號”雜質(zhì)。雜質(zhì)。 如氯化物、硫酸鹽等屬于信如氯化物、硫酸鹽等屬于信 號雜質(zhì)。號雜質(zhì)。 毒性雜質(zhì)毒性雜質(zhì) 對人體有毒害的雜質(zhì)。如重對人體有毒害的雜質(zhì)。如重 金屬、砷鹽、氰化物等應(yīng)嚴金屬、砷鹽、氰化物等應(yīng)嚴 格加以控制，以保

9、證用藥安格加以控制，以保證用藥安 全。全。 有機雜質(zhì)有機雜質(zhì) 殘留溶劑殘留溶劑 無機雜質(zhì)無機雜質(zhì) 按按 化化 學(xué)學(xué) 類類 別別 和和 特特 性性 分分 類類 合成中未反應(yīng)完全的原料、中合成中未反應(yīng)完全的原料、中 間體、副產(chǎn)物、降解產(chǎn)物等間體、副產(chǎn)物、降解產(chǎn)物等 生產(chǎn)中使用的有機溶劑生產(chǎn)中使用的有機溶劑 來源于生產(chǎn)過程，一般是已知來源于生產(chǎn)過程，一般是已知 的和確定的，直接影響藥物的的和確定的，直接影響藥物的 穩(wěn)定性，反映生產(chǎn)工藝情況穩(wěn)定性，反映生產(chǎn)工藝情況 四、雜質(zhì)的限量四、雜質(zhì)的限量 定義定義 藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量。藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量。 計算計算 供供試試品品的的量量 雜雜質(zhì)質(zhì)

10、的的最最大大允允許許量量 雜雜質(zhì)質(zhì)限限量量100 供供試試品品的的量量 體體積積標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)液液濃濃度度 100 %100 S VC (%)L 百分之幾或百萬分之幾（百分之幾或百萬分之幾（ppm） 表示表示 檢查方法檢查方法 限度檢查法限度檢查法定量測定定量測定 對照法對照法比較法比較法靈敏度法靈敏度法 樣品管樣品管 標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)管 %100 S VC L 注意事項：平行操作原則。注意事項：平行操作原則。 對照法對照法 在供試品溶液中加在供試品溶液中加 入一定量的試劑，入一定量的試劑， 在一定反應(yīng)條件下在一定反應(yīng)條件下 不得有正反應(yīng)出現(xiàn)，不得有正反應(yīng)出現(xiàn)， 從而判斷供試品中從而判斷供試品中 所含雜質(zhì)

11、是否符合所含雜質(zhì)是否符合 限量規(guī)定限量規(guī)定 靈敏度法靈敏度法 取一定量供試品依取一定量供試品依 法檢查，測定特定法檢查，測定特定 待檢雜質(zhì)的參數(shù)與待檢雜質(zhì)的參數(shù)與 規(guī)定的限量比較，規(guī)定的限量比較， 不得更大。不得更大。 比較法比較法 示例示例3-1 茶苯海明中氯化物的檢查茶苯海明中氯化物的檢查 已知：已知： 200 25 g30. 0S ml/g10C ml5 . 1V 求：求：L L？ 解：解： %04. 0 %100 200 25 30. 0 5 . 11010 %100 S VC L 6 示例示例3-2 谷氨酸鈉中重金屬的檢查谷氨酸鈉中重金屬的檢查 已知：已知：S1.0g C10g/ml

12、 L1010 6 求：求：V？ 解：解： )ml(0 . 1 1010 0 . 11010 C SL V 6 6 示例示例3-3 腎上腺素中酮體的檢查腎上腺素中酮體的檢查 解：解： )ml/g(1015. 1 100 1 435 05. 0 100 1 E A C 6 %1 cm1 酮酮體體 %1 cm1 E %06. 0%100 100 . 2 1015. 1 100% C C (%)L 3 6 樣樣品品 酮酮體體 已知：已知： =435 A=0.05 求：求：L？ ml/g100 .2 100 2 .0 C 3 樣樣品品 示例示例3-4 卡比馬唑片中甲巰咪唑的檢查卡比馬唑片中甲巰咪唑的檢查

13、 %1.0%100 10 1000205 100 100% C C L 樣樣品品 雜雜質(zhì)質(zhì) 計算計算 注意注意 單位一致單位一致 稀釋體積稀釋體積 ppm的表示方法的表示方法 TLC法法 雜質(zhì)對照品法雜質(zhì)對照品法 解：解：卡比馬唑片規(guī)格：卡比馬唑片規(guī)格：5mg 第二節(jié)第二節(jié) 雜質(zhì)的檢查方法雜質(zhì)的檢查方法 一、雜質(zhì)的研究規(guī)范一、雜質(zhì)的研究規(guī)范 （一）有機雜質(zhì)在藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的項目名（一）有機雜質(zhì)在藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的項目名 項目名稱項目名稱 雜質(zhì)的雜質(zhì)的 化學(xué)名化學(xué)名 以某類以某類 雜質(zhì)名雜質(zhì)名 根據(jù)檢根據(jù)檢 測方法測方法 選用選用 腎上腺素中腎上腺素中 的的“酮體酮體” 利巴韋林中利巴韋林中 的的

14、“有關(guān)物有關(guān)物 質(zhì)質(zhì)” “雜質(zhì)雜質(zhì) 吸吸 光度光度” （二）雜質(zhì)檢查項目的確定（二）雜質(zhì)檢查項目的確定 確定原則：針對性確定原則：針對性 原料藥和制劑中的雜質(zhì)原料藥和制劑中的雜質(zhì) 根據(jù)其生產(chǎn)工藝、起始原料情況確定檢查項目根據(jù)其生產(chǎn)工藝、起始原料情況確定檢查項目 規(guī)定降解產(chǎn)物和毒性雜質(zhì)的檢查項目規(guī)定降解產(chǎn)物和毒性雜質(zhì)的檢查項目 新藥新藥 經(jīng)研究和穩(wěn)定性考察檢出的，并在批量生產(chǎn)中經(jīng)研究和穩(wěn)定性考察檢出的，并在批量生產(chǎn)中 出現(xiàn)的雜質(zhì)和降解產(chǎn)物。對在合成、純化和貯出現(xiàn)的雜質(zhì)和降解產(chǎn)物。對在合成、純化和貯 存中實際存在的雜質(zhì)和潛在的雜質(zhì)進行研究，存中實際存在的雜質(zhì)和潛在的雜質(zhì)進行研究， 包括無機雜質(zhì)、有

15、機雜質(zhì)及殘留溶劑。包括無機雜質(zhì)、有機雜質(zhì)及殘留溶劑。 單一對映體藥物單一對映體藥物 其可能共存的其他對映體應(yīng)作為雜質(zhì)檢查其可能共存的其他對映體應(yīng)作為雜質(zhì)檢查 消旋體藥物消旋體藥物 當(dāng)已有其單一對映體藥物的法定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時，當(dāng)已有其單一對映體藥物的法定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時， 應(yīng)在該消旋體藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中設(shè)旋光度檢查應(yīng)在該消旋體藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中設(shè)旋光度檢查 項目。項目。 （三）雜質(zhì)限度的確定（三）雜質(zhì)限度的確定 確定原則：合理性確定原則：合理性 在確保用藥安全有效的前提下，在確保用藥安全有效的前提下， 應(yīng)考慮：生產(chǎn)的可行性及批與批之間的正常波動應(yīng)考慮：生產(chǎn)的可行性及批與批之間的正常波動 藥品本身的穩(wěn)定性藥品本

16、身的穩(wěn)定性 根據(jù)每日劑量來制訂質(zhì)控限度根據(jù)每日劑量來制訂質(zhì)控限度 有機雜質(zhì)的限度規(guī)定應(yīng)包括：每一個已知雜質(zhì)、未知有機雜質(zhì)的限度規(guī)定應(yīng)包括：每一個已知雜質(zhì)、未知 雜質(zhì)及總雜質(zhì)。雜質(zhì)及總雜質(zhì)。 仿制藥品的雜質(zhì)限度，應(yīng)與已上市產(chǎn)品進行質(zhì)量對比仿制藥品的雜質(zhì)限度，應(yīng)與已上市產(chǎn)品進行質(zhì)量對比 研究。研究。 藥物藥物最大日劑量最大日劑量報告限度報告限度a鑒定限度鑒定限度b質(zhì)控限度質(zhì)控限度c 原料藥原料藥 2g 2g 0.05% 0.03% 0.10%或或1.0mg 0.05% 0.15%或或1.0mg 0.05% 制劑制劑1g 1g 1mg 110 mg 10mg-2g 2g 10mg 10mg-100m

17、g 100mg-2g 2g 0.1% 0.05% 1.0%或或 5 g 0.5%或或 20 g 0.2%或或 2mg 0.10% 1.0%或或50 g 0.5%或或200 g 0.2%或或3mg 0.15% 原料藥與制劑的雜質(zhì)限度原料藥與制劑的雜質(zhì)限度 報告限度（報告限度（reporting threshold）：超出此限度的）：超出此限度的 雜質(zhì)均應(yīng)在檢測報告中報告，并應(yīng)報告具體的檢雜質(zhì)均應(yīng)在檢測報告中報告，并應(yīng)報告具體的檢 測數(shù)據(jù)。測數(shù)據(jù)。 b. 鑒定限度（鑒定限度（identification threshold）：超出此限）：超出此限 度的雜質(zhì)均應(yīng)進行定性分析，確定其化學(xué)結(jié)構(gòu)。度的雜質(zhì)

18、均應(yīng)進行定性分析，確定其化學(xué)結(jié)構(gòu)。 c. 質(zhì)控限度（質(zhì)控限度（qualification threshold）：質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中）：質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中 一般允許的雜質(zhì)限度，如制訂的限度高于此限度，一般允許的雜質(zhì)限度，如制訂的限度高于此限度， 則應(yīng)有充分的依據(jù)。則應(yīng)有充分的依據(jù)。 （四）雜質(zhì)檢查方法的選擇與驗證（四）雜質(zhì)檢查方法的選擇與驗證 用于雜質(zhì)檢查的分析方法要求專屬、靈敏用于雜質(zhì)檢查的分析方法要求專屬、靈敏 。 專屬性：專屬性：根據(jù)原料藥或制劑的生產(chǎn)工藝及儲存條件，根據(jù)原料藥或制劑的生產(chǎn)工藝及儲存條件， 以中間體、立體異構(gòu)體、粗品、重結(jié)晶母液、經(jīng)加速以中間體、立體異構(gòu)體、粗品、重結(jié)晶母液、經(jīng)加速 破壞性

19、試驗后的樣品作為測試品進行系統(tǒng)適用性研究，破壞性試驗后的樣品作為測試品進行系統(tǒng)適用性研究， 考察產(chǎn)品中各雜質(zhì)峰及主成分峰相互間的分離度是否考察產(chǎn)品中各雜質(zhì)峰及主成分峰相互間的分離度是否 符合要求。符合要求。 采用采用HPLC法檢查有機雜質(zhì)時，常采用梯度洗脫。法檢查有機雜質(zhì)時，常采用梯度洗脫。 檢測限：檢測限：要符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中對雜質(zhì)限度的要求，最要符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中對雜質(zhì)限度的要求，最 低檢測限不得大于該雜質(zhì)的報告限度。低檢測限不得大于該雜質(zhì)的報告限度。 二、雜質(zhì)的常用檢查方法二、雜質(zhì)的常用檢查方法 物理性質(zhì)物理性質(zhì) 外觀外觀 性狀性狀 分配分配 或吸附或吸附 化學(xué)性質(zhì)化學(xué)性質(zhì) 性質(zhì)差異性質(zhì)差異 對

20、光對光 的吸收的吸收 常用方法常用方法 化學(xué)方法化學(xué)方法 色譜方法色譜方法 光譜方法光譜方法 物理方法物理方法 與試劑產(chǎn)生顏色與試劑產(chǎn)生顏色 與試劑產(chǎn)生沉淀與試劑產(chǎn)生沉淀 與試劑產(chǎn)生氣體與試劑產(chǎn)生氣體 雜質(zhì)雜質(zhì) （一）化學(xué)方法（一）化學(xué)方法 顯色反應(yīng)檢查法顯色反應(yīng)檢查法 雜質(zhì)與試劑產(chǎn)生顏色雜質(zhì)與試劑產(chǎn)生顏色 比色法比色法 示例示例3-5 氯硝柳胺中氯硝柳胺中5-氯水楊酸和氯水楊酸和2-氯氯-4-硝基苯胺的檢查硝基苯胺的檢查 CONHNO2 Cl Cl OH +FeCl3 Fe/3 Cl OH O OH Cl O O O NH2 Cl O2N + NaNO2 + 2HCl N2+Cl- Cl O

21、2N + NaCl + 2H2O N2+Cl- Cl O2N + NHCH2CH2NH2 N Cl O2NNNHCH2CH2NH2 氯硝柳胺氯硝柳胺 5-氯水楊酸氯水楊酸2-氯氯-4-硝基苯胺硝基苯胺 5-氯水楊酸的檢查氯水楊酸的檢查 檢查原理檢查原理 + FeCl3 Fe/3 Cl OH O OH Cl O O O 2-氯氯-4-硝基苯胺的檢查硝基苯胺的檢查 NH2 Cl O2N + NaNO2 + 2HCl N2+Cl- Cl O2N + NaCl + 2H2O N2+Cl- Cl O2N + NHCH2CH2NH2 N Cl O2NNNHCH2CH2NH2 氨基磺酸銨的作用：將剩余的亞硝

22、酸分解除去氨基磺酸銨的作用：將剩余的亞硝酸分解除去 2HNO2+ 2H2NSO3NH42N2+ (NH4)2SO4+ H2SO4+H2O 要求：要求：1min內(nèi)不得出現(xiàn)渾濁。內(nèi)不得出現(xiàn)渾濁。 2. 沉淀反應(yīng)檢查法沉淀反應(yīng)檢查法 雜質(zhì)與試劑產(chǎn)生沉淀雜質(zhì)與試劑產(chǎn)生沉淀 比濁比濁 重量法測定雜質(zhì)的量重量法測定雜質(zhì)的量 示例示例3-6 鹽酸肼屈嗪中游離肼的檢查鹽酸肼屈嗪中游離肼的檢查 檢查原理檢查原理 H2NNH2 + CHO OH HC OH NNH2 + H2O 4.滴定法滴定法 滴定劑只與雜質(zhì)反應(yīng)，以一定濃度的滴定溶液滴滴定劑只與雜質(zhì)反應(yīng)，以一定濃度的滴定溶液滴 定藥物的雜質(zhì)，可以定量地測定雜質(zhì)

23、的含量。定藥物的雜質(zhì)，可以定量地測定雜質(zhì)的含量。 2Fe3+ 2KI H+ 2Fe2+ I2+2K+ I2+2Na2S2O3 2NaI+ 2NaI + Na2SO4 檢查原理檢查原理 示例示例3-7 硫酸亞鐵中高鐵鹽的檢查硫酸亞鐵中高鐵鹽的檢查 1. TLC 法法 （1）雜質(zhì)對照品法雜質(zhì)對照品法 （二）色譜方法（二）色譜方法 方法方法 適用于已知雜質(zhì)并能制備雜質(zhì)對照品的情況適用于已知雜質(zhì)并能制備雜質(zhì)對照品的情況 樣品樣品對照品對照品 示例示例3-8 枸櫞酸乙胺嗪中枸櫞酸乙胺嗪中N-甲基哌嗪的檢查甲基哌嗪的檢查 判斷結(jié)果判斷結(jié)果 供試品溶液如顯與對照品相應(yīng)的雜質(zhì)斑點，其顏色與供試品溶液如顯與對照

24、品相應(yīng)的雜質(zhì)斑點，其顏色與 對照溶液品溶液主斑點比較，不得更深。對照溶液品溶液主斑點比較，不得更深。 供試品溶液：供試品溶液：枸櫞酸乙胺嗪枸櫞酸乙胺嗪（50mg/ml） 對照品溶液：對照品溶液： N-甲基哌嗪對照品甲基哌嗪對照品(50 g/ml) 點樣點樣 展開展開 晾干薄層板晾干薄層板檢視斑點檢視斑點 （2）供試品溶液自身稀釋對照法）供試品溶液自身稀釋對照法 適用于雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)不能確定，或無雜質(zhì)對照品適用于雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)不能確定，或無雜質(zhì)對照品 的情況。限于雜質(zhì)斑點的顏色與主成分斑點顏色相的情況。限于雜質(zhì)斑點的顏色與主成分斑點顏色相 同或相近的情況下使用。同或相近的情況下使用。 樣品樣品對照品對照

25、品 結(jié)果判斷結(jié)果判斷 供試品溶液所顯雜質(zhì)斑點與供試品溶液所顯雜質(zhì)斑點與 自身稀釋對照溶液或系列自自身稀釋對照溶液或系列自 身稀釋對照溶液所顯主斑點身稀釋對照溶液所顯主斑點 比較，不得更深。比較，不得更深。 示例示例3-11 吡羅昔康中有關(guān)物質(zhì)的檢查吡羅昔康中有關(guān)物質(zhì)的檢查 供試品溶液：供試品溶液：20mg/ml 對照溶液：對照溶液：0.2mg/ml 結(jié)果判斷：結(jié)果判斷：供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點，與對照溶液所供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點，與對照溶液所 顯的主斑點比較，不得更深。顯的主斑點比較，不得更深。 稀釋稀釋 （3）雜質(zhì)對照品法與供試品溶液自雜質(zhì)對照品法與供試品溶液自 身稀釋對照身稀釋對照 法并用法

26、并用 當(dāng)藥物中存在多個雜質(zhì)時，當(dāng)藥物中存在多個雜質(zhì)時， 其中已知雜質(zhì)有對照品時，采其中已知雜質(zhì)有對照品時，采 用雜質(zhì)對照品法檢查；共存的用雜質(zhì)對照品法檢查；共存的 未知雜質(zhì)或沒有對照品的雜質(zhì)，未知雜質(zhì)或沒有對照品的雜質(zhì)， 可采用供試品溶液自身稀釋對可采用供試品溶液自身稀釋對 照法檢查。照法檢查。 樣品樣品 對照品對照品 對照對照 判斷：判斷： 供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點不得多供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點不得多 于于2個，其中在與對照品溶液相同的個，其中在與對照品溶液相同的 位置上所顯雜質(zhì)斑點的顏色與對照位置上所顯雜質(zhì)斑點的顏色與對照 品溶液主斑點比較，不得更深，另品溶液主斑點比較，不得更深，另 一雜質(zhì)雜

27、質(zhì)的顏色與對照溶液主斑點比較，不得更深。一雜質(zhì)雜質(zhì)的顏色與對照溶液主斑點比較，不得更深。 示例示例3-13 鹽酸黃酮哌酯鹽酸黃酮哌酯中有關(guān)物質(zhì)的檢查中有關(guān)物質(zhì)的檢查 供試品溶液：供試品溶液： 20mg/ml 對照溶液：對照溶液： 0.10 mg/ml 對照品溶液：對照品溶液：3-甲基黃酮甲基黃酮-8-羧酸羧酸 0.10 mg/ml 稀釋稀釋 N O O O O C H 3 H O O O O C H 3 黃 酮 哌 酯 3 - 甲 基 黃 酮 - 8 - 羧 酸 N O O O O C H 3 H O O O O C H 3 黃 酮 哌 酯 3 - 甲 基 黃 酮 - 8 - 羧 酸 （4）對

28、照藥物法）對照藥物法 當(dāng)無合適的雜質(zhì)對照品，或者是供試品顯示的雜當(dāng)無合適的雜質(zhì)對照品，或者是供試品顯示的雜 質(zhì)斑點顏色與主成分斑點顏色有差異，難以判斷限量質(zhì)斑點顏色與主成分斑點顏色有差異，難以判斷限量 時，可用與供試品相同的藥物作為對照品，此對照藥時，可用與供試品相同的藥物作為對照品，此對照藥 物中所含待檢雜質(zhì)需符合限量要求，且穩(wěn)定性好。物中所含待檢雜質(zhì)需符合限量要求，且穩(wěn)定性好。 判斷結(jié)果：判斷結(jié)果：供試品溶液主斑點的位置與顏色應(yīng)與對供試品溶液主斑點的位置與顏色應(yīng)與對 照品溶液的主斑點一致，如顯雜質(zhì)斑點，其顏色不得照品溶液的主斑點一致，如顯雜質(zhì)斑點，其顏色不得 深于對照品溶液對應(yīng)的雜質(zhì)斑點，

29、并不得有對照品溶深于對照品溶液對應(yīng)的雜質(zhì)斑點，并不得有對照品溶 液以外的雜質(zhì)斑點；供試品溶液除主斑點外，不得液以外的雜質(zhì)斑點；供試品溶液除主斑點外，不得 顯任何雜質(zhì)斑點。顯任何雜質(zhì)斑點。 示例示例3-14 馬來酸麥角新堿中有關(guān)物質(zhì)的檢查馬來酸麥角新堿中有關(guān)物質(zhì)的檢查 供試品溶液供試品溶液 ：5mg/ml 供試品溶液供試品溶液 ：0.2mg/ml 對照品溶液：馬來酸麥角新堿對照品，對照品溶液：馬來酸麥角新堿對照品， 5mg/ml 系統(tǒng)適用性試驗系統(tǒng)適用性試驗TLC 檢測靈敏度檢測靈敏度分離效能分離效能 比移值比移值 （Rf） 限量要求：規(guī)定雜質(zhì)斑點數(shù)和單一限量要求：規(guī)定雜質(zhì)斑點數(shù)和單一 雜質(zhì)量、

30、雜質(zhì)總量雜質(zhì)量、雜質(zhì)總量 2. HPLC 法法 （1）外標(biāo)法測定供試品中某個雜質(zhì)的含量）外標(biāo)法測定供試品中某個雜質(zhì)的含量 供試品溶液供試品溶液 雜質(zhì)對照品溶液雜質(zhì)對照品溶液 R X RX A A cc）含量（ 供試品溶液供試品溶液 對照品對照品溶液溶液 進樣進樣 AX和和AR 記錄色譜圖記錄色譜圖 計算計算 示例示例3-15卡托普利及其片劑中卡托普利二硫化物的檢查卡托普利及其片劑中卡托普利二硫化物的檢查 供試品溶液：供試品溶液： 0.5mg/ml 對照品溶液：卡托普利二硫化物對照品，對照品溶液：卡托普利二硫化物對照品，5 g/ml 混合溶液：混合溶液： 卡托普利和卡托普利二硫化物對照品卡托普利

31、和卡托普利二硫化物對照品 0.1mg/ml和和15 g/ml 適用性試驗：用混合溶液適用性試驗：用混合溶液 R卡托普利和卡托普利二硫化物 卡托普利和卡托普利二硫化物大于 大于4.0 以峰面積計算其含量，原料藥中的二硫化物不得超以峰面積計算其含量，原料藥中的二硫化物不得超 過過1.0%，片劑中的不得超過卡托普利標(biāo)示量的，片劑中的不得超過卡托普利標(biāo)示量的3.0% （2）加校正因子的主成分自身對照法）加校正因子的主成分自身對照法 RR SS CA CA f / / 消除雜質(zhì)與主成分的響應(yīng)因子消除雜質(zhì)與主成分的響應(yīng)因子 可能不同所引起的測定誤差可能不同所引起的測定誤差 適用于已知雜質(zhì)的控制。適用于已知

32、雜質(zhì)的控制。 用雜質(zhì)對照品測定用雜質(zhì)對照品測定f雜質(zhì) 雜質(zhì)， ，f雜質(zhì) 雜質(zhì)和相對保留時間直接 和相對保留時間直接 載入各品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，在常規(guī)檢驗時用相對保載入各品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，在常規(guī)檢驗時用相對保 留時間定位，以留時間定位，以f雜質(zhì) 雜質(zhì)校正該雜質(zhì)的實測峰面積。 校正該雜質(zhì)的實測峰面積。 藥物對照品的峰面積藥物對照品的峰面積 雜質(zhì)對照品的峰面積雜質(zhì)對照品的峰面積 方法方法 調(diào)節(jié)檢測靈敏度：用對照溶液調(diào)節(jié)檢測靈敏度：用對照溶液 主成分色譜峰的峰高約為滿量程主成分色譜峰的峰高約為滿量程 的的1025 供試品溶液的制備供試品溶液的制備 對照溶液的制備對照溶液的制備 進樣：供試品溶液進樣：供試品溶

33、液 對照溶液對照溶液 分析時間：主成分色譜峰保分析時間：主成分色譜峰保 留留 時間的時間的2倍倍 判斷：供試品溶液中各雜質(zhì)的峰面積分別乘以相應(yīng)的判斷：供試品溶液中各雜質(zhì)的峰面積分別乘以相應(yīng)的 校正因子后，與對照溶液中主成分的峰面積比校正因子后，與對照溶液中主成分的峰面積比 較。較。 示例示例3-16 紅霉素紅霉素A中紅霉素中紅霉素B、C組分及有關(guān)組分及有關(guān) 物質(zhì)的檢查物質(zhì)的檢查 供試品溶液：供試品溶液：4mg/ml 對照溶液：對照溶液：0.2mg/ml 調(diào)節(jié)檢測靈敏度：用對照溶液調(diào)節(jié)檢測靈敏度：用對照溶液 主成分色譜峰的峰高約為滿量程主成分色譜峰的峰高約為滿量程 的的20 進樣：供試品溶液進樣

34、：供試品溶液 對照溶液對照溶液 分析時間：供試品溶液分析時間：供試品溶液 主成分色譜峰保留時間的主成分色譜峰保留時間的4倍倍 稀釋稀釋 結(jié)果判斷：結(jié)果判斷： A紅霉素 紅霉素B校正校正、 、 A紅霉素 紅霉素C校正校正A紅霉素紅霉素A對照液對照液 A紅霉素烯醇醚校正 紅霉素烯醇醚校正3/5A紅霉素紅霉素A對照液對照液 校正峰面積：紅霉素校正峰面積：紅霉素A f = 1.0 紅霉素紅霉素B 0.7 紅霉素紅霉素C 1.0 紅霉素烯醇醚紅霉素烯醇醚 0.09 其他單個雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積其他單個雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積 （3）不加校正因子的主成分自身對照法不加校正因

35、子的主成分自身對照法 適用于沒有雜質(zhì)對照品的情況適用于沒有雜質(zhì)對照品的情況 對照溶液：供試品的稀釋液對照溶液：供試品的稀釋液 調(diào)節(jié)檢測靈敏度調(diào)節(jié)檢測靈敏度 進樣：供試品溶液進樣：供試品溶液 對照溶液對照溶液 分析時間：供試品溶液分析時間：供試品溶液 主成分色譜峰保留時間的主成分色譜峰保留時間的2倍倍 供試品溶液中各雜質(zhì)的峰面積與對照溶液主成供試品溶液中各雜質(zhì)的峰面積與對照溶液主成 分的峰面積比較分的峰面積比較. 自身對照液自身對照液 供試品溶液供試品溶液 A雜總 雜總=A1 A2A3 供試品溶液：供試品溶液：0.4mg/ml 對照溶液：對照溶液：(0.4 g/ml) 調(diào)靈敏度：對照溶液調(diào)靈敏度

36、：對照溶液 使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的 25% 進樣：供試品溶液進樣：供試品溶液 對照溶液對照溶液 分析時間：供試品溶液主成分色譜峰保留時間的分析時間：供試品溶液主成分色譜峰保留時間的2倍倍 判斷：判斷：單個雜質(zhì)的峰面積不得大于對照溶液主峰面積單個雜質(zhì)的峰面積不得大于對照溶液主峰面積 的的0.25倍（倍（0.25%），各雜質(zhì)峰面積的和不得），各雜質(zhì)峰面積的和不得 大于對照溶液的主峰面積。大于對照溶液的主峰面積。 示例示例3-18 利巴韋林中有關(guān)物質(zhì)的檢查利巴韋林中有關(guān)物質(zhì)的檢查 稀釋稀釋 （4）面積歸一化法）面積歸一化法 適用于粗略測量供試品中雜質(zhì)的含量。

37、適用于粗略測量供試品中雜質(zhì)的含量。 供試品溶液供試品溶液 進樣進樣 各組分峰面積各組分峰面積 記錄色譜圖記錄色譜圖 計算計算 計算各雜質(zhì)峰面積及其總和計算各雜質(zhì)峰面積及其總和 占總峰面積（含藥物的峰面占總峰面積（含藥物的峰面 積，而不含溶劑峰面積）的積，而不含溶劑峰面積）的 百分率。百分率。 該法一般不宜用于微量雜該法一般不宜用于微量雜 質(zhì)的檢查。質(zhì)的檢查。 %100% 主 AA A L i i 雜雜1 雜雜2 主成分主成分 3. GC 法法 主要用于藥物中揮發(fā)性雜質(zhì)的檢查。主要用于藥物中揮發(fā)性雜質(zhì)的檢查。 方法方法 ：方法同方法同HPLC 標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法 標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法標(biāo)準(zhǔn)溶液

38、加入法 雜質(zhì)對照液雜質(zhì)對照液 +供試液供試液 外標(biāo)法或外標(biāo)法或 內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法 測定測定 總量總量 總量總量-加入的雜質(zhì)對照品的量加入的雜質(zhì)對照品的量=雜質(zhì)的量雜質(zhì)的量 采用下列公式計算：采用下列公式計算： X XX X is C CC A A 1)A/A( C C Xis X X Cx 供試品中組分供試品中組分X的濃度；的濃度； Ax 供試品中組分供試品中組分X的色譜峰的色譜峰 面積；面積； Cx 加入的已知濃度的待測加入的已知濃度的待測 組分對照品的濃度；組分對照品的濃度； Ais 加入對照品后組分加入對照品后組分X的色的色 譜峰面積譜峰面積 L=Cx/C樣 樣 100% 示例示例3-19

39、樟腦中有關(guān)物質(zhì)的檢查樟腦中有關(guān)物質(zhì)的檢查 供試品溶液：供試品溶液：100mg/ml 對照溶液：對照溶液：1mg/ml 混合溶液：混合溶液：3,7-二甲基二甲基-1,6-辛二烯辛二烯-3-醇與乙酸龍腦酯醇與乙酸龍腦酯 系統(tǒng)適用性試驗：混合溶液系統(tǒng)適用性試驗：混合溶液 分離度應(yīng)大于分離度應(yīng)大于2.0 調(diào)節(jié)檢測靈敏度：對照溶液調(diào)節(jié)檢測靈敏度：對照溶液 使主成分色譜峰的峰高約為滿量程使主成分色譜峰的峰高約為滿量程 的的20 稀釋稀釋 進樣：供試品溶液進樣：供試品溶液 對照溶液對照溶液 分析時間：供試品溶液主成分色譜峰保留時間的分析時間：供試品溶液主成分色譜峰保留時間的2倍倍 判斷：供試品溶液如有雜質(zhì)峰

40、，單個雜質(zhì)的峰面積判斷：供試品溶液如有雜質(zhì)峰，單個雜質(zhì)的峰面積 不得大于對照溶液主峰面積的不得大于對照溶液主峰面積的2倍（倍（2.0%），）， 各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液的主峰各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液的主峰 面積的面積的4倍（倍（4.0%）。）。 毛細管電泳法可以用于酶類藥物中酶類雜質(zhì)的檢毛細管電泳法可以用于酶類藥物中酶類雜質(zhì)的檢 查。檢查方法與高效液相色譜法相同。查。檢查方法與高效液相色譜法相同。 4毛細管電泳法毛細管電泳法 示例示例3-20 抑肽酶中去丙氨酸抑肽酶中去丙氨酸-去甘氨酸去甘氨酸-抑肽酶和去丙抑肽酶和去丙 氨酸氨酸-抑肽酶的檢查抑肽酶的檢查 電泳條件：熔融石英毛細

41、管柱（電泳條件：熔融石英毛細管柱（75m60cm，有效，有效 長度長度50cm），電極液為），電極液為120mmol/L磷酸二磷酸二 氫鉀緩沖液（氫鉀緩沖液（pH 2.5），檢測波長），檢測波長214nm， 毛細管溫度為毛細管溫度為30，分離電壓，分離電壓12kv，1.5Pa 壓力進樣，進樣時間壓力進樣，進樣時間3s。 系統(tǒng)適用性試驗系統(tǒng)適用性試驗 去丙氨酸去丙氨酸-去甘氨酸去甘氨酸-抑肽酶的相對保留時間為抑肽酶的相對保留時間為0.98 去丙氨酸去丙氨酸-抑肽酶的保留時間為抑肽酶的保留時間為0.99 兩個雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)大于兩個雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)大于0.5 抑肽酶峰的拖尾因子不得大于抑肽酶峰

42、的拖尾因子不得大于3。 以抑肽酶為參照以抑肽酶為參照 供試品溶液：供試品溶液：5U/ml 對照品溶液對照品溶液 ：抑肽酶對照品，：抑肽酶對照品，5U/ml 測定：供試品溶液、對照品溶液測定：供試品溶液、對照品溶液 計算：計算： 100 r r s i 雜質(zhì)含量雜質(zhì)含量 ri：去丙氨酸：去丙氨酸-去甘氨酸去甘氨酸-抑肽酶或去丙氨酸抑肽酶或去丙氨酸-抑肽酶的抑肽酶的 校正峰面積校正峰面積 rs：去丙氨酸：去丙氨酸-去甘氨酸去甘氨酸-抑肽酶、去丙氨酸抑肽酶、去丙氨酸-抑肽酶和抑肽酶和 抑肽酶的校正峰面積總和抑肽酶的校正峰面積總和 要求：去丙氨酸要求：去丙氨酸-去甘氨酸去甘氨酸-抑肽酶的量不得大于抑肽

43、酶的量不得大于8.0%， 去丙氨酸去丙氨酸-抑肽酶的量不得大于抑肽酶的量不得大于7.5%。 1可見可見-紫外分光光度法紫外分光光度法 在某一波長處雜質(zhì)有最大吸收，藥物無吸收。在某一波長處雜質(zhì)有最大吸收，藥物無吸收。 H OO HOH OO HO O 二羥基蒽醌二羥基蒽醌 地蒽酚地蒽酚 （三）光譜方法（三）光譜方法 依據(jù)藥物和雜質(zhì)對光選擇吸收性質(zhì)差異進行檢查。依據(jù)藥物和雜質(zhì)對光選擇吸收性質(zhì)差異進行檢查。 示例示例3-21 地蒽酚中二羥基蒽醌的檢查地蒽酚中二羥基蒽醌的檢查 H OO HOH OO HO O 均有紫外吸收均有紫外吸收 432nm 地蒽酚地蒽酚 無吸收無吸收 二羥基蒽醌二羥基蒽醌 有最

44、大吸收有最大吸收 規(guī)定規(guī)定0.01%地蒽酚氯仿溶液地蒽酚氯仿溶液A432nm 結(jié)果判斷結(jié)果判斷 A晶型晶型 C晶型晶型 640cm-1 有強吸收有強吸收 吸收很弱吸收很弱 662cm-1 吸收很弱吸收很弱 有強吸收有強吸收 3. 原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法 通過測定藥物中所含待測元素原子蒸氣，吸通過測定藥物中所含待測元素原子蒸氣，吸 收發(fā)自光源的該元素特定波長的程度，以求出藥收發(fā)自光源的該元素特定波長的程度，以求出藥 物中待測元素的物中待測元素的 含量。含量。 限量檢查限量檢查 對照品液：供試品對照品對照品液：供試品對照品a 供試品液供試品液b b(a-b) 不合格不合格 吸光度吸光

45、度 1. 熱分析法熱分析法(thermoanalysis) （1）熱重分析法）熱重分析法(thermogravimetric analysis, TGATGA) 在程序升溫下，測量物質(zhì)的質(zhì)量與溫度的關(guān)系，在程序升溫下，測量物質(zhì)的質(zhì)量與溫度的關(guān)系， 研究物質(zhì)在加熱同時失重的情況下，所發(fā)生的質(zhì)的變研究物質(zhì)在加熱同時失重的情況下，所發(fā)生的質(zhì)的變 化?；?應(yīng)用：藥物穩(wěn)定性的研究；應(yīng)用：藥物穩(wěn)定性的研究； 貴重和易氧化藥物的干燥失重測定；貴重和易氧化藥物的干燥失重測定； 藥物結(jié)晶水和吸附水的區(qū)別以及結(jié)藥物結(jié)晶水和吸附水的區(qū)別以及結(jié) 晶水含量的測定。晶水含量的測定。 （四）其他方法（四）其他方法 T A

46、B C TiTf W1 W2 W 反應(yīng)區(qū)間反應(yīng)區(qū)間= Tf Ti 減失重量減失重量=W1-W2 方法：將樣品置熱天平中，按一定速度升溫，記錄樣方法：將樣品置熱天平中，按一定速度升溫，記錄樣 品重量隨溫度的變化，即熱重曲線。品重量隨溫度的變化，即熱重曲線。 物質(zhì)在相變（失物質(zhì)在相變（失 去結(jié)晶水，熱分去結(jié)晶水，熱分 解等）時保持溫解等）時保持溫 度不變，熱重曲度不變，熱重曲 線呈臺階狀線呈臺階狀 吸附水失去為漸進過程；吸附水失去為漸進過程； 結(jié)晶水失去在特定溫度發(fā)結(jié)晶水失去在特定溫度發(fā) 生突躍，可以區(qū)分。生突躍，可以區(qū)分。 4080： CuSO45H2OCuSO43H2O+2H2O 80120

47、：CuSO43H2OCuSO4H2O+2H2O 200250：CuSO4H2OCuSO4+H2O 40 80 120 200 250 （失重（失重14.4） （失重（失重28.8） （失重（失重36） 2. 差示熱分析差示熱分析 是在程序升溫下，測量被測物質(zhì)和參比物之是在程序升溫下，測量被測物質(zhì)和參比物之 間的溫差與溫度關(guān)系的一種技術(shù)。間的溫差與溫度關(guān)系的一種技術(shù)。參比物是一種參比物是一種 惰性物質(zhì)，在加熱過程中不發(fā)生相變和化學(xué)變化惰性物質(zhì)，在加熱過程中不發(fā)生相變和化學(xué)變化。 因此溫差因此溫差(T)只與被測物質(zhì)的質(zhì)量變化有關(guān)。只與被測物質(zhì)的質(zhì)量變化有關(guān)。 T=0 被測物未發(fā)生吸熱或放熱反應(yīng)；被

48、測物未發(fā)生吸熱或放熱反應(yīng)； T= - 為吸熱峰為吸熱峰(負峰負峰) ； T = + 為放熱峰為放熱峰(正峰正峰)。 T T T T + + 放熱峰放熱峰 吸熱峰吸熱峰 峰寬峰寬 峰高峰高 外推起始點外推起始點 （與熔點相當(dāng)）（與熔點相當(dāng)） 典型的差熱曲線典型的差熱曲線 DTA在藥物分析中的應(yīng)用在藥物分析中的應(yīng)用 測定藥物的熔點測定藥物的熔點 藥物的定性分析藥物的定性分析 尖峰為物理變化尖峰為物理變化 寬峰為化學(xué)變化寬峰為化學(xué)變化 估測藥物的純度估測藥物的純度 134226 CaC2O4H2OCaC2O4+ H2O 398478 CaC2O4CaCO3+CO 635838 CaCO3CaO+CO

49、2 3. 差示掃描量熱法（差示掃描量熱法（DSC ） 在程序升溫下，測量維持樣品和參比物的溫度在程序升溫下，測量維持樣品和參比物的溫度 相同，測量輸給待測物質(zhì)和參比物的能量差與溫度相同，測量輸給待測物質(zhì)和參比物的能量差與溫度 (或時間或時間)關(guān)系。關(guān)系。 DSC與與DTA的區(qū)別：記錄方式不同，的區(qū)別：記錄方式不同，DSC記錄系統(tǒng)記錄系統(tǒng) 供給的能量，吸熱供給能量；放熱減少供給的能量。供給的能量，吸熱供給能量；放熱減少供給的能量。 DSC-TG常聯(lián)合用。常聯(lián)合用。 應(yīng)用應(yīng)用 熔點測定：用于鑒別藥物真?zhèn)稳埸c測定：用于鑒別藥物真?zhèn)?例例 DSC掃描阿司匹林和撲熱息痛掃描阿司匹林和撲熱息痛 不同晶型的

50、物質(zhì)，其熔點不同，熔化吸熱峰的不同晶型的物質(zhì)，其熔點不同，熔化吸熱峰的 位置也就不同。位置也就不同。DSC也可用于藥物中無效或低效晶也可用于藥物中無效或低效晶 型的檢查。型的檢查。 無味氯霉素?zé)o味氯霉素 的的DSC曲線曲線 85是是B型型 吸熱特征峰吸熱特征峰 90是是A型型 吸熱特征峰吸熱特征峰 多晶型及其轉(zhuǎn)變的表征多晶型及其轉(zhuǎn)變的表征 例例 無味氯霉素有無味氯霉素有A型和型和B 型型 純度檢查純度檢查 條件：樣品純度在條件：樣品純度在98.0%以上以上 雜質(zhì)不與主成分反應(yīng)雜質(zhì)不與主成分反應(yīng) 雜質(zhì)不與主成分形成共晶或固熔體雜質(zhì)不與主成分形成共晶或固熔體 雜質(zhì)與熔融試樣有化學(xué)相似性雜質(zhì)與熔融試

51、樣有化學(xué)相似性 藥物在熔融過程中化學(xué)性穩(wěn)定藥物在熔融過程中化學(xué)性穩(wěn)定 藥物如存在多晶現(xiàn)象則必須全部轉(zhuǎn)變成藥物如存在多晶現(xiàn)象則必須全部轉(zhuǎn)變成 某一晶型。某一晶型。 酸堿滴定法酸堿滴定法 pH法法 指示劑法指示劑法 酸堿性的酸堿性的 差異差異 2. 酸堿度檢查法酸堿度檢查法 （1）酸堿滴定法酸堿滴定法 例：己酸羥孕酮中正己酐、對甲苯磺酸的檢查例：己酸羥孕酮中正己酐、對甲苯磺酸的檢查 要求：要求：V5000，填充柱的，填充柱的N1000。 （2）色譜圖中，待測物色譜峰與其相鄰色譜峰的分）色譜圖中，待測物色譜峰與其相鄰色譜峰的分 離離 度度(R)應(yīng)大于應(yīng)大于1.5。 （3）以內(nèi)標(biāo)法測定時，對照品溶液連

52、續(xù)進樣）以內(nèi)標(biāo)法測定時，對照品溶液連續(xù)進樣5次，所次，所 得待測物與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比的得待測物與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比的RSD5%；以；以 外標(biāo)法測定，所得待測物峰面積的外標(biāo)法測定，所得待測物峰面積的RSD10%。 （二）系統(tǒng)適用性試驗（二）系統(tǒng)適用性試驗 頂空條件的選擇頂空條件的選擇 時間：時間：一般平衡一般平衡30min45min 溫度：對沸點較高的殘留溶劑，通常選擇較高的頂溫度：對沸點較高的殘留溶劑，通常選擇較高的頂 空平衡溫度；但應(yīng)兼顧試品的熱分解特性。空平衡溫度；但應(yīng)兼顧試品的熱分解特性。 內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法 外標(biāo)法外標(biāo)法 限度限度 檢查檢查 被測溶劑峰面積與被測溶劑峰面積與 內(nèi)標(biāo)峰面積之比不內(nèi)

53、標(biāo)峰面積之比不 得大于對照品溶液得大于對照品溶液 的相應(yīng)比值的相應(yīng)比值 被測溶劑峰面積不被測溶劑峰面積不 得大于對照品溶液得大于對照品溶液 的相應(yīng)峰面積的相應(yīng)峰面積 （三）計算法（三）計算法 內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法 外標(biāo)法外標(biāo)法 定量定量 測定測定 十一、溶液顏色檢查法十一、溶液顏色檢查法 藥物溶液的顏色及其與規(guī)定顏色的差異能在藥物溶液的顏色及其與規(guī)定顏色的差異能在 一定程度上反映藥物的純度。對溶液顏色進行檢一定程度上反映藥物的純度。對溶液顏色進行檢 查，可以控制藥物中有色雜質(zhì)的含量。本法系將查，可以控制藥物中有色雜質(zhì)的含量。本法系將 藥物溶液的顏色與規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)比色液相比較，或藥物溶液的顏色與規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)

54、比色液相比較，或 在規(guī)定的波長處測定其吸收度，以檢查其顏色。在規(guī)定的波長處測定其吸收度，以檢查其顏色。 1. 目視比色法：標(biāo)準(zhǔn)比色液進行比較的方法目視比色法：標(biāo)準(zhǔn)比色液進行比較的方法 比色用比色用K2Cr2O7液液 比色用比色用CoCl2液液 比色用比色用CuSO4液液 標(biāo)準(zhǔn)比色液標(biāo)準(zhǔn)比色液 貯備液（黃綠、黃、橙黃、橙紅、棕紅）貯備液（黃綠、黃、橙黃、橙紅、棕紅） 加水加水 10個色號個色號 2. 分光光度法分光光度法 于規(guī)定波長處：于規(guī)定波長處：A測得 測得 A規(guī)定 規(guī)定 3. 色差計法色差計法 通過測定供試品與標(biāo)準(zhǔn)比色液或水之間的通過測定供試品與標(biāo)準(zhǔn)比色液或水之間的 色差值來比較供試品與標(biāo)

55、準(zhǔn)比色液之間的顏色色差值來比較供試品與標(biāo)準(zhǔn)比色液之間的顏色 差異。差異。 十二、溶液澄清度檢查法十二、溶液澄清度檢查法 檢查藥物中微量的不溶性雜質(zhì)。檢查藥物中微量的不溶性雜質(zhì)。 原理：藥物溶液中存在分散的細微顆粒，當(dāng)直原理：藥物溶液中存在分散的細微顆粒，當(dāng)直 線光通過溶液時，細微顆粒可引起光的線光通過溶液時，細微顆粒可引起光的 散射，測量光的散射就可以測量溶液的散射，測量光的散射就可以測量溶液的 濁度。比較供試品溶液和濁度標(biāo)準(zhǔn)液的濁度。比較供試品溶液和濁度標(biāo)準(zhǔn)液的 濁度，來判斷供試品溶液的澄清度是否濁度，來判斷供試品溶液的澄清度是否 符合規(guī)定。符合規(guī)定。 濁度標(biāo)準(zhǔn)原液濁度標(biāo)準(zhǔn)原液（ml） 2.

56、5 5.0 10.0 30.0 50.0 水水 （ml） 97.5 95.0 90.0 70.0 50.0 級級 號號 0.5 1 2 3 4 不同級號濁度標(biāo)準(zhǔn)液不同級號濁度標(biāo)準(zhǔn)液 (CH2)6N6 + 4H2O6HCHO +4NH3 HCHO + H2N NH2H2CNNH2+H2O 濁度標(biāo)準(zhǔn)液的制備濁度標(biāo)準(zhǔn)液的制備 甲醛腙：白色甲醛腙：白色 第四節(jié)第四節(jié) 特殊雜質(zhì)的檢查與鑒定特殊雜質(zhì)的檢查與鑒定 一、特殊雜質(zhì)的研究規(guī)范一、特殊雜質(zhì)的研究規(guī)范 定性研究的意義：定性研究的意義： 獲得有關(guān)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息，分析其形成過程，合獲得有關(guān)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息，分析其形成過程，合 成時可設(shè)法避免該雜質(zhì)的形成，或

57、經(jīng)純化使之降至可成時可設(shè)法避免該雜質(zhì)的形成，或經(jīng)純化使之降至可 接受的水平，接受的水平， 貯藏過程中控制好條件。貯藏過程中控制好條件。 定性或確證結(jié)構(gòu)的雜質(zhì)定性或確證結(jié)構(gòu)的雜質(zhì) 表觀含量在表觀含量在0.1%及其以上（或者等于或高于鑒定限及其以上（或者等于或高于鑒定限 度）的雜質(zhì)度）的雜質(zhì) 表觀含量在表觀含量在0.1%以下的具強烈生物作用的雜質(zhì)或毒以下的具強烈生物作用的雜質(zhì)或毒 性雜質(zhì)性雜質(zhì) 光學(xué)異構(gòu)體檢查光學(xué)異構(gòu)體檢查 在原料藥制備工藝研究時，應(yīng)嚴格控制手性原料與在原料藥制備工藝研究時，應(yīng)嚴格控制手性原料與 每步反應(yīng)產(chǎn)物的光學(xué)純度每步反應(yīng)產(chǎn)物的光學(xué)純度 在質(zhì)量研究中，應(yīng)結(jié)合工藝與各手性中心的穩(wěn)

58、定在質(zhì)量研究中，應(yīng)結(jié)合工藝與各手性中心的穩(wěn)定 性，確定需要研究與控制的光學(xué)異構(gòu)體雜質(zhì)，并注性，確定需要研究與控制的光學(xué)異構(gòu)體雜質(zhì)，并注 意驗證各種手性分析方法的立體專屬性意驗證各種手性分析方法的立體專屬性 在穩(wěn)定性研究時，主要是監(jiān)測構(gòu)型的穩(wěn)定性在穩(wěn)定性研究時，主要是監(jiān)測構(gòu)型的穩(wěn)定性 單一對映體藥物或兩對映體以一定比例組合給藥的單一對映體藥物或兩對映體以一定比例組合給藥的 藥物，檢查光學(xué)異構(gòu)體雜質(zhì)藥物，檢查光學(xué)異構(gòu)體雜質(zhì) 兩對映體的比例組成含多個手性中心的單一對映體兩對映體的比例組成含多個手性中心的單一對映體 藥物，在獲得充分的安全性信息的基礎(chǔ)上，對生產(chǎn)藥物，在獲得充分的安全性信息的基礎(chǔ)上，對生

59、產(chǎn) 與貯藏過程中產(chǎn)生的毒性（生物活性）較大的光學(xué)與貯藏過程中產(chǎn)生的毒性（生物活性）較大的光學(xué) 異構(gòu)體雜質(zhì)作單獨控制異構(gòu)體雜質(zhì)作單獨控制 在生產(chǎn)過程中應(yīng)控制手性起始原料及中間體光學(xué)純度在生產(chǎn)過程中應(yīng)控制手性起始原料及中間體光學(xué)純度 示例示例3-26 瑞格列奈中左旋異構(gòu)體的檢查：瑞格列奈中左旋異構(gòu)體的檢查： N N H OH OCH3 CH3 H3CO O H 瑞格列奈瑞格列奈 色譜條件：色譜條件： 手性色譜柱手性色譜柱AGP(100mm 4.0 mm，5 m)，填料為，填料為2-酸酸 性糖蛋白鍵合硅膠；性糖蛋白鍵合硅膠； 流動相流動相A 0.02 mol/L的磷酸鹽緩沖液的磷酸鹽緩沖液(pH7.0) 流動相流動相B 乙腈乙腈 10%乙腈，保持乙腈，保持2min，2min內(nèi)線性提高到內(nèi)線性提高到25%，保持，保持4min 檢測波長為檢測波長為240 nm，流速，流速0.5ml/min。 瑞格列奈消旋體的瑞格列奈消旋體的HPLC圖。圖。 1.右旋體，右旋體，2. 左旋體左旋體 供試品溶液的色譜圖中如有左旋異構(gòu)體峰，其峰面供試品溶液的色譜圖中如有左旋異構(gòu)體峰，其峰面 積不得大于對照溶液主峰面積（積不得大于對照溶