現(xiàn)代生物技術(shù)在發(fā)酵食品生產(chǎn)中的應(yīng)用

1、現(xiàn)代生物技術(shù)在發(fā)酵食品生產(chǎn)中的應(yīng)用摘要：生物技術(shù)是以生命科學(xué)為基礎(chǔ)，利用生物機體、生物系統(tǒng)創(chuàng)造新物種，并與工程原理相結(jié)合，加工生產(chǎn)生物制品的綜合性科學(xué)技術(shù)?，F(xiàn)代生物技術(shù)則包括基因工程、細(xì)胞工程、酶工程和發(fā)酵工程、蛋白質(zhì)工程等領(lǐng)域。在我國的工業(yè)食品中，生物技術(shù)工業(yè)化產(chǎn)品占有相當(dāng)大的比重。近年來，酒類和新型發(fā)酵產(chǎn)品以及釀造產(chǎn)品的產(chǎn)值占工業(yè)食品總產(chǎn)值的17%。在食品發(fā)酵生產(chǎn)中應(yīng)用生物技術(shù)可以提高發(fā)酵劑的性能，縮短發(fā)酵周期，豐富發(fā)酵制品的種類?，F(xiàn)代生物技術(shù)在發(fā)酵食品領(lǐng)域中有廣闊市場和發(fā)展前景，本文闡述了基因工程、細(xì)胞工程、酶工程等現(xiàn)代生物技術(shù)在食品發(fā)酵生產(chǎn)中的應(yīng)用。關(guān)鍵詞：生物技術(shù)；基因工程；細(xì)胞工程

2、；酶工程；發(fā)酵食品一前言現(xiàn)代生物技術(shù)的迅猛發(fā)展，成就斐然，推動著科學(xué)技術(shù)的進步，促進著社會經(jīng)濟的發(fā)展，改變著人類的生活與思維方式，影響著人類社會的發(fā)展進程?，F(xiàn)代生物技術(shù)的成果越來越廣泛地應(yīng)用于醫(yī)藥、食品能源、化工、輕工和環(huán)境保護等諸多領(lǐng)域。生物技術(shù)是21世紀(jì)高新技術(shù)革命的核心內(nèi)容，具有巨大的經(jīng)濟效益及潛在的生產(chǎn)力。專家預(yù)測到2020年，生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)將成為世界經(jīng)濟體系的支柱產(chǎn)業(yè)之一。生物技術(shù)是以生命科學(xué)為基礎(chǔ)，利用生物機體、生物系統(tǒng)創(chuàng)造新物種，并與工程原理結(jié)合，加工生產(chǎn)生物制品的綜合性科學(xué)技術(shù)。現(xiàn)代生物技術(shù)包括基因工程、細(xì)胞工程、酶工程和發(fā)酵工程、蛋白質(zhì)工程等領(lǐng)域1-3。在我國的工業(yè)食品中，生物

3、技術(shù)工業(yè)化產(chǎn)品占有相當(dāng)大的比重。近年來，酒類和新型發(fā)酵產(chǎn)品以及釀造產(chǎn)品的產(chǎn)值占工業(yè)食品總產(chǎn)值的17%?，F(xiàn)代生物技術(shù)在發(fā)酵食品領(lǐng)域中有廣闊市場和發(fā)展前景，本文主要闡述現(xiàn)代生物技術(shù)在發(fā)酵食品生產(chǎn)中的應(yīng)用。二現(xiàn)代生物技術(shù)在發(fā)酵食品生產(chǎn)中的應(yīng)用1 基因工程技術(shù)在發(fā)酵食品生產(chǎn)中的應(yīng)用基因工程技術(shù)是現(xiàn)代生食品 物技術(shù)的核心內(nèi)容，采用類似工程設(shè)計的方法，按照人類的特殊需要，將具有遺傳性的目的基因在離體條件下進行剪切、組合、拼接，再將人工重組的基因通過載體導(dǎo)入受體細(xì)胞，進行無性繁殖，并使目的基因在受體細(xì)胞中快速表達，產(chǎn)生出人類所需要的產(chǎn)品或組建成新的生物類型。發(fā)酵食品生產(chǎn)的關(guān)鍵是優(yōu)良菌株的獲取，除選用常用的誘

4、變、雜交和原生質(zhì)體融合等傳統(tǒng)方法外，還可與基因工程結(jié)合，進行改造生產(chǎn)菌種4-6。1.1 改良面包酵母菌的性能面包酵母是最早采用基因工程改造的食品微生物。將優(yōu)良酶基因轉(zhuǎn)入面包酵母菌中后，其含有的麥芽糖透性酶及麥芽糖的含量比普通面包酵母顯著提高，面包加工中產(chǎn)生二氧化碳?xì)怏w量提高，應(yīng)用改良后的酵母菌種可生產(chǎn)出膨潤松軟的面包7。1.2 改良釀酒酵母菌的性能利用基因工程技術(shù)培育出新的釀酒酵母菌株，用以改進傳統(tǒng)的釀酒工藝，并使之多樣化。采用基因工程技術(shù)將大麥中的淀粉酶基因轉(zhuǎn)入啤酒酵母中后，即直接利用淀粉發(fā)酵，使生產(chǎn)流程縮短，工序簡化，革新啤酒生產(chǎn)工藝8。目前，已成功地選育出分解-葡聚糖和分解糊精的啤酒酵母

5、菌株、嗜殺啤酒酵母菌株 提高生香物質(zhì)含量的啤酒酵母菌株9。1.3 改良乳酸菌發(fā)酵劑的性能乳酸菌是一類能代謝產(chǎn)生乳酸，降低發(fā)酵產(chǎn)品ph值的一類微生物。乳酸菌基因表達系統(tǒng)分為組成型表達和受控表達兩種類型，其中受控表達系統(tǒng)包括糖誘導(dǎo)系統(tǒng)、nisin誘導(dǎo)系統(tǒng)、ph誘導(dǎo)系統(tǒng)和噬菌體衍生系統(tǒng)。相對于乳酸乳球菌和嗜熱鏈球菌而言，德氏乳桿菌的基因研究比較缺乏，不過已經(jīng)發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒pn42和pjbl2用于構(gòu)建德氏乳桿菌的克隆載體。研究發(fā)現(xiàn)乳酸菌基因突變有兩種方法：第一種方法涉及(同源或異源的)可獨立復(fù)制的轉(zhuǎn)座子，第二種方法是依賴于克隆的基因組dna片斷和染色體上的同源部位的重組整合而獲得。通過基因工程得到的乳酸菌發(fā)

6、酵劑具有優(yōu)良的發(fā)酵性能，產(chǎn)雙乙酰能力、蛋白水解能力、胞外多糖的穩(wěn)定形成能力、抗雜菌和病原菌的能力較強10-12。2 細(xì)胞工程技術(shù)在發(fā)酵食品生產(chǎn)中的應(yīng)用細(xì)胞工程是生物工程的主要組成部分之一，產(chǎn)生于20世紀(jì)70年代末至80年代初，是在細(xì)胞水平上改變細(xì)胞的遺傳特性或通過大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)以獲得人們所需物質(zhì)的技術(shù)過程。細(xì)胞工程主要有細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合及細(xì)胞代謝物的生產(chǎn)等。細(xì)胞融合是在外力(誘導(dǎo)劑或促融劑)作用下，使兩個或兩個以上的異源(種、屬間) 細(xì)胞或原生質(zhì)體相互接觸，從而發(fā)生膜融合、胞質(zhì)融合和核融合并形成雜種細(xì)胞的現(xiàn)象。細(xì)胞融合技術(shù)是一種改良微生物發(fā)酵菌種的有效方法，主要用于改良微生物菌種特性、提高目

7、的產(chǎn)物的產(chǎn)量、使菌種獲得新的性狀、合成新產(chǎn)物等。與基因工程技術(shù)結(jié)合，使對遺傳物質(zhì)進一步修飾提供了多樣的可能性13。例如日本味之素公司應(yīng)用細(xì)胞融合技術(shù)使產(chǎn)生氨基酸的短桿菌雜交，獲得比原產(chǎn)量高3倍的賴氨酸產(chǎn)生菌和蘇氨酸高產(chǎn)新菌株。釀酒酵母和糖化酵母的種間雜交，分離子后代中個別菌株具有糖化和發(fā)酵的雙重能力。日本國稅廳釀造試驗所用該技術(shù)獲得了優(yōu)良的高性能謝利酵母來釀制西班牙謝利白葡萄酒獲得了成功。目前，微生物細(xì)胞融合的對象已擴展到酵母、霉菌、細(xì)菌、放線菌等多種微生物的種間以至屬間，不斷培育出用于各種領(lǐng)域的新菌種。3 酶工程技術(shù)在食品發(fā)酵生產(chǎn)中的應(yīng)用酶是活細(xì)胞產(chǎn)生的具有高效催化功能、高度專一性和高度受控

8、性的一類特殊生物催化劑。酶工程是現(xiàn)代生物技術(shù)的一個重要組成部分，酶工程又稱酶反應(yīng)技術(shù)，是在一定的生物反應(yīng)器內(nèi)，利用生物酶作為催化劑，使某些物質(zhì)定向轉(zhuǎn)化工藝技術(shù)，包括酶的研制與生產(chǎn)，酶和細(xì)胞或細(xì)胞器的固定化技術(shù)，酶分子的修飾改造，以及生物傳感器等14-16。酶工程技術(shù)在發(fā)酵生產(chǎn)中主要用于兩個方面，一是用酶技術(shù)處理發(fā)酵原料，有利于發(fā)酵過程的進行。如啤酒釀制過程，主要原料麥芽的質(zhì)量欠佳或大麥、大米等輔助原料使用量較大時，會造成淀粉酶、俘一葡聚糖酶、纖維素酶的活力不足，使糖化不充分、蛋白質(zhì)降解不足，從而減慢發(fā)酵速度，影響啤酒的風(fēng)味和收率。使用微生物淀粉酶、蛋白酶、一葡聚糖酶等制劑，可補充麥芽中足的缺陷

9、，提高麥汁的可發(fā)酵度和麥汁糖化的組分，縮短糖化時間，減少麥皮中色素、單寧等不良雜質(zhì)在糖化過程中浸出，從而降低麥汁色澤。二是用酶來處理發(fā)酵菌種的代謝產(chǎn)物，縮短發(fā)酵過程，促進發(fā)酵風(fēng)味的形成。啤酒中的雙乙酰是影響啤酒風(fēng)味的主要因素，是判斷啤酒成熟的主要指標(biāo)。當(dāng)啤酒中雙乙酰的濃度超過閾值時，就會產(chǎn)生一種不愉快的餿酸味。雙乙酰是由酵母繁殖時生成的-乙酰乳酸和-乙酰羥基丁酸氧化脫羧而成的，一般在啤酒發(fā)酵后期還原雙乙酰需要約510d的時間。崔進梅等報道，發(fā)酵罐中加入-乙酰乳酸脫羧酶能催化-乙酰乳酸直接形成羧基丁酮，可縮短發(fā)酵周期，減少雙乙酰含量17。三前景與展望傳統(tǒng)的微生物發(fā)酵技術(shù)在食品領(lǐng)域的應(yīng)用由來已久,

10、 如傳統(tǒng)的釀酒、發(fā)酵肉制品、發(fā)酵豆制品、發(fā)酵奶制品和發(fā)酵調(diào)味品等。應(yīng)用現(xiàn)代微生物發(fā)酵工程技術(shù)不僅可以更好地生產(chǎn)傳統(tǒng)發(fā)酵制品, 而且對于發(fā)酵生產(chǎn)現(xiàn)代的酶制劑、氨基酸、菌體蛋白、食品添加劑等食用產(chǎn)品具有重要意義18。一個占地不多, 年產(chǎn)10萬噸單細(xì)胞蛋白的微生物工廠, 相當(dāng)于12萬公頃耕地生產(chǎn)的大豆蛋白質(zhì), 或是200萬公頃草原飼養(yǎng)牛羊生產(chǎn)的動物蛋白質(zhì)19, 應(yīng)用現(xiàn)代發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)豐富多樣的食品添加劑和食品用酶也是改善食品品質(zhì)與開發(fā)新食品的重要途徑?，F(xiàn)在低糖甜味劑、酸味劑、鮮味劑、香精香料、天然色素和維生素以及多種食用蛋白酶、淀粉酶等都已實現(xiàn)發(fā)酵生產(chǎn)。在食品發(fā)酵生產(chǎn)中應(yīng)用生物技術(shù)可以提高發(fā)酵劑的性能

11、，縮短發(fā)酵周期，豐富發(fā)酵制品的種類。不僅提高了產(chǎn)品檔次和附加值，生產(chǎn)出符合不同消費者需要的發(fā)酵食品，而且有利于加速食品加工業(yè)的發(fā)展20。隨著生化技術(shù)的日益發(fā)展，相信會開發(fā)出更多物美價廉的發(fā)酵食品，使生物技術(shù)在食品發(fā)酵生產(chǎn)中的應(yīng)用更加廣泛。參考文獻1趙志華,岳田利等.現(xiàn)代生物技術(shù)在乳品工業(yè)中的應(yīng)用研究j.生物技術(shù)通報.2006,04:78-80.2王春榮,王興國等.現(xiàn)代生物技術(shù)與食品工業(yè)j.山東食品科技.2004,07:31.3徐成勇,郭本恒等.酸奶發(fā)酵劑和乳酸菌生物技術(shù)育種j.中國生物工程雜志.2004,(7):27.4楊玉琢,劉玉靜.基因工程對乳酸菌發(fā)酵劑的改良應(yīng)用j.中國乳品工業(yè).2005

12、,07:33-35.5邵晨,黃小鳳.現(xiàn)代酶工程及其在食品加工中的應(yīng)用j.江蘇食品與發(fā)酵.1995,03:32-336許新德, 徐爾尼, 高蔭榆等. 1999. 生物技術(shù)在食品領(lǐng)域中的應(yīng)用. 食品工業(yè)技術(shù)科技, 20(4): 68697石元春. 2003. 一座偉大的里程碑) 農(nóng)業(yè)生物技術(shù). 生物學(xué)通報, 38( 8): 348石毅. 2003. 轉(zhuǎn)基因作物與人類的安全. 生物學(xué)通報, 38( 8): 12139呂福堂, 司東霞, 戴保國. 2003. 微生物與新型農(nóng)業(yè). 生物學(xué)通報,38( 8): 232410姚汝華. 1996. 微生物工程工藝原理. 廣州: 華南理工大學(xué)出版社, 92071

13、1wod，hg，proceeding of the nutrition society，1997，56 (3)：845121 jennifer athomsonre18ismai lserageldinbiotechnology and fond security in the21st centuryscience1999，285：387389 search needs to improve agrieul- ture productivity and fod quality，with emphasis on biotechnologyjournal of nutrition，2002，132

14、：34413442 13ganesh mkishorebiotechnology：enhancing human nu- trition in developing and developed worldspnas，1999，96： 59685972 i81 kj kashabiotechnology and world fod supplygenome 1999，42(4)：642645 14李丹, 崔凱. 1999. 食品蛋白質(zhì)改性. 食品發(fā)酵工業(yè), 25(6): 5862 15馬文漪, 楊柳燕. 1998. 環(huán)境微生物工程. 南京: 南京大學(xué)出版社,11811916呂福堂, 司東霞, 戴

15、保國. 2003. 微生物與新型農(nóng)業(yè). 生物學(xué)通報,38( 8): 2122 17石毅. 2003. 轉(zhuǎn)基因作物與人類的安全. 生物學(xué)通報, 38( 8): 121318呂福堂, 司東霞, 戴保國. 2003. 微生物與新型農(nóng)業(yè). 生物學(xué)通報,38( 8): 2324 19姚汝華. 1996. 微生物工程工藝原理. 廣州: 華南理工大學(xué)出版社, 9207 20李丹, 崔凱. 1999. 食品蛋白質(zhì)改性. 食品發(fā)酵工業(yè), 25(6): 5862 蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆蚇袃膀莂蚆羅羃羋蚅蚅膈膄蚄螇羈蒃螃衿膆荿螃羈罿芅螂蟻膅芁莈袃肇膇莇羆芃蒅莆蚅肆莁莆螈芁芇蒞袀肄膃蒄羂袇蒂蒃螞肂莈蒂螄裊莄蒁羇膁芀

16、蒀蚆羃膆蒀蝿腿蒄葿袁羂莀蒈羃膇芆薇蚃羀膂薆螅膆肈薅袇羈蕆薄蚇芄莃薄蝿?wù)剀邓A袂節(jié)膅薂羄肅蒄薁蚄袈莀蝕螆肅芆蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆蚇袃膀莂蚆羅羃羋蚅蚅膈膄蚄螇羈蒃螃衿膆荿螃羈罿芅螂蟻膅芁莈袃肇膇莇羆芃蒅莆蚅肆莁莆螈芁芇蒞袀肄膃蒄羂袇蒂蒃螞肂莈蒂螄裊莄蒁羇膁芀蒀蚆羃膆蒀蝿腿蒄葿袁羂莀蒈羃膇芆薇蚃羀膂薆螅膆肈薅袇羈蕆薄蚇芄莃薄蝿?wù)剀邓A袂節(jié)膅薂羄肅蒄薁蚄袈莀蝕螆肅芆蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆蚇袃膀莂蚆羅羃羋蚅蚅膈膄蚄螇羈蒃螃衿膆荿螃羈罿芅螂蟻膅芁莈袃肇膇莇羆芃蒅莆蚅肆莁莆螈芁芇蒞袀肄膃蒄羂袇蒂蒃螞肂莈蒂螄裊莄蒁羇膁芀蒀蚆羃膆蒀蝿腿蒄葿袁羂莀蒈羃膇芆薇蚃羀膂薆螅膆肈薅袇羈蕆薄蚇芄莃薄蝿?wù)剀邓A袂節(jié)膅薂羄肅蒄

17、薁蚄袈莀蝕螆肅芆蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆蚇袃膀莂蚆羅羃羋蚅蚅膈膄蚄螇羈蒃螃衿膆荿螃羈罿芅螂蟻膅芁莈袃肇膇莇羆芃蒅莆蚅肆莁莆螈芁芇蒞袀肄膃蒄羂袇蒂蒃螞肂莈蒂螄裊莄蒁羇膁芀蒀蚆羃膆蒀蝿腿蒄葿袁羂莀蒈羃膇芆薇蚃羀膂薆螅膆肈薅袇羈蕆薄蚇芄莃薄蝿?wù)剀邓A袂節(jié)膅薂羄肅蒄薁蚄袈莀蝕螆肅芆蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆蚇袃膀莂蚆羅羃羋蚅蚅膈膄蚄螇羈蒃螃衿膆荿螃羈罿芅螂蟻膅芁莈袃肇膇莇羆芃蒅莆蚅肆莁莆螈芁芇蒞袀肄膃蒄羂袇蒂蒃螞肂莈蒂螄裊莄蒁羇膁芀蒀蚆羃膆蒀蝿腿蒄葿袁羂莀蒈羃膇芆薇蚃羀膂薆螅膆肈薅袇羈蕆薄蚇芄莃薄蝿?wù)剀邓A袂節(jié)膅薂羄肅蒄薁蚄袈莀蝕螆肅芆蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆蚇袃膀莂蚆羅羃羋蚅蚅膈膄蚄螇羈蒃螃衿膆荿螃羈罿芅

18、螂蟻膅芁莈袃肇膇莇羆芃蒅莆蚅肆莁莆螈芁芇蒞袀肄膃蒄羂袇蒂蒃螞肂莈蒂螄裊莄蒁羇膁芀蒀蚆羃膆蒀蝿腿蒄葿袁羂莀蒈羃膇芆薇蚃羀膂薆螅膆肈薅袇羈蕆薄蚇芄莃薄蝿?wù)剀邓A袂節(jié)膅薂羄肅蒄薁蚄袈莀蝕螆肅芆蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆蚇袃膀莂蚆羅羃羋蚅蚅膈膄蚄螇羈蒃螃衿膆荿螃羈罿芅螂蟻膅芁莈袃肇膇莇羆芃蒅莆蚅肆莁莆螈芁芇蒞袀肄膃蒄羂袇蒂蒃螞肂莈蒂螄裊莄蒁羇膁芀蒀蚆羃膆蒀蝿腿蒄葿袁羂莀蒈羃膇芆薇蚃羀膂薆螅膆肈薅袇羈蕆薄蚇芄莃薄蝿?wù)剀邓A袂節(jié)膅薂羄肅蒄薁蚄袈莀蝕螆肅芆蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆蚇袃膀莂蚆羅羃羋蚅蚅膈膄蚄螇羈蒃螃衿膆荿螃羈罿芅螂蟻膅芁莈袃肇膇莇羆芃蒅莆蚅肆莁莆螈芁芇蒞袀肄膃蒄羂袇蒂蒃螞肂莈蒂螄裊莄蒁羇膁芀蒀蚆羃膆

19、蒀蝿腿蒄葿袁羂莀蒈羃膇芆薇蚃羀膂薆螅膆肈薅袇羈蕆薄蚇芄莃薄蝿?wù)剀邓A袂節(jié)膅薂羄肅蒄薁蚄袈莀蝕螆肅芆蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆蚇袃膀莂蚆羅羃羋蚅蚅膈膄蚄螇羈蒃螃衿膆荿螃羈罿芅螂蟻膅芁莈袃肇膇莇羆芃蒅莆蚅肆莁莆螈芁芇蒞袀肄膃蒄羂袇蒂蒃螞肂莈蒂螄裊莄蒁羇膁芀蒀蚆羃膆蒀蝿腿蒄葿袁羂莀蒈羃膇芆薇蚃羀膂薆螅膆肈薅袇羈蕆薄蚇芄莃薄蝿?wù)剀邓A袂節(jié)膅薂羄肅蒄薁蚄袈莀蝕螆肅芆蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆蚇袃膀莂蚆羅羃羋蚅蚅膈膄蚄螇羈蒃螃衿膆荿螃羈罿芅螂蟻膅芁莈袃肇膇莇羆芃蒅莆蚅肆莁莆螈芁芇蒞袀肄膃蒄羂袇蒂蒃螞肂莈蒂螄裊莄蒁羇膁芀蒀蚆羃膆蒀蝿腿蒄葿袁羂莀蒈羃膇芆薇蚃羀膂薆螅膆肈薅袇羈蕆薄蚇芄莃薄蝿?wù)剀邓A袂節(jié)膅薂羄肅蒄薁蚄袈莀

20、蝕螆肅芆蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆蚇袃膀莂蚆羅羃羋蚅蚅膈膄蚄螇羈蒃螃衿膆荿螃羈罿芅螂蟻膅芁莈袃肇膇莇羆芃蒅莆蚅肆莁莆螈芁芇蒞袀肄膃蒄羂袇蒂蒃螞肂莈蒂螄裊莄蒁羇膁芀蒀蚆羃膆蒀蝿腿蒄葿袁羂莀蒈羃膇芆薇蚃羀膂薆螅膆肈薅袇羈蕆薄蚇芄莃薄蝿?wù)剀邓A袂節(jié)膅薂羄肅蒄薁蚄袈莀蝕螆肅芆蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆蚇袃膀莂蚆羅羃羋蚅蚅膈膄蚄螇羈蒃螃衿膆荿螃羈罿芅螂蟻膅芁莈袃肇膇莇羆芃蒅莆蚅肆莁莆螈芁芇蒞袀肄膃蒄羂袇蒂蒃螞肂莈蒂螄裊莄蒁羇膁芀蒀蚆羃膆蒀蝿腿蒄葿袁羂莀蒈羃膇芆薇蚃羀膂薆螅膆肈薅袇羈蕆薄蚇芄莃薄蝿?wù)剀邓A袂節(jié)膅薂羄肅蒄薁蚄袈莀蝕螆肅芆蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆蚇袃膀莂蚆羅羃羋蚅蚅膈膄蚄螇羈蒃螃衿膆荿螃羈罿芅螂蟻膅芁

21、莈袃肇膇莇羆芃蒅莆蚅肆莁莆螈芁芇蒞袀肄膃蒄羂袇蒂蒃螞肂莈蒂螄裊莄蒁羇膁芀蒀蚆羃膆蒀蝿腿蒄葿袁羂莀蒈羃膇芆薇蚃羀膂薆螅膆肈薅袇羈蕆薄蚇芄莃薄蝿?wù)剀邓A袂節(jié)膅薂羄肅蒄薁蚄袈莀蝕螆肅芆蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆蚇袃膀莂蚆羅羃羋蚅蚅膈膄蚄螇羈蒃螃衿膆荿螃羈罿芅螂蟻膅芁莈袃肇膇莇羆芃蒅莆蚅肆莁莆螈芁芇蒞袀肄膃蒄羂袇蒂蒃螞肂莈蒂螄裊莄蒁羇膁芀蒀蚆羃膆蒀蝿腿蒄葿袁羂莀蒈羃膇芆薇蚃羀膂薆螅膆肈薅袇羈蕆薄蚇芄莃薄蝿?wù)剀邓A袂節(jié)膅薂羄肅蒄薁蚄袈莀蝕螆肅芆蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆蚇袃膀莂蚆羅羃羋蚅蚅膈膄蚄螇羈蒃螃衿膆荿螃羈罿芅螂蟻膅芁莈袃肇膇莇羆芃蒅莆蚅肆莁莆螈芁芇蒞袀肄膃蒄羂袇蒂蒃螞肂莈蒂螄裊莄蒁羇膁芀蒀蚆羃膆蒀蝿腿蒄

22、葿袁羂莀蒈羃膇芆薇蚃羀膂薆螅膆肈薅袇羈蕆薄蚇芄莃薄蝿?wù)剀邓A袂節(jié)膅薂羄肅蒄薁蚄袈莀蝕螆肅芆蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆蚇袃膀莂蚆羅羃羋蚅蚅膈膄蚄螇羈蒃螃衿膆荿螃羈罿芅螂蟻膅芁莈袃肇膇莇羆芃蒅莆蚅肆莁莆螈芁芇蒞袀肄膃蒄羂袇蒂蒃螞肂莈蒂螄裊莄蒁羇膁芀蒀蚆羃膆蒀蝿腿蒄葿袁羂莀蒈羃膇芆薇蚃羀膂薆螅膆肈薅袇羈蕆薄蚇芄莃薄蝿?wù)剀邓A袂節(jié)膅薂羄肅蒄薁蚄袈莀蝕螆肅芆蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆蚇袃膀莂蚆羅羃羋蚅蚅膈膄蚄螇羈蒃螃衿膆荿螃羈罿芅螂蟻膅芁莈袃肇膇莇羆芃蒅莆蚅肆莁莆螈芁芇蒞袀肄膃蒄羂袇蒂蒃螞肂莈蒂螄裊莄蒁羇膁芀蒀蚆羃膆蒀蝿腿蒄葿袁羂莀蒈羃膇芆薇蚃羀膂薆螅膆肈薅袇羈蕆薄蚇芄莃薄蝿?wù)剀邓A袂節(jié)膅薂羄肅蒄薁蚄袈莀蝕螆肅芆

23、蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆蚇袃膀莂蚆羅羃羋蚅蚅膈膄蚄螇羈蒃螃衿膆荿螃羈罿芅螂蟻膅芁莈袃肇膇莇羆芃蒅莆蚅肆莁莆螈芁芇蒞袀肄膃蒄羂袇蒂蒃螞肂莈蒂螄裊莄蒁羇膁芀蒀蚆羃膆蒀蝿腿蒄葿袁羂莀蒈羃膇芆薇蚃羀膂薆螅膆肈薅袇羈蕆薄蚇芄莃薄蝿?wù)剀邓A袂節(jié)膅薂羄肅蒄薁蚄袈莀蝕螆肅芆蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆蚇袃膀莂蚆羅羃羋蚅蚅膈膄蚄螇羈蒃螃衿膆荿螃羈罿芅螂蟻膅芁莈袃肇膇莇羆芃蒅莆蚅肆莁莆螈芁芇蒞袀肄膃蒄羂袇蒂蒃螞肂莈蒂螄裊莄蒁羇膁芀蒀蚆羃膆蒀蝿腿蒄葿袁羂莀蒈羃膇芆薇蚃羀膂薆螅膆肈薅袇羈蕆薄蚇芄莃薄蝿?wù)剀邓A袂節(jié)膅薂羄肅蒄薁蚄袈莀蝕螆肅芆蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆蚇袃膀莂蚆羅羃羋蚅蚅膈膄蚄螇羈蒃螃衿膆荿螃羈罿芅螂蟻膅芁莈袃肇膇

24、莇羆芃蒅莆蚅肆莁莆螈芁芇蒞袀肄膃蒄羂袇蒂蒃螞肂莈蒂螄裊莄蒁羇膁芀蒀蚆羃膆蒀蝿腿蒄葿袁羂莀蒈羃膇芆薇蚃羀膂薆螅膆肈薅袇羈蕆薄蚇芄莃薄蝿?wù)剀邓A袂節(jié)膅薂羄肅蒄薁蚄袈莀蝕螆肅芆蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆蚇袃膀莂蚆羅羃羋蚅蚅膈膄蚄螇羈蒃螃衿膆荿螃羈罿芅螂蟻膅芁莈袃肇膇莇羆芃蒅莆蚅肆莁莆螈芁芇蒞袀肄膃蒄羂袇蒂蒃螞肂莈蒂螄裊莄蒁羇膁芀蒀蚆羃膆蒀蝿腿蒄葿袁羂莀蒈羃膇芆薇蚃羀膂薆螅膆肈薅袇羈蕆薄蚇芄莃薄蝿?wù)剀邓A袂節(jié)膅薂羄肅蒄薁蚄袈莀蝕螆肅芆蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆蚇袃膀莂蚆羅羃羋蚅蚅膈膄蚄螇羈蒃螃衿膆荿螃羈罿芅螂蟻膅芁莈袃肇膇莇羆芃蒅莆蚅肆莁莆螈芁芇蒞袀肄膃蒄羂袇蒂蒃螞肂莈蒂螄裊莄蒁羇膁芀蒀蚆羃膆蒀蝿腿蒄葿袁羂莀

25、蒈羃膇芆薇蚃羀膂薆螅膆肈薅袇羈蕆薄蚇芄莃薄蝿?wù)剀邓A袂節(jié)膅薂羄肅蒄薁蚄袈莀蝕螆肅芆蠆袈袆膂蠆薈肁膈蚈螀襖蒆聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈蝿肈蒈螄螈膀蚄蝕螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆羀肅莃薅罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄肁肁蒄薀肀膃莇衿聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈蝿肈蒈螄螈膀蚄蝕螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆羀肅莃薅罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄

26、肁肁蒄薀肀膃莇衿聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈蝿肈蒈螄螈膀蚄蝕螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆羀肅莃薅罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄肁肁蒄薀肀膃莇衿聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈蝿肈蒈螄螈膀蚄蝕螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆羀肅莃薅罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄肁肁蒄薀肀膃莇衿聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈

27、蝿肈蒈螄螈膀蚄蝕螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆羀肅莃薅罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄肁肁蒄薀肀膃莇衿聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈蝿肈蒈螄螈膀蚄蝕螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆羀肅莃薅罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄肁肁蒄薀肀膃莇衿聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈蝿肈蒈螄螈膀蚄蝕螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆

28、羀肅莃薅罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄肁肁蒄薀肀膃莇衿聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈蝿肈蒈螄螈膀蚄蝕螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆羀肅莃薅罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄肁肁蒄薀肀膃莇衿聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈蝿肈蒈螄螈膀蚄蝕螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆羀肅莃薅罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄肁肁蒄薀

29、肀膃莇衿聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈蝿肈蒈螄螈膀蚄蝕螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆羀肅莃薅罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄肁肁蒄薀肀膃莇衿聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈蝿肈蒈螄螈膀蚄蝕螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆羀肅莃薅罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄肁肁蒄薀肀膃莇衿聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈蝿肈蒈螄

30、螈膀蚄蝕螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆羀肅莃薅罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄肁肁蒄薀肀膃莇衿聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈蝿肈蒈螄螈膀蚄蝕螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆羀肅莃薅罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄肁肁蒄薀肀膃莇衿聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈蝿肈蒈螄螈膀蚄蝕螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆羀肅莃薅

31、罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄肁肁蒄薀肀膃莇衿聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈蝿肈蒈螄螈膀蚄蝕螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆羀肅莃薅罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄肁肁蒄薀肀膃莇衿聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈蝿肈蒈螄螈膀蚄蝕螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆羀肅莃薅罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄肁肁蒄薀肀膃莇衿

32、聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈蝿肈蒈螄螈膀蚄蝕螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆羀肅莃薅罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄肁肁蒄薀肀膃莇衿聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈蝿肈蒈螄螈膀蚄蝕螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆羀肅莃薅罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄肁肁蒄薀肀膃莇衿聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈蝿肈蒈螄螈膀蚄蝕

33、螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆羀肅莃薅罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄肁肁蒄薀肀膃莇衿聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈蝿肈蒈螄螈膀蚄蝕螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆羀肅莃薅罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄肁肁蒄薀肀膃莇衿聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈蝿肈蒈螄螈膀蚄蝕螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆羀肅莃薅罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄肁肁蒄薀肀膃莇衿聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈蝿肈蒈螄螈膀蚄蝕螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆羀肅莃薅罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄肁肁蒄薀肀膃莇衿聿芅薂螅聿莈蒞蟻肈肇薁薇膇腿莄裊膆節(jié)蕿螁膅莄莂蚇膄膄薇蚃螁芆蒀蕿螀莈蚆袈蝿肈蒈螄螈膀蚄蝕螇芃蕆薆袇蒞芀裊袆肅蒅螁裊芇羋螇襖荿薃螞袃聿莆薈袂膁薂袇袁芄莄螃羈莆薀蠆羀肅莃薅罿膈薈蒁羈莀莁袀羇肀蚆螆羆膂葿螞羅芄蚅薈羅莇蒈袆肄肆芀螂肅腿蒆蚈肂芁艿薄肁肁蒄