醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)三胡11322

1、第四節(jié)第四節(jié) 細(xì)菌的人工培養(yǎng)細(xì)菌的人工培養(yǎng) p31p31 一、一、培養(yǎng)基培養(yǎng)基（culture medium）：）： 是由人工方法配制而成的，專供微生物生長(zhǎng)繁殖是由人工方法配制而成的，專供微生物生長(zhǎng)繁殖 使用的使用的混合營(yíng)養(yǎng)物混合營(yíng)養(yǎng)物制品制品。 常用培養(yǎng)基的種類常用培養(yǎng)基的種類 按營(yíng)養(yǎng)組成和用途分按營(yíng)養(yǎng)組成和用途分 厭氧培養(yǎng)基厭氧培養(yǎng)基 基礎(chǔ)培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基 增菌培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)基 選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基 鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基 二、細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況二、細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況 據(jù)物理狀態(tài)分據(jù)物理狀態(tài)分 1 1、液體培養(yǎng)基：、液體培養(yǎng)基： 均勻混濁均勻混濁、沉淀生長(zhǎng)沉淀生長(zhǎng)、表面生長(zhǎng)表面生

2、長(zhǎng)（菌膜）；（菌膜）； 多用于增菌多用于增菌 均勻混濁均勻混濁 對(duì)照對(duì)照 沉淀生長(zhǎng)沉淀生長(zhǎng) 2 2、固體培養(yǎng)基：、固體培養(yǎng)基： 含含1.5%1.5%瓊脂瓊脂 用于分離培養(yǎng)用于分離培養(yǎng) 菌落菌落：?jiǎn)蝹€(gè)細(xì)菌分裂繁殖成一堆肉眼可見(jiàn)單個(gè)細(xì)菌分裂繁殖成一堆肉眼可見(jiàn) 的細(xì)菌集團(tuán)。的細(xì)菌集團(tuán)。 純培養(yǎng)純培養(yǎng)：挑取一個(gè)菌落，移種到另一培養(yǎng)挑取一個(gè)菌落，移種到另一培養(yǎng) 基中，生長(zhǎng)出來(lái)的細(xì)菌均為純基中，生長(zhǎng)出來(lái)的細(xì)菌均為純 種，稱為種，稱為純培養(yǎng)純培養(yǎng)。 菌落特征菌落特征大小、形狀、顏色、氣味、透明度、大小、形狀、顏色、氣味、透明度、 光滑或粗糙、濕潤(rùn)或干燥、隆起或扁平、邊緣整光滑或粗糙、濕潤(rùn)或干燥、隆起或扁平、

3、邊緣整 齊與否、是否溶血等齊與否、是否溶血等有助于細(xì)菌鑒定有助于細(xì)菌鑒定 菌落（菌落（S型）型） 菌苔菌苔 菌落（菌落（R型）型） 光滑型光滑型(S型型) 粗造型粗造型(R型型) 粘液型粘液型(M型型) 3 3、半固體培養(yǎng)基：、半固體培養(yǎng)基：含含0.3%0.5%瓊脂瓊脂 鞭毛菌鞭毛菌混濁生長(zhǎng)混濁生長(zhǎng)（沿穿刺線呈云霧狀（沿穿刺線呈云霧狀/ /羽毛狀）羽毛狀） 無(wú)鞭毛菌無(wú)鞭毛菌沿穿刺線呈沿穿刺線呈線狀生長(zhǎng)線狀生長(zhǎng) 用于用于檢測(cè)細(xì)菌的動(dòng)力檢測(cè)細(xì)菌的動(dòng)力和和保存菌種保存菌種 斜面劃線示意圖斜面劃線示意圖 4 4、斜面培養(yǎng)基接種法、斜面培養(yǎng)基接種法 應(yīng)用：短期保存菌種應(yīng)用：短期保存菌種 三、三、人工培養(yǎng)

4、細(xì)菌的用途人工培養(yǎng)細(xì)菌的用途 u在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用 1.1.感染性疾病的病原學(xué)診斷感染性疾病的病原學(xué)診斷：明確病因，指導(dǎo)用明確病因，指導(dǎo)用藥藥 2.2.細(xì)菌學(xué)的研究細(xì)菌學(xué)的研究：細(xì)菌遺傳、變異、耐藥性細(xì)菌遺傳、變異、耐藥性 3.3.生物制品的制備生物制品的制備：疫苗、類毒素、抗毒素疫苗、類毒素、抗毒素 u在工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用在工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用 （抗生素、維生素、酶制劑等）（抗生素、維生素、酶制劑等） u在基因工程中的應(yīng)用在基因工程中的應(yīng)用（ 基因工程菌基因工程菌乙肝疫苗）乙肝疫苗） 進(jìn)入實(shí)驗(yàn)內(nèi)容講授進(jìn)入實(shí)驗(yàn)內(nèi)容講授 1 1、固體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基( (平板平板) )接種法接種法 分

5、區(qū)劃線法分區(qū)劃線法 連續(xù)劃線法連續(xù)劃線法 第一區(qū)劃線第一區(qū)劃線 滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán) 第二區(qū)劃線第二區(qū)劃線 滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán) 第三區(qū)劃線第三區(qū)劃線 滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán) 滅菌接種環(huán)，取菌準(zhǔn)備滅菌接種環(huán)，取菌準(zhǔn)備 分區(qū)劃線法分區(qū)劃線法 原劃線原劃線 標(biāo)本：混合菌液標(biāo)本：混合菌液 分組：分組：1人一個(gè)固體平板人一個(gè)固體平板 連續(xù)劃線法連續(xù)劃線法 菌落示意圖菌落示意圖 細(xì)菌在細(xì)菌在固體固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象 細(xì)菌在固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象細(xì)菌在固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象 菌菌 落落 菌落特征菌落特征：大小、形狀、顏色、氣味、透明度、表面光：大小、形狀、顏色、氣味、透明度、表面光 滑或

6、粗糙、濕潤(rùn)或干燥、邊緣整齊與否、溶血性等。滑或粗糙、濕潤(rùn)或干燥、邊緣整齊與否、溶血性等。 菌落類型：菌落類型： S型、型、 R型、型、 M型菌落。型菌落。 菌菌 苔苔：指多個(gè)菌落融合在一起形成的細(xì)菌堆積物。指多個(gè)菌落融合在一起形成的細(xì)菌堆積物。 菌落（菌落（S型）型） 菌苔菌苔 菌落（菌落（R型）型） 光滑型光滑型(S型型) 粗造型粗造型(R型型) 粘液型粘液型(M型型) 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 1、無(wú)菌操作、無(wú)菌操作 2、密而不重疊、密而不重疊 3、勿劃破瓊脂、勿劃破瓊脂 4、做好標(biāo)記，、做好標(biāo)記，第二天觀察結(jié)果第二天觀察結(jié)果 2、葡萄球菌培養(yǎng)（示教）、葡萄球菌培養(yǎng)（示教） 營(yíng)養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)

7、基生長(zhǎng)良好營(yíng)養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基生長(zhǎng)良好 菌菌 落落： S S型菌落，金黃型菌落，金黃 色、表皮、腐生葡萄球色、表皮、腐生葡萄球 菌各自形成菌各自形成金黃色、白金黃色、白 色、檸檬色色、檸檬色- -脂溶性色素脂溶性色素 血平板：血平板： 金黃色葡萄球菌形金黃色葡萄球菌形 成的成的-溶血環(huán)溶血環(huán) 金黃色色素金黃色色素白色色素白色色素 3 3、鏈球菌培養(yǎng)（示教）、鏈球菌培養(yǎng)（示教） 血平板上的菌落：血平板上的菌落： 甲型溶血性鏈球菌形甲型溶血性鏈球菌形 成草綠色溶血現(xiàn)象，乙型溶血性鏈球菌形成草綠色溶血現(xiàn)象，乙型溶血性鏈球菌形 成透明的完全溶血現(xiàn)象，丙型鏈球菌無(wú)溶成透明的完全溶血現(xiàn)象，丙型鏈球菌無(wú)

8、溶 血現(xiàn)象。血現(xiàn)象。 甲鏈甲鏈 溶血溶血 草綠色溶血草綠色溶血 乙鏈乙鏈 溶血溶血 丙鏈丙鏈 不溶血不溶血 4、常見(jiàn)致病菌的形態(tài)與染色性、常見(jiàn)致病菌的形態(tài)與染色性 取材：純培養(yǎng)物取材：純培養(yǎng)物 染色法：革蘭染色染色法：革蘭染色 放大倍數(shù)：放大倍數(shù)：10X100 自閱片之一自閱片之一 取材：痰涂片取材：痰涂片 染色法：抗酸染色染色法：抗酸染色 放大倍數(shù)：放大倍數(shù)：10X100 自閱片之二自閱片之二 菌體染成菌體染成紅色紅色， 細(xì)長(zhǎng)略微彎曲桿細(xì)長(zhǎng)略微彎曲桿 菌，單個(gè)或分枝菌，單個(gè)或分枝 狀排列；狀排列； （非抗酸菌及細(xì)非抗酸菌及細(xì) 胞染成藍(lán)色胞染成藍(lán)色） 示教片之一示教片之一 取材：泌尿道膿性分泌

9、物取材：泌尿道膿性分泌物 染色法：革蘭染色染色法：革蘭染色 放大倍數(shù)：放大倍數(shù)：10X100 中性粒細(xì)胞分葉核中性粒細(xì)胞分葉核 淋球菌染成淋球菌染成紅色紅色/G-， 腎形或豆形，成雙腎形或豆形，成雙 排列排列 示教片之二示教片之二 取材：純培養(yǎng)物取材：純培養(yǎng)物 染色法：革蘭染色染色法：革蘭染色 放大倍數(shù)：放大倍數(shù)：10X100 G+粗短桿菌，粗短桿菌， 芽胞呈橢圓形，芽胞呈橢圓形， 比菌體粗，次極比菌體粗，次極 端，細(xì)菌呈端，細(xì)菌呈湯匙湯匙 狀或網(wǎng)球拍狀狀或網(wǎng)球拍狀 示教片之三示教片之三 取材：小鼠腹腔滲出液取材：小鼠腹腔滲出液 染色法：革蘭染色染色法：革蘭染色 放大倍數(shù)：放大倍數(shù)：10X10

10、0 G+粗大桿菌，粗大桿菌， 兩端幾乎平切，兩端幾乎平切， 在被感染得人在被感染得人 或動(dòng)物體內(nèi)形或動(dòng)物體內(nèi)形 成成明顯的莢膜明顯的莢膜 示教片之四示教片之四 取材：純培養(yǎng)物取材：純培養(yǎng)物 染色法：革蘭染色染色法：革蘭染色 放大倍數(shù)：放大倍數(shù)：10X100 G+粗大桿菌，粗大桿菌， 有氧條件下形有氧條件下形 成成橢圓形芽胞橢圓形芽胞， 位于菌體中央位于菌體中央 取材：純培養(yǎng)物取材：純培養(yǎng)物 染色法：美藍(lán)染色染色法：美藍(lán)染色 放大倍數(shù)：放大倍數(shù)：10X100 取材：純培養(yǎng)物取材：純培養(yǎng)物 染色法：染色法：Neisser染色染色 放大倍數(shù)：放大倍數(shù)：10X100 示教片之五示教片之五 菌體細(xì)長(zhǎng)彎曲

11、的桿菌，粗細(xì)不一，常一菌體細(xì)長(zhǎng)彎曲的桿菌，粗細(xì)不一，常一 端或兩端膨大呈棒狀；排列不規(guī)則，呈端或兩端膨大呈棒狀；排列不規(guī)則，呈 柵欄狀、柵欄狀、V字形或字形或L字形。字形。異染顆粒異染顆粒 1、細(xì)菌的人工培養(yǎng)（講授）、細(xì)菌的人工培養(yǎng)（講授） 2、細(xì)菌的培養(yǎng)方法：、細(xì)菌的培養(yǎng)方法： 固體培養(yǎng)基接種法（自做）；固體培養(yǎng)基接種法（自做）； 半固體、液體培養(yǎng)基接種法（示教）半固體、液體培養(yǎng)基接種法（示教） 3、葡萄球菌、鏈球菌培養(yǎng)及生化（示教）、葡萄球菌、鏈球菌培養(yǎng)及生化（示教） 4、細(xì)菌的形態(tài)觀察、細(xì)菌的形態(tài)觀察 自閱片：甲型鏈球菌、結(jié)核桿菌自閱片：甲型鏈球菌、結(jié)核桿菌 示教片：淋球菌、肉毒桿菌、產(chǎn)

12、氣莢膜桿菌、白喉?xiàng)U菌、示教片：淋球菌、肉毒桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌、白喉?xiàng)U菌、 第第2 2頁(yè)：頁(yè)： 實(shí)驗(yàn)名稱：實(shí)驗(yàn)名稱：細(xì)菌平板劃線分離法細(xì)菌平板劃線分離法 （記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果繪一簡(jiǎn)圖并描述平板上的（記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果繪一簡(jiǎn)圖并描述平板上的菌落特征菌落特征） 第第3頁(yè)頁(yè) ： 實(shí)驗(yàn)名稱：實(shí)驗(yàn)名稱：細(xì)菌的形態(tài)觀察（繪圖）細(xì)菌的形態(tài)觀察（繪圖） 甲型鏈球菌、結(jié)核桿菌、淋球菌、肉毒桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌、白喉?xiàng)U菌、甲型鏈球菌、結(jié)核桿菌、淋球菌、肉毒桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌、白喉?xiàng)U菌、 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 第第1頁(yè)：頁(yè)： 實(shí)驗(yàn)名稱：細(xì)菌培養(yǎng)及形態(tài)觀察實(shí)驗(yàn)名稱：細(xì)菌培養(yǎng)及形態(tài)觀察 取材：純培養(yǎng)物取材：純培養(yǎng)物 染色法：革蘭染色染色法

13、：革蘭染色 放大倍數(shù)：放大倍數(shù)：10X100 取材：痰涂片取材：痰涂片 染色法：抗酸染色染色法：抗酸染色 放大倍數(shù)：放大倍數(shù)：10X100 取材：泌尿道膿性分泌物取材：泌尿道膿性分泌物 染色法：革蘭染色染色法：革蘭染色 放大倍數(shù)：放大倍數(shù)：10X100 取材：純培養(yǎng)物取材：純培養(yǎng)物 染色法：革蘭染色染色法：革蘭染色 放大倍數(shù)：放大倍數(shù)：10X100 取材：小鼠腹腔滲出液取材：小鼠腹腔滲出液 染色法：革蘭染色染色法：革蘭染色 放大倍數(shù)：放大倍數(shù)：10X100 取材：純培養(yǎng)物取材：純培養(yǎng)物 染色法：革蘭染色染色法：革蘭染色 放大倍數(shù)：放大倍數(shù)：10X100 取材：純培養(yǎng)物取材：純培養(yǎng)物 染色法：染

14、色法：Neisser染色染色 放大倍數(shù)：放大倍數(shù)：10X100 菌落示意圖菌落示意圖 細(xì)菌在細(xì)菌在固體固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象 血平板：血平板： 金黃色葡萄球菌形金黃色葡萄球菌形 成的成的-溶血環(huán)溶血環(huán) 金黃色色素金黃色色素白色色素白色色素 取材：純培養(yǎng)物取材：純培養(yǎng)物 染色法：革蘭染色染色法：革蘭染色 放大倍數(shù)：放大倍數(shù)：10X100 自閱片之一自閱片之一 取材：痰涂片取材：痰涂片 染色法：抗酸染色染色法：抗酸染色 放大倍數(shù)：放大倍數(shù)：10X100 自閱片之二自閱片之二 菌體染成菌體染成紅色紅色， 細(xì)長(zhǎng)略微彎曲桿細(xì)長(zhǎng)略微彎曲桿 菌，單個(gè)或分枝菌，單個(gè)或分枝 狀排列；狀排列；

15、（非抗酸菌及細(xì)非抗酸菌及細(xì) 胞染成藍(lán)色胞染成藍(lán)色） 示教片之三示教片之三 取材：小鼠腹腔滲出液取材：小鼠腹腔滲出液 染色法：革蘭染色染色法：革蘭染色 放大倍數(shù)：放大倍數(shù)：10X100 G+粗大桿菌，粗大桿菌， 兩端幾乎平切，兩端幾乎平切， 在被感染得人在被感染得人 或動(dòng)物體內(nèi)形或動(dòng)物體內(nèi)形 成成明顯的莢膜明顯的莢膜 1、細(xì)菌的人工培養(yǎng)（講授）、細(xì)菌的人工培養(yǎng)（講授） 2、細(xì)菌的培養(yǎng)方法：、細(xì)菌的培養(yǎng)方法： 固體培養(yǎng)基接種法（自做）；固體培養(yǎng)基接種法（自做）； 半固體、液體培養(yǎng)基接種法（示教）半固體、液體培養(yǎng)基接種法（示教） 3、葡萄球菌、鏈球菌培養(yǎng)及生化（示教）、葡萄球菌、鏈球菌培養(yǎng)及生化（示教） 4、細(xì)菌的形態(tài)觀察、細(xì)菌的形態(tài)觀察 自閱片：甲型鏈球菌、結(jié)核桿菌自閱片：甲型鏈球菌、結(jié)核桿菌 示教片：淋球菌、肉毒桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌、白喉?xiàng)U菌、示教片：淋球菌、肉毒桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌、白