人D二聚體D2D試劑盒使用方法

1、如有幫助，歡迎支持。 人D二聚體（D2D ）試劑盒使用方法 檢測(cè)范圍：96T 20pg/ml-480pg/ml 使用目的： 本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中D二聚體（D2D ）含量。 實(shí)驗(yàn)原理 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人D二聚體（D2D ）水平。用純化的人 D二聚 體（D2D）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入D二聚體（D2D）， 再與HRP標(biāo)記的D二聚體（D2D ）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底 洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最 終的黃色。顏色的深淺和樣品中的D二聚體（D2D ）

2、呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下 測(cè)定吸光度（0D值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人 D二聚體（D2D ）濃度。 試劑盒組成 1 30倍濃縮洗滌液 20ml X 1 瓶 7 終止液 6ml X 1 瓶 2 酶標(biāo)試劑 6ml X 1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（960pg/ml） 0.5ml X 1 瓶 3 酶標(biāo)包被板 12孔X 8條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml X 1 瓶 4 樣品稀釋液 6ml X 1 瓶 10 說(shuō)明書(shū) 1份 5 顯色劑A液 6ml X 1 瓶 11 圭寸板膜 張 6 顯色劑B液 6ml X 1/瓶 12 密封袋 1個(gè) 標(biāo)本要求 1 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后

3、應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能 馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于 -20 C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融 2. 不能檢測(cè)含 NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。 操作步驟 1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀 釋。 480pg/ml 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150 d 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150 d標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 240pg/ml 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150 d 的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150 d標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 120pg/ml 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150 d 的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150 d標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 60pg/ml 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150 d 的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150 d標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 30p

4、g/ml 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150 d 的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150 d標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、 待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50山,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40山, 然后再加待測(cè)樣品10 d （樣品最終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。 3. 溫育：用封板膜封板后置 37 C溫育30分鐘。 4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用 5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此 重復(fù)5次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)

5、試劑 50 4，空白孔除外。 7. 溫育：操作同3。 8. 洗滌：操作同5。 9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50 4，再加入顯色劑 B50 4，輕輕震蕩混勻，37 C避光顯色 15分鐘. 10. 終止：每孔加終止液 50 4，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。 11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（ OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止 液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。 操作程序總結(jié)： 準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品 加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，3廠C反應(yīng)30分鐘 3 計(jì)算 以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的 OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用

6、標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)， 即為樣品的實(shí)際濃度。 注意事項(xiàng) 1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未 用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 2濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。 3各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好 控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。 4 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD 值 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD 值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（ n 倍）后再測(cè)定，計(jì) 算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（XnX 5）O 5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6.底物請(qǐng)避光保存。 7嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). &所有