裂解液主要特點與區(qū)分

1、產(chǎn)品名WesternRIPA裂解液RIPA 裂解液NP-40 裂及IP 細RIPA 裂解液 ( 中 )SDS裂解液稱( 強)( 弱)解液胞裂解液1%1% Triton1% NP-40, 0.5%1% NP-40,有效裂X-100, 1%Tritondeoxycholate,0.25%1% NP-401% SDS解成分deoxycholate,X-1000.1% SDSdeoxycholate0.1% SDS裂解強溫和強中溫和溫和強度對膜蛋白的提一般很好較好一般一般很好取對胞漿蛋白的很好很好很好很好很好很好提取對核蛋白的提較好很好較好較好較好很好取胞漿磷酸化蛋很好很好很好很好很好很好白提取細胞核

2、轉(zhuǎn)錄因很好很好很好很好很好很好子提取含蛋白酶抑制是是是是是是劑含磷酸酯酶抑是是是是是是制劑主要用WB,WB, IPWB, IPWB, IP, co-IPWB,WB, ChIP途IP,co-IPIP,co-IP用于普通的Western 、 IP 或 co-IP ，我們推薦使用 Western 及 IP 細胞裂解液，該裂解液已被國內(nèi)各大研究機構(gòu)廣泛使用， 用戶普遍反映很好。 裂解細胞或組織后，沒有非常粘滯的透明狀DNA團塊形成， 不必采用超聲處理等就可以非常理想地用于后續(xù)操作。另外該裂解液裂解的產(chǎn)物也適合用于磷酸化蛋白的 Western 檢測。對于某些特殊蛋白的IP，如果發(fā)現(xiàn)Western 及 I

3、P 細胞裂解液效果不是非常理想，可以嘗試用RIPA 裂解液 (強、中或弱 )或 NP-40 裂解液。如果發(fā)現(xiàn)IP 的時候背景很高，即非特異的蛋白也被IP 下來，則需要選用裂解強度較高的裂解液，例如RIPA 裂解液 (強或中 )。如果發(fā)現(xiàn)目的蛋白無法被IP 下來，則說明裂解液的強度過強，可以使用較為溫和的裂解液例如RIPA 裂解液 (弱) 或NP-40 裂解液。對于某些難溶解蛋白的Western，如果發(fā)現(xiàn)Western 及 IP 細胞裂解液效果不是非常理想，可以嘗試使用裂解強度更高的裂解液例如RIPA 裂解液 (強、中 )或 SDS 裂解液。RIPA 裂解液（強）（ RIPA Lysis Buf

4、fer）Code No.產(chǎn)品簡介：包裝清單：保存條件：注意事項：使用說明：PG410501? 本公司的 RIPA 裂解液（ RIPA Lysis Buffer ）是一種傳統(tǒng)的細胞組織快速裂解液。RIPA 裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western 、 IP等。?RIPA 的本意是 Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA 裂解液的配方有很多種，根據(jù)其裂解液的強度大致可以分為強、中、弱三類。? RIPA 裂解液（強）的主要成分為 50mM Tris （pH 7.4 ），150mM NaCl ，1% TritonX-100 ，1% sodiumdeoxyc

5、holate ，0.1%SDS ，以及 sodiumorthovanadate ，sodium fluoride，EDTA ，leupeptin 等多種抑制劑?？梢杂行б种频鞍捉到?。?用 RIPA 裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用本公司的BCA 蛋白濃度測定試劑盒（PG400301 ）測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford 法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。?RIPA 裂解液（強）100ml?說明書1份? -20 保存，一年有效。? 為取得最佳的使用效果，盡量避免過多的反復凍融?？梢赃m當分裝后使用。? 需自備 PMSF 。? 裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或 4進行

6、。? 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。? 對于培養(yǎng)細胞樣品：融解 RIPA 裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF ，使 PMSF 的最終濃度為 1mM 。對于貼壁細胞：去除培養(yǎng)液，用PBS 、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍（如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗）。按照6孔板每孔加入150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后，細胞就會被裂解。對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照 6孔板每孔細胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞

7、。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成 50-100 萬細胞 /管，然后再裂解。充分裂解后， 10000-14000g 離心 3-5分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE 、Western 和免疫沉淀等操作。 裂解液用量說明： 通常 6孔板每孔細胞加入 150 微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。? 對于組織樣品：把組織剪切成細小的碎片。融解 RIPA 裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF ，使 PMSF 的最終濃度為 1mM 。按照每 20毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例

8、加入裂解液。 （如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。）用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。充分裂解后， 10000-14000g 離心 3-5分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE 、Western 和免疫沉淀等操作。如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器， 缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。? 注：RIPA 裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物， 屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組 DNA 等的復合物。在不檢測和基因組 DNA 結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可