實驗七_微生物大小和數量的測定張理珉PPT課件

1、實驗七實驗七 微生物大小和數量的測定微生物大小和數量的測定 目的要求 1、掌握用顯微鏡測微尺測量微生物大小的基本原理及方法。 2、利用血球計數器，進行微生物數量的直接測定，并掌握其原理和傳統方法。 實驗內容一 利用顯微鏡測微尺 測量微生物大小 顯微鏡成像原理 經過顯微鏡物鏡和目鏡的二級放大， 形成肉眼可見的放大的物像（虛 像）。 構造及原理 目鏡測微尺安裝于顯微鏡的目鏡部位； 鏡臺測微尺校正時放置于顯微鏡的載物臺上（樣品處），測量時不需要； 利用鏡臺測微尺（已知刻度長度）校正目鏡測微尺在不同物鏡下代表的實際長度（m）。 利用鏡臺測微尺校正目鏡測微尺 顯微鏡測微尺的組成 目鏡測微尺肉眼可見物像為

2、一級放大（7 7種，根據測定的材料不同進行選擇）。 鏡臺測微尺肉眼可見物像為二級放大，和觀察樣品處于同一焦面。 不可能利用真正的尺子來進行測量（微?。?； 不可能制成（或制作成本過高） 不可能和所觀察樣品同時使用 只能用虛擬的尺子進行測量（物像）。 標定。 鏡臺測微尺在4物鏡下的情況 鏡臺測微尺在10物鏡下的情況 鏡臺測微尺在40物鏡下的情況 目鏡測微尺 鏡臺測微尺 4物鏡下校正 示意圖 目鏡測微尺 鏡臺測微尺 10物鏡下校正 示意圖 目鏡測微尺 鏡臺測微尺 40物鏡下校正 示意圖 目鏡測微尺 鏡臺測微尺 100物鏡下校正 示意圖 m 10 10 1010 長長度度目目鏡鏡測測微微尺尺每每格格代

3、代表表的的 m 25 10 1025 長長度度目目鏡鏡測測微微尺尺每每格格代代表表的的 m 5.2 20 105 長長度度目目鏡鏡測測微微尺尺每每格格代代表表的的 m 0.1 10 101 長長度度目目鏡鏡測測微微尺尺每每格格代代表表的的 說明： 鏡臺測微尺刻度距離的物像隨物鏡的變化而變化（由小變大）； 目鏡測微尺刻度距離的物像在目鏡不變換的情況下，是不隨物鏡的變化而變化。 目鏡測微尺校正（代表）尺寸隨物鏡放大倍數增大成反比例減小。 注意： 刻度的刻線會隨物鏡的放大倍數而變粗（物像）； 校正的目鏡測微尺在不同物鏡下代表的長度是和物鏡的放大倍數成反比的； 實際校正過程中，會因加工精度和刻度的放大

4、出現微小誤差。 實驗步驟 菌種： 釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ） 1、放置目鏡測微尺（已放好，或直接使用測微目鏡） 2、放置鏡臺測微尺（1毫米被100等分，放于載物臺上） 3、校正目鏡測微尺（不同物鏡倍數） 4、用校好的目鏡微尺測定酵母菌大?。?0個細胞，同時觀察酵母菌形 態(tài)），計算平均值 5、微生物的大小表述：寬長（m） 說明： 微生物（其它生物也有類似的情況）的大小是有一定范圍的， 實際表述為0.51.04.0 7.0m（舉例） 目鏡測微尺校正結果 微生物大小測定結果 實驗內容二 利用血球計數板測定 酵母細胞數 顯微鏡直接計數法是將待測樣品的懸浮液置于一種特

5、別的具有確定面積和容積的載玻片上（又稱計數器），于顯 微鏡下直接計數的一種簡便、快速、直觀的方法。 國內常用的計數器有血球（血細胞）計數板、 Petroff-Hausser計菌器及Hawksley計菌器。 血球（血細胞）計數板是一塊特制的載玻片，由四條槽構成三個平臺；中間較寬的平臺又被一短槽隔成兩半，每 一邊的平臺各刻有一個方格網，每個方格網共分為九個大方格，中間的大方格即為計數室。 血球計數板俯視圖 血球計數板剖面圖 不同規(guī)格血球計數板的計數室 （a）麥氏血球計數板；（b）希里格氏血球計數板 血球計數板的大方格顯微照 片 血球計數板的中方格 及小方格顯微照片 實驗步驟 菌種： 釀酒酵母（Sa

6、ccharomyces cerevisiae ） 稀釋鏡檢計數室（熟悉計數室結構） 蓋上蓋玻片加樣品（不能有氣泡）靜止5分鐘左右顯微鏡計 數（5個中方格）清洗血球計數板利用吸水紙擦拭干凈。注意觀察出芽情況，計算總菌數、出芽率。 計算公式：（B=100） B50000A B1000025 5 A /mL ）菌液中的菌數（1mL 個 將結果記錄于下表中 A表示五個中方格中的總菌數； B表示菌液稀釋倍數。 各中方格中菌數各中方格中菌數 AB 二室二室 平均值平均值 菌數菌數/ml 12345 第一室第一室 第二室第二室 注意： 位于格線上的菌體一般只計入上方和右邊線上的細胞； 對于酵母菌來說，出芽生

7、殖的芽體大小達到母細胞的一半時，即作為兩個菌體（細胞）計數，反之，計為一個； 血球計數板只適用于計數單細胞生物； 細菌等原核生物因需要在油鏡下觀察，一般血球計數板不能使用，而采用Petroff-Hausser計數板（進口購買， 其計數室有效空間高度為0.02mm）。 附：活菌染色美蘭法 在顯微鏡下區(qū)分死活菌觀察活菌的方法？注意死活 菌的區(qū)分，分別計數，計算成活率。 原理： 活菌細胞新陳代謝中有大量脫氫作用，具有較強的 還原性，可以使美蘭褪色變成無色，活細胞不能染 上顏色，死細胞被染上藍色。 實驗步驟 菌種： 釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ） 操作步驟：取1mL細胞

8、懸液放入一支小試管中，加入 1mL 0.5%美蘭溶液，混勻后立即制片觀察（水封片）， 或利用血球計數板制片計數（可以區(qū)分死活細胞，計算 出細胞的成活率）。 操作要求：動作要快，否則活細胞接觸美蘭染料過長也 會死，一般要求在510分鐘內完成計數。 思考題 1、記錄實驗結果 ，計算出菌懸液中酵母菌的大小、數量、出芽率和存活率。 2、試比較平板菌落計數法和顯微鏡下直接計數法的優(yōu)缺點及應用？ 3、在不改變目鏡和目鏡測微尺，而改用不同放大倍數的物鏡來測定同一菌體的大小時，其測定結果是否相同？為 什么？ 4、注意觀察酵母菌的細胞形態(tài)，并繪圖標注。 下周實驗內容 生長譜法測定大腸桿菌對碳源的需求 要點： 1

9、、測定方法的原理和應用 2、培養(yǎng)基的要求 3、具體操作步驟（包括相關方法） 構造及原理 目鏡測微尺安裝于顯微鏡的目鏡部位； 鏡臺測微尺校正時放置于顯微鏡的載物臺上（樣品處），測量時不需要； 利用鏡臺測微尺（已知刻度長度）校正目鏡測微尺在不同物鏡下代表的實際長度（m）。 說明： 鏡臺測微尺刻度距離的物像隨物鏡的變化而變化（由小變大）； 目鏡測微尺刻度距離的物像在目鏡不變換的情況下，是不隨物鏡的變化而變化。 目鏡測微尺校正（代表）尺寸隨物鏡放大倍數增大成反比例減小。 注意： 刻度的刻線會隨物鏡的放大倍數而變粗（物像）； 校正的目鏡測微尺在不同物鏡下代表的長度是和物鏡的放大倍數成反比的； 實際校正過程中，會因加工精度和刻度的放大出現微小誤差。 實驗步驟 菌種： 釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ） 1、放置目鏡測微尺（已放好，或直接使用測微目鏡） 2、放置鏡臺測微尺（1毫米被100等分，放于載物臺上） 3、校正目鏡測微尺（不同物鏡倍數） 4、