LA1篩選試劑及LA2驗證試劑

1、LA1篩選試劑及LA2驗證試劑醫(yī)療器械注冊證書編號：產(chǎn)品標準編號：YZB/德靈014-2004狼瘡抗凝物檢測試劑盒 改良魯塞爾氏姪蛇毒稀釋試驗（DRVVT）用于狼瘡抗凝物質檢測。用途LA1篩查試劑和LA2確診試劑是一種改良的DRVVT試驗 試劑，用于一期凝固法檢測狼瘡抗凝物質（LA）。L A1篩查試劑 改良DRVV試劑用于篩查狼瘡抗凝物質。L A2確診試劑富含磷脂 的DRW試劑能特異地檢出狼瘡抗凝物質。概要和說明狼瘡抗凝物質是一類自身抗體，具有抗帶負電荷 的磷脂，或抗磷脂和B-2-糖蛋白1. 凝血因子如凝血酶原形成的復合物。LA見于多種臨床疾 病，尤其是自身免疫性疾病，目前認為也是伴不明原因血

2、栓病人 的重要危險因子，也常見于習慣性流產(chǎn)的婦女5。LA檢測的經(jīng)典 方法采用磷脂反應性凝集試驗，如活化部分凝血活酶時間（APTT）,白陶土凝血時間（KCT）,當存在抗凝劑影響時采用 DRVVT2o D RVV試驗自Thiagarajan等6于1986年報道后才開始 流行。Gradipore改良并標準化了該方法7。按照Petri等觀點， 系統(tǒng)性紅斑狼瘡病人血栓形成時，DRVVT檢岀狼瘡抗凝物質比酶聯(lián) 免疫吸附試驗（ELISA）檢出抗心磷脂抗體的關系更密切5。近 來，Galli和Bevers9進一步證明了該觀點，實驗表明，對DRVVT第1頁共8頁 試驗影響最大的LA亞型是B 2-糖蛋白1型，而凝血

3、酶原依賴的 LA亞型對KCT試驗的影響較大。試驗原理1. 在LA1篩查試劑屮，魯塞爾氏蛙蛇毒能直接激活X因子， 導致血漿凝固。LA抗體使LA1篩查試劑的凝固時間延長。2. 在LA2確診試劑和LA1篩查試劑一樣，但含有高濃度的磷 脂。外源性磷脂與LA抗體結合，很大程度上糾正凝固時間。3. DRVV試驗“跳過” 了外源性凝血因子vn,和內(nèi)源性凝血的 接觸因子抗血友病因子。因此，DRVVT篩查試驗比APTT試驗檢出 狼瘡抗凝物的特異性更高，因為該試驗不受接觸因子異常.VIII因子 缺乏或VIII因子抗體的影響6?；诹字m正的試驗很多，但沒有一 個比LA確診試驗加LA篩查試驗更簡便。4. 混合試驗用

4、于排除II. V和X因子缺乏的影響，這些因子 缺乏可以使LA1篩查試驗和LA2確診試驗的結果延長。將正常血 漿和測試血漿混合后，補足了測試血漿屮缺乏的因子。如果混合 試驗結果仍延長，表明測試血漿屮存在抑制劑（如LA）。循環(huán)抑 制劑的存在通常使凝固時間延長，且不能被正常血漿和病人血漿 混合糾正。3, 10試劑 組成成份LA1篩查試劑和LA2確診試劑由 魯塞爾氏蛙蛇毒.磷脂.抗肝素劑.鈣.緩沖液.穩(wěn)定劑.疊氮鈉和染 料組成。警告和注意事項僅適用于體外診斷。第2頁共8頁當處理疊氮化合物時，需用大量水沖洗，避免在金屬管道屮 形成有爆炸性的殘留物。試劑的準備按瓶標簽所注的量加人蒸鐳水復溶試劑。顛倒充 分

5、混合保證所有凍干物質重新懸浮。貯存及穩(wěn)定性凍干試劑存儲在2-8C條件下，至少能穩(wěn)定到 瓶標簽上注有效期限。復溶后試劑在37C穩(wěn)定8小時，在20-25C穩(wěn)定24小時， 在2-8C穩(wěn)定48小時，在-20C穩(wěn)定1個月。不穩(wěn)定性或變質指征若開瓶時沒有真空，和/或試劑看起來 不干燥，應將試劑退還給Dade Behring公司。樣本采集和制備 按照NCCLS H21-A3：凝血試驗和常用凝血分 析的血液標本采集運送和處理；批準指南，第三版（1998年）的 要求采集和處理血液。分離血漿必須在2-8C保存，采集后4小時 內(nèi)完成檢驗。如果試驗前樣品必須冷凍，冷凍前血漿必須進行再次離心， 去除血小板（低于10X1

6、09/L） 10,否則會使LA1篩查試驗的凝固 時間縮短。試驗方法1）將稍過量的LA1篩查試劑或LA2確診試劑放置于37TC的試 劑槽屮預溫。每次試驗用量為200微升。2）將200微升測試血漿加入玻璃試管，在37C加溫1分鐘。第3頁共8頁3）在血漿屮加入200微升預溫的試劑，并記錄從試劑加入到血 液凝固所用的時間。4）重復雙份測試值，取均值作為實驗報告結果。自動化方法Dade Behring分析儀的操作規(guī)程可以索取。和大多數(shù)凝血酶試驗的操作規(guī)程一樣，LA1篩查試劑和LA2確 診試劑必須使用等量的血漿和試劑。但是，檢測或讀取時間應延 長至120秒。試劑盒規(guī)格LA1篩查試劑盒，編號0QGP, 10

7、X2ml, LA2確 診試劑盒，編號0QGR, 10X lml檢測所需要的其他物品 10mmX75mm玻璃試管200PL, lml, 2ml或5ml的移液管 水浴箱， 秒表純水，符合USP或類似標準乏血小板正常血漿正?；虍惓?質控血漿LA高值質控品（編號OQWD） LA低值質控品（編號 OQWE）質量控制每個實驗室都應該確定自己的可接受對照值和 正常范圍。D ade Behring公司提供的LA高值質控品（編號為 OQWD）和低值質控品（編號為OQWE）能用于LA1篩查試驗和LA2 確診試驗的質量控制。質控血漿必須和病人血漿同時進行測定。結果如果LA1篩查試驗結果在正常范圍內(nèi)，無需進行LA的

8、進一步試驗。如果LA1篩查試驗結果超過正常乏血小板血漿均值 的20%,結果為異常，需作進一步試驗（見圖1）。第4頁共8頁最終結果以LA1篩查試驗/LA2確診試驗結果比率來表示。L A1篩查試劑結果LA比率二LA2確診試劑結果 圖1疑有LA結果 正常LA1篩查試驗未檢到LA延長LA1結果結果正常存在LA LA2確診試驗LA2結果 延長LA2結果LA比率異常LA比率正常 存在LA混合試驗見表2混合試驗如果結果是臨界值，混合試 驗能用于糾正標本屮因子隱性缺乏，明確出現(xiàn)LA。方法是按照標 準化操作規(guī)程，將測試血漿和正常血漿（Dade Behring質控血漿 N不能用作混合試驗）按50:50比例混合。表

9、2：混合試驗和確診試驗組合LA1結果LA2結果解釋病 人血漿病人與正常血漿混合病人血漿病人與正常血漿混合正 常正常正常正常未檢到LA異常異常正常正常存在可能 LA異常正常異常正常可疑因子缺乏/OAT進一步實驗排除異 常異常異常正?？梢梢蜃尤狈?進一步實驗排除異常異常 異常異常其它抑制實驗排除該試驗方法的局限性必須排除含 有凝塊和血細胞壓積異常的標本。黃疸.乳糜和溶血標本必須用手 工方法測試，因部分光電法儀器會產(chǎn)生假性結果。混合試驗屮不能使用商品化的.枸椽酸和血小板含量異常的正 常質控血漿。比較性研究屮應同時進行LA1篩查試驗和LA2確診試驗。至少應采用2種不同檢測原理篩查試驗。而且，應采用混合

10、 試驗確認凝血抑制劑的存在，用確診試驗確認磷脂缺乏的存在。第5頁共8頁肝素水平達到1單位/毫升時對結果沒有影響，因為LA1篩查 試劑和LA2確診試劑屮含有屮和試劑。結果解釋應結合病人的病史.臨床表現(xiàn)和其他癥狀。期望值 收集26例年齡在18-55歲Z間的健康個體血漿，用 手工傾斜試管法測定，得出LA1篩查試劑的正常范圍是31-44 秒，LA2確診試劑的正常范圍是30-38秒。LA1/LA2比率范圍為 0. 8-1.2o這些結果僅供參考。L A1篩查若比率大于2.0,存在強陽性的LA, LA2確診LA1篩查 若比率在1. 52. 0之間，存在中度陽性的LA, LA2確診LA1篩查 若比率在1. 2

11、-1.5之間，存在弱陽性的LA, LA2確診 每個實驗室必須建立 自身的手工法和自動化方法的正常參考值范圍。，以克服標本采 集和儀器間的差異。性能指標采用手工傾斜試管法和自動化方法對批內(nèi)和批間精 度進行了研究，正常血漿的變異系數(shù)不超過3. 5%,異常血漿的變異系數(shù)小于5%。對已知血漿樣品進行了特異性研究。L A1篩查試驗/LA2確診試驗的陽性比率大于第6頁共8頁1. 2見于“已知” *血漿：LA血漿90% (26/29)肝素化的血漿12% (1/8) 0AT病人血漿0% (0/7)乏因子血漿0% (0/5) 正常血漿2% (1/60) *N. B.已知LA血漿是用活化部分凝血活酶時 間+白陶土

12、凝血時間的混合實驗確定的。參考文獻(Bibligoraphy)1. Feinstein Di.Lupus anticoagulant, thrombosis and fetal loss. N. Eng. J. Med (1985)313, 1248-1350.2. Triplett DA, Brandt JT Laboratory identification of the lupus anticoagulant. Br. J. Haematol. 1991, 73, 139- 1423. Exner T, Triplett DA, Tabemer D, Machin SJ Guidelin

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