抗核抗體檢測(cè)的質(zhì)量要求及結(jié)果的合理判讀(1)

1、抗核抗體檢測(cè)的質(zhì)量要求及結(jié)果 的合理判讀 1 . 自身免疫性疾病 2 . 自身免疫病(Autoimmune diseases,AID) 主要病理基礎(chǔ)： -血清中存在有一種或多種針對(duì)自身組織成份的抗體標(biāo)志血清中存在有一種或多種針對(duì)自身組織成份的抗體標(biāo)志 物及自身反應(yīng)淋巴細(xì)胞 致病機(jī)制： -自身抗體和自身反應(yīng)淋巴細(xì)胞在自身抗體和自身反應(yīng)淋巴細(xì)胞在AID的發(fā)病過(guò)程中起重的發(fā)病過(guò)程中起重 要作用 1)體液免疫：由自身抗體介導(dǎo)、過(guò)敏反應(yīng)導(dǎo)致的組 織損傷 2)細(xì)胞免疫：自身反應(yīng)性T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用 3)二者共同參與：抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用 （ADCC） 4) 3 . 自身免疫病的系統(tǒng)受累 AI

2、D的類型： 1）器官特異性AID 2）系統(tǒng)性AID（非器官特異性） AID主要特征： 1）相關(guān)的臨床癥狀）相關(guān)的臨床癥狀 2）ESR增高增高, 血清Ig, 自身抗體、 CIC陽(yáng)性陽(yáng)性, 血清補(bǔ)體(C3、C4)活 性降低 3）有病變且病變處存在有與自）有病變且病變處存在有與自 身抗原分布相關(guān)的免疫活性細(xì)胞 或抗體 4）將相關(guān)抗原給動(dòng)物注射時(shí)能）將相關(guān)抗原給動(dòng)物注射時(shí)能 重復(fù)出類似人的疾病，當(dāng)被動(dòng)輸 入淋巴細(xì) 胞或抗體時(shí)可將疾病從 患病動(dòng)物轉(zhuǎn)移給正常動(dòng)物 4 . 自身免疫病的“病譜” 器官特異性非器官特異性 橋本甲狀腺炎擴(kuò)張性心肌炎自身免疫性溶血性貧血系統(tǒng)性紅斑狼瘡 原發(fā)性粘液水腫 惡性貧血特發(fā)性

3、血小板減少性紫癜 干燥綜合征 甲狀腺機(jī)能亢進(jìn) 自身免疫性胃炎特發(fā)性粒細(xì)胞減少癥類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 Addisino病病 1型糖尿病型糖尿病 重癥肌無(wú)力 多發(fā)性硬化癥 脫髓鞘疾病 尋常型天皰瘡 類天皰瘡 自身免疫性肝炎 原發(fā)性膽汁性肝硬化 原發(fā)性硬化性膽管炎 潰瘍性結(jié)腸炎 克羅恩病 自身免疫性腎小球腎炎 肺腎出血綜合征 絕經(jīng)過(guò)早（少數(shù)病例） 男性不育（少數(shù)病例） 交感性眼炎 晶狀體源性葡萄膜炎 硬皮病 多發(fā)性肌炎/皮肌炎 混合性結(jié)締組織病 系統(tǒng)性血管炎 抗磷脂綜合征 藥物性狼瘡 5 . 自身免疫病共同特征 1. 病因不明 2. 女性居多，發(fā)病率隨年齡增加而增加 3. 有遺傳傾向 4. 患者血清中有多種

4、自身抗體或自身反應(yīng)性致敏淋巴細(xì)胞 5. 疾病有重疊現(xiàn)象，即一個(gè)病人可同時(shí)患一種以上自身免疫 病 6. 病程一般較長(zhǎng)，多遷延為慢性 7. 病損局部可發(fā)現(xiàn)淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等浸潤(rùn) 8. 免疫抑制劑治療可取得一定療效 6 . 自身免疫病主要實(shí)驗(yàn)檢查 自身抗體 免疫球蛋白 補(bǔ)體 淋巴細(xì)胞 細(xì)胞因子 7 . 自身抗體與臨床疾病的關(guān)系 天然自身抗體：維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定 靶抗原：肌動(dòng)蛋白、肌球蛋白、角蛋白、DNA、膠 原、Ig、細(xì)胞因子等，多為IgM型、低滴度； 病理性自身抗體：在免疫風(fēng)濕病的發(fā)病過(guò)程中起重 要作用 1）診斷、鑒別診斷：抗）診斷、鑒別診斷：抗dsDNA、抗、抗Sm抗體與抗體與 SL

5、E；抗；抗CCP與與RA；AoAb與、女性不育、流產(chǎn)有與、女性不育、流產(chǎn)有 關(guān)者 2）疾病監(jiān)測(cè)、預(yù)后判定：抗）疾病監(jiān)測(cè)、預(yù)后判定：抗dsDNA為為SLE疾病疾病 活動(dòng)標(biāo)志 8 . 自身抗體的特性 自身免疫性疾病的重要標(biāo)志 高滴度存在于自身免疫性疾病患者 與疾病的活動(dòng)性相關(guān) 參與免疫病理性損傷 9 . 常檢測(cè)的自身抗體 抗核抗體（ANA） 抗可提取性核抗原抗體（A-ENA） 抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA） 類風(fēng)濕因子（RF） 抗角蛋白抗體（AKA） 抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體） 10 . 抗核抗體（ANA） 抗核抗體:針對(duì)真核細(xì)胞（HEp-2、肝細(xì)胞）各種核 成分靶抗原的自身抗體的總稱。

6、11 . 抗核抗體（ANA） 抗DNA抗體（anti-dsDNA，anti-ssDNA ） 抗組蛋白抗體（histones: H1 , H2A , H2B , H3 , H4 , H2A-H2B） 抗ENA（抗: Sm , nRNP , SSA/Ro , SSB/La, rRNP , Scl-70 , Jo-1 , PCNA , .） ANAs抗非組蛋白抗體 抗著絲點(diǎn)抗體（ anti-CENP -A , B , C ，D，F(xiàn)，G） 抗核仁抗體 抗其他細(xì)胞成分抗體（高爾基體，中心體，紡錘體，線粒體，溶酶體， 肌動(dòng)蛋白，Vimentin，細(xì)胞角蛋白，Lamin) 12 . 1. 2. 3. 4.

7、抗核抗體譜的分類和命名 以首先檢出該抗體的患者名字命名，如抗Sm、 抗Sa 抗體等； 以相關(guān)疾病命名，如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS- B 抗體等； 以抗原的部位命名，如抗核仁抗體、抗線粒體 抗體、抗核膜抗體、抗細(xì)胞漿抗體等； 以抗原的化學(xué)名稱分類命名，如抗DNA、抗RNP、 抗組蛋白抗體,抗核小體抗體等。 13 . 常規(guī)臨床診斷ANA種類:數(shù)十種 新自身抗體和檢測(cè)方法:陸續(xù)被引進(jìn)臨床實(shí)驗(yàn)室 為臨床醫(yī)生提供更多的選擇和診斷指標(biāo) 另一方面也帶來(lái)一定的困惑? 14 . 如何根據(jù)患者病情挑選具有診斷價(jià)值的最佳自身抗體組合? 如何選擇合理的檢測(cè)方法，并對(duì)結(jié)果作出正確的判斷? 將為患者得到及時(shí)準(zhǔn)確

8、的診斷和治療發(fā)揮至關(guān)重要的 作用! 15 . 免疫檢驗(yàn)工作者的目的: 廣泛向臨床醫(yī)生宣傳有關(guān)ANA項(xiàng)目及其檢測(cè)技術(shù)的價(jià) 值及其限制， 宣傳ANA選擇的適應(yīng)征及有效性，從而對(duì)檢測(cè)結(jié)果作 出科學(xué)合理的判讀。 16 . 保證檢測(cè)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性 讓臨床醫(yī)生了解各種測(cè)定方法的特性 包括方法的精確度、靈敏度、特異性、陽(yáng) 性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值、似然比等，關(guān)系 到醫(yī)生如何準(zhǔn)確地選擇這些檢測(cè)項(xiàng)目服務(wù) 于患者，并合理地利用資源。 17 . 敏感性（sensitivity） 特異性（specificity） 敏感性: 某檢驗(yàn)項(xiàng)目對(duì)某病具有鑒別、確認(rèn)的能力 患者陽(yáng)性結(jié)果的百分比 特異性: 某檢驗(yàn)項(xiàng)目排除無(wú)某病的

9、能力 非患者陰性結(jié)果的百分比 敏感性和特異性取決于所選用的cut-off值 某法敏感性越高，特異性就越低，反之亦然 應(yīng)優(yōu)選能獲得最佳敏感性和特異性組合的cut-off值 18 . 敏感性和特異性并不能告訴醫(yī)生陽(yáng)性結(jié) 果的個(gè)體是否患某種疾病，陰性結(jié)果的個(gè)體 是否不患某種疾病 而臨床醫(yī)生關(guān)心的是，ANA陽(yáng)性者中有 多少是CTD患者；ANA陰性者中有多少不是 CTD患者。PPV和NPV即回答這一問(wèn)題 19 . 陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（PPV） 陰性預(yù)測(cè)值（NPV） PPV：試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性者中真正患病的概率 NPV：試驗(yàn)結(jié)果陰性者中未患病的概率 PPV和NPV是臨床試驗(yàn)中對(duì)試驗(yàn)有用性的正確評(píng)價(jià)指標(biāo) PPV和NPV受

10、人群患病率的影響： 患病率： PPV ，NPV 理想的ANA試驗(yàn)： 高PPV：大部分陽(yáng)性結(jié)果者是CTD患者 高NPV：大部分陰性結(jié)果者不患CTD 20 . ANA檢測(cè)的選擇原則 臨床醫(yī)生選擇ANA檢測(cè)的目的： 1）在有典型癥狀患者中作出CTD的診斷 2）在癥狀不確定患者中排除CTD的診斷 3）明確CTD的類別 4）判斷病情活動(dòng)度 21 . ANA檢測(cè)的選擇原則檢測(cè)的選擇原則 通常原則: ）首先采用以HEp-2細(xì)胞為基質(zhì)片的IFA作 為篩查實(shí)驗(yàn)，以有效地排除CTD的存在 ）ANA陽(yáng)性 進(jìn)一步檢查抗ds-DNA或抗 ENA抗體，以期對(duì)CTD作出特異性地診斷。 ）不主張單獨(dú)用抗ENA抗體作為篩查實(shí)驗(yàn)

11、 22 . ANA免疫學(xué)測(cè)定方法免疫學(xué)測(cè)定方法 瓊脂雙向擴(kuò)散或?qū)α髅庖唠娪?-抗ds-DNA，抗Sm，抗U1RNP Farr試驗(yàn)：抗ds-DNA 間接免疫熒光技術(shù)：細(xì)胞內(nèi)抗原自身抗體檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)” (篩 查) -抗核抗體(ANA)、抗ds-DNA抗體、抗平滑肌抗體 (ASMA)、ANCA等 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA):自身抗體確認(rèn) 免疫印跡免疫斑點(diǎn)技術(shù):自身抗體確認(rèn) -ENA多肽抗體譜、AMA(M2/M4/M9)、抗LKM-1、抗LC-1、抗 SLA/LP等 微陣列免疫芯片技術(shù) 懸浮芯片技術(shù) 23 . IFAANA IFA篩查篩查ANA有效的有效的“金標(biāo)準(zhǔn)金標(biāo)準(zhǔn)” 基質(zhì)片抗原：鼠肝勻漿組

12、織 敏感性差，不能測(cè)出抗SSA Hep-2細(xì)胞細(xì)胞 陽(yáng)性檢出率高 Ro60 cDNA轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染Hep-2細(xì)胞（細(xì)胞（Hep-2000TM）可顯）可顯 著提高檢測(cè)抗SSA/Ro抗體的敏感性 24 . 1) IFAANA 如何鑒別假陽(yáng)性現(xiàn)象(滴度, 核型)? 血清稀釋度： 1:40：健康人：健康人ANA高達(dá)高達(dá)30%； 1:160： 則僅5% 高滴度的ANA陽(yáng)性結(jié)果方有診斷意義 2) 核型: 3) A-ENA:健康人健康人A-ENA常為陰性常為陰性 25 . Mariz.Arth Rheumatol, 2011, 63: 191 ANA-IFA核型有助核型有助 于區(qū)別正常人 ANA+和和ARD AN

13、A+? 密而細(xì)顆粒型 26 . 抗核膜抗體(抗板層素抗體) 熒光模式: 在核膜區(qū)呈現(xiàn)線狀熒光, 中心區(qū)域熒光強(qiáng)度弱(Hep- 2), 而肝細(xì)胞片:中心區(qū)域發(fā)暗,無(wú)熒光, 此點(diǎn)可與核均 質(zhì)熒光相區(qū)別. 靶抗原: 包括60kD, 68kD和74kD 3種蛋白組分,與中間絲相關(guān), 以網(wǎng)狀形式包被在核內(nèi)膜的內(nèi)部. 相關(guān)疾病: 慢性活動(dòng)性自身免疫性肝炎的活動(dòng)期. ANA(均質(zhì)型) 熒光模式: Hep-2細(xì)胞: 間期細(xì)胞核陽(yáng)性,呈均勻的熒光; 核仁與 核漿一樣呈強(qiáng)度相同的均質(zhì)熒光; 分裂期染色體陽(yáng)性 (增強(qiáng)), 亦呈均勻的熒光. 肝細(xì)胞片:肝細(xì)胞核陽(yáng)性,呈均勻的熒光, 與Hep-2細(xì)胞 的熒光強(qiáng)度一致.

14、主要相關(guān)自身抗體: 抗ds-DNA, 核小體和組蛋白抗體等. EUROIMMUN 27 . 粗顆粒型 抗RNP/Sm抗體 熒光模式: Hep-2細(xì)胞:間期時(shí),整個(gè)細(xì)胞核呈現(xiàn)粗顆粒,但有 時(shí)也出現(xiàn)中等到細(xì)的顆粒熒光,核仁為陰性;在分裂 期細(xì)胞中,濃縮的染色體部位為陰性,而外周區(qū)幾乎 為均質(zhì)型、光滑的熒光. 靈長(zhǎng)類肝組織切片:細(xì)胞核亦呈現(xiàn)顆粒型熒光,核 仁為陰性,熒光強(qiáng)度與 Hep-2細(xì)胞相同. 細(xì)顆粒型 抗SS-A/SS-B抗體 熒光模式: Hep-2細(xì)胞:間期細(xì)胞核呈現(xiàn)細(xì)顆粒型熒光,核仁 有部分不發(fā)熒光。分裂期細(xì)胞在染色體以外顯示顆 粒熒光,而染色體本身則不發(fā)熒光. 靈長(zhǎng)類肝組織切片: 肝細(xì)胞

15、核及部分核仁可見(jiàn)細(xì) 顆粒熒光,細(xì)胞漿不發(fā)熒光. 在某些細(xì)胞（如淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞）中的熒光 反應(yīng)較強(qiáng) EUROIMMUN 28 . ANA常見(jiàn)核型與疾病關(guān)系常見(jiàn)核型與疾病關(guān)系 Diagnostic Pathology 2009, 4:1 29 . ANA臨床診斷臨床診斷CTD特性特性 Diagnostic Pathology 2009, 4:1 30 . Arth Rheumat,2002, 47, pp 434444 ANA(+)臨床診斷意義臨床診斷意義 對(duì)疾病診斷非常重要 SLE、系統(tǒng)性硬化病 對(duì)疾病診斷有一定作用 干燥綜合征、多發(fā)性肌炎-皮肌炎 對(duì)監(jiān)測(cè)預(yù)后非常重要 幼年型慢性關(guān)節(jié)炎、雷諾

16、現(xiàn)象 疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)的重要組成部分 藥物引起的狼瘡、混合性結(jié)締組織病 對(duì)疾病診斷、監(jiān)測(cè)預(yù)后沒(méi)有作用 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、甲狀腺疾病、傳染病、特發(fā)性血小板減少性紫癜 纖維組織肌痛 31 . IFA法檢測(cè)法檢測(cè)ANA時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題 ANA滴度和熒光圖譜不能作為判斷抗體特異性的標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)滴度和熒光圖譜不能作為判斷抗體特異性的標(biāo)準(zhǔn)，結(jié) 果陽(yáng)性時(shí)應(yīng)進(jìn)一步作特異性抗核抗體項(xiàng)目的檢查 IFA限制限制: *ANA(-)， 抗ds-DNA(+)， 抗ENA(+) 技術(shù)誤差 SLE特殊類型特殊類型 *某些某些ANA(抗抗SSA/Ro、抗、抗SSB/La)用用IFA難以測(cè)出難以測(cè)出 *Jo-1抗

17、原屬于胞漿抗原，抗原屬于胞漿抗原，IFA檢測(cè)檢測(cè)ANA陰性時(shí)不能排陰性時(shí)不能排 除抗Jo-1的可能 32 . IFA法檢測(cè)法檢測(cè)ANA時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題 如果臨床高度懷疑CTD，應(yīng)同時(shí)做ANA和抗 ENA抗體，即使ANA(-) ，也要進(jìn)行抗ENA 抗體的檢測(cè)，否則會(huì)漏檢一些ANA如抗 SSA/Ro、SSB/La或抗Jo-1抗體。 33 . IFA法檢測(cè)法檢測(cè)ANA時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題 由于目前國(guó)內(nèi)缺乏合適的質(zhì)控品，檢測(cè)結(jié)果在 實(shí)驗(yàn)室間很難做到標(biāo)準(zhǔn)化。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室必須規(guī) 范化各自的操作規(guī)程，確立各自的cut-off值， 使判斷標(biāo)準(zhǔn)兼顧到診斷敏感性和診斷特異性的 平衡。應(yīng)該參加當(dāng)?shù)?/p>

18、或國(guó)家的室間質(zhì)量評(píng)價(jià) （external quality assessment，EQA）計(jì)劃。 目前，國(guó)際上已有抗核抗體的標(biāo)準(zhǔn)參考品 結(jié)果解釋?xiě)?yīng)密切結(jié)合其他臨床指標(biāo) 34 . ANA室間結(jié)果很難具備可比性室間結(jié)果很難具備可比性 15個(gè)國(guó)際個(gè)國(guó)際Lab同時(shí)用同時(shí)用HEp-2-IFA進(jìn)行進(jìn)行ANA的檢的檢 測(cè)，所獲得的平均變異系數(shù)（CV）值如下： 1:40 1:80 室內(nèi)CV（%） 16.5 13.1 室間CV（%） 50.7 44.3 1:160 12.2 37.9 1:320 12.8 36.0 每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)各自情況，建立本室的cut- off值，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確性和可比性值，以確保實(shí)

19、驗(yàn)結(jié)果的精確性和可比性 35 . 部分自身抗體的國(guó)際參考品 參考品 WHO Wo80 WHO1064 特異性 dsDNA 100 IU/ampoule 均質(zhì)型ANA 100 IU/ampoule MRC 參考品A 均質(zhì)型ANA 100 IU/ampoule WHO1063 WHO1061 CDC參考品參考品 nRNP IgM ANA 100 IU/ampoule dsDNA、La、U1-RNP、Sm、 Ro、中心粒、中心粒、Scl70、Jo-1 36 . 抗ds-DNA檢測(cè) 抗ds-DNA與SLE及狼瘡性腎炎的發(fā)生及其活動(dòng) 程度密切相關(guān)。 檢測(cè)常用短膜蟲(chóng)IFA（CLIF）、Farr試驗(yàn)和 EL

20、ISA技術(shù)。技術(shù)。 Farr試驗(yàn)是經(jīng)典的特異性檢測(cè)方法，但可測(cè)出試驗(yàn)是經(jīng)典的特異性檢測(cè)方法，但可測(cè)出 高親和力的IgM類抗ds-DNA。 目前臨床推薦使用的是測(cè)IgG類抗ds-DNA的 ELISA和和CLIF 37 . 單鏈DNA,變性的DNA (嘌呤和嘧啶堿基) 雙鏈DNA,天然DNA(氧核糖核酸骨架) 相關(guān)疾病: 風(fēng)濕病: ssDNA: SLE: 80.8%; Sjgrens綜合征: 40.0%; 硬皮病: 44.0%; RA: 12.3% (歐蒙) 健康獻(xiàn)血員: 6.8% (歐蒙) 風(fēng)濕病: dsDNA: SLE: 30% - 90%; 歐蒙 (51.7% ) 抗dsDNA抗體 ANA(

21、均質(zhì)型均質(zhì)型) 組蛋白抗體： 抗原:組蛋白H1, H2A, H2B, H3, H4(主要的靶抗原為H1 和H2B); 功能: 核小體的形成 相關(guān)疾病: 藥物誘導(dǎo)性 LE:100% (抗組蛋白抗體是該病 唯一的標(biāo)志性抗體); SLE:40% - 80%、歐蒙(56.4%); 在 其他風(fēng)濕病中很少見(jiàn) 抗核小體抗體: 抗原:組蛋白和DNA形成的復(fù)合物; 功能:染色體的功能 亞單位。相關(guān)疾病: SLE: 58% (歐蒙研究) 歐蒙第二代: 對(duì)SLE的特異性為100% EUROIMMUN 38 . 使用注意事項(xiàng) （1）不同組織來(lái)源（哺乳類或非哺乳類）的DNA做固相抗原， 會(huì)有不同的結(jié)果 （2）某些試驗(yàn)可

22、測(cè)出不同Ig類別的抗ds-DNA。如Farr試驗(yàn)， 或用多克隆抗人Ig抗體建立的ELISA或CLIF可檢測(cè)出IgM類 抗ds-DNA。該類抗ds-DNA無(wú)診斷SLE的特異性。因此應(yīng)該 采用檢測(cè)IgG類抗ds-DNA的ELISA或CLIF 39 . 使用注意事項(xiàng) （3）高親和力抗ds-DNA對(duì)SLE特別是狼瘡性腎炎有特異性診 斷價(jià)值，低親和力抗體則無(wú)。但ELISA往往能測(cè)出低親和 力的抗ds-DNA，因此若ELISA結(jié)果陽(yáng)性，必須用CLIF或 Farr試驗(yàn)予以確認(rèn)。 （4）CRP和ssDNA在Farr試驗(yàn)、脂蛋白-IgG復(fù)合物在CLIF中 可引起假陽(yáng)性結(jié)果 （5）嚴(yán)格執(zhí)行室內(nèi)質(zhì)量控制以確保檢測(cè)結(jié)

23、果在實(shí)驗(yàn)室間的 可比性，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該參加室間質(zhì)量控制（EQA）計(jì)劃 40 . 抗可提取性核抗原（ENA）抗體譜的檢測(cè) 抗Sm抗體：SLE標(biāo)記性抗體（20%30%） 抗nRNP抗體：MCTD 95%100%（高滴度） 抗SSA抗體：PSS 60%75%，其它CTD 抗SSB抗體： PSS 10%40%，其它CTD 抗Scl-70抗體：SSc 25%75%, 標(biāo)記性抗體 抗Jo-1抗體：PM/DM 25%，標(biāo)記性抗體 抗組蛋白抗體： SLE特異性抗體（50%70%） 41 . 抗ENA抗體檢測(cè)方法 雙向免疫擴(kuò)散（ID） 對(duì)流免疫電泳（CIE） 免疫印跡法（Western-blot） 免疫斑點(diǎn) ELI

24、SA 酶免疫斑點(diǎn)法 42 . DID和和CIEP 抗原與抗體在瓊脂(或瓊脂糖)凝膠中擴(kuò)散或電場(chǎng)泳動(dòng)中相 遇形成沉淀線，通過(guò)對(duì)沉淀線的鑒別和用陽(yáng)性血清作對(duì)照 來(lái)進(jìn)行判斷。經(jīng)典的檢測(cè)ENA抗體的方法 CIEP的敏感性和特異性DID 某些帶負(fù)電荷較少的抗原如Scl-70，在CIEP中的移動(dòng)方向 會(huì)與抗體一致而不形成沉淀線 優(yōu)點(diǎn)：操作便利，特異性高， 缺點(diǎn)：果判斷帶有一定的主觀性，需要經(jīng)驗(yàn)，耗時(shí)長(zhǎng)，不 易獲得陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)血清 43 . 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) 操作快速簡(jiǎn)便，自動(dòng)化程度高，定性和定量分析 關(guān)鍵是獲取純化的特異抗原。重組抗原由于純度的提 高，也大大提高了檢測(cè)的特異性 存在的問(wèn)題： ）重

25、組抗原中可能混有大腸桿菌抗原，患者體內(nèi)的抗 菌體蛋白抗體在試驗(yàn)中可能造成假陽(yáng)性反應(yīng) ）重組抗原缺乏翻譯后折疊修飾過(guò)程，不能形成天然 二級(jí)、三級(jí)結(jié)構(gòu)，可能丟失某些空間構(gòu)像的表位，導(dǎo) 致實(shí)驗(yàn)的假陰性反應(yīng)。采用真核系統(tǒng)表達(dá)重組抗原有 助于解決這類問(wèn)題。 44 . 免疫印跡技術(shù)（IB） 特異性和敏感性比DID、CIEP高，能在一次檢測(cè)中，同時(shí) 完成對(duì)多種特異性（抗Sm、抗U1RNP、抗SSA、抗 SSB、抗Scl-70、抗J0-1及抗核糖體抗體等）的識(shí)別和過(guò) 篩 因?yàn)榭乖?jīng)SDS-PAGE后發(fā)生變性，該法檢測(cè)的是抗線型抗 原表位的抗體 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印效果不佳，本底染色深 SSA抗原轉(zhuǎn)印效果差，加上15%的

26、抗SSA抗體僅識(shí)別立體構(gòu) 象的抗原表位，檢測(cè)抗SSA的敏感性要低于CIEP和ELISA； 也不能測(cè)出某些抗Scl-70抗體 45 . 46 . 免疫斑點(diǎn)技術(shù)（IB） IB繞過(guò)凝膠電泳，直接將純化的自身抗 原包被在NC膜上 由于抗原位置固定，結(jié)果判斷比WB簡(jiǎn)單、 可靠 包被抗原純度高，膜條上沒(méi)有多余蛋白， 顯色后非特異背景比WB要弱 47 . 48 . Jo-1 Centro 液態(tài)芯片技術(shù) 目前，國(guó)際上有BMD、BioRad Diagnostics、 INOVA Diagnostics 、ZEUS Scientific 基于液 芯平臺(tái)ANA檢測(cè)產(chǎn)品 國(guó)內(nèi)尚未常規(guī)開(kāi)展 SSA SSB RNP Sc

27、l-70 Sm mere B DNA Chrom atin 49 . 迄今為止還沒(méi)有一種檢測(cè)抗ENA既高特異 又高敏感的方法。歐洲Consensus Workshops 曾推薦采用兩種或兩種以上的方法檢測(cè)抗ENA 抗體，由于費(fèi)用昂貴，目前難以廣泛采納。某 些實(shí)驗(yàn)室采用ELISA-CIEP聯(lián)合應(yīng)用檢測(cè)技術(shù)來(lái) 解決ELISA低親和力的問(wèn)題，例如，先用簡(jiǎn)便 快速的ELISA篩查抗ENA抗體，陽(yáng)性標(biāo)本再用 CIEP予以確認(rèn)，但常規(guī)實(shí)驗(yàn)室也難以接受 50 . ELISA DID CIE PHA ANA測(cè)定方法比較測(cè)定方法比較 方法 IFANA Westernblot 優(yōu)點(diǎn) 經(jīng)濟(jì)、易操作、高靈敏度和特異性 自動(dòng)化、可定量、高靈敏度、可進(jìn) 行抗體分類 經(jīng)濟(jì)、高特異性、可同時(shí)檢測(cè)多種 抗體 經(jīng)濟(jì)有效、高特