乙肝兩對半終結(jié)版

1、乙肝兩對半定量測定技術(shù) 對 HBV 感染診斷、治療的意義邳州市中醫(yī)院檢驗(yàn)科 平1、前言乙型病毒肝炎是由乙肝病毒（HBV）感染引起的傳染性疾病。在全球圍，乙肝的發(fā)病率均比較高，屬于臨床上常見的一種傳染病。因?yàn)橐腋尾《靖腥疽邹D(zhuǎn)化為慢性乙肝，繼而發(fā)展成肝硬化，肝癌，所以需要早診斷早治療。我國是乙肝病毒的高危流行地區(qū)。在我國大部分醫(yī)院，預(yù)防、診斷及治療乙肝時，乙肝兩對半的檢測結(jié)果為主要依據(jù)。通過乙肝兩對半的檢測結(jié)果，可將乙肝病毒活動性復(fù)制及傳染性是否存在直接反映出來。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ ELISA）是將抗原抗體免疫反應(yīng)的特異性和酶的高效催化作用原理有機(jī)的結(jié)合起來，可敏感的檢測生物標(biāo)本中微量的特異性抗體

2、或抗原的一種臨床檢驗(yàn)方法。因其操作簡單，靈敏度高，經(jīng)濟(jì)安全，不需特殊設(shè)備等特點(diǎn)而在臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中得到廣泛應(yīng)用1。然而，此方法屬于定性檢測方法，只能進(jìn)行定性分析，“灰區(qū)”樣本易導(dǎo)致漏診。同時在臨床應(yīng)用過程中，定性方法難以判斷乙肝病毒感染復(fù)制情況，患者病情及療效情況不能實(shí)現(xiàn)動態(tài)的監(jiān)測，使得其在臨床中的應(yīng)用受到一定的限制2。近年來，乙肝兩對半檢測中開始采用定量檢測方法，如時間分辨熒光免疫分析法（TRIFA），化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）等，因這些方法具備的高靈敏度、強(qiáng)穩(wěn)定性等優(yōu)勢，而在臨床檢測中得以迅速的推廣，在一定程度上彌補(bǔ)了ELISA 方法存在的局限。2、我科乙肝兩對半檢測的現(xiàn)狀分析酶聯(lián)免疫吸

3、附實(shí)驗(yàn)（ ELISA）法作為傳統(tǒng)的傳染病標(biāo)志物檢測技術(shù)，多年來一直被我科用于乙肝兩對半、丙肝、梅毒等的實(shí)驗(yàn)室診斷。鑒于其定性方法方法學(xué)的特性，應(yīng)用受到極大的限制。因此在 2014 年 7 月，我科引進(jìn)了一臺 EFFICUTA 全自動時間分辨熒光分析儀器， 用于開展傳染病標(biāo)志物的定量檢測。該機(jī)器采用時間分辨熒光免疫分析法（TRFIA），有效排除背景雜質(zhì)光對檢測結(jié)果的影響，可獲得高靈敏度、高準(zhǔn)確性的傳染病標(biāo)志物定量分析結(jié)果，不僅在早期診斷和判斷是否痊愈中可以應(yīng)用，而且可在治療過程中實(shí)時監(jiān)測治療效果，對于臨床治療方案的制定給予實(shí)驗(yàn)室支持。3、問題確立對于傳統(tǒng)項(xiàng)目因方法學(xué)改變而產(chǎn)生的收費(fèi)差異，臨床上還

4、是存在一定的疑慮，尤其是肝病科，由于其科室（我院特色科室之一）的診治的乙肝病人較多，醫(yī)生多次向我科咨詢：（1）轉(zhuǎn)變方法學(xué)，定性和定量檢測的區(qū)別是什么？（2）定量檢測的臨床意義是否真的比定性檢測更具有優(yōu)勢？對此，本人以乙肝兩對半檢測項(xiàng)目為例，選擇肝病科病人，同時對其血液樣本進(jìn)行乙肝兩對半的定性和定量檢測，比較檢測結(jié)果，評價兩種檢測方法在診斷乙型肝炎病毒感染中的差異，向臨床醫(yī)生介紹乙肝兩對半定性和定量結(jié)果的區(qū)別和臨床意義。同時探討 TRFIA 的臨床價值，給臨床醫(yī)生、給病人選擇檢測項(xiàng)目提供參考依據(jù)。4、文獻(xiàn)查證在我國總?cè)丝跀?shù)量中，約有 10%的人口為乙肝病毒攜帶者，預(yù)防、診斷及治療乙肝時，乙肝兩對

5、半的檢測結(jié)果為主要依據(jù)。目前，酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）為我國檢測乙肝兩對半時較為常用的方法，此種檢測屬于定性檢測。由于定性檢測方法存在一定的局限性，容易導(dǎo)致“灰區(qū)”樣本漏診的發(fā)生3。近年來，部分醫(yī)療機(jī)構(gòu)已逐漸采用定量檢測方法測定乙肝兩對半，逐步替代定性的 ELISA 方法。常用的定量檢測方法有放射免疫分析法（RIA），化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA），時間分辨熒光免疫分析法（ TRIFA）等4-6。因定量方法具備的靈敏度高、穩(wěn)定性強(qiáng)等優(yōu)勢而廣泛得應(yīng)用于臨床檢測中，并在一定程度上彌補(bǔ)了定性ELISA 方法存在的局限。同時有報道指出，定量測定乙肝兩對半與HBV-DNA 血清水平的定量聯(lián)合測定對乙

6、肝的臨床診斷，療效觀察和預(yù)后判斷具有更大的臨床價值，這是定性方法無法替代的7。5、研究方法1檢測對象以 2014 年 9 月2015 年 9 月選擇肝科病人 400 例，（其中住院病人 190 例，門診病人 210 例）為研究對象，其中男226 例，女 174 例；年齡 2281 歲，平均（51.82.3）歲。2方法2.1 標(biāo)本采集：住院病人收集肝病科病房護(hù)士早上抽取的病人空腹靜脈血，門診病人由采血室護(hù)士抽取病人靜脈血，并及時分離血清。2.2 ELSIA 法檢測：試劑來源于科衛(wèi)臨床診斷試劑，酶標(biāo)儀是華科瑞科的HR801 儀器，乙肝五項(xiàng)定性檢測嚴(yán)格按照試劑及儀器說明書進(jìn)行操作。2.3 TRIFA

7、 法檢測：TRIFA 檢測時采用的試劑來于源新波技術(shù)，儀器EFFICUTA 全自動時間分辨熒光分析儀器，乙肝五項(xiàng)定量檢測操作嚴(yán)格按照試劑及儀器說明書進(jìn)行。2.4 陽性判讀標(biāo)準(zhǔn)： ELSIA 法檢測乙肝兩對半?yún)⒖紘繛殛幮裕?TRIFA 檢 測 的 參 考 圍 為 ： HBsAg 為 0-0.2ng/ml, HBsAb 為0-10mIU/ml,HBeAg 為 0-0.5PEIU/ml, HBeAb 為 0-0.2PEIU/ml, HBcAb 為 0-0.9PEIU/ml.6、結(jié)果ELISA 方法與TRIFA 方法的檢測結(jié)果見表 1 和表 2 所示。表 1.兩種方法檢測乙肝兩對半的陽性例數(shù)及構(gòu)成

8、比。方法學(xué)項(xiàng)目ELISA（n=400）陽性構(gòu)成比TRIFA（n=400）陽性構(gòu)成比HBsAg12130.25%13132.75%HBsAb19147.75%20350.75%HBeAg5112.75%5112.75%HBeAb11929.75%13233%HBcAb20751.75%22355.75%表 2.兩種方法檢測乙肝兩對半的模式匯總。 （1.HBsAg; 2.HBsAb; 3.HBeAg; 4.HBeAb; 5.HBcAb模式例數(shù)構(gòu)成比例數(shù)構(gòu)成比4 陽性0010.25%2,4 陽性30.75%41%1 陽性0030.75%5 陽性61.5%82%1,5 陽性92.25%102.5%全陰

9、性7518.75%4812%2 陽性11428.5%12030%2,5 陽性276.75%287%2,4,5 陽性4711.75%5012.5%4,5 陽性71.75%102.5%1,4 陽性10.25%10.25%1,2,5 陽性0010.25%1,3,4,5 陽性10.25%10.25%1,3,5 陽性5012.5%5012.5%1,4,5 陽性6015%6516.25%對比兩種檢測方法的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，存在檢測結(jié)果不一致的現(xiàn)象。每一個單項(xiàng)或每一種模式，TRIFA 方法的陽性結(jié)果普遍高于ELISA 方法；同時存在比如TRIFA 方法檢測HBsAg 顯示為陽性者，ELISA 方法檢測顯示為陰性或者

10、TRIFA 方法檢測HBcAb 顯示為陰性者，ELISA 方法檢測顯示為陽性。說明 ELISA 方法測試時存在假陽性或假陰性的結(jié)果。7、結(jié)果分析兩種檢測方法結(jié)果的不同表明兩種方法的方法學(xué)性能存在差異， 但是哪一種方法更加適合臨床需要進(jìn)一步的討論與驗(yàn)證。1.定量檢測乙肝兩對半具有更高的檢測靈敏度乙肝兩對半檢測中，采用 ELISA 方法檢測時，酶標(biāo)陽性的呈現(xiàn)需要達(dá)到 2ng/ml 的血清水平；而采用 TRIFA 方法檢測時，陽性呈現(xiàn)僅需達(dá)到 0.1ng/ml 即可，檢測靈敏度顯著提升8。因此，采用TRIFA方法定量檢測后，HBsAg 陽性可以在更早期被檢出，以確證 HBV 感染。在急性乙肝早期檢測

11、中采用ELISA 方法時，HBsAg 的檢測結(jié)果會顯示為陰性，造成漏診；在部分慢性乙肝患者中，機(jī)體免疫對乙肝病毒包膜蛋白的應(yīng)答缺乏，從而降低HBsAg 的表達(dá)，利用ELISA 檢測時，HBsAg會顯示為陰性，而且抗-HBs 會也顯示為陰性，造成漏診；乙肝病毒變異后，表達(dá)量會比較低，抗原采用 ELISA 檢測時不能檢測，造成漏診；部分乙肝病毒攜帶者的HBsAg 濃度比較低，尤其是特殊群體，受到長期密切接觸的影響，轉(zhuǎn)變?yōu)榧毙砸腋?，但傳播感染途徑并非直接?jīng)由血液，而是少量感染長期積累而成，此種情況下，感染濃度比較低，定性的ELISA 方法檢測將不易檢出，造成漏診；然而上述情況若采用定量方法檢測，則假

12、陰性的情況基本不會出現(xiàn)，提高了 HBV 感染的診斷準(zhǔn)確率9。在HBV 感染的早期診斷中，采用定量檢測時，因檢出靈敏度的提升可及早發(fā)現(xiàn)患者的病情，從而積極的治療、預(yù)防，避免發(fā)展為乙肝或慢性乙肝攜帶者。臨床觀察乙肝患者病情時，“窗口期”時間也隨著方法檢測靈敏度的提升而明顯縮短，有利于病情的實(shí)時監(jiān)測。2.乙肝兩對半定量檢測可對患者病情動態(tài)的觀察與監(jiān)測疾病的發(fā)生、發(fā)展具備動態(tài)性，而且治療過程中，療效及預(yù)后也是動態(tài)變化的。乙肝五項(xiàng)的濃度變化可直接反映乙肝患者的病情變化情況、療效情況等，通過定量檢測方法，可對變化過程實(shí)施動態(tài)監(jiān)測，并指導(dǎo)醫(yī)生對患者病情的判定及治療方案的調(diào)整，提升治療效果。急性乙肝患者治療過

13、程中，HBsAg、HBsAb 濃度變化利用定量分析監(jiān)測時，可以較為準(zhǔn)確的判斷患者病情是否處于恢復(fù)期當(dāng)中，通常HBsAg 濃度出現(xiàn)下降，而 HBsAb 濃度出現(xiàn)升高時，表示患者病情正在發(fā)展至恢復(fù)期10。乙肝患者病情及治療效果的變化可通過 HBeAg 和 HBeAb 濃度的變化情況反映出來。此外，HBeAb 的濃度非常高時，說明患者急性感染乙肝。3.乙肝兩對半定量檢測與 HBV-DNA 定量分析的聯(lián)合應(yīng)用可更好地反映病毒復(fù)制狀態(tài)和治療效果臨床治療乙肝患者時，治療一段時間后，患者 HBsAg 檢測呈陰性或HBV-DNA 檢測呈陰性時，并不能說明已經(jīng)完全清除了乙肝病毒， 綜合性分析乙肝兩對半的五項(xiàng)指標(biāo)

14、檢測結(jié)果之后，機(jī)體乙肝病毒狀態(tài)可以客觀的反映出來，可對患者預(yù)后較為準(zhǔn)確的判斷11。血清HBV-DNA 檢測結(jié)果顯示為陰性，而且 HBsAg、HBeAb 濃度檢測結(jié)果顯示比較高時，說明患者的病情并未全部痊愈，病情存在惡化的風(fēng)險，應(yīng)對患者的病情密切的觀察，但血清 HBV-DNA 檢測結(jié)果顯示為陰性，而且HBsAg、HBeAb 濃度檢測結(jié)果顯示比較低時，提示患者病情治療效果良好，正在逐漸痊愈，預(yù)后情況可有效的改善。4.乙肝兩對半定量檢測可正確評價抗體中和乙肝病毒的免疫力情況檢測乙肝患者“兩對半”時，HBsAb 的濃度含量如果超過10mIU/mL，那么采用ELISA 方法檢測時，檢測結(jié)果會顯示為陽性，

15、但此結(jié)果并不能說明機(jī)體免疫力一定存在；而其濃度含量在10 100mIU/mL 之間時，ELISA 檢測結(jié)果依然為陽性，此時，機(jī)體免疫乙肝病毒的能力比較弱，甚至乙肝病毒感染預(yù)防的能力都不存在，乙肝病毒感染的風(fēng)險比較高12。當(dāng) HBsAb 濃度含量超過 100mIU/mL 時，機(jī)體方具備較強(qiáng)的抵御乙肝病毒感染的能力。由此可知，機(jī)體中HBsAb 的濃度含量越高時，機(jī)體抵御乙肝病毒感染的能力越高，而且可長時間的持續(xù)。采用 TRIFA 檢測機(jī)體中HBsAb 的濃度含量時，機(jī)體抵御乙肝病毒的狀態(tài)、接種乙肝疫苗的效果均可被判斷出來：如果機(jī)體中HBsAb 的濃度含量比較少時，乙肝疫苗的接種應(yīng)加強(qiáng)，從而降低機(jī)體

16、感染乙肝病毒的風(fēng)險。此外，個體差異的存在導(dǎo)致機(jī)體接種乙肝疫苗后產(chǎn)生不同的免疫力，有些個體接種乙肝疫苗后，數(shù)十年 HBsAb 的濃度含量均會持續(xù)比較高的狀態(tài)，而有些個體接種乙肝疫苗后，幾年即會消失。因此，乙肝預(yù)防及篩查中，應(yīng)十分注意這類高危人群。8、結(jié)論綜上所述，乙肝兩對半檢測中，定量檢測的靈敏度及準(zhǔn)確性要優(yōu)于定性檢測，檢測時可綜合采用這兩種檢測方法，揚(yáng)長避短，提升檢測的準(zhǔn)確性，避免漏診。預(yù)防性篩查乙肝患者時，可以用定性分析。對于疑似乙肝患者或是乙肝患者應(yīng)進(jìn)行定量檢測，可提升診治的準(zhǔn)確性，盡早發(fā)現(xiàn)患者的乙肝病情，及時給予患者治療，改善患者預(yù)后?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1王蘭蘭，臨床免疫學(xué)與檢驗(yàn).人民衛(wèi)生，M

17、2012 年第 5 版：91-92. 2國繪，許文龍，竇琳琳等.1128 例HBV-DNA 定量和乙肝血清學(xué)標(biāo)志物定量結(jié)果之間的相關(guān)性研究J.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2013，23（02）：351-354.3慧.乙型肝炎血清兩對半檢測與HBV-DNA 濃度的分析J.中外醫(yī)療，2013，10（27）：188+190.4黃志勇，然峰，董長林等.固相放免法定量乙肝兩對半轉(zhuǎn)珠前后結(jié)果比較分析J.武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2004，13（5）：401，406.5龍紹芬，黎鐵斌等.乙肝兩對半定量檢測結(jié)果分析J.實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2012，30（2）：187-188.6燦，靜，雯.化學(xué)發(fā)光法與 ELISA 法對乙肝兩對半少見模式測定的比較分析J.中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2007，11（12）：16807胡夷.乙肝兩對半定量檢測和 HBV-DNA 定量檢測結(jié)果對比分析J. 中國保健營養(yǎng)，2015，25（10）：275.8雙元.ELISA 法檢測乙肝兩對半的意義及臨床應(yīng)用J.當(dāng)代醫(yī)學(xué)， 2013，8（26