胃癌HER2檢測亞太工作組建議

1、,胃癌HER2檢測 亞太工作組建議,目的,了解制訂亞太胃癌HER2檢測建議的必要性 了解HER2亞太工作組建議以及這些建議與國際指南的不同 了解亞太建議對多學(xué)科診斷及治療亞太胃癌患者的意義,HER2，人表皮生長因子受體2.,制訂適用于亞太地區(qū)的指南的必要性,關(guān)于胃癌HER2檢測的現(xiàn)有指南主要依據(jù)歐洲的檢測經(jīng)驗1 很多APAC國家的當(dāng)?shù)貦z測環(huán)境不同于歐洲、澳大利亞和美國 APAC建議必須考慮到該區(qū)域?qū)嶒炇胰粘９ぷ髦兴媾R的挑戰(zhàn),1Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:63750.,HER2，人表皮生長因子受體2.,制訂適用于亞太地區(qū)的指南的必要性,修訂或擴(kuò)充了國際

2、指南以體現(xiàn)APAC實驗室的特有經(jīng)驗1 強(qiáng)調(diào)本地檢測環(huán)境 提高區(qū)域適用性,1Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,亞太指南：概述,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生長因子受體2；IHC，免疫組織化學(xué),HER2多學(xué)科檢測團(tuán)隊的原則,實驗室操作建議,適當(dāng)?shù)臉?biāo)本類型,胃癌的獨有特征,HER2基因擴(kuò)增評估,IHC HER2染色評估,HER2檢測解讀和評分,質(zhì)量控制,處理和固定,抗原修復(fù),染色,對照,HER2多學(xué)科檢測團(tuán)隊的原則,HER2檢測需要多學(xué)科協(xié)同,準(zhǔn)確及時地診斷患者的HER2狀態(tài)需要腫瘤外科、腫

3、瘤內(nèi)科和病理團(tuán)隊關(guān)鍵成員之間的協(xié)作 多學(xué)科團(tuán)隊?wèi)?yīng)共同推動數(shù)個關(guān)鍵原則以保證檢測質(zhì)量,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生長因子受體2.,胃癌檢測的關(guān)鍵原則,應(yīng)在診斷時常規(guī)檢查不可手術(shù)、局限性晚期、復(fù)發(fā)性和轉(zhuǎn)移性胃癌和胃食管結(jié)合部（GEJ）癌患者的HER2過表達(dá)情況1 HER2狀態(tài)對于胃和GEJ癌同時具有預(yù)后和預(yù)測價值25 能否獲取HER2靶向治療不應(yīng)影響受試患者的決策 確定HER2狀態(tài)胃癌組織學(xué)診斷的時間應(yīng)盡可能短1 胃和GEJ癌病情進(jìn)展迅速、復(fù)發(fā)率高 必須借助對患者HER2狀態(tài)的全面了解制定治療計劃1 HER2報告應(yīng)提供確定性診斷

4、不應(yīng)提交或接受不確定的結(jié)果 HER2檢測應(yīng)盡可能自動化以提供更精確和可靠的結(jié)果1,1Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014; 2.Bang, et al.Lancet 2010;28:68797; 3.Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:63750; 4.Kim, et al.Ann Surg Oncol 2011;18:283340; 5.Gomez-Martin, et al.Clin Transl Oncol 2011;13:63651.,GEJ，胃食管結(jié)合部；HER2，人表皮生長因子受體2.,實驗室建議影響檢測結(jié)果的

5、重要參數(shù),合格的標(biāo)本,手術(shù)切除和活檢標(biāo)本均可接受1 更常使用活檢標(biāo)本，因為很多晚期/轉(zhuǎn)移性胃癌常不可手術(shù) 4-6處新鮮腫瘤組織的活檢標(biāo)本可以接受1 腫瘤組織數(shù)量不足不能解釋異質(zhì)性，并會提高假陰性結(jié)果的風(fēng)險2,3 受測活檢組織數(shù)量不同可能是亞太地區(qū)HER2陽性率不同的原因 4-6處活檢標(biāo)本較國際指南中的6-8處活檢標(biāo)本更有可操作性4 不建議使用組織微陣列進(jìn)行常規(guī)標(biāo)本評估1 不能完全代表異質(zhì)性,1Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014; 2.Warneke, et al.Ann Oncol 2013;24:72533; 3.Lee, et al.Eur J Ca

6、ncer 2013;49:144857; 4.Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:63750.,HER2，人表皮生長因子受體2.,處理和固定,應(yīng)在切除20分鐘內(nèi)將活檢標(biāo)本置于 10% NBF內(nèi)1,應(yīng)在切除后1小時內(nèi)將手術(shù)切除標(biāo)本置于 10% NBF內(nèi),1Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:63750.,NBF，中性緩沖福爾馬林,冷缺血時間和經(jīng)驗證的方案1,冷缺血時間 = 組織切除到開始福爾馬林固定之間的時間 可影響蛋白表達(dá)，使HER2檢測結(jié)果解釋不準(zhǔn)確，導(dǎo)致假陰性結(jié)果2,3 采用指南建議范圍之外的冷缺血時間必須經(jīng)過驗證 應(yīng)分別

7、驗證活檢和手術(shù)切除標(biāo)本。 驗證必須將標(biāo)本固定地點（是新鮮轉(zhuǎn)運至實驗室，還是在手術(shù)室內(nèi)開始固定）考慮在內(nèi) 在手術(shù)室需要做的： 應(yīng)在檢查申請單中注明切除和置于固定劑的時間 應(yīng)將標(biāo)本置于耐用的尺寸適當(dāng)?shù)娜萜鲀?nèi)，浸泡于10% NBF內(nèi) 在浸入前應(yīng)切開手術(shù)標(biāo)本并標(biāo)記方向,1Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014; 2.Yildiz-Aktas, et al.Mod Pathol 2012;25:1098-105; 3.Neumeister, et al.J Natl Cancer Inst 2012;104:181524.,HER2，人表皮生長因子受體2；NBF，中性

8、緩沖福爾馬林,固定：一個影響檢測結(jié)果的重要因素,可變且未經(jīng)驗證的檢測流程在亞太地區(qū)常見，這是結(jié)果不可靠的主要原因 標(biāo)本固定受以下因素影響： 溫度 滲透速率 標(biāo)本尺寸（最好厚度不超過4mm） 固定劑與組織體積的比值 pH值 固定時間 必須優(yōu)化并驗證這些參數(shù),Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,指南對固定的建議概述,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,NBF，中性緩沖福爾馬林,遠(yuǎn)距離的樣本運送,檢測實驗室應(yīng)與當(dāng)?shù)貙嵤┙M織采樣的中心密切協(xié)同以確保對標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)?shù)倪\送準(zhǔn)備 如果標(biāo)本將在已驗證的固定時間內(nèi)到達(dá)HER2檢測

9、實驗室： 當(dāng)?shù)刂行膽?yīng)根據(jù)建議開始固定 應(yīng)固定標(biāo)本，密封在適合長距離運輸?shù)娜萜鲀?nèi) 如果標(biāo)本將在已驗證的固定時間以外到達(dá)HER2檢測實驗室： 應(yīng)在運輸之前處理標(biāo)本，用蠟塊包埋,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生長因子受體2.,抗原修復(fù)1,推薦自動控溫抗原修復(fù) 即使是自動化系統(tǒng)也必須優(yōu)化，并根據(jù)生產(chǎn)商建議進(jìn)行驗證 抗原修復(fù)不佳是導(dǎo)致假結(jié)果的常見原因 過度修復(fù)可能活化內(nèi)源性生物素，導(dǎo)致基于親和素-生物素染色檢測中過強(qiáng)的背景染色，并可導(dǎo)致假陽性結(jié)果2,1Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014; 2.Buss

10、olati, et al.Histopathology 1997;31:4007.,檢測1,實驗室應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)化的商用IHC和ISH分析 可能與可靠性和重復(fù)性差相關(guān) 應(yīng)建立并驗證胃癌標(biāo)本專用的檢測流程 所有檢測必須在實驗室內(nèi)驗證 不同的IHC抗體導(dǎo)致不同的染色強(qiáng)度 可能影響陽性率2 為無、低和高水平的HER2蛋白表達(dá)生成參考圖像以進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化評分,1Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014; 2.Cho, et al.Mod Pathol 2013;26:677-84.,HER2，人表皮生長因子受體2；IHC，免疫組織化學(xué)；ISH，原位雜交,對照,每個標(biāo)本玻片上都

11、應(yīng)有HER2表達(dá)水平明確的對照 用于檢測假陽性和假陰性結(jié)果 IHC： 對照應(yīng)包括無（IHC 0）和強(qiáng)IHC染色（IHC 3+)的切片 如果可能還應(yīng)包括不確定染色（IHC 2+) 應(yīng)使用與胃癌標(biāo)本相似的固定劑、處理和石蠟包埋技術(shù)準(zhǔn)備對照樣品,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生長因子受體2；IHC，免疫組織化學(xué),胃癌HER2檢測結(jié)果解讀和評分建議,胃癌的獨有特征,胃癌是一種形成腺體和生成粘液的腫瘤，呈不完全基底側(cè)方/側(cè)方染色模式 胃癌的結(jié)果解讀和評分指導(dǎo)原則不同于乳腺癌 將乳腺癌的指導(dǎo)原則用于胃癌標(biāo)本將使HER2陽性標(biāo)本評為陰性,Kim

12、, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生長因子受體2.,乳腺癌和胃癌的區(qū)別,乳腺癌圖像由Dako回贈；胃癌圖像來自F.Hoffmann-L；a Roche,GOJ，胃-食管結(jié)合部；IHC,免疫組織化學(xué),IHC 0,IHC 1+,IHC 3+,IHC 2+,乳腺癌,胃癌,由于組織和生物學(xué)差異，乳腺癌和胃及胃食管癌的評分不同,胃癌中異質(zhì)性染色常見1,2,存在于高達(dá)30%的HER2陽性胃癌病例中3 更常見于IHC2+病例或混合組織學(xué)分型內(nèi)4 影響檢測的各個階段，從采樣到評分 問題 盡管使用現(xiàn)行評分標(biāo)準(zhǔn)分類為HER2陰性， 陽性染色細(xì)胞10%的腫瘤對H

13、ER2靶向治療有染色嗎？,1Hofman, et al.Histopathology 2008;52:797805; 2.Jouret-Mourin, et al.Acta Gastroenterol Belg 2012;75:913; 3.Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:63750; 4.Cho, et al.Ann Surg Oncol 2013;20:47784.,HER2，人表皮生長因子受體2；IHC，免疫組織化學(xué),解釋異質(zhì)性：IHC評分,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生長因子受體2；

14、IHC，免疫組織化學(xué),在10%的細(xì)胞中觀察到強(qiáng)、完全/基底側(cè)方或側(cè)方膜染色,在不同的蠟塊切片上重復(fù)ICH染色,仍不能確定?,使用ISH確定HER2基因擴(kuò)增和最終HER2狀態(tài),原發(fā)和轉(zhuǎn)移性腫瘤的不一致性,原發(fā)和轉(zhuǎn)移性胃癌間的HER2狀態(tài)不一致并不罕見1,2 IV期病變：應(yīng)在原發(fā)和遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移樣本中進(jìn)行HER2檢測（如可能）3 應(yīng)在做出最終治療決定前將不一致的證據(jù)報告至腫瘤學(xué)家3,1Cho, et al.Mod Pathol 2013;26:677-84; 2.Lee, et al.Eur J Cancer 2013;49:144857; 3.Kim, et al.Asia Pac J Clin On

15、col 2014.,HER2，人表皮生長因子受體2.,胃癌HER2檢測程序,IHC是胃癌的主要檢測方法1 曲妥珠單抗可為高表達(dá)HER2蛋白的患者提供最大獲益(曲妥珠單抗胃癌ToGA試驗)2 ISH用于IHC不確定病例的HER2狀態(tài)確認(rèn)1 首選亮視野ISH法以有效確定HER2擴(kuò)增區(qū)域 澳大利亞胃癌HER2檢測研究(GaTHER)認(rèn)為IHC 3+強(qiáng)烈提示陽性ISH結(jié)果3,1Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014; 2.Bang, et al.Lancet 2012;376:68797; 3.Fox, et al.Am J Surg Pathol 2012;36:

16、57782.,HER2，人表皮生長因子受體2；IHC，免疫組織化學(xué)；ISH，原位雜交,使用IHC HER2染色評估侵襲性癌,1Bang, et al.Lancet 2012;376:68797.,HER2，人表皮生長因子受體2；IHC，免疫組織化學(xué), 對于活檢無百分比截斷值；單需要至少5個陽性細(xì)胞成簇 摘自Bang, et al.1,顯微鏡放大倍數(shù)法則1,關(guān)聯(lián)染色強(qiáng)度和顯微鏡放大倍數(shù)與IHC評分1 可提高IHC和ISH結(jié)果的一致性2,1Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:63750; 2.Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:6

17、3750.,HER2，人表皮生長因子受體2；IHC，免疫組織化學(xué),HER2基因擴(kuò)增評估,H25:63750; 2.Bartlett, et al.J Clin Pathol 2011;64:64953.,CEP17, 染色體計數(shù)探針 17; HER2, 人表皮生長因子受體2; ISH，原位雜交,摘自Ruschoff, et al.1,排除標(biāo)準(zhǔn),出現(xiàn)下列情況時應(yīng)拒絕檢驗： 未驗證的檢測前處理流程，尤其是固定 由于切片機(jī)偽影、雜交信號強(qiáng)度和/或雙探針檢查中同時存在兩種信號，不符合檢測要求 對照結(jié)果不滿意 組織切片中無腫瘤成分 超期4-6周準(zhǔn)備切片的陰性結(jié)果（未石蠟包埋和/或在4下保存）,Kim,

18、et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,質(zhì)量控制,內(nèi)部質(zhì)控：驗證,HER2檢測實驗室應(yīng)每天對所有抗原（包括HER2）至少進(jìn)行10次IHC檢測 同時具有IHC和ISH能力的實驗室進(jìn)行首次胃HER2檢測需要： 同時使用IHC和ISH分析25至50個胃癌病例 實現(xiàn)一致性 90% 包括至少5個HER2陽性病例（10-20%驗證病例） 驗證必須獨立于乳腺癌方案 如果檢測條件、試劑、材料和方法變更必須重新驗證 病理學(xué)家應(yīng)每年至少評分50個胃癌病例,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生長因子受體2；IHC，免疫組織化學(xué)；ISH，原位雜交,外部質(zhì)控程序,幫助實驗室確保日常檢測的標(biāo)準(zhǔn)一致 允許實驗室之間長期互相檢查HER2檢測質(zhì)量,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生長因子受體2.,總結(jié),關(guān)鍵點概述,Kim, et al.Asia Pac J