分光光度法測(cè)定葉綠素含量

1、.1、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解植物組織中葉綠素的分布及性質(zhì)。2.掌握測(cè)定葉綠素含量的原理和方法。二、實(shí)驗(yàn)原理葉綠素廣泛存在于果蔬等綠色植物組織中，并在植物細(xì)胞中與蛋白質(zhì)結(jié)合成葉綠體。當(dāng)植物細(xì)胞死亡后，葉綠素即游離出來(lái)，游離葉綠素很不穩(wěn)定，對(duì)光、熱較敏感；在酸性條件下葉綠素生成綠褐色的脫鎂葉綠素，在稀堿液中可水解成鮮綠色的葉綠酸鹽以及葉綠醇和甲醇。高等植物中葉綠素有兩種：葉綠素a 和b，兩者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。葉綠素的含量測(cè)定方法有多種，其中主要有：1.原子吸收光譜法：通過(guò)測(cè)定鎂元素的含量，進(jìn)而間接計(jì)算葉綠素的含量。2.分光光度法：利用分光光度計(jì)測(cè)定葉綠素提取液在最大吸收波長(zhǎng)下的吸光值，即

2、可用朗伯比爾定律計(jì)算出提取液中各色素的含量。葉綠素a 和葉綠素b 在645nm 和663nm 處有最大吸收，且兩吸收曲線相交于652nm 處。因此測(cè)定提取液在645nm、663nm、652nm 波長(zhǎng)下的吸光值，并根據(jù)經(jīng)驗(yàn)公式可分別計(jì)算出葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素的含量。三、儀器、原料和試劑儀器分光光度計(jì)、電子頂載天平(感量001g)、研缽、棕色容量瓶、小漏斗、定量濾紙、吸水紙、擦境紙、滴管。原料新鮮(或烘干)的植物葉片試劑1. 96乙醇(或80丙酮) 2. 石英砂3. 碳酸鈣粉四、操作步驟取新鮮植物葉片(或其它綠色組織)或干材料，擦凈組織表面污物，去除中脈剪碎。稱(chēng)取剪碎的新鮮樣品2g，放入研

3、缽中，加少量石英砂和碳酸鈣粉及3mL95乙醇，研成均漿，再加乙醇10mL，繼續(xù)研磨至組織變白。靜置35min。取濾紙1張置于漏斗中，用乙醇濕潤(rùn)，沿玻棒把提取液倒入漏斗，濾液流至100mL 棕色容量瓶中；用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘?jiān)鼣?shù)次，最后連同殘?jiān)黄鸬谷肼┒分?。用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直至濾紙和殘?jiān)袩o(wú)綠色為止。最后用乙醇定容至100mL，搖勻。取葉綠體色素提取液在波長(zhǎng)665nm、645nm 和652nm 下測(cè)定吸光度，以95乙醇為空白對(duì)照。五、計(jì)算按照實(shí)驗(yàn)原理中提供的經(jīng)驗(yàn)公式，分別計(jì)算植物材料中葉綠素a、b 和總?cè)~綠素的含量葉綠素a= （12.7 A665

4、-2.69 A645） 葉綠素b=（12.7 A645 - 2.69A665） 總?cè)~綠素a=（20.0A645 + 8.02 A665 ） 或總?cè)~綠素a= 幾種葉綠素含量測(cè)定方法比較葉綠素含量是植物生長(zhǎng)過(guò)程中一個(gè)重要的生理指標(biāo),由于其對(duì)周?chē)h(huán)境很敏感,并與植物的光合作用、營(yíng)養(yǎng)吸收等密切相關(guān),被廣泛作為植物生長(zhǎng)的常規(guī)測(cè)定指標(biāo)項(xiàng)目。葉綠素含量的測(cè)定方法有多種,在國(guó)際上以傳統(tǒng)的Arnon法(也稱(chēng)研磨法)應(yīng)用最為廣泛。但該法需要把植物材料研磨并經(jīng)轉(zhuǎn)移、過(guò)濾或離心處理,不僅工作量大,而且不可避免地使試驗(yàn)人員較長(zhǎng)時(shí)間與揮發(fā)于空氣中的試劑相接觸,對(duì)人體損害較大。近年來(lái),直接浸取法受到重視,張憲政等用不同配比

5、的混合液對(duì)葉綠素進(jìn)行提取,證明了用混合液提取的可行性。李得孝,吳志旭等對(duì)傳統(tǒng)的Arnon法進(jìn)行了改進(jìn),將樣品冷凍處理后,用50丙酮靜置提取并進(jìn)行測(cè)定,極大提高了工作效率。(1)研磨法。稱(chēng)取0. 5 g樣品于研缽內(nèi),加入少量CaCO3和5 mL 80%的丙酮,將材料充分研磨細(xì)碎直至變白(約5 min),轉(zhuǎn)移至10 mL具塞離心管中,定容至刻度,搖勻后置于4冰箱中靜置12 h,離心10 min (2000 r/min),取上清液測(cè)定。(2)直接浸取法。稱(chēng)取0. 5 g樣品放入10 mL具塞離心管中,用80%丙酮定容至刻度,于暗柜中靜置72 h浸取,取上清液測(cè)定。(3)樣品冷凍后用50提取液提取法。

6、稱(chēng)取0. 5 g樣品于10 mL具塞離心管中,置冰箱中冷凍2h,取出后加入10mL在水浴鍋中加熱至50的80%丙酮,充分振搖后于暗柜中靜置4h,取上清液測(cè)定。（4）葉綠素計(jì)法：葉綠素計(jì)是所有方法中最快捷的，你只需手持葉綠素計(jì)，將葉片插入儀器的感應(yīng)部位，然后合上測(cè)量探頭即可。應(yīng)用于這種測(cè)定的儀器又被叫做便攜式葉綠素儀，因?yàn)樵撊~綠素計(jì)擁有小巧的機(jī)身，僅200g的重量，可以方便地裝入口袋并帶到現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行測(cè)量。在以上幾種測(cè)定方法中，直接浸取法提取效果最好,但耗時(shí)長(zhǎng),傳統(tǒng)研磨法葉綠素的損失較大,冷凍后用50提取液提取法操作簡(jiǎn)便且提取速度較快,在提取率和穩(wěn)定性方面均顯示良好的優(yōu)越性。冷凍后用50提取液提取法

7、的最優(yōu)試驗(yàn)條件為將試驗(yàn)材料冷凍1 h后,靜置提取3 h。而葉綠素儀法，則相較于其他三種化學(xué)方法，更加快速方便。而且用SPAD-502測(cè)定葉綠素含量時(shí)，不會(huì)對(duì)葉片造成損傷，這也是使用葉綠素計(jì)的另一大好處。因?yàn)槟悴恍枰氯~片，直接用儀器夾住葉片測(cè)定即可，這樣就可以在作物的生長(zhǎng)過(guò)程中全程對(duì)特定的葉片進(jìn)行監(jiān)測(cè)，從而得到更科學(xué)的分析結(jié)果。分光光度法快速測(cè)定玉米葉片中的葉綠素作者:作者：潘玲玲 徐曉潔 譚晶晶 張海艷 喬英哲 張曄暉 來(lái)源：醫(yī)學(xué)期刊 / 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物醫(yī)學(xué)工程收藏本文章【關(guān)鍵詞】 葉綠素,SPAD值,玉米葉,分光光度法摘要 以玉米葉片為材料，利用雙波長(zhǎng)雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，用最大決定

8、系數(shù)增量回歸算法，研究了葉片葉綠素a、b及SPAD值同時(shí)、快速測(cè)量方法。結(jié)果表明，用3個(gè)波長(zhǎng)點(diǎn)建立的模型可以達(dá)到良好的預(yù)測(cè)效果，預(yù)測(cè)葉綠素a、b及SPAD值的相關(guān)系數(shù)分別為0.9919、0.9816和0.9757；標(biāo)準(zhǔn)差分別為1.52、0.43和1.96；預(yù)測(cè)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差分別為4.64%、5.50%和4.88%。同時(shí)研究了儀器波長(zhǎng)誤差和帶寬變化對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響, 發(fā)現(xiàn)波長(zhǎng)偏移超過(guò)0.2 nm,誤差快速增大，且波長(zhǎng)向長(zhǎng)波方向偏移時(shí)對(duì)測(cè)量的影響要大于向短波方向偏移的影響；儀器帶寬變大，預(yù)測(cè)誤差也就越大。關(guān)鍵詞 葉綠素，SPAD值,玉米葉，分光光度法1 引言 葉綠素a、葉綠素b的含量的測(cè)定一般用光譜方

9、法。先用某種溶劑（如丙酮等）提取葉綠素，然后用光譜儀器測(cè)定1,2，這類(lèi)方法操作繁瑣，耗時(shí)太長(zhǎng)。而活體葉片中葉綠素的測(cè)量一般只能測(cè)定葉綠素總量或SPAD(soil and plant analyzer development)值3。同時(shí)測(cè)定葉綠素a、葉綠素b和SPAD值的方法，尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究以玉米葉片為材料，利用雙波長(zhǎng)雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，用最大決定系數(shù)增量回歸算法，研究了葉片葉綠素a、葉綠素b及SPAD值同時(shí)、快速測(cè)量方法；研究了儀器波長(zhǎng)誤差和帶寬變化對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。 本研究既可作為實(shí)驗(yàn)室快速測(cè)量的方法，也為開(kāi)發(fā)研制野外活體葉片快速、無(wú)損測(cè)定儀器提供了參考。 2 實(shí)驗(yàn)部分2.1 儀器

10、與試劑557型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本日立公司）；60片玉米葉片，SPAD值用SPAD502測(cè)量?jī)x測(cè)定；葉綠素a、葉綠素b含量用Arnon法測(cè)定。2.2 實(shí)驗(yàn)方法在分光光度計(jì)上，用雙波長(zhǎng)方式，參比波長(zhǎng)為750 nm；掃描區(qū)間為590 700 nm，分別在帶寬為2、4、6、8、10 nm測(cè)量60片玉米葉片的吸收光譜。測(cè)得的光譜圖經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)室自主開(kāi)發(fā)的光譜數(shù)字化系統(tǒng)，每隔0.1 nm采集一個(gè)數(shù)據(jù)，得到數(shù)字化的光譜圖。 3 結(jié)果與討論3.1 葉片的吸收光譜圖圖1是帶寬為2 nm時(shí)的光譜，吸收峰值約680 nm，噪聲很小，其它帶寬下測(cè)得的圖譜也類(lèi)似。3.2 數(shù)學(xué)模型的建立 在590700 nm的波長(zhǎng)范圍

11、，每隔1nm取一個(gè)吸光值，用最大決定系數(shù)增量回歸算法來(lái)建立模型。選出葉片葉綠素a、葉綠素b和SPAD值同時(shí)測(cè)定的最優(yōu)波長(zhǎng)，即選擇預(yù)測(cè)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)誤差最小的波長(zhǎng)組合。結(jié)果表明：當(dāng)只選擇一個(gè)波長(zhǎng)時(shí)，是625 nm；選擇兩個(gè)波長(zhǎng)點(diǎn)時(shí)，最優(yōu)組合是635和625 nm；選擇個(gè)波長(zhǎng)點(diǎn)時(shí)，最優(yōu)組合是635、625和610 nm；選擇個(gè)波長(zhǎng)點(diǎn)時(shí)，最優(yōu)組合是635、625、610和655 nm；選擇5個(gè)波長(zhǎng)點(diǎn)時(shí)，最優(yōu)組合是635、625、610、655和700 nm；選擇6個(gè)波長(zhǎng)點(diǎn)時(shí)，最優(yōu)組合是635、625、610、655、700和595 nm。圖2是以上6種組合時(shí)各種物質(zhì)的預(yù)測(cè)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差。 圖1 60片玉米葉片

12、吸收光譜圖（略）Fig.1 bsorption spectra of 60 maize leaves 圖2 不同波長(zhǎng)數(shù)目的預(yù)測(cè)效果（略）Fig.2 rediction (RSD) of the models with different wavelength number從圖2中可以看出，所用波長(zhǎng)數(shù)越多，測(cè)量效果越好。但這種變化越來(lái)越緩慢，尤其是3個(gè)波長(zhǎng)以后，隨著波長(zhǎng)數(shù)目增加，測(cè)量效果改善不顯著。此外，葉綠素b的測(cè)量效果不如葉綠素a的測(cè)量效果好，而SPAD值的測(cè)量效果不同波長(zhǎng)的差異不大；可能是葉綠素b的含量較低，化學(xué)值測(cè)量的相對(duì)誤差較大；而SPAD值本身是用一個(gè)波長(zhǎng)的吸收而得，所以較容易準(zhǔn)確測(cè)

13、定；總體上，當(dāng)選個(gè)波長(zhǎng)點(diǎn)組合，種組分測(cè)定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差約5%，如圖3和圖4所示。 圖3 葉綠素a（）和葉綠素b（B)預(yù)測(cè)集的散點(diǎn)圖（略）Fig.3 Diagram of the prediction result of chlorophyll a (A) and chlorophyl b (B) 圖4 SPAD預(yù)測(cè)集的散點(diǎn)圖（略）Fig.4 Diagram of the prediction result of Soil and Plant Analyzer Development (SPAD)圖3A和B以及圖4分別是葉綠素a、葉綠素b和SPAD值測(cè)量時(shí)選擇波長(zhǎng)635 nm、625 nm以及61

14、0nm組合建立模型的預(yù)測(cè)效果圖。這時(shí)葉綠素a、葉綠素b和SPAD值測(cè)量的預(yù)測(cè)相關(guān)系數(shù)分別是09919、0.9816和0.9757；預(yù)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)差分別是1.52、043和1.96；預(yù)測(cè)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差分別是4.64%、550%和4.88%；滿足葉片分析測(cè)量的要求。 3.3 儀器波長(zhǎng)誤差對(duì)測(cè)量的影響研究用635、625和610 nm 3個(gè)波長(zhǎng)所建立的模型，當(dāng)測(cè)定樣品時(shí)儀器波長(zhǎng)發(fā)生偏移對(duì)測(cè)量結(jié)果的影響。當(dāng)波長(zhǎng)偏移0.1 nm、0.2 nm、0.5 nm、1 nm時(shí)引起的相應(yīng)測(cè)量誤差如圖5所示。從圖中可以看到，波長(zhǎng)偏差0.1 nm，0.2 nm，葉綠素a、葉綠素b的RSD 值變化將近到達(dá)50%，對(duì)SPAD值測(cè)量

15、的影響雖不如葉綠素a、葉綠素b明顯，但是當(dāng)波長(zhǎng)偏移超過(guò)0.2 nm時(shí)，影響也很大，所以葉綠素的測(cè)量對(duì)儀器的波長(zhǎng)準(zhǔn)確性要求很高。3.4 儀器帶寬變化對(duì)測(cè)量的影響利用帶寬6 nm這組光譜數(shù)據(jù)，用635、625以及610 nm 個(gè)波長(zhǎng)建立的模型，預(yù)測(cè)在儀器帶寬為2、4、8、10 nm下測(cè)量的相應(yīng)樣品，結(jié)果如圖6所示。從圖中可以看到預(yù)測(cè)2、4 nm帶寬樣品的誤差較小，但預(yù)測(cè)8和10 nm帶寬樣品的誤差很大，且?guī)挼淖兓?，?duì)葉綠素a、葉綠素b的影響要大于對(duì)SPAD值的影響。說(shuō)明當(dāng)儀器帶寬變大時(shí)會(huì)引起較大的測(cè)量誤差，而儀器帶寬變小時(shí)，對(duì)測(cè)量影響不大。 圖5 波長(zhǎng)變化對(duì)測(cè)量的影響（略）Fig. Predic

16、tion RSD of the models with these wavelengths changing圖 6 nm帶寬下建立的模型用于其它帶寬的測(cè)量結(jié)果（略）Fig. rediction RSD of the models at 6 nm with bandwidth changingReferences1 Peng Yunsheng(彭運(yùn)生), Wang Huaqi(王化琪), He Daogeng(何道根). Spectroscopy and Spectral Analysis(光譜學(xué)與光譜分析), 1998, 18(3): 2692722 Arnon D I Plant Physi

17、ol, 1949， 24： 1153 Ji Haiyan(吉海彥), Yan Yanlu(嚴(yán)衍祿)， Feng Xuemei(馮雪梅)， Wang Linghui(王靈慧). Chinese J. Anal. Chem.(分析化學(xué))，1993, 21(8)： 869872（中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)信電學(xué)院，北京 100094） （北京農(nóng)學(xué)院，北京 102206)甘肅農(nóng)科院外源腐胺對(duì)干旱脅迫下小麥葉片滲透調(diào)節(jié)的影響來(lái)源：中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào).-2009，25(09).-148-151作者：趙文才等閱讀次數(shù)：122干旱脅迫誘導(dǎo)植物葉片氣孔關(guān)閉、萎蔫，降低葉綠素和蛋白質(zhì)含量、改變細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能、增加活性氧的含量。在

18、水分脅迫下，礦質(zhì)元素的吸收能力下降，因此，在滲透調(diào)節(jié)中起主要作用的可能是小分子有機(jī)物，如可溶性糖和脯氨酸等。許多研究表明，干旱脅迫下，小麥葉中脯氨酸、可溶性糖等有機(jī)溶質(zhì)增加，參與降低植株體內(nèi)的滲透壓。多胺(polyamine，PA)是一類(lèi)廣泛存在于原核生物和真核生物中的生物活性物質(zhì)，是一類(lèi)低分子脂肪族含氮堿。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者開(kāi)始研究多胺在延長(zhǎng)植物衰老、提高植物抗逆性等方面的作用機(jī)理，而對(duì)干旱脅迫下多胺與植物滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)關(guān)系的研究還未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。因此，筆者研究源腐胺對(duì)干旱脅迫下冬小麥葉片丙二醛含量、質(zhì)膜透性、游離氨基酸含量、脯氨酸含量和可溶性糖含量的影響，旨在探討腐胺提高冬小麥抗旱性的機(jī)理，為

19、干旱區(qū)栽培和育種提供理論依據(jù)。1材料與方法11材料試驗(yàn)于2007年9月2008年5月在河南農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院人工氣候室內(nèi)進(jìn)行，供試材料為冬小麥(Triticum aestivum)品種洛早6號(hào)。種子經(jīng)10次氯酸鈉消毒、蒸餾水沖洗、室溫吸漲12h后，于25恒溫箱中萌發(fā)24h，選露白一致的種子用Hoagland營(yíng)養(yǎng)液在(251)恒溫室盆缽中進(jìn)行水培，每天光照12h，光強(qiáng)4400lx。待小麥幼苗四葉一心時(shí)，選取長(zhǎng)勢(shì)一致的幼苗，進(jìn)行試驗(yàn)處理。12試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)設(shè)3個(gè)處理：CK：Hoagland；T1：Hoagland+15PEG-6000；T2：Hoagland+15PEG6000+100molLP

20、ut；重復(fù)3次。在處理后0、1、2、4、8、24、36、48h，取小麥葉片用于各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定。13方法131丙二醛MDA含量測(cè)定：按趙世杰的方法測(cè)定。132質(zhì)膜透性測(cè)定：膜相對(duì)透性按李錦樹(shù)等的方法測(cè)定。133游離脯氨酸(Pro)含量測(cè)定：用酸性茚三酮法測(cè)定。134游離氨基酸總量(TIA)測(cè)定：按鄒琦的茚三酮法測(cè)定。135可溶性糖(SS)測(cè)定：葸酮比色法測(cè)定。14數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析2. 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel、DPS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析2結(jié)果與分析21外源腐胺對(duì)干旱脅迫下冬小麥葉片丙二醛(A)含量的影響由表1（略）可知，正常條件下(CK)，冬小麥葉片MDA含量變化不大，干旱脅迫處理(T1)和干旱結(jié)合外源腐胺

21、的處理(T2)的MDA含量均顯著高于對(duì)照平(POO1)。干旱脅迫處理(T1)使冬小麥葉片MDA含量變化呈急劇上升趨勢(shì)，脅迫24h達(dá)到最高為2874molg FW，與1h時(shí)相比，增加了的557，達(dá)到極顯著水平(PO01)，是處理(CK)的495倍。而100molL腐胺的處理(T2)中，冬小麥葉片MDA含量隨脅迫時(shí)間延長(zhǎng)呈緩慢上升的趨勢(shì)，但MDA含量顯著低于處理(T1)，在24h達(dá)到最低，僅為干旱脅迫處理(T1)的18。22外源腐胺對(duì)干旱脅迫下冬小麥幼苗葉片質(zhì)膜透性(P)的影響由表1(略)可以看出，在正常供水條件下(CK)，冬小麥幼苗葉片的PMP變幅很小，維持在13左右。干旱脅迫條件下，葉片的PM

22、P都高于對(duì)照，其中干旱脅迫處理(T1)，隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，葉片的PMP顯著增加，48h達(dá)到最高，為41257，是對(duì)照的299倍，達(dá)到極顯著水平(PO01)。結(jié)合外源腐胺的處理(T2)，葉片的PMP在脅迫后4h最高，比對(duì)照提高34，達(dá)到顯著水平(PO05)，脅迫后36h，葉片的PMP最低，僅為干旱處理(T1)的l55。說(shuō)明外源腐胺顯著抑制了冬小麥幼苗葉片質(zhì)膜透性的增加。23外源腐胺對(duì)干旱脅迫下冬小麥葉片中可溶性糖(SS)含量的影響可溶性糖含量的增加被普遍看作是植物對(duì)水分脅迫的種適應(yīng)機(jī)制。試驗(yàn)結(jié)果表明(表2)，與對(duì)照相比，干旱脅迫各處理的可溶性糖含量均顯著增加(P005)。脅迫4h，干旱處理(T

23、1)可溶性糖含量達(dá)到2713mgg，與CK相比提高33，達(dá)到極顯著水平(PO01)，4h后，干旱處理的緩慢下降，但仍高于對(duì)照；結(jié)合外源腐胺處理(T2)，可溶性糖含量逐漸上升，在48h達(dá)到2978mgg，是處理(T1)的173倍，達(dá)顯著水平(P005)。24外源腐胺對(duì)干旱脅迫下冬小麥葉片脯氨酸(Pro)含量的影響脯氨酸的積累是對(duì)水分脅迫的一種適應(yīng)。從表2（略）可知，正常處理(CK)條件下，小麥葉片中Pro含量約為1030gg，干旱脅迫下(T1)，冬小麥幼苗葉片的Pro含量在lh時(shí)，達(dá)到50546gg，是對(duì)照的307倍，達(dá)顯著水平(P005)，此后，隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，Pro含量迅速降低，48h時(shí)

24、最低為16155g，僅為對(duì)照的58。處理(T2)，冬小麥幼苗葉片的Pro含量與對(duì)照相比顯著提高(P0O1)，脅迫后8h達(dá)到212562gg，是對(duì)照的l626倍，干旱脅迫處理(T1)的95倍。表明外源腐胺可通過(guò)提高冬小麥葉片中Pro含量，降低滲透勢(shì)，緩解干旱對(duì)冬小麥的傷害，同時(shí)也表明，干旱脅迫條件下葉片脯氨酸含量可以作為抗旱性指標(biāo)。25外源腐胺對(duì)干旱脅迫下冬小麥葉片中游離氨基酸(TFA)含量的影響正常條件下，冬小麥幼苗葉片中TFA的含量維持在較低的水平(表2略)。干旱脅迫下(T1)，冬小麥幼苗葉片游離氨基酸含量顯著增加。脅迫后1h，葉片中TFA的含量是對(duì)照的178倍，脅迫后24h，葉片中TFA的

25、含量與對(duì)照相比，增加了115，達(dá)極顯著水平(P0O1)。外源腐胺處理(T2)，干旱脅迫4h后，葉片中TFA的含量是對(duì)照的178倍，脅迫后24h，葉片中TFA的含量與對(duì)照相比，增加了115，達(dá)極顯著水平(P0O1)。外源腐胺處理(T2)，干旱脅迫4h后，葉片中TFA的含量與對(duì)照相比極顯著增加(P001)，是對(duì)照的279倍：脅迫8h后，Pro/FA為01789。這表明，干旱脅迫下，葉片脯氨酸含量占的比例越大，冬小麥抵御干旱的能力越強(qiáng)，外源腐胺處理顯著提高了脯氨酸所占的比例，提高了冬小麥的抗旱性。26干旱脅迫下冬小麥幼苗葉片有機(jī)滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)與丙二醛(MDA)含量及質(zhì)膜透性(PMP)的相關(guān)性由表3（略

26、）可見(jiàn)，處理(CK)的MDA含量與可溶性糖、脯氨酸和游離氨基酸含量為正相關(guān)關(guān)系，干旱處理(T1)的MDA含量與游離氨基酸和可溶性糖含量呈正相關(guān)關(guān)系，而脯氨酸含量與MDA含量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，且達(dá)到顯著水平。干旱結(jié)合外源腐胺處理(T2)的MDA含量與脯氨酸含量為正相關(guān)關(guān)系，且相關(guān)性達(dá)到顯著水平，而與可溶性糖含量呈正相關(guān)關(guān)系。而對(duì)PMP來(lái)說(shuō)，處理(CK)的PMP與可溶性糖含量為正相關(guān)關(guān)系，而與脯氨酸、游離氨基酸的含量呈負(fù)相關(guān)。干旱處理(T1)的PMP與脯氨酸、游離氨基酸含量呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系，而與可溶性糖含量呈正相關(guān)關(guān)系，但未達(dá)到顯著水平。結(jié)合外源腐胺的干旱處理(T2)的PMP與可溶性糖、脯氨酸含量為負(fù)

27、相關(guān)關(guān)系，且相關(guān)性不顯著，而與游離氨基酸含量呈正相關(guān)關(guān)系。3討論干旱脅迫打破了植物體內(nèi)活性氧產(chǎn)生和清除的平衡，造成活性氧的積累，而作為膜脂過(guò)氧化產(chǎn)物的MDA能損傷細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能，直接導(dǎo)致質(zhì)膜透性升高。干旱脅迫處理的MDA含量從處理的第4小時(shí)開(kāi)始均極顯著高于對(duì)照，最高分別達(dá)對(duì)照的495倍，PMP從處理的第1小時(shí)開(kāi)始均極顯著高于對(duì)照，最高分別達(dá)對(duì)照的299倍。說(shuō)明干旱脅迫處理引發(fā)了小麥幼苗的膜脂過(guò)氧化作用。同時(shí)，脅迫后1-2h，冬小麥幼苗葉片可溶性糖、游離氨基酸、脯氨酸含量分別是對(duì)照的133，177，307倍，相關(guān)性分析表明，干旱脅迫處理的脯氨酸含量與MDA含量呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系(P001)，這

28、說(shuō)明，干旱脅迫前期，冬小麥感受干旱信號(hào)，通過(guò)應(yīng)激反應(yīng)提高滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量，降低葉片細(xì)胞水勢(shì)，緩解干旱對(duì)冬小麥的傷害。但滲透調(diào)節(jié)作用有一定的局限性，隨著脅迫環(huán)境的延續(xù)，會(huì)使植物體滲透調(diào)節(jié)能力降低或喪失。筆者也證明了這一點(diǎn)，脅迫4h后，干旱脅迫超過(guò)了傷害閾值，導(dǎo)致膜脂中不飽和脂肪酸被氧化，膜的完整性受到破壞，從而使小麥葉片受到傷害。許多研究表明，外源多胺緩解干旱脅迫下作物葉片膜脂過(guò)氧化和提高作物抗旱性。筆者認(rèn)為，外源腐胺處理，葉片的PMP在脅迫后4h最高，比對(duì)照提高34，脅迫36h后，葉片的PMP最低，僅為干旱處理(T1)的155，達(dá)到顯著水平(P005)。說(shuō)明外源腐胺顯著抑制了冬小麥幼苗葉片質(zhì)膜

29、透性的增加，這與段輝國(guó)的研究一致。同時(shí)，外源腐胺處理，無(wú)論是SS、Pro還是TFA，在干旱脅迫48h內(nèi)，均明顯增加其中干旱脅迫后8h，SS、Pro還是ProTFA分別是干旱脅迫處理的135、951、1064倍。外源腐胺可以通過(guò)誘導(dǎo)可溶性糖、游離氨基酸、脯氨酸含量增加，提高冬小麥葉片脯氨酸含量所占的比例，降低滲透勢(shì)。這可能是腐胺提高作物抗旱性的又一途徑。外源腐胺對(duì)小麥根中鹽脅迫引起的氧化損傷的保護(hù)作用 在線閱讀整本下載分章下載分頁(yè)下載 本系統(tǒng)暫不支持迅雷或FlashGet等下載工具【英文題名】The Protection of Exogenous Putrescine to the Oxidative Damage Induced by Salt Stress in Wheat Roots【作者】馬瑛;【導(dǎo)師】畢玉蓉;【學(xué)位授予單位】蘭州大學(xué);【學(xué)科專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)】植物學(xué)【學(xué)位年度】2008【論文級(jí)別】碩士【網(wǎng)絡(luò)出版投稿人】蘭州大學(xué)【網(wǎng)絡(luò)出版投稿時(shí)間】2008-10-31【關(guān)鍵詞】腐胺; 抗氧化酶; 脯氨酸; H_2O_2; NaCl;【英文關(guān)鍵詞】antioxidant enzymes; H_2O_2; NaCl; proline; putrescine;【中文摘要】鹽脅迫是限制農(nóng)作物產(chǎn)量的主要原因之一,多胺在植物對(duì)逆境脅迫的響應(yīng)過(guò)程中起重要作用。本文以小麥(