DNA的粗提取與鑒定.ppt

1、一、實(shí)驗(yàn)原理,DNA在NaCl溶液中的溶解度是隨NaCl的濃度而改變的。DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低，據(jù)此可以使溶解于NaCl溶液中的DNA析出。 DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中某些物質(zhì)可以溶解于酒精溶液，據(jù)此可提取雜質(zhì)較少的DNA。 DNA二苯胺 藍(lán)色物,沸水浴,根據(jù)DNA在NaCl溶液中的溶解度曲線圖，思考在什么濃度下，DNA的溶解度最??？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何變化的,DNA在NaCl溶液中的溶解度曲線圖,在NaCl溶液濃度低于0.14 mol/L時(shí)，DNA的溶解度隨NaCl溶液濃度的增加而逐漸降低；在0.14 mol/L時(shí)，DNA溶解度最小；當(dāng)N

2、aCl溶液濃度繼續(xù)增加時(shí)，DNA的溶解度又逐漸增大,如何通過控制NaCl溶液的濃度使DNA在鹽溶液中溶解或析出,當(dāng)氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 molL時(shí)，DNA的溶解度最大，濃度為 014 molL時(shí)，DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使DNA在鹽溶液中溶解或析出,1.制雞血細(xì)胞液（活雞鮮血經(jīng)分離或沉淀獲得,500mL燒杯中，玻棒攪拌，離心、分離或靜置沉淀,2.提取DNA,取血細(xì)胞5-10mL20mL蒸餾水，用玻棒沿一個(gè)方向快速攪拌,紗布過濾：濾液中含DNA和其他核物質(zhì)，如蛋白質(zhì),提取血細(xì)胞核物質(zhì),溶解核內(nèi)的DNA,濾液2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一個(gè)方向輕緩攪拌,二、實(shí)驗(yàn)步

3、驟,析出含DNA的粘稠物,濾取含DNA的粘稠物,DNA粘稠物的再溶解,在上述溶液中緩緩加入蒸餾水，并沿一個(gè)方向輕輕攪拌，出現(xiàn)絲狀物；當(dāng)絲狀物不再增加時(shí)，停止加水（此時(shí)NaCl溶液的濃度相當(dāng)于0.14mol/L,用多層紗布過濾，含DNA的粘稠物留在紗布上,在20mL燒杯中輕緩攪拌3min，使盡可能多的DNA溶解在NaCl溶液,過濾含有DNA的NaCl溶液,用放有兩層紗布的漏斗過濾步驟所得的溶液，濾液中含有DNA,提取含有雜質(zhì)較少的DNA,步驟所得的濾液體積分?jǐn)?shù)為95%的冷卻酒精50mL，用玻棒沿一個(gè)方向輕緩攪拌，溶液中（析出）出現(xiàn)乳白色絲狀物，用玻棒將絲狀物卷起，并用濾紙吸取上面的水分,3.DN

4、A的鑒定,加入二苯胺試劑4mL，用玻棒攪拌使DNA溶解，沸水浴5min，觀察溶液是否出現(xiàn)淺藍(lán)色,1.共有“三次過濾，兩次析出，七次攪拌,2.加入“兩次蒸餾水，三次NaCl溶液，一次酒精,三、實(shí)驗(yàn)小結(jié),四、實(shí)驗(yàn)原理拓展介紹,1.DNA的釋放,DNA主要在雞血細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)，正常情況下不會(huì)釋放出來，蒸餾水對(duì)于雞血細(xì)胞是一種低滲液，水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞，使之脹破，同時(shí)加上玻璃棒快速攪拌的機(jī)械作用，加速血細(xì)胞的細(xì)胞膜和核膜的破裂。但釋放出來的大量DNA與RNA、蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，即釋放的不是純凈的DNA，常稱為DNA核蛋白,2.DNA與蛋白質(zhì)分離,在高濃度（2mol/L）的氯化鈉溶液中，核蛋白易溶解

5、，析出DNA并溶解在高濃度的氯化鈉溶液中,3.DNA的析出與獲取,因?yàn)镈NA在低濃度（ 0.14mol/L ）的氯化鈉溶液中溶解度小，而蛋白質(zhì)的在其中的溶解度大。所以在向含DNA的高濃度的氯化鈉溶液中加入大量蒸餾水稀釋氯化鈉溶液，從而使DNA溶解度下降，蛋白質(zhì)溶解度增高,4.DNA的再溶解,用高濃度（2mol/L）的氯化鈉溶液再溶解DNA粘稠物,5.DNA的沉淀和濃縮,對(duì)于除去了蛋白質(zhì)的DNA的氯化鈉溶液，必須再進(jìn)一步沉淀和濃縮，常用酒精沉淀法。即往含有Na的DNA溶液，加入體積分?jǐn)?shù)為95%的冷卻酒精，混勻后可以使DNA沉淀、濃縮，形成含雜質(zhì)較少的DNA絲狀物，懸浮于溶液中。若絲狀物較少，可將

6、混合液再放入冰箱中冷卻幾分鐘即可。濃縮后的DNA絲狀物可以用玻棒（玻棒有吸附DNA的作用）緩緩旋轉(zhuǎn)的方法卷起,6.DNA的鑒定,鑒定時(shí)藍(lán)色的深淺與溶液中DNA的含量多少有關(guān),實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象,加入檸檬酸鈉溶液的目的是防止血凝固,加速血細(xì)胞破裂,溶解DNA,使2mol/L的NaCl溶液稀釋至0.14mol/L使得DNA最大限度地釋出,使含DNA的黏稠物被留在紗布上,使含DNA的黏稠物盡可能多的溶解于溶液中,除去含DNA的濾液中的雜質(zhì),提取DNA,A出現(xiàn)藍(lán)色 B無變化,2.實(shí)驗(yàn)中NaCl的物質(zhì)的量濃度為2 molL和0.14 molL對(duì)DNA有何影響,1.在DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)過程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是( )。 A.稀釋血液、沖洗樣品 B.使血細(xì)胞破裂、降低NaCl濃度使DNA析出 C.使血細(xì)胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的DNA,答：B,答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出,3.DNA遇二苯胺(沸水浴)會(huì)染成( ) A.磚紅色 B