作物抗病性鑒定

1、實驗六作物抗病性鑒定作物抗病性鑒定 (evaluation of disease resistance ) 是作物抗病育種的重要基礎，從抗原篩選、后代選擇、直到品種推廣的全過程都離不開抗病性鑒定。狹義的抗病性鑒定是評價寄主品種、 品系或種質對特定病害抵抗或感染程度，廣義的抗病性鑒定還應包括病原物的致病性評價。鑒定方法包括自然鑒定、接種鑒定、田間成株鑒定、室內苗期鑒定、離體鑒定及間接 鑒定等， 在實際工作中則需根據作物、 病害種類， 目的要求和設備條件而定。 常用方法如下：1、田間自然鑒定自然發(fā)病條件下的田間鑒定是鑒定抗病性的最基本方法，尤其是在各種病害的常發(fā)區(qū)，進行多年、多點的聯合鑒定是一種有

2、效方法。它能對育種材料或品種的 抗性進行最全面、嚴格的考驗。田間鑒定的方法因作物種類而異，大田作物的田間鑒定一般 要進行人工接種，接種方法又因病菌而異。對于稻瘟病等氣傳病害，可分別用涂抹、噴霧及2、溫室或田間接種鑒定注射等方法進行接種，以使具有抗接觸、抗侵入等抗病機制的品種也得以發(fā)病。這種方法是將病原菌孢子或病毒直接接種到溫室或田間植株 的葉片、果實或根上，它適合對所有作物進行抗病性鑒定。由于抗病現象是寄主、病原物及(病菌的分離、保存與抱子誘發(fā))及環(huán)境條件三者共同作用的結果，因此，這種鑒定結果也能真實地反映被鑒定材料的抗病性， 可靠性強。接種鑒定的技術規(guī)程包括育苗、接種體的制備 接種 3 個環(huán)

3、節(jié)，接種的方法有點滴法、噴霧法、摩擦法及注射法等。3、離體接種鑒定為鑒定以組織、細胞或分子水平的抗病機制為主的病害，可選用離體接種鑒定。具有操作簡便，鑒定結果可靠等優(yōu)點?？赏瑫r分別鑒定同一材料對不同病原菌 的抗性。因直接從植株上取下子葉、葉片或果實進行鑒定，不影響幼苗正常生長發(fā)育和開花 結實。鑒定方法不僅因作物、病菌種類而異，而且抗病性分級標準也因作物、病原菌的種類 不同而存在很大的差別。以下則針對水稻稻瘟病、 小麥條銹病、 玉米大斑病等部分主要作物的最重要病害分別學 習各種鑒定方法和技術。I 水稻苗瘟抗性的鑒定、實驗目的1、熟悉水稻苗期稻瘟病的癥狀特征。2、學習和初步掌握水稻苗瘟抗性鑒定技術

4、。、內容說明水稻稻瘟病是一種世界性的真菌病害，被列為水稻三大病害之首。水稻稻瘟病具有傳播快、發(fā)生范圍廣、流行頻率高、災變嚴重等特點。在我國水稻各稻區(qū)常年均有不同程度的發(fā)病，給水稻生產帶來極大的損失。稻瘟病原菌（圖6-1 ）為稻梨孢菌(Pyricularic oryzae），無性世代：Pyrcularia grisea Sacc.，半知菌亞門梨孢屬。有性世代：Magnaporthe grisea BarrYaegash，子囊菌亞門。分生孢子梗不分強步生砲子換2-芳里范子 灣：-分生抱子萌找稻瘟病菌枝，從寄主表皮或氣孔伸出，具28個隔膜，基部稍膨大，淡褐色，向上色淡,6-1稻瘟病原菌頂端曲狀，上生

5、分生孢子。 分生孢子無色,洋梨形或棍棒形,常有13個隔膜，基部有腳胞。我國稻瘟病菌有7群43個生理小種，為ZA群、ZB群、ZC群、ZD群、ZE群、ZF群和ZG群，其中ZG小種為優(yōu)勢小種，分布最廣。稻瘟病在水稻整個生育階段皆可發(fā)生,具有為害時間長、侵染部位多和癥狀多樣性等特點。按其為害時期和部位的不同，可分為苗瘟、葉瘟、節(jié)瘟、穗頸瘟和谷粒瘟，其中以穗頸瘟對產量的影響最大。稻株容易感病的生育期是4葉期、分蘗期和抽穗期。品種是稻瘟病發(fā)生和流行的基礎。稻瘟病菌群體大、繁殖快，其高度的變異性使新的生理小種不斷更替出現，導致選育的高抗品種很容易喪失抗性。因此，必須堅持長期研究病原菌的變化，并不斷地選育新的

6、抗病品種。溫度和濕度是影響稻瘟病發(fā)生流行的主要環(huán)境條件，以氣溫為2528 C對菌絲發(fā)育、分生孢子形成最為適宜，相對濕度96%最適合病菌孢子的形成和侵入。陰雨連綿，日照不足或時晴時雨，或早晚有云霧或結露條件，病情擴展迅速。光照對孢子形成、萌發(fā)及侵入都有抑制作用，缺氧時孢子不能萌發(fā)。在飽和濕度和適溫條件下，病菌侵入稻葉后經4d的潛育期就可出現病斑。偏施過施氮肥有利發(fā)病。放水早或長期深灌根系發(fā)育差，抗病力弱發(fā)病重。稻瘟病的抗性鑒定方法可分自然誘發(fā)鑒定和人工接種鑒定兩種。其中人工接種鑒定根據菌株的接種方式不同，又可分為： 抗譜測定，即多個菌株單個接種； 多個菌株混合接種。自然誘發(fā)鑒定適于苗瘟、葉瘟穗、

7、頸瘟和枝梗瘟鑒定，人工接種鑒一般適于對苗瘟和葉 瘟的鑒定。一般來說，苗瘟與穗瘟有極顯著正相關，因而抗瘟性鑒定常采用苗期人工接種鑒 定。但人工接種鑒定時，一般應用多個種群代表小種的混合菌種，以增加鑒定準確性和普遍 性。三、材料儀器藥品1供試材料 供試水稻育種材料若干以及抗病對照品種和感病對照品種各一個。 供試稻瘟病菌菌種 從當地搜集分布廣、致病力強的主要稻瘟病菌的代表性生理小 種若干個。分別進行小種培養(yǎng)繁殖。2儀器用品 病菌培養(yǎng)器具 高壓滅菌鍋、超凈工作臺、酒精燈、恒溫培養(yǎng)箱、三角瓶（或茄子 瓶 ） 、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、搪瓷盆、紗布等。 菌液接種和制備器具 顯微鏡、載玻片、蓋玻片、搪瓷盤、普通專用

8、噴霧器或醫(yī)用 喉頭噴霧器、醫(yī)用皮下注射器、橡膠管和保溫、保濕的遮蔭設備。3病菌培養(yǎng)基 酵母淀粉瓊脂培養(yǎng)基（酵母2g、可溶性淀粉10g、瓊脂1520g，加水1000ml ）。 大麥或高粱種子。四、方法步驟一）人工接種鑒定1 菌種制備 將供試稻瘟病菌菌種各生理小種分別培養(yǎng)，混合接種。2病原菌培養(yǎng)繁殖 培養(yǎng)方法包括一級培養(yǎng)繁殖和二級培養(yǎng)繁殖兩個步驟： 一級培養(yǎng)繁殖 采用酵母淀粉瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)。 方法為：將瓊脂 1015g 放入 1000ml水中加熱溶化，再加可溶性淀粉（或煎糖）10g,酵母2g，裝入試管，經消毒滅菌后，取出制成斜面，接種病原菌，放在2628 C恒溫箱中培養(yǎng) 10d左右即可取用。24h

9、,然后倒去多余的水分, 二級培養(yǎng)繁殖 將病原菌轉移到大麥（或高粱）粒培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)擴大繁殖，用 于接種鑒定。 其方法是將大麥粒加水后煮到半熟狀態(tài)或用水浸泡 裝入三角瓶內（或茄子瓶） ，高壓滅菌，滅菌后立即將麥粒搖散防止結塊。然后在無菌操作條件下接種病菌，放在2628 C恒溫箱內培養(yǎng)。培養(yǎng)45d時應搖動三角瓶內的大麥粒，使菌絲生長均勻。待灰色菌絲長滿大麥粒并開始變黑時，用自來水沖洗大麥粒上的菌絲，隨后攤放薄層于搪瓷盤中，盤上覆蓋12層紗布以保濕，置于2528 C變溫條件下培養(yǎng)2d左右,即可見到麥粒上產生大量灰色的分生孢子，就可供接種使用。擴大繁殖時，應注意搪瓷盤內 的濕度不宜過高，否則只長菌絲

10、，較少產生分生孢子。3育秧 前期準備 每個盤中同時安排感病和抗病品種作對照。將各供試水稻材料的種子進行粒選，各取 3040 粒種子，經消毒、沖洗、催芽后準備播種。 培育方法 在盛有肥沃泥土的搪瓷盤中育秧。幼苗 2 葉期定株，每個材料選留 10 株生長一致的秧苗。定株后酌施 23 次氮肥，最后一次施氮肥應在接種前34d 施用，使幼苗生長嫩綠。如采用注射接種鑒定法，可在秧田中育秧，移植于大田后進行接種鑒定。4接種 噴霧接種般在 34葉期。日平均氣溫2528 C和陰雨高濕,葉面長時間（ 12h分別配以上）常有水珠的時期接種，最有利于發(fā)病。具體步驟是： 將產生不同病菌小種孢子的大麥粒放入盛有自來水的燒

11、杯中攪拌，2025 個（孢密度則制成孢子懸浮液，用 100 倍顯微鏡檢孢子密度，平均每個視野應有孢子為 2025 萬個 /ml ）。然后將不同生理小種的孢子懸浮液混合，用于接種。采用專用噴霧器噴霧接種。噴霧時要將葉片充分均勻濕潤。接種后，在2628 C下，用薄膜覆蓋保濕24小時。然后移至室外，在 2030 C下保持高濕，培養(yǎng)7天，進行病情鑒定。 注射接種： 一般在水稻67 葉期分蘗進行， 接種的分蘗必須有一張未展開的嫩心葉。將按上述方法配制好孢子懸浮液，使用醫(yī)用皮下注射器從葉鞘外側注入孢子懸浮液，直到多余菌液從心葉中冒出為止。接種后7d 調查植株的發(fā)病情況。二）自然誘發(fā)鑒定該方法適于多霧天氣和

12、陰雨的條件下的稻瘟病重病區(qū)，可種植鑒定材料， 采用自然誘發(fā)抗病鑒定。1020 叢，可移栽或直播，重具體操作：將鑒定材料種植在重病區(qū)肥沃土壤上，施氮水平略高于當地豐產田。如有必 要可進行人工田間接種，以誘導發(fā)病。每個鑒定材料一般栽植復三次。以當地抗、感品種作對照。在鑒定區(qū)周圍應種植若干行咸感病的品種作誘發(fā)行，以增加感染強度。保持高濕條件。（三）病情鑒定般是接種后 7d即進行病情鑒定，或當感病對照品種達到高度發(fā)病時調查。并按全國水稻稻瘟病抗病性鑒定分級標準（見表6-1）逐株鑒定和記載,表6-1苗瘟和葉瘟抗性分級標準級另U抗性類型癥狀R抗病葉片上未見病斑或產生針頭狀或稍大褐點M中抗葉片上產生圓形或橢

13、圓形病斑，中間灰白色，邊緣黃褐色，病斑大小在兩葉脈之間，病斑直徑在3mm以內S感病葉片上產生典型梭型病斑，中心灰白色，邊緣黃褐色，病斑超過兩條葉脈間的寬度然后用加權法求其平均病級。宀卜圭+匕舷Z （各級病株數X各相應病級數）鑒定總株數X最高病級數病情指數=6-2 )。國際水稻研究所采用10級制稻瘟病抗性分級標準（見表表6-2 苗葉瘟抗性分級標準（IRRI ）病級受害情況抗性水平0葉上無病斑高抗（HR）1病斑為針頭大小的褐點抗（R）2褐點稍大3圓形至橢圓形的灰色病斑，邊緣褐色，病斑直徑12mm中抗（MR ）4梭形病斑，長 12cm，通常局限于兩條葉脈間，受害面積不超過葉面積的2%5梭形病斑，受害

14、面積不超過葉面積的10%感( MS )6梭形病斑，受害面積為葉面積的1125%7梭形病斑，受害面積為葉面積的2650%感（S）8梭形病斑，受害面積為葉面積的5175%9全葉枯死高感（HS）五、實驗作業(yè)100倍顯微1.分組進行稻瘟病的苗期人工噴霧接種鑒定。先配制病菌孢子懸浮液，在鏡下檢查孢子液濃度，即檢查 3 個視野內的孢子數，明確是否符合所要求的孢子懸浮液。2進行噴霧接種和噴霧接種后的保溫、保濕和遮光等管理工作。3接種 7d 后，進行發(fā)病情況檢查，確定供試水稻品種的抗性。4水稻抗瘟性鑒定應注意哪些問題II小麥條銹病抗性鑒定、實驗目的1、熟悉小麥條銹病的癥狀特征。2、學習和初步掌握小麥條銹病抗性

15、鑒定技術。、內容說明小麥銹病俗稱黃疸、麥疸等，分條銹病、葉銹病和稈銹病三種，其中條銹病是我國發(fā)生范圍最廣、危害最重的麥類病害，一般減產25%75% ，也是東北地區(qū)限制小麥增產的主要因素。小麥條銹病主要發(fā)生在葉片上，其次為葉鞘和莖上，穗部穎殼和莖上也可發(fā)生。癥狀 如圖 6-2 。病原菌為條形柄銹菌 （ Puccinia striiformis West ），擔子菌亞門柄銹菌屬。 夏孢子球形或卵圓形，淡黃色，尺度為1828微米X 1824微米，壁厚l2微米，表面有微刺，發(fā)芽孔排列不規(guī)則 （如圖 6-3 ）。冬孢子梭形或捧形， 雙細胞， 橫隔處有纜縮， 頂端平截或略圓， 褐色，6-4）。下端色淺，尺

16、度為 3053微米X 1220微米，頂端壁厚 35微米，具短柄（如圖圖6-2條銹病癥狀圖6-3條銹病夏抱子堆圖6-4條銹病冬抱子堆條銹病的發(fā)生流行，取決于小麥品種的抗病性、菌源和菌量及氣候條件。選育和栽培抗銹品種是防治小麥銹病危害的一項最基本、最有效的措施，近幾年來，隨著小麥群體多樣化的實施，具有累加毒性、毒性譜更寬的條銹病菌新的毒性小種的不斷產生和發(fā)展，許多小麥高抗品種逐漸喪失其抗病性，使我國大面積小麥生產品種而臨嚴重的抗性危機。從事小麥育種工作必須掌握對銹病抗性的鑒定方法。小麥品種抗條銹病的表現形式,按其對條銹菌的?；杂袩o，可以劃分為?；钥剐院头菍；钥剐詢纱箢?。專化性抗性主要表現為過

17、敏性的壞死反應,非?；钥剐砸话惚憩F為抗接觸、抗侵入、抗擴展以及除過敏性反應以外的其它生理生化抗病特性。銹病的發(fā)生受到小麥材料的抗病能力、病原物的致病力和發(fā)病環(huán)境的影響,銹病在自然條件下，并非每年每地均嚴重發(fā)生。因此，在進行抗銹病育種時，除在發(fā)病的麥田中進行直 接鑒定外，還必須人工接種鑒定，如采用苗期鑒定和成株期鑒定。一般來說苗期抗病的品種 大多數成株期仍然表現抗病，變?yōu)楦胁〉闹徽己苄”壤?，因此苗期鑒定有重要意義。幼苗鑒定在溫室中進行，于充分發(fā)病后進行鑒定。成株期鑒定一般在田間進行。因小麥條銹病的危害主要在成株期， 故鑒定結果最能反應出生產需要。成株期抗性鑒定在一些條銹病常年發(fā)生較重的地區(qū)可以

18、依靠自然發(fā)病,但為了保證充分發(fā)病得到可靠的結果,也有必要進行人工接種。本實驗將選用苗期鑒定和成株期鑒定兩種人工接種鑒定。三、材料儀器1.供試材料 小麥育種材料、感病對照品種、抗病對照品種；供試條銹病菌種（選用致病力強、分布廣的不同生理小種）。2 .儀器用具小花盆、試管、培養(yǎng)皿或燒杯、蒸餾水、接種針、玻棒、保濕桶、注射 器、噴霧器、塑料薄膜等。四、方法步驟便于鑒定不一） 幼苗接種 該方法可在較短的時間內測定大量材料對銹病的抗病性，同小麥品種對不同銹病生理小種的抗病性，能防止當地未發(fā)現而外地己存在的新的生理小種810cm的傳播。1 育苗 在接種鑒定前 10d 左右，將待鑒定的小麥品種的種子，播種于

19、直徑為左右的小花盆內。每盆播種 23 個品種，其中一個品種為易感病的誘發(fā)品種，以用作對照。各品種要相互隔開，插上木簽，注明品種名稱及播種日期等。2接種時間接種適宜時間是在麥苗第一片葉子長達45cm 時。3采集孢子在溫室培養(yǎng)的發(fā)病植株上，按不同生理小種分別采集新鮮孢子粉，將試管傾斜套進麥株病葉，再輕輕震動，使已成熟的孢子落于管內，達到要求量即可。4 孢子懸浮液的配制 采集不同生理小種的新鮮孢子粉，分別在玻璃杯內用蒸餾水稀釋至孢子懸浮液透光呈桔黃色即可。如果采取混合接種， 則各小種的孢子粉事先應等量混合，而后配成孢子懸浮液，現配現用。5 接種方法般可用的接種方法有涂抹、噴霧、噴粉等方法，第一種方法

20、主要在繁殖少量菌種或接種少量鑒定材料時應用，后兩種方法適于對大量材料的接種鑒定。但一般常用的是涂抹接種法。具體操作是： 用潔凈的手指蘸清水將麥苗的葉片摩擦數次，去掉葉片表面的蠟質和茸毛，以利于菌液吸附于葉面上。 用消毒過的接種針蘸上配制好的孢子懸浮液，涂抹于麥葉正面進行接種。然后記錄并在木簽上注明接種日期及所用菌種。 接種后把麥苗隨即放入保濕桶中（即用一鐵皮桶，其內盛水，保持99%100%濕度），再用噴霧器噴降水霧，令麥苗和保濕桶的內壁沾滿霧滴。噴霧不能過量，以防沖掉已接種的銹病孢子。 噴霧后，馬上蓋嚴塑料薄膜， 把保濕桶放置在適宜的溫度條件（最適溫度為913 C）下，保濕階段經 24h 左右

21、。 將麥苗取出，移至陽光充分的溫室內，平均溫度最好分別控制在1618 C,光照時間每天應不少于 1 2h ，冬季光照不足，需每天增加一定時間的人工輔助光照。溫度和光照掌握的好壞是發(fā)病充分與否的關鍵。 經兩周后麥苗即可發(fā)病，此時即可鑒定品種的抗病力。注意：在分別接種不同生理小種進行鑒定時，接種用的一切用具都要先行消毒，防止可能發(fā)生的污染影響鑒定結果。二）成株接種1 材料種植 把每個被鑒定材料采用凹穴播種法種成一個小區(qū)，在鑒定材料圃的四周和在鑒定區(qū)內每當隔1020個小區(qū)播種高感品種做為誘發(fā)行。誘發(fā)行最好用 24個高感品種等量混合播種。2 接種時間接種條銹病的適宜時間，通常是在小麥拔節(jié)前后。3 .孢

22、子采集條銹菌配制孢子懸浮液方法同幼苗接種。4 .接種方法1m左右選取單莖 35規(guī)分級法表示， 能較好地反映出品種免疫性的本質。目測評定，其反應型新標準采用 9級制,般可用的接種方法有涂抹、注射、噴霧、噴粉等方法，但最常用的是 注射接種法:選擇夜間有露傍晚進行。為了提高田間濕度，接種后和開始發(fā)病后，在誘發(fā)行上用清水 噴霧，或澆水，保證良好的誘發(fā)條件。將配制好的孢子懸浮液吸入注射器在感病誘發(fā)行植株 的第二可見（從上數）葉片與葉鞘相接處將針頭傾斜刺入，切勿刺穿，再稍稍回抽，即行注 射孢子液，以見到心葉上端冒出水珠為度。在誘發(fā)行接種，一般每隔 個予以注射35針。隨即用塑料薄膜覆蓋保濕，次日早晨揭開。（

23、三）抗銹性鑒定觀察與記載衡量小麥品種對銹病的抗性和發(fā)病程度，常用反應型、普遍率及嚴重度三個指標。 反應型是指小麥植株受病菌侵染后的保衛(wèi)性反應。是一種定性的記載標準，用常其分級標準如表6-3。表6-3小麥品種對條銹菌反應型的分級標準別抗性程度0免疫型1近免疫型3高抗型5中抗型7中感型9高感型級葉片健康，沒有病害癥狀品種反應的癥狀葉片上有點滴枯死斑和失綠反應，但無夏抱于堆葉片夏抱子堆很小且很少，抱子周圍有褪綠和枯死斑夏抱子堆小到中等，較分散，周圍有枯死和失綠反應夏抱子堆中等大小，數量較多，周圍組織無枯死反應，但有失綠現象夏抱子堆大而多，連成條紋，串連成片，早期葉片既無枯死也無褪綠現象100%。一般

24、在田間銹病發(fā)展到高峰期時進行鑒定，記載時在1m行中隨機取3點，每點記載1030片頂三葉嚴重度即病葉上孢子堆占葉面積的百分率，用以表示病害發(fā)生的嚴重程度。用分級法表示。一般可分8 級，即 1%、5%、10%、25%、40%、65%、80%、的實際嚴重度，求平均嚴重度。一般用普遍率指病害發(fā)生的普遍程度，即發(fā)病葉片數占調查總葉片數的百分率。目測估計法觀測記載。要求精確鑒定時，可根據被鑒定材料小區(qū)面積的大小，可設點隨機選 取3050片葉觀察記載。此外，還應觀察銹菌的潛育期。即銹菌從侵入和建立寄生關系到表現明顯的癥狀為止的時期。潛育期的長短與品種的抗病性有密切的關系,即使同一品種對不同生理小種以及在不1

25、1d后開始，每同溫度下其潛育期也不同，因而可用來作為鑒定的一種指標。接種后一般從天在接菌圃中逐品種檢查一次以某一品種有50%頂三葉上孢子堆破裂為標準，記載日期，推算潛育期。在正常情況下，接種后約經兩星期即可發(fā)病，抗銹性的病情鑒定時間是小麥乳熟期以后,田間銹病發(fā)展到高峰時進行。每個品種逐個進行鑒定記載。鑒定小麥品種的抗銹性應以鑒定 反應型為主，并目測鑒定普遍率和嚴重率。鑒定雜種后代只鑒定反應型。均按上述分級標準 進行評定。五、實驗作業(yè)1.采集條銹病菌新鮮孢子和配制其孢子懸浮液，并按分配任務進行注射接種和做好接種后的田間管理工作。2. 小麥條銹病發(fā)病條件是哪些？在人工接種時怎樣保證這些條件？接種鑒

26、定抗性過程中，容易出現哪些問題干擾鑒定結果?3. 發(fā)病盛期對供鑒材料的抗病性進行鑒定，并對抗性進行綜合評價分析。將觀察結果填寫表6-4。表6-4小麥條銹病抗病性鑒定結果記錄品種反應型嚴重度普遍率潛育期III玉米大斑病抗性鑒定、實驗目的本實驗將學習和初步掌握玉米大斑病抗性鑒定技術:1.玉米大斑病的主要癥狀特征觀察2.玉米大斑病的接種辦法3. 玉米大斑病的病情與抗性級別鑒定、內容說明玉米大斑病( Helmin thos porium turcicum )在中國分布廣泛，主要發(fā)生在氣候較涼爽的玉米種植區(qū),是東北玉米主要病害之一，發(fā)生嚴重。大斑病菌主要侵染玉米葉片、苞葉和葉鞘。病害主要發(fā)生在玉米抽雄以

27、后，下部葉片首先發(fā)病并迅速向上部葉片擴展。發(fā)病初期，葉片上出現水漬狀青灰色斑，向兩端擴展，形成黃褐色梭形或長紡錘形大斑(如圖6-5)，影響植株光合作用，造成籽粒灌漿不足，導致產量降低，嚴重時全株枯死，造成嚴重損失。圖6-5玉米大斑病典型病斑病原菌為大斑突臍孢菌Exserohilum turcicum (P ass.)Leonard et Suggs。有性態(tài):大斑剛毛球腔菌Setos phaeriaSuggs。世界已知病原菌有5turcica (Luttrell) Leonardet個生理小種，我國已發(fā)現其中3個，分別為0號小種，1號小種，23號小種。0號和1小種是我國主要玉米產區(qū) 的優(yōu)勢小種。

28、抗病育種是防治大斑病最經濟有效的措施。玉米對圖6-6玉米大斑病原菌大斑病抗性表現亦分兩種：一是由多基因控制，表現不同程度的病斑數； 一是由單基因控制,產生抗性病斑,表現褪綠病斑或褪綠斑點甚至無病斑。玉米對斑病抗性水平鑒定和評價是一項專業(yè)性強、技術性高的工作，包括一系列的內容。只有在具備適宜的病原菌、適宜的病害發(fā)生環(huán)境以及能夠較準確反映寄主抗性本質的評價指標的條件下，玉米品種的抗性水平才能得以真實反映?？共⌒澡b定的各個步驟都影響著植株抗性的表達程度和表達真實性。科學、準確地開展玉米的抗病特性鑒定和抗性評價，是正確 評價種質的抗性、在育種過程中合理選擇和聚合抗性、在生產中充分利用抗性的重要基礎。接

29、種時期的選擇，最佳的接玉米抗病性鑒定程序主要包括主要生理小種病原菌的準備, 種方法、抗病性鑒定圃的設立、田間調查觀察與記載等步驟和內容。鑒定玉米育種材料抗大斑病的方法有自然誘發(fā)鑒定，大田誘發(fā)鑒定和人工接種鑒定。 但以人工接種鑒定較為可靠。三、材料儀器藥品1供試材料玉米抗病和感病對照材料，玉米大斑病菌種（1 號生理小種） 。2儀器用具高壓滅菌鍋、超凈工作臺、酒精燈、接種環(huán)、恒溫箱、燒杯、漏斗、試管、紗布、玻璃棒、培養(yǎng)皿、顯微鏡、小噴霧器、保濕罩等。3藥品試劑75%酒精、 0.1%升汞溶液、葡萄糖、瓊脂、馬鈴薯等。四、方法步驟一）人工接種 病原菌的分離1菌種的培養(yǎng)選取新鮮病葉作為分離材料，在滅菌室

30、內進行操作。先將病斑剪成45mm 2大小，約 3040 塊，然后分別將病組織小塊置于 0.1%升汞溶液中消毒 1min ，立即取出，按無菌操作方法投入無菌水中清洗三次，每次23 min 。最后以無菌操作方法，將病斑組織按正方形四點排列，栽種在PDA平板培養(yǎng)基（去皮馬鈴薯20g，葡萄糖1020g，瓊脂1720g，水100ml）上，置2530 C溫箱中培養(yǎng)約 7d。 菌種的純化 選取培養(yǎng)性狀典型的菌落，按無菌操作方法移植到斜面培養(yǎng)基上（每個典型菌落移 3管），然后再放在 25C恒溫下培養(yǎng)。待產生孢子后，選取菌落較一致的斜面12 管，挑取一點，觀察孢子的形狀、分隔數、臍點特點。然后計測孢子大小。確認

31、純種后，再用斜面培養(yǎng)基擴大培養(yǎng)，讓其產生大量孢子后，置冰箱中保存待用。2孢子懸浮液的制備 將培養(yǎng)物用少量蒸餾水洗下孢子，用紗布濾去菌絲及培養(yǎng)基，濾液用蒸餾水稀釋，調至在 100倍顯微鏡下每個視野 1 0個孢子左右為宜。3接種時期苗期接種一般在玉米苗齡 58 葉時進行；成株期接種在抽雄前進行。4接種方法 苗期接種接種前在孢子液中加入2%蔗糖，以促進孢子萌發(fā)。接種菌液量是每株12cm。用微型噴霧器均勻噴霧，噴后立即覆蓋保濕罩，在22C左右保濕 24h。成株期接種將粉碎的頭一年病葉撒入心葉喇叭口，接種應在下午或傍晚濕度較大 時進行。天氣干燥時，接種后可在每株心葉噴水。（二）病情鑒定和分級標準1 .苗期鑒定及標準接種后12d左右進行病情鑒定，鑒定應在同一天內完成。鑒定項 目和標準如下:發(fā)病程度