噬菌體展示總結(jié)技術(shù)

1、xx年X月X日精品范文-噬菌體展示總結(jié)技術(shù)_工作總結(jié)最近發(fā)表了一篇名為噬菌體展示總結(jié)技術(shù)的范文，感覺很有用處，希望對(duì)網(wǎng)友有用。（文章一）：噬菌體展示技術(shù)噬菌體展示技術(shù)關(guān)鍵詞： 噬菌體展示 組裝 融合蛋白 2xx-07-21 00:00 互聯(lián)網(wǎng) 點(diǎn)擊次數(shù)：3662 噬菌體展示技術(shù)是將外源蛋白或多肽的DNA序列到噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置，使外源基因隨外殼蛋白的表達(dá)而表達(dá)，同時(shí),外源蛋白隨噬菌體的重新組裝而展示到噬菌體表面的生物技術(shù)。到目前為止，人們已開發(fā)出了單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng)、噬菌體展示系統(tǒng)、T4噬菌體展示系統(tǒng)等數(shù)種噬菌體展示系統(tǒng)。本文主要概述了噬菌體展示技術(shù)的基本原理、噬菌體展示系統(tǒng)

2、研究以及技術(shù)特點(diǎn)等，并跟蹤了目前該領(lǐng)域的最新研究進(jìn)展和發(fā)展前景。關(guān)鍵詞：噬菌體展示；組裝；融和蛋白xx年，Smith G P1第一次將外源基因絲狀噬菌體f1的基因，使目的基因編碼的多肽以融合蛋白的形式展示在噬菌體表面，從而創(chuàng)建了噬菌體展示技術(shù)。該技術(shù)的主要特點(diǎn)是將特定分子的基因型和表型統(tǒng)一在同一病毒顆粒內(nèi)，即在噬菌體表面展示特定蛋白質(zhì)，而在噬菌體核心DNA中則含有該蛋白的結(jié)構(gòu)基因。另外，這項(xiàng)技術(shù)把基因表達(dá)產(chǎn)物與親和篩選結(jié)合起來，可以利用適當(dāng)?shù)陌械鞍讓⒛康牡鞍谆蚨嚯奶暨x出來。近年來，隨著噬菌體展示技術(shù)的日益完善，該技術(shù)在眾多基礎(chǔ)和應(yīng)用研究領(lǐng)域產(chǎn)生的影響已日漸明顯。（一）、噬菌體展示技術(shù)的原理噬菌

3、體展示技術(shù)是將多肽或蛋白質(zhì)的編碼基因或目的基因片段克隆入噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置，在閱讀框正確且不影響其他外殼蛋白正常功能的情況下，使外源多肽或蛋白與外殼蛋白融合表達(dá)，融合蛋白隨子代噬菌體的重新組裝而展示在噬菌體表面。思想?yún)R報(bào)專題被展示的多肽或蛋白可以保持相對(duì)獨(dú)立的空間結(jié)構(gòu)和生物活性，以利于靶分子的識(shí)別和結(jié)合。肽庫與固相上的靶蛋白分子經(jīng)過一定時(shí)間孵育后，洗去未結(jié)合的游離噬菌體，然后以競(jìng)爭(zhēng)受體或酸洗脫下與靶分子結(jié)合吸附的噬菌體，洗脫的噬菌體感染宿主細(xì)胞后經(jīng)繁殖擴(kuò)增，進(jìn)行下一輪洗脫，經(jīng)過3輪5輪的“吸附-洗脫-擴(kuò)增”后，與靶分子特異結(jié)合的噬菌體得到高度富集2。所得的噬菌體制劑可用來做進(jìn)一步

4、富集有期望結(jié)合特性的目標(biāo)噬菌體。（二）、噬菌體展示系統(tǒng)（2）、1 單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng)（1）P展示系統(tǒng)。絲狀噬菌體是單鏈DNA病毒，P是病毒的次要外殼蛋白，位于病毒顆粒的尾端，是噬菌體感染大腸埃希菌所必須的。每個(gè)病毒顆粒都有3個(gè)5個(gè)拷貝P蛋白3，其在結(jié)構(gòu)上可分為N（1）、N2和CT 3個(gè)功能區(qū)域4-5，這3個(gè)功能區(qū)域由兩段富含甘氨酸的連接肽G1和G2連接。其中，N1和N2與噬菌體吸附大腸埃希菌菌毛及穿透細(xì)胞膜有關(guān)6，而CT構(gòu)成噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)的一部分，并將整個(gè)P蛋白的C端結(jié)構(gòu)域錨定于噬菌體的一端7。P有2個(gè)位點(diǎn)可供外源序列，當(dāng)外源的多肽或蛋白質(zhì)融合于P蛋白的信號(hào)肽(Sg)和N1之間時(shí)，該系

5、統(tǒng)保留了完整的P蛋白，噬菌體仍有感染性；但若外源多肽或蛋白直接與P蛋白的CT結(jié)構(gòu)域相連，則噬菌體喪失感染性，這時(shí)重組噬菌體的感染性由輔助噬菌體表達(dá)的完整P蛋白來提供。P蛋白很容易被蛋白水解酶水解，所以有輔助噬菌體超感染時(shí)，可以使每個(gè)噬菌體平均展示不到一個(gè)融合蛋白，即所謂“單價(jià)”噬菌體。（2）P及其他展示系統(tǒng)。P是絲狀噬菌體的主要外殼蛋白，位于噬菌體外側(cè)，C端與DNA結(jié)合，N端伸出噬菌體外，每個(gè)病毒顆粒有2 700個(gè)左右P拷貝8-9。P的N端附近可融合五肽，但不能融合更長(zhǎng)的肽鏈，因?yàn)檩^大的多肽或蛋白會(huì)造成空間障礙，影響噬菌體裝配2，10-11，使其失去感染力。但有輔助噬菌體參與時(shí)，可提供野生型P

6、蛋白，降低價(jià)數(shù)，此時(shí)可融合多肽甚至抗體片段。此外，尚有絲狀噬菌體P展示系統(tǒng)的研究報(bào)道12。P蛋白的C端暴露于噬菌體表面，可以作為外源蛋白的融合位點(diǎn)，可以用于研究外源蛋白C端結(jié)構(gòu)區(qū)域功能。從所掌握的文獻(xiàn)來看，該系統(tǒng)主要用于cDNA表面展示文庫的構(gòu)建，并取得了不錯(cuò)的篩選效果。（2）、2 噬菌體展示系統(tǒng)（1）PV展示系統(tǒng)。噬菌體的PV蛋白構(gòu)成了它的尾部管狀部分，該管狀結(jié)構(gòu)由32個(gè)盤狀結(jié)構(gòu)組成，每個(gè)盤又由6個(gè)PV亞基組成。PV有兩個(gè)折疊區(qū)域，C端的折疊結(jié)構(gòu)域（非功能區(qū)）可供外源序列或替換。目前，用PV系統(tǒng)已成功展示了有活性的大分子蛋白-半乳糖苷酶（465 ku）和植物外源凝血素BPA（120 ku）等

7、13。噬菌體的裝配在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，故可以展示難以分泌的肽或蛋白質(zhì)。該系統(tǒng)展示的外源蛋白質(zhì)的拷貝數(shù)為平均1個(gè)分子/噬菌體，這表明外源蛋白質(zhì)或多肽可能干擾了噬菌體的尾部裝配。（2）D蛋白展示系統(tǒng)。D蛋白的分子質(zhì)量為11 ku，參與野生型噬菌體頭部的裝配。低溫電鏡分析表明，D蛋白以三聚體的形式突出在殼粒表面13。當(dāng)突變型噬菌體基因組小于野生型基因組的82%時(shí)，可以在缺少D蛋白的情況下完成組裝，故D蛋白可作為外源序列融合的載體，而且展示的外源多肽在空間上是可以接近的。病毒顆粒的組裝可以在體內(nèi)也可以在體外，體外組裝即是將D融合蛋白結(jié)合到D-噬菌體表面，而體內(nèi)組裝是將含D融合基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入D-溶源的大腸埃

8、希菌菌種中，從而補(bǔ)償溶源菌所缺的D蛋白，通過熱誘導(dǎo)而組裝。該系統(tǒng)有一個(gè)很好的特點(diǎn)，噬菌體上融合蛋白和D蛋白的比例可以由宿主的抑制tRNA活性加以控制，這對(duì)于展示那些可以對(duì)噬菌體裝配造成損害的蛋白質(zhì)時(shí)特別有用。（2）、3 T4噬菌體展示系統(tǒng)T4噬菌體展示系統(tǒng)是20世紀(jì)90年代中期建立起來的一種新的展示系統(tǒng)。它的顯著特點(diǎn)是能夠?qū)煞N性質(zhì)完全不同的外源多肽或蛋白質(zhì)，分別與T4衣殼表面上的外殼蛋白SOC（9 ku）和HOC（40 ku）融合而直接展示于T4噬菌體的表面，因此它表達(dá)的蛋白不需要復(fù)雜的蛋白純化，避免了因純化而引起的蛋白質(zhì)變性和丟失。T4噬菌體是在宿主細(xì)胞內(nèi)裝配，不需通過分泌途徑，因而可展示

9、各種大小的多肽或蛋白質(zhì)，很少受到限制。吳健敏等成功地將大小約215 aa SOC/m E2融合蛋白展示于T4噬菌體衣殼表面14。令人值得關(guān)注的是，SOC與HOC蛋白的存在與否，并不影響T4的生存和繁殖。SOC和HOC在噬菌體組裝時(shí)可優(yōu)于DNA的包裝而裝配于衣殼的表面，事實(shí)上，在DNA包裝被抑制時(shí)，T4是雙股DNA噬菌體中唯一能夠在體內(nèi)產(chǎn)生空衣殼的噬菌體（SOC和HOC也同時(shí)組裝）。因此，在用重組T4做疫苗時(shí)，它能在空衣殼表面展示目的抗原，這種缺乏DNA的空衣殼苗，在生物安全性方面具有十分光明的前景14。（三）、噬菌體展示技術(shù)的局限性（1）在噬菌體展示過程中必須經(jīng)過細(xì)菌轉(zhuǎn)化、噬菌體包裝，有的展示

10、系統(tǒng)還要經(jīng)過跨膜分泌過程，這就大大限制了所建庫的容量和分子多樣性。目前，常用的噬菌體展示文庫中含有不同序列分子的數(shù)量一般限制在109。（2）不是所有的序列都能在噬菌體中獲得很好的表達(dá)，因?yàn)橛行┑鞍踪|(zhì)功能的實(shí)現(xiàn)需要折疊、轉(zhuǎn)運(yùn)、膜和絡(luò)合，導(dǎo)致在體內(nèi)篩選時(shí)需外加選擇壓力。例如，在噬菌體展示文庫試驗(yàn)中，由于部分未折疊的蛋白在細(xì)菌中很容易被降解，因此，必須小心控制條件，以保證在噬菌體表面展示的文庫沒有降解。另外，鼠源抗體在噬菌體中表達(dá)差，也是體內(nèi)選擇壓力的一個(gè)例子。真核細(xì)胞蛋白在細(xì)菌中表達(dá)差是因?yàn)樗鼈兊牡鞍踪|(zhì)合成與折疊機(jī)制不同的緣故15。（3）噬菌體展示文庫一旦建成，很難再進(jìn)行有效的體外突變和重組，進(jìn)而

11、限制了文庫中分子遺傳的多樣性。（4）由于噬菌體展示系統(tǒng)依賴于細(xì)胞內(nèi)基因的表達(dá)，所以，一些對(duì)細(xì)胞有毒性的分子如生物xx分子，很難得到有效表達(dá)和展示。（四）、結(jié)語噬菌體展示技術(shù)經(jīng)過近20年的發(fā)展和完善，已成為生命科學(xué)領(lǐng)域的一項(xiàng)重要技術(shù)，廣泛應(yīng)用于抗原抗體庫的建立、藥物設(shè)計(jì)、疫苗研究、病原檢測(cè)、基因治療、抗原表位研究及細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究等16生成過程，構(gòu)建高親和力抗體庫。由于噬菌體展示技術(shù)實(shí)現(xiàn)了基因型和表型的有效轉(zhuǎn)換，使研究者在基因分子克隆基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)了蛋白質(zhì)構(gòu)象體外控制，從而為獲取具有良好生物學(xué)活性的表達(dá)產(chǎn)物提供了強(qiáng)有力手段。另外，噬菌體展示技術(shù)已成為不經(jīng)過免疫獲取特異性人源抗體的新途徑，為獲取對(duì)人類

12、和動(dòng)物疾病有診斷和治療價(jià)值的單克隆抗體提供了重要手段（文章二）：噬菌體展示技術(shù)噬菌體展示技術(shù)王浩11307110047摘要：噬菌體展示技術(shù)可以將目標(biāo)蛋白與噬菌體衣殼蛋白結(jié)合在一起形成融合蛋白，進(jìn)而展示于噬菌體表面。該技術(shù)可以較好地保持被展示蛋白質(zhì)的活性，因而在蛋白質(zhì)研究中發(fā)揮著重要的作用。目前用于構(gòu)建噬菌體展示系統(tǒng)的載體主要有絲狀噬菌體、噬菌體、T4噬菌體和T7噬菌體。這些系統(tǒng)不僅對(duì)構(gòu)建cDNA文庫很有幫助，還可在隨機(jī)短肽文庫的協(xié)助下研究蛋白質(zhì)之間的相互作用。關(guān)鍵詞：噬菌體展示技術(shù)；蛋白質(zhì)；文庫；類型；原理；應(yīng)用xx年，美國Missouri大學(xué)的Smith G P首次證實(shí)絲狀噬菌體fd基因組能

13、通過基因工程手段改造，他把EcoR內(nèi)切酶的部分基因片段與絲狀噬菌體的次要衣殼蛋白p (protein )基因融合，獲得的重組噬菌體能被抗EcoR內(nèi)切酶的1抗體所識(shí)別，由此建立了噬菌體展示技術(shù)(phage displaytechnology)。通過近幾十年的發(fā)展，噬菌體展示技術(shù)已經(jīng)有絲狀噬菌體、噬菌體、T4噬菌體和T7噬菌體等展示系統(tǒng)，這些系統(tǒng)在在新型疫苗的研制、酶抑制劑的篩選、醫(yī)學(xué)診斷和治療、多肽藥物的開發(fā)、蛋白質(zhì)相互作用的研究等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用，并顯示了良好的應(yīng)用前景。（1）、噬菌體展示系統(tǒng)類型（1）、（1）、單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng)單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng)是利用了M13噬菌體獨(dú)特的生命周期

14、及其所表達(dá)的幾個(gè)噬菌體蛋白質(zhì)。它的單鍵DNA基因組由07個(gè)核苷酸殘基組成，編碼10種不同的蛋白質(zhì)，并被包裝于約有27003000個(gè)拷貝數(shù)的基因編碼的蛋白質(zhì)p的蛋白衣殼內(nèi)。而且M13的尾部有一種35個(gè)拷貝的基因編碼的蛋白質(zhì)p。2（1）、（1）、（1）、p展示系統(tǒng)（35個(gè)拷貝）p基因主要編碼病毒的次要衣殼尾絲蛋白。p的可位點(diǎn)很多，所以其為多價(jià)展示系統(tǒng)，但這樣就會(huì)造成蛋白質(zhì)的異促效應(yīng)，不易篩選到高親和力的噬菌體。為了構(gòu)建單價(jià)展示系統(tǒng)，人們將目的基因轉(zhuǎn)入到噬菌粒（噬菌粒是由質(zhì)粒與單絲噬菌體結(jié)合而構(gòu)成的載體系列。它既具有質(zhì)粒的特性和復(fù)制起點(diǎn)，又有噬菌體的特性和復(fù)制起點(diǎn)。3）中。由于噬菌粒沒有噬菌體蛋白而

15、難以形成真正的噬菌體，其需要輔助噬菌體。輔助噬菌體能提供將該DNA復(fù)制并包裝成完整噬菌體所需的蛋白質(zhì)。而由于該輔助噬菌體的復(fù)制起始點(diǎn)很低效，不足以和噬菌粒DNA抗衡，所以轉(zhuǎn)錄出的DNA大多數(shù)仍為噬菌粒DNA。通過在噬菌粒DNA和輔助噬菌體DNA上加上篩選標(biāo)記，人們就可以很方便地篩選出被感染的大腸桿菌。而且不像其他大多數(shù)的噬菌體，M13在感染大腸桿菌后，并不引起宿主細(xì)胞的裂解，而是使宿主細(xì)胞穩(wěn)定地分泌出噬菌體顆粒。通過不斷地進(jìn)行免疫富集篩選，人們就能得到高親和力克隆。4（1）、（1）、（2）、p展示系統(tǒng)（27003000個(gè)拷貝）p基因編碼主要的衣殼蛋白。由于其拷貝數(shù)多，可用于篩選親和力較低的配體

16、。相應(yīng)的，如果用該系統(tǒng)展示較長(zhǎng)肽鏈而形成空間阻礙的話，就有可能影響相關(guān)衣殼蛋白的合成，使得噬菌體失去感染力。（1）、（2）、噬菌體展示系統(tǒng)噬菌體是溫和噬菌體，在其顆粒中，DNA是線狀雙鏈分子帶有單鏈互補(bǔ)末端。末端12個(gè)可互補(bǔ)的核苷酸，稱為粘性末端。當(dāng)噬菌體浸入宿主細(xì)胞后，線狀雙鏈DNA分子借助粘性末端連結(jié)成環(huán)狀分子。在感染早期，環(huán)狀DNA分子進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。在此期間，噬菌體有兩條復(fù)制途徑可供選擇：一是裂解生長(zhǎng)。環(huán)狀DNA分子在宿主細(xì)胞里復(fù)制若干次，合成了大量的噬菌體基因產(chǎn)物，形成子代噬菌體顆粒，成熟后使細(xì)菌裂解，釋放出許多新的有感染能力的病毒顆粒。另一是溶源性生長(zhǎng)。噬菌體DNA整合進(jìn)宿主菌的基因組，

17、然后象細(xì)菌染色體上的基因一樣進(jìn)行復(fù)制，并傳遞給下一代細(xì)菌。5成熟的噬菌體由頭、尾兩部分組成。（1）、（2）、1 D蛋白展示系統(tǒng)D蛋白為噬菌體頭部必需蛋白，其可作為外源序列融合的載體，這種展示一般為N端展示。由于其在噬菌體顆粒表面呈突出狀分布，有利于配體在空間上接近，便于之后的篩選。D蛋白展示的體外組裝途徑是將D融合蛋白結(jié)合到噬菌體表面。體內(nèi)組裝途徑是將含D融合基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入D蛋白缺乏放入菌株中，從而彌補(bǔ)溶源菌所缺的D蛋白；或?qū)⑵湔系降绞删w的基因組中。（1）、（2）、2 展示系統(tǒng)蛋白PV為噬菌體主要尾部蛋白，其C端折疊區(qū)為非必需的，所以可供外源序列而不會(huì)影響其正常的生理功能。（1）、（3）

18、、T4噬菌體展示系統(tǒng)T4噬菌體與噬菌體較為相似，其DNA為雙鏈線形，呈環(huán)狀排列。但其表面包被著2種非必需外殼蛋白：SOC（主要為C端末）和HOC（主要為N端末）。SOC位點(diǎn)展示是通過一個(gè)重組載體，將融合有外源序列的SOC融合基因同源整合入缺失SOC的T4基因組中，選擇恢復(fù)溶菌酶生長(zhǎng)不依賴性的噬菌體，即可將外源肽或蛋白質(zhì)展示于噬菌體表面。HOC位點(diǎn)展示則通過體外包裝實(shí)現(xiàn)，將目的基因連接于hoc基因的C端，構(gòu)建hoc 融合基因表達(dá)載體，并在IPTG 的誘導(dǎo)下表達(dá)HOC 融合蛋白。再將其與HOC缺失的T4噬菌體結(jié)合，就將其轉(zhuǎn)移到該噬菌體上從而得到展示。由于這兩者的缺失方式不同，就可以在同一噬菌體上通

19、過不同的方式（DNA缺失及蛋白缺失）得到表達(dá)，即可實(shí)現(xiàn)SOC、HOC雙位點(diǎn)的同時(shí)展示。此外，T4噬菌體的扁長(zhǎng)型二十面體衣殼，使其系統(tǒng)容量大，可以體外組裝，拷貝數(shù)高。6（1）、（4）、T7噬菌體展示系統(tǒng)T7噬菌體基因組為線性雙鏈DNA，其主要有2種衣殼蛋白，10A和10B。由于10B的蛋白區(qū)在噬菌體表面，所以將其作為展示位點(diǎn)。T7噬菌體的功能性衣殼由10A與10B按不同比例構(gòu)成，說明其有一定的容錯(cuò)性，可容納變異體。展示的蛋白會(huì)通過C端融合，這樣，即使的片段含有終止密碼子也不會(huì)影響該蛋白的表達(dá)。另外，T7噬菌體展示系統(tǒng)可以以高拷貝量展示50個(gè)氨基酸的多肽，以低拷貝量（0.11/噬菌體）或以中拷貝量

20、（515/噬菌體）展示1200個(gè)氨基酸殘基的多肽或蛋白質(zhì)。這些多肽或蛋白質(zhì)分別與相應(yīng)親和力區(qū)域結(jié)合，其實(shí)用性較強(qiáng)。（2）、噬菌體展示的原理噬菌體展示技術(shù)是將多肽或蛋白質(zhì)的編碼基因或目的基因片段克隆入噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置，在閱讀框正確且不影響其他外殼蛋白正常功能的情況下，使外源多肽或蛋白與外殼蛋白融合表達(dá)，融合蛋白隨子代噬菌體的重新組(來自:噬菌體展示總結(jié)技術(shù))裝而展示在噬菌體表面。被展示的多肽或蛋白可以保持相對(duì)獨(dú)立的空間結(jié)構(gòu)和生物活性，以利于靶分子的識(shí)別和結(jié)合。肽庫與固相上的靶蛋白分子經(jīng)過一定時(shí)間孵育后，洗去未結(jié)合的游離噬菌體，然后以競(jìng)爭(zhēng)受體或酸洗脫下與靶分子結(jié)合吸附的噬菌體，洗脫

21、的噬菌體感染宿主細(xì)胞后經(jīng)繁殖擴(kuò)增,進(jìn)行下一輪洗脫，經(jīng)過3 輪5 輪的“吸附-洗脫-擴(kuò)增”后，與靶分子特異結(jié)合的噬菌體得到高度富集。7外源多肽或蛋白質(zhì)表達(dá)在噬菌體的表面，而其編碼基因作為噬菌體基因組中的一部分可通過噬菌體DNA序列測(cè)序出來。該技術(shù)的顯著特點(diǎn)是建立了基因型和表現(xiàn)型之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系。（2）、1 篩選步驟8：略。（3）、噬菌體展示的應(yīng)用（與蛋白結(jié)構(gòu)與功能相關(guān)的方面）（3）、1 展示功能蛋白結(jié)構(gòu)域噬菌體隨機(jī)展示技術(shù)被廣泛應(yīng)用于研究蛋白質(zhì)與其他配基的相互作用。完整的蛋白質(zhì)或結(jié)構(gòu)域與噬菌體蛋白形成融合噬菌體，為研究結(jié)構(gòu)與功能的相互關(guān)系提供了一個(gè)非常有效的工具。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)或功能亞基被表達(dá)于噬菌體表

22、面，蛋白質(zhì)的天然的四級(jí)結(jié)構(gòu)就提供了一個(gè)具有廣泛突變位點(diǎn)的用來限制折疊的框架（如：鋅指結(jié)構(gòu)）。即使用蛋白質(zhì)上帶有的鋅指結(jié)構(gòu)，讓其與某些DNA作用，就可篩選出一些與其相互作用的噬菌體。（3）、2 確定核酸結(jié)合蛋白及其相互作用噬菌體隨機(jī)展示技術(shù)可以篩選出一種有某些結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)，這些結(jié)構(gòu)域可與DNA 結(jié)合而調(diào)控基因的表達(dá)。通過這種方法，可以發(fā)現(xiàn)更多的與DNA結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。此外，利用噬菌體展示技術(shù)還可以篩選出DNA 的模擬肽（模擬肽是一個(gè)具有廣泛意義的術(shù)語，它指任意一個(gè)被設(shè)計(jì)并執(zhí)行肽功能的化合物。一個(gè)生物活性模擬肽，具有與激素、細(xì)胞因子、酶底物、病毒或其他生物分子拈抗、刺激或是調(diào)節(jié)天然配體的生理活性的

23、功能。9）。（3）、3 研究蛋白質(zhì)相互作用噬菌體展示的多肽文庫是由特定長(zhǎng)度的隨機(jī)短肽序列組成。用靶蛋白質(zhì)（如受體、抗體等）對(duì)該隨機(jī)文庫進(jìn)行親和淘篩，就可以獲得與之結(jié)合的短肽序列。對(duì)所得序列測(cè)定分析，并合成相應(yīng)的短肽，就可用來研究?jī)蓚€(gè)蛋白質(zhì)之間的相互作用。（3）、4 抗原表位分析抗原表位分析技術(shù)是以單克隆抗體作為固相篩選分子，加入噬菌體隨機(jī)多肽庫，使其與單抗充分反應(yīng)，經(jīng)數(shù)輪“吸附-洗脫-擴(kuò)增”的篩選過程，且每次增加篩選強(qiáng)度，用最后一次淘洗的噬菌體感染宿主菌。再隨機(jī)挑選克隆，經(jīng)噬菌體ELISA 鑒定并進(jìn)行交叉反應(yīng)實(shí)驗(yàn)和競(jìng)爭(zhēng)抑制性實(shí)驗(yàn)，對(duì)所選的陽性克隆通過DNA 序列分析，就可以知道該噬菌體所攜帶的

24、外源肽序列，從而得知該單抗針對(duì)的特異性抗原表位。4 噬菌體展示技術(shù)的展望噬菌體展示技術(shù)憑借著自己獨(dú)有的優(yōu)勢(shì)及特點(diǎn)，在生物科學(xué)研究和應(yīng)用中的前景已經(jīng)逐漸地顯示出來。以噬菌體展示抗原表位的優(yōu)點(diǎn)有：(1)生產(chǎn)成本低廉。(2)有可能利用一種噬菌體展示兩種抗原表位，這樣便可開發(fā)出能同時(shí)診斷一種以上疾病的診斷抗原。(3)噬菌體顆?？稍谙喈?dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)保持穩(wěn)定，這一點(diǎn)對(duì)研究和應(yīng)用非常適用。(4)可模擬天然多肽表位結(jié)構(gòu)或功能。(5)噬菌體作為表位載體具有較好的免疫原性。10但現(xiàn)在這項(xiàng)技術(shù)的某些方面并不完善，目前其主要的局限有：(1)受大腸桿菌轉(zhuǎn)化效率的限制，高效轉(zhuǎn)化大腸桿菌的轉(zhuǎn)化效率為107108，故一般肽庫的容量只有109，高于此限制的基因難以表達(dá)，受到庫容量的限制；(2)由于噬菌體展示技術(shù)依賴于宿主細(xì)胞內(nèi)基因的表達(dá)，因此難以對(duì)毒性分子進(jìn)行有效表達(dá)和展示；(3)編碼肽的基因帶有一定的偏愛性，決定了肽庫的多樣性受到局限；(4)氨基酸的修飾受宿主細(xì)胞的限制。不過，隨著噬菌體肽庫的不斷完善，對(duì)噬菌體展示技術(shù)認(rèn)識(shí)地不斷加深。這項(xiàng)技術(shù)必定會(huì)日臻完美，其應(yīng)用的范圍肯定會(huì)越來越廣。1劉相葉,鄧洪寬,吳秀萍等.噬菌體展示技術(shù)及其應(yīng)用J.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2xx,29(1):606（3）、2戴和平,高宏,趙新顏.噬菌體展示技術(shù)的原理和方法J.水生生物學(xué)