18生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)--吳憲-Folin法測定血糖含量

1、最新 料推薦吳憲 -Folin法 測定血糖含量【目的】1 掌握吳憲 -Folin法測定血糖含量的實(shí)驗(yàn)方法。2 熟悉吳憲 -Folin法測定血糖含量的實(shí)驗(yàn)原理?！驹怼挎u酸鈉（ Na 2 WO 4 ）和硫酸作用，生成鎢酸，可沉淀血液樣品中的蛋白質(zhì)濾除蛋白質(zhì)沉淀即可制得無蛋白血濾液，此血濾液中的葡萄糖具有還原性與鹼性銅試劑共熱可使蘭色的二價(jià)銅離子（Cu 2+ ）還原成紅色的氧化亞銅（Cu 2 O ）沉淀。氧化亞銅再使無色的磷鉬酸還原成蘭色的鉬蘭。顏色深淺與葡萄糖含量成正比。因此，將血濾液和經(jīng)同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)葡葡萄溶液分別進(jìn)行比色，即可求出血糖含量。其反應(yīng)如下：1 鹼性銅試劑內(nèi)的反應(yīng)2 定糖顯色反應(yīng)【

2、器材】1 Folin-吳氏定糖管2 中號試管3 電爐及加熱器4 刻度吸管5 微量移液器6 漏斗1最新 料推薦7 分光光度計(jì)【試劑】1 1/3mol/L硫酸溶液2 10% 鎢酸鈉3 堿性銅試劑取無水碳酸鈉 40g 溶解于 400ml 蒸餾水中，再加入酒石酸 7.5g ，溶解后定量地移入 1000ml 量瓶中，再加入結(jié)晶硫酸銅 4.5g （可先用熱水浴稍微加熱），待其完全溶解后加蒸餾水至刻度，混勻貯于棕色瓶中保存。4 磷鉬酸試劑取鉬酸（ H 2 MoO4 ） 35g 和鎢酸鈉 5g 加入 1000ml 平底燒杯中，加入 10% 的氫氧化鈉 200ml ，蒸餾水 100ml 煮沸 20-40 分鐘以

3、除以鉬酸試劑中可能存在的氨。冷卻后加蒸餾水使全量為 350ml 。再加入濃磷酸（ 85% ） 120ml ，最后加水蒸餾水至 500ml 。5 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液（ 1 ）儲(chǔ)存液（ 1mg/ml ） ：精確稱取葡萄糖 1.00g 置于 1 000ml 量瓶中，加入防腐劑 0.25% 苯甲酸溶液至刻度。（ 2 ）應(yīng)用液（ 2.5mg/dl ）：臨用時(shí)，取上述儲(chǔ)存液 25ml ，注入 1000ml 量瓶中，加蒸餾水至刻度處?！静僮鳌? 無蛋白血濾液的制備取小錐形瓶 1 個(gè)，準(zhǔn)確加入蒸餾水 7ml ，用 0.2ml 干燥移液管準(zhǔn)確吸取全血 0.2ml 。用小塊濾紙擦干吸管外面附著血液， 然后徐徐地將血液放

4、入水中 （將吸管尖端放在錐形瓶液面以下） ，待血液放完以后再吸取錐形瓶內(nèi)液將試管洗滌二次。吸管內(nèi)最后一滴液體吹出，混勻，透明呈寶石紅色。加 1/3mol/L ，硫酸液 0.4ml 混勻再加 10% 鎢酸鈉溶液 0.4ml 、充分混勻。放置 5 分鐘，待溶液由棕色透明變?yōu)榭Х壬鞚岷螅枚鄬痈稍餅V紙過濾于一干燥的試管中，即得 40 倍稀釋的鎢酸血濾液。 濾液必須無色透明， 如發(fā)現(xiàn)混濁，即證明尚有蛋白質(zhì)存在，不合要求，應(yīng)重新制備。2 血糖測定取干燥潔凈的 Folin-吳氏定糖管 3支，標(biāo)號，按下表操作：2最新 料推薦試劑（ ml ）測定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管無蛋白血濾液2.0-葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液-2.0-蒸餾水

5、-2.0鹼性銅試劑2.02.02.0充分混勻，置沸水浴準(zhǔn)確煮沸 8 分鐘，取出切勿搖動(dòng)，以自來水沖冷 3 分鐘，各加磷鉬酸試劑 2.0ml ?；靹颍胖?3 分鐘，待蘭色反應(yīng)完全后，將上述各管加蒸餾水稀釋至 12.5ml 刻度處，用拇指或手掌堵嚴(yán)管口， 倒轉(zhuǎn) 1 2 次，充分混勻，放置 10 分鐘后，于波長 620nm 處，以空白管調(diào)零點(diǎn)，進(jìn)行比色，分別讀取并記錄各管吸光度值。【計(jì)算】血糖濃度（ mg/dl）血糖濃度 ( mmol/L)【注意事項(xiàng)】1 血液不能放置過久，以免血糖分解致使含量降低。2 在制備無蛋白血濾液時(shí)， 加各種試劑的順序不能顛倒， 每加一種試劑后應(yīng)充分振搖以免形成血塊蛋白沉淀不完全。3 葡萄糖與鹼性試劑的鹼性、各成分的濃度、加熱的溫度及時(shí)間等均有關(guān)。因此操作時(shí)應(yīng)力求條件恒定。4 加入磷鉬酸試劑后顯色不穩(wěn)定，應(yīng)迅速進(jìn)行比色。5 本法測定的是血中還原性糖的含量，所以血糖正常值為80 120 mg/dl或 4.4 6.7mmol/L ，比葡萄糖氧化酶法測定值高。 目前臨床多用專一性