腫瘤免疫治療--腫瘤生物治療學(xué)基礎(chǔ)知識[材料參考]

1、腫瘤免疫治療 -腫瘤生物治療學(xué)基礎(chǔ)知識,福建醫(yī)科大學(xué)教學(xué)醫(yī)院 福建省腫瘤醫(yī)院 葉韻斌,1,參考檔案,目的與要求： 腫瘤免疫學(xué)是研究腫瘤發(fā)生、發(fā)展與機(jī)體免疫系統(tǒng)之間的關(guān)系，以及應(yīng)用免疫學(xué)原理和手段對腫瘤進(jìn)行預(yù)防、診斷和治療的一門學(xué)科。通過本課程的學(xué)習(xí)，全面了解機(jī)體的抗腫瘤免疫監(jiān)視機(jī)制，包括特異性和非特異性的免疫機(jī)制；腫瘤的免疫逃逸機(jī)制；免疫編輯假說。深入認(rèn)識腫瘤與免疫系統(tǒng)相互作用機(jī)制，了解腫瘤的生物學(xué)特性，以及腫瘤免疫治療在腫瘤綜合治療中的地位和作用。,2,參考檔案,第一章、腫瘤免疫學(xué)概述,腫瘤免疫學(xué)（Tumor immunology）是研究腫瘤抗原、機(jī)體的免疫功能與腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸的相互關(guān)

2、系；機(jī)體對腫瘤的免疫應(yīng)答以及腫瘤細(xì)胞逃逸免疫效應(yīng)的機(jī)制；腫瘤免疫學(xué)診斷；以及免疫學(xué)預(yù)防和治療的學(xué)科。,3,參考檔案,第二章、免疫系統(tǒng)的基本組成和功能,免疫細(xì)胞 細(xì)胞因子 主要組織相容性復(fù)合體、粘附分子 免疫耐受 抗腫瘤免疫應(yīng)答過程 機(jī)體對腫瘤抗原的免疫應(yīng)答,4,參考檔案,免疫系統(tǒng)是機(jī)體識別自我和非我，引發(fā)免疫應(yīng)答、執(zhí)行免疫效應(yīng)和最終維持自身免疫穩(wěn)態(tài)的組織系統(tǒng) 免疫器官：中樞免疫器官胸腺、骨髓 外周免疫器官淋巴結(jié)、脾臟 免疫細(xì)胞：主要是指能識別抗原，產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的 淋巴細(xì)胞等各種細(xì)胞。 細(xì)胞因子：機(jī)體的免疫細(xì)胞和非免疫細(xì)胞能合成和分泌小分 子的多肽類因子，它們調(diào)節(jié)多種細(xì)胞生理功能， 這些因

3、子統(tǒng)稱為細(xì)胞因子（cytokines）。 主要組織相容性復(fù)合體：腫瘤抗原遞呈 抗腫瘤免疫應(yīng)答：細(xì)胞免疫、體液免疫 免疫耐受：是指免疫活性細(xì)胞接觸抗原性物質(zhì)時所表現(xiàn)的無應(yīng)答狀態(tài)（a state of specific unresponsiveness）,5,參考檔案,一、免疫細(xì)胞,（一）T淋巴細(xì)胞 -主要的抗腫瘤效應(yīng)細(xì)胞 表面標(biāo)志：CD3 CD8+ 抗腫瘤作用： A. 結(jié)合腫瘤抗原，殺傷腫瘤細(xì)胞 B. 分泌細(xì)胞因子 CD4+ 抗腫瘤作用： A. 輔助激活CTL,B細(xì)胞,NK，巨噬細(xì)胞; B. 分泌細(xì)胞因子：IL-2，IFN-，TFN- C. 少數(shù)屬于細(xì)胞毒性T細(xì)胞具有殺瘤作用,6,參考檔案,（二

4、）B淋巴細(xì)胞-表面標(biāo)志：CD19 介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答 （三）NK細(xì)胞-表面標(biāo)志：CD16CD56 1） 非特異性殺傷2）無MHC限制性，無需預(yù)先致敏3）不依賴抗體和補(bǔ)體4）ADCC5） 釋放IFN-,7,參考檔案,（四）樹突細(xì)胞-表面標(biāo)志：CD1a、CD80、 CD40、CD86. 是目前公認(rèn)的功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞，高表達(dá)MHCI類和MHCII類分子 功能：DC攜帶抗原通過MHC限制性途徑把抗原遞呈給T細(xì)胞，激活T細(xì)胞而激發(fā)免疫應(yīng)答,8,參考檔案,（五）巨噬細(xì)胞-表面標(biāo)志：CD68 1）處理和呈遞抗原 2）活化的巨噬細(xì)胞通過溶酶體酶直接殺傷 3）可通過分泌細(xì)胞因子間接殺傷腫瘤細(xì)胞 4） 合成和

5、釋放NO 5）ADCC,9,參考檔案,二、細(xì)胞因子,（一）細(xì)胞因子的定義 細(xì)胞因子（cytokines,CKs）是一類由活化的免疫細(xì)胞和非免疫細(xì)胞（如成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞及某些腫瘤細(xì)胞）所分泌的小分子蛋白質(zhì)的統(tǒng)稱，能夠作用于分泌細(xì)胞本身或鄰近其他細(xì)胞，具有調(diào)節(jié)免疫效應(yīng)、炎癥反應(yīng)等多種生物學(xué)活性。,10,參考檔案,（二）研究的歷史 細(xì)胞因子的研究淵源始于50年代的干擾素研究和60年代的集落刺激因子研究。 基因工程技術(shù)的迅速發(fā)展，帶來了細(xì)胞因子研究的突破性進(jìn)展。80-90年代相繼克隆出一大批細(xì)胞因子，細(xì)胞因子的化學(xué)本質(zhì)是多肽，從信息傳遞的角度，細(xì)胞因子是生物體內(nèi)一類重要的第一信使分子

6、，是細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)的產(chǎn)物。,11,參考檔案,（三）細(xì)胞因子的種類 按作用分： 調(diào)節(jié)天然免疫的細(xì)胞因子：TNF-a、 IL-1、IL-6等 調(diào)節(jié)獲得性免疫的細(xì)胞因子：IL-2、IL-4、IFN-等 作用于造血系統(tǒng)的細(xì)胞因子：CSF、IL-3、IL-7等 按細(xì)胞來源分類： 免疫細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子：IL-2、IL-3、IL-4等 非免疫細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子：IL-7、IL-8、IL-11、CSF等,12,參考檔案,細(xì)胞因子的作用方式：自分泌作用 旁分泌作用 內(nèi)分泌作用。 細(xì)胞因子的作用特點(diǎn)：多效性 重疊性 協(xié)同性 拮抗性 雙重性,13,參考檔案,研究意義,細(xì)胞因子研究具有非常重要的理論和實用意義，它有

7、助于闡明分子水平的免疫調(diào)節(jié)機(jī)理，有助于疾病的預(yù)防、診斷和治療，特別是利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的重組細(xì)胞因子已用于治療腫瘤、感染、炎癥、造血功能障礙等，并收到良好療效，具有非常廣闊的應(yīng)用前景。,14,參考檔案,三、主要組織相容性復(fù)合體、粘附分子,（一）主要組織相容性復(fù)合體 同種異體移植物移植后會發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這是由細(xì)胞表面的同種異型抗原誘導(dǎo)的，這種抗原稱為組織相容性抗原。體內(nèi)具有多種組織相容性抗原，其中能引起強(qiáng)而迅速的排斥反應(yīng)者稱為主要組織相容性抗原，其編碼的基因是一組緊密連鎖的基因群，稱為主要組織相容性復(fù)合體,15,參考檔案,人的MHCHLA復(fù)合體（6# 染色體）,1. 經(jīng)典的HLA I類、H

8、LA II類基因,HLA I類基因（HLA Ia）： HLA-A ( locus ) HLA-B HLA-C HLA II類基因： HLA-DP ( subrigon ) HLA-DQ ( locus A B ) HLA-DR,16,參考檔案,2. 免疫功能相關(guān)基因,（1）補(bǔ)體gene（III類基因） （2）抗原加工、遞呈相關(guān)gene（II類基因） LMP、TAP、HLA-DM HLA-DO、TAP相關(guān)蛋白gene,17,參考檔案,（3）非經(jīng)典的HLA I類gene（HLA Ib） HLA-E、HLA-G、HLA-F （4）炎癥相關(guān)gene TNF gene 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 MIC（MHC I

9、相關(guān) gene）：MICA、MICB HSP,18,參考檔案,（二）粘附分子 定義：是一類介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間粘附作用的膜表面糖蛋白 作用：參與調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的凋亡 參與免疫應(yīng)答和免疫調(diào)節(jié) 參與免疫細(xì)胞的發(fā)育和分化,19,參考檔案,B7分子：主要分布于B細(xì)胞、DC細(xì)胞、激活 的單核細(xì)胞和T細(xì)胞 CD28-激活T細(xì)胞 配體 CTLA-4-抑制T細(xì)胞活化,20,參考檔案,細(xì)胞粘附因子 -intracellular adhesion molecule ICAM ICAM-1（CD54） ICAM-2（CD102） ICAM-3（CD50） 作用：介導(dǎo)免疫免疫細(xì)胞的活化、免疫細(xì)胞之間及免疫

10、細(xì)胞與其他細(xì)胞的接觸、免疫細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷,21,參考檔案,(三)抗原遞呈 MHC-I類分子呈遞途徑：參與內(nèi)源性抗原的呈遞過程 MHC-II類分子呈遞途徑：參與外源性抗原的呈遞過程 抗原的交叉呈遞： MHCI類分子也能遞呈外源性抗原，MHCII類分子也能遞呈內(nèi)源性抗原。,HLA,22,參考檔案,基本概念,抗原加工：蛋白質(zhì)抗原在細(xì)胞內(nèi)被降解成能與MHC分子結(jié)合的肽的過程。 抗原遞呈：MHC分子與抗原肽結(jié)合，將其展示于細(xì)胞表面供T細(xì)胞識別的過程。 內(nèi)源性抗原：細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)抗原，包括自身抗原和非己抗原-MHC分子遞呈。 外源性抗原：由細(xì)胞外攝入細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)抗原，包括非己抗原和自身抗原-M

11、HC分子遞呈。,23,參考檔案,Antigens must be processed in order to be recognised by T cells,T cell response,無應(yīng)答,無應(yīng)答,無應(yīng)答,無應(yīng)答,抗原加工、遞呈,24,參考檔案,25,參考檔案,抗原遞呈細(xì)胞 能攝取、加工、處理抗原并將抗原信息提呈給淋巴細(xì)胞的細(xì)胞，又稱為輔佐細(xì)胞。,專職APC(professional APC) 能組成性表達(dá)MHC-II類分子、具有較強(qiáng)的抗原提呈作用，包括巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、B細(xì)胞等。,兼職APC 非組成性地表達(dá)MHC-II類分子，抗原提呈能力弱，包括內(nèi)皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞、上皮及間質(zhì)

12、細(xì)胞等。 腫瘤細(xì)胞、病毒感染細(xì)胞等也可通過MHC-I類分子途徑提呈抗原。此類CTL的靶細(xì)胞屬廣義APC。,26,參考檔案,抗原加工遞呈的意義,實現(xiàn)免疫系統(tǒng)對非己抗原的免疫監(jiān)視作用 免疫調(diào)節(jié)作用,27,參考檔案,四、免疫耐受,（一）定義： 免疫耐受（immune tolerancnce）指抗原誘導(dǎo)特異性淋巴細(xì)胞失活或死亡，導(dǎo)致機(jī)體不能對該抗原產(chǎn)生應(yīng)答的現(xiàn)象。,28,參考檔案,（二）T細(xì)胞免疫耐受 中樞性免疫耐受：T細(xì)胞的陰性選擇 T細(xì)胞的否定現(xiàn)象 外周性免疫耐受：生理性屏障對自身抗 原的不識別 外周血自身反應(yīng)性T 細(xì)胞克隆的清除 缺乏激活信號 具有潛在自身反應(yīng)性 的T細(xì)胞被抑制,29,參考檔案,

13、（二）B細(xì)胞免疫耐受 中樞性免疫耐受：克隆排除 克隆無能(clonal anergy) 外周性免疫耐受：已活化的細(xì)胞受到大量 抗原持續(xù)刺激時，可被 誘發(fā)凋亡。,30,參考檔案,研究免疫耐受的意義及應(yīng)用,1.理論方面的意義 2.臨床治療方面的意義和應(yīng)用 治療自身免疫病 防止器官移植后的排斥反應(yīng) 腫瘤治療,31,參考檔案,五、抗腫瘤免疫應(yīng)答 機(jī)體抗腫瘤的免疫學(xué)效應(yīng)機(jī)制,（一）細(xì)胞免疫機(jī)制 細(xì)胞免疫在機(jī)體抗腫瘤效應(yīng)中起重要作用。 1、CD4+T細(xì)胞：參與B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞 和CTL細(xì)胞的活化和抗腫瘤效應(yīng)。 A.輔助激活CTL,B細(xì)胞,NK，巨噬細(xì)胞;B.分泌細(xì)胞因子：IL-2，IFN-，TN

14、F- C.少數(shù)屬于細(xì)胞毒性T細(xì)胞，具有殺瘤作用,32,參考檔案,2、CD8+T細(xì)胞：在機(jī)體抵抗腫瘤效應(yīng)中起關(guān)鍵作用。 CTL（細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞） A.通過其細(xì)胞膜上的T細(xì)胞抗原識別受體 （TCR），特異性識別MHC分子腫瘤抗原肽復(fù)合物，引起T細(xì)胞活化、增殖，殺傷腫瘤細(xì)胞。 B.分泌細(xì)胞因子,33,參考檔案,34,參考檔案,3、抗原遞呈細(xì)胞： M、DC A. 通過攝取、加工處理和遞呈腫瘤抗原， 激發(fā)特異性T細(xì)胞免疫而發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)。 B. 活化的巨噬細(xì)胞通過溶酶體酶直接殺傷, 且可通過分泌細(xì)胞因子間接殺傷腫瘤細(xì) 胞。 C. 合成和釋放NO D. ADCC,35,參考檔案,36,參考檔案,4.

15、NK細(xì)胞非特異性免疫應(yīng)答 A. 非特異性殺傷B.無MHC限制性，無需預(yù)先致敏C.不依賴抗體和補(bǔ)體D.ADCCE. 釋放IFN-,37,參考檔案,（二）體液免疫機(jī)制 1、激活補(bǔ)體系統(tǒng)溶解腫瘤細(xì)胞 2、抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC） 3、抗體的免疫調(diào)理作用 4、抗體封閉腫瘤細(xì)胞上的某些受體作用 5、抗體使腫瘤細(xì)胞上的黏附特性改變或喪失作 用,38,參考檔案,Ag,IL-12,活化DC,Th1,DC,CTL,CD4,CD4,IL-12,NK/NKT,Tumor,IFN,IL-2 IFN,IL-12,抗腫瘤免疫應(yīng)答,39,參考檔案,六、機(jī)體對腫瘤抗原的免疫應(yīng)答,認(rèn)識腫瘤抗原以及腫瘤抗原在免

16、疫應(yīng)答中的作用,40,參考檔案,腫瘤抗原,細(xì)胞惡性變過程中出現(xiàn)的新抗原(neoantigen)及過度表達(dá)的抗原物質(zhì)的總稱。 包括突變的癌基因和抗癌基因編碼的蛋白、病毒誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞表面常常表達(dá)病毒基因編碼的蛋白、共同腫瘤抗原、胚胎抗原。,41,參考檔案,腫瘤抗原的分類,根據(jù)特異性分類 1）腫瘤特異性抗原 (tumor specific antigen,TSA) 腫瘤細(xì)胞所特有的或只存在于某種腫瘤細(xì)胞而不存在于正常細(xì)胞的新抗原。 2）腫瘤相關(guān)抗原 (tumor associated antigen, TAA） 非腫瘤細(xì)胞所特有、正常細(xì)胞和其它組織上也存在的抗原，細(xì)胞癌變時，含量增加。,42,參考

17、檔案,機(jī)體對腫瘤抗原的免疫應(yīng)答,機(jī)體抗腫瘤的免疫學(xué)效應(yīng)機(jī)制十分復(fù)雜，涉及多種免疫成分，包括先天性免疫（非腫瘤特異性免疫）和獲得性免疫（腫瘤特異性免疫），二者共同參與機(jī)體免疫機(jī)體免疫。 對于免疫原性較強(qiáng)的腫瘤，特異性免疫應(yīng)答起主要作用 對于免疫原性較弱的腫瘤，非特異性免疫應(yīng)答更重要,43,參考檔案,第三章、免疫調(diào)節(jié)機(jī)制,免疫調(diào)節(jié)-指抗原驅(qū)動的免疫應(yīng)答過程中，通過免疫細(xì)胞之間，免疫細(xì)胞與免疫分子之間及免疫系統(tǒng)與其他系統(tǒng)之間的相互作用，使免疫應(yīng)答維持在適當(dāng)?shù)膹?qiáng)度和時限以保證機(jī)體免疫功能的穩(wěn)定的生物學(xué)過程。 免疫細(xì)胞調(diào)節(jié)： 調(diào)節(jié)型T細(xì)胞 NK T細(xì)胞 T細(xì)胞 巨噬細(xì)胞,44,參考檔案,調(diào)節(jié)型T細(xì)胞（r

18、egulatory T cells,Treg）,促進(jìn)一些抑制性細(xì)胞因子的分泌、下調(diào)免疫共刺激分子和粘附分子的表達(dá)、抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡、抑制自身反應(yīng)性T細(xì)胞的免疫反應(yīng)以及抑制傳統(tǒng)T細(xì)胞的活化等。其免疫抑制機(jī)制尚不十分清楚,45,參考檔案,NK T細(xì)胞,是一類特殊的T細(xì)胞亞群，既表達(dá)T細(xì)胞受體，同時又能表達(dá)NK的表明標(biāo)記CD161,46,參考檔案,T細(xì)胞,在抗微生物感染免疫和抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用,47,參考檔案,巨噬細(xì)胞,抗腫瘤的作用機(jī)制 抗腫瘤功能的抑制及促腫瘤生長的機(jī)制,48,參考檔案,腫瘤對機(jī)體免疫功能的影響,腫瘤誘導(dǎo)的抑制性細(xì)胞 Ts 抑制性巨噬細(xì)胞 腫瘤誘導(dǎo)的體液抑制因子 封

19、閉抗體 腫瘤細(xì)胞產(chǎn)物的免疫抑制作用 TGF-，IL-10,49,參考檔案,第四章、 腫瘤免疫逃逸機(jī)制,抗原缺失和調(diào)變 腫瘤細(xì)胞MHC I分子表達(dá)低下 腫瘤細(xì)胞表面抗原被封閉 腫瘤細(xì)胞缺乏協(xié)同刺激信號 腫瘤細(xì)胞的“漏逸” 免疫抑制作用 腫瘤抗原誘發(fā)免疫耐受 腫瘤細(xì)胞抗凋亡或誘導(dǎo)免疫細(xì)胞凋亡,50,參考檔案,腫瘤細(xì)胞“漏逸”,某些突變可以是腫瘤細(xì)胞迅速生長從而超過了機(jī)體的抗腫瘤免疫效應(yīng)，導(dǎo)致宿主不能有效地清除大量生長地腫瘤細(xì)胞，稱為腫瘤細(xì)胞地“漏逸”,51,參考檔案,腫瘤細(xì)胞的免疫原性降低,腫瘤細(xì)胞異常的HLA表型 A。正常細(xì)胞HLA I類分子表型(舉例)。腫瘤細(xì)胞異常HLA I類分子表型； B。

20、全部丟失，包括HLA-A、 HIA-B、HLA-C； C。HLA一條單元型丟失，即HLA-A、HLA-B、 HLA-C三位點(diǎn)均丟失一半等位基因； D。某一位點(diǎn)丟失(此處為HLA-B或A位點(diǎn))； E。某一等位基因丟失(此處為HLA-B44)。,52,參考檔案,腫瘤表達(dá)免疫抑制分子和誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡,腫瘤的免疫豁免,53,參考檔案,腫瘤誘發(fā)免疫抑制,1、腫瘤誘導(dǎo)免疫抑制細(xì)胞 抑制性T細(xì)胞 抑制性NKT細(xì)胞 抑制性巨噬細(xì)胞,54,參考檔案,2、腫瘤誘導(dǎo)免疫抑制因子 轉(zhuǎn)化生長因子 白細(xì)胞介素-10 前列腺素,55,參考檔案,3、腫瘤誘導(dǎo)T細(xì)胞成分和功能紊亂 T細(xì)胞亞群紊亂 Th1/Th2漂移 T細(xì)胞信

21、號通路異常,56,參考檔案,腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞與免疫逃逸,腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞表面各種細(xì)胞粘附分子地表達(dá)水平降低 腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞MHC類分子的表達(dá)異常 腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的抗自由基損傷活性增強(qiáng) 腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞合成細(xì)胞外基質(zhì)能力增強(qiáng),57,參考檔案,第五章、腫瘤免疫學(xué)理論的演變,58,參考檔案,免疫監(jiān)視學(xué)說,Burnet提出免疫監(jiān)視學(xué)說：機(jī)體在生長發(fā)育的過程中，其體細(xì)胞會時常發(fā)生突變，有些突變可能會導(dǎo)致細(xì)胞惡化轉(zhuǎn)化。當(dāng)具有異常增殖能力的腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)形成時，它們攜帶新的抗原決定簇，隨著腫瘤細(xì)胞的增殖，當(dāng)新的抗原達(dá)到一定數(shù)量時，就開始產(chǎn)生胸腺依賴性免疫反應(yīng)，最終排斥腫瘤。,59,參考檔案,人類的免疫監(jiān)

22、視現(xiàn)象,免疫缺陷或免疫抑制的個體具有更高的腫瘤發(fā)生率。 對移植后應(yīng)用免疫抑制劑的患者和先天性免疫缺陷患者的追蹤觀察結(jié)果顯示其腫瘤發(fā)生的相對危險度明顯增高。,60,參考檔案,腫瘤免疫編輯,此假說認(rèn)為，免疫系統(tǒng)既可能清除腫瘤細(xì)胞或?qū)δ[瘤細(xì)胞產(chǎn)生非保護(hù)性免疫反應(yīng)，又可能促進(jìn)免疫無反應(yīng)性或免疫耐受性的產(chǎn)生。腫瘤細(xì)胞在于免疫系統(tǒng)的相互作用過程終，免疫原性強(qiáng)的克隆被清除，免疫原性弱的克隆被保留，腫瘤細(xì)胞基因組的不穩(wěn)定性導(dǎo)致免疫原性更弱的克隆最終形成優(yōu)勢腫瘤細(xì)胞群體。 3個過程：免疫清除；免疫平衡；免疫逃逸,61,參考檔案,第六章、腫瘤的免疫治療,基本原理： 提高腫瘤抗原免疫原性，激發(fā)和增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)

23、答，提高腫瘤對抗瘤免疫效應(yīng)的敏感性，在體內(nèi)外誘生腫瘤特異性效應(yīng)細(xì)胞和分子等。 抗腫瘤免疫治療包括主動免疫治療、被動免疫治療。,62,參考檔案,一、細(xì)胞因子治療,1、干擾素 1）I型干擾素：由單核巨噬細(xì)胞、病毒誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞、轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞產(chǎn)生 種類：IFN-、IFN-、IFN-、IFN-等 作用：抑制腫瘤細(xì)胞周期、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡 調(diào)節(jié)免疫反應(yīng) 感染腫瘤血管生成 其它作用：抗病毒 2）II型干擾素：由活化的T細(xì)胞、原始的Th0細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生 種類：IFN- 作用: 激活巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞等直接殺傷癌細(xì)胞 延長細(xì)胞周期、抑制腫瘤細(xì)胞的生長和增殖 促進(jìn)MHC-I、II類分子和抗原遞呈細(xì)胞尚共刺激分

24、子的表達(dá) 在干擾素的調(diào)節(jié)下，IFN-可誘導(dǎo)Th0向Th1分化，抑制向Th2分化，增強(qiáng)細(xì)胞免疫和CTL的殺傷活性 臨床藥物：基因工程產(chǎn)品，已國產(chǎn)化。 干擾靈、賽若金 、因特芬、派羅欣。,63,參考檔案,適應(yīng)癥：干擾素主要用于治療晚期毛細(xì)胞白血病、腎癌、黑色素瘤、kaposi肉瘤、慢性粒細(xì)胞性白血病和中低度惡性非霍奇金淋巴瘤，其他曾用于骨肉瘤、乳腺癌、多發(fā)性骨髓瘤、頭頸部癌和膀胱癌等。對慢性乙、丙型肝炎也有效。 用法：第1周300萬單位，皮下注射，每周23次，第2周每次加到500600萬單位，第3周加到9001000萬單位連續(xù)6周，共8周為1療程。 干擾素亦可局部注射（瘤周浸潤）、腔內(nèi)注射（癌性胸

25、腹腔積液）或膀胱內(nèi)灌注。,64,參考檔案,毒副作用：高劑量干擾素具有一般生物制劑的反應(yīng)即發(fā)熱、流感樣癥狀，肌肉酸痛等，其次是輕度骨髓抑制。一般對肝腎功能無影響，少數(shù)有轉(zhuǎn)氨酶、血肌酐升高。,65,參考檔案,2、白細(xì)胞介素-2 （IL-2) 來源：主要由激活的T淋巴細(xì)胞分泌和表達(dá)，此外NK、轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞和LAK細(xì)胞也可產(chǎn)生 作用：促進(jìn)T細(xì)胞增殖及相應(yīng)的細(xì)胞因子分泌 刺激NK生長并增強(qiáng)其殺細(xì)胞活性 誘導(dǎo)LAK、NK、TIL擴(kuò)增及細(xì)胞因子的分泌 促進(jìn)B細(xì)胞分化、增殖和產(chǎn)生抗體 參與機(jī)體的炎癥反應(yīng)、抗腫瘤免疫反應(yīng)和移植排斥反應(yīng) 臨床藥物：基因工程IL-2 欣吉爾、德路生 、遠(yuǎn)策欣 。,66,參考檔案,適

26、應(yīng)癥：用于腎細(xì)胞癌、黑色素瘤、乳腺癌、膀胱癌、肝癌、直腸癌、淋巴瘤、肺癌等惡性腫瘤的治療。用于癌性胸腹水的控制。用于手術(shù)后、放療及化療后的腫瘤治療，可增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。也用于自身免疫性疾病和病毒性、細(xì)菌性疾病的治療，如乙肝、結(jié)核病。 用法：1）胸腹腔注射 100-200萬IU/次，每周1-2次，2-4周為一療程。 2）局部注射 根據(jù)癌灶大小決定劑量，每次每個病灶不少于610萬IU，隔日1次，4周為一療程。 3）皮下注射 60-100萬IU/m3，每日1次，每周5次，4周為一療程。 4）靜脈滴注 40-80萬IUIU/m3，每日1次，緩慢滴注，每周5次，4周為一療程。,67,參考檔案,毒副作用：

27、治療中常見副反應(yīng)為發(fā)熱、寒戰(zhàn)、乏力、惡心、輕度食欲下降等。其他少見的副反應(yīng)包括局部反應(yīng)、皮疹、血壓下降、水潴留、轉(zhuǎn)氨酶升高等。 這些副反應(yīng)多為輕度、易耐受，停藥后可自行緩解。必要時可給與消炎痛或給予升壓等措施對癥處理。,68,參考檔案,3、IL12：主要是由抗原呈遞細(xì)胞（如單核巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生） 作用：誘導(dǎo)Th0分化為Th1，增強(qiáng)細(xì)胞免疫應(yīng)答 促進(jìn)NK、T細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)LAK、TIL產(chǎn)生， 并增強(qiáng)上述細(xì)胞的殺傷功能 誘導(dǎo)Th1、NK分泌IFN- 促進(jìn)巨噬細(xì)胞分泌一氧化氮，殺傷腫瘤細(xì)胞 抑制腫瘤血管的生成 增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞表達(dá)MHC-I II類分子，提高腫 瘤細(xì)胞對免疫效應(yīng)細(xì)胞的易

28、感性 增加抗原遞呈細(xì)胞對腫瘤抗原的遞呈功能,69,參考檔案,動物試驗： 應(yīng)用基因工程技術(shù)，將IL-12基因?qū)肽[瘤細(xì)胞、樹突細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等，制成腫瘤疫苗，使IL-12在局部分泌，誘發(fā)機(jī)體的抗腫瘤免疫。,70,參考檔案,臨床試驗：最近的一個多中心、隨機(jī)的臨床試驗，重組人(rHu)IL-12分別以003g、025g或05gkg 2周x 12周，治療46例慢性乙型肝炎病人。與治療前比較，治療結(jié)束和隨訪12周后HBV DNA水平顯著降低(P0001)。對IL-12的效應(yīng)與劑量相關(guān)，治療結(jié)束時病毒清除3個劑量組依次為 7、13和25；隨訪結(jié)束時5例HBeAg陰轉(zhuǎn)。較大劑量較易有不良反應(yīng)，包括淋巴細(xì)胞

29、和嗜中性細(xì)胞數(shù)中度減少，3例未完成療程；注射處可有局部反應(yīng)；僅1例檢出對rHulL-12的抗體。,71,參考檔案,Ohe等對IL-12治療癌患者的臨床病例作了回顧性的總結(jié)報道：IL-12治療臨床上可觀察到IL-10產(chǎn)生和NK細(xì)胞、LAK活性短暫增高，少數(shù)患者能取得部分療效，但顯著性療效的病例尚未見報道，而且有許多毒副作用，如發(fā)熱、疲勞、流感樣反應(yīng)、關(guān)節(jié)痛、肌痛、白細(xì)胞減少、肝功能損害等。 盡管如此，IL-12治療前景不可低估。臨床證實，IL-12能恢復(fù)由實體瘤轉(zhuǎn)移患者PBMC獲得的NK細(xì)胞活性，IL12還能增強(qiáng)毛細(xì)胞白血病患者NK細(xì)胞活性。隨著對IL-12抗腫瘤機(jī)制研究的深入及IL-12用藥劑

30、量、途徑、協(xié)同用藥等方面的改進(jìn)，IL-12將會成功發(fā)展為有重要臨床應(yīng)用價值的抗癌新藥。,72,參考檔案,4、IL-4：主要由活化的T淋巴細(xì)胞（特別是Th2細(xì)胞）產(chǎn)生。 作用：促進(jìn)休止期的B細(xì)胞活化，促進(jìn)B細(xì)胞分泌 IgE，增加B細(xì)胞的抗原遞呈功能，促進(jìn)體液免疫應(yīng) 答。 維持胸腺細(xì)胞和活化T細(xì)胞的生長，誘導(dǎo)Th2產(chǎn)生，抑 制Th1分泌細(xì)胞因子。 誘導(dǎo)NK細(xì)胞增殖。 激活巨噬細(xì)胞，促進(jìn)其抗原遞呈和殺傷腫瘤細(xì)胞的作 用。 誘導(dǎo)外周血單個核細(xì)胞分泌M-CSF和G-CSF，增強(qiáng)中 性粒細(xì)胞介導(dǎo)的吞噬、殺傷功能和抗體依賴性細(xì)胞介 導(dǎo)的細(xì)胞毒效應(yīng)（ADCC） 應(yīng)用：主要用于DC細(xì)胞的誘導(dǎo)、擴(kuò)增。,73,參考

31、檔案,5、腫瘤壞死因子TNF 1）TNF-：主要來源于LPS、細(xì)菌DNA等抗原分子激活的單核巨噬細(xì)胞、其它細(xì)胞如T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞等產(chǎn)生的。 作用： 影響免疫反應(yīng)過程 影響非免疫細(xì)胞 促進(jìn)細(xì)胞因子分泌 調(diào)控細(xì)胞凋亡 全身反應(yīng) 2）TNF-：主要由Th1、CD8T細(xì)胞和早期的B細(xì)胞產(chǎn)生 作用：是炎癥過程的重要組成成分,74,參考檔案,6、集落刺激因子：是一種低分子量糖蛋白，能夠在體內(nèi)外選擇性刺激造血干細(xì)胞增生、分化成某一譜系的細(xì)胞 分類：G-CSF,M-CSF, GM-CSF, IL-3, EPO, SCF,75,參考檔案,7、胸腺素 分為兩族 作用：1）具有免疫增強(qiáng)作用，可促進(jìn)T細(xì)胞、NK

32、、LAK等細(xì)胞的增殖及殺傷活性 2）參與細(xì)胞骨架的形成，通過對肌動蛋白的調(diào)節(jié)，參與某些腫瘤的轉(zhuǎn)移,76,參考檔案,二、腫瘤的主動免疫治療,應(yīng)用腫瘤抗原或模擬腫瘤抗原的疫苗刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)，激發(fā)或增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤特異性免疫應(yīng)答，阻止腫瘤生長、擴(kuò)散和復(fù)發(fā)。,77,參考檔案,腫瘤疫苗,腫瘤疫苗與傳統(tǒng)疫苗在概念上不同，它主要不是用于腫瘤的預(yù)防，而是通過瘤苗的接種來刺激機(jī)體對腫瘤的免疫應(yīng)答來治療腫瘤。 該法應(yīng)用的前提是腫瘤抗原能刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)。 對手術(shù)后清除微小轉(zhuǎn)移瘤灶和隱匿瘤、預(yù)防腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)有較好的效果。,78,參考檔案,1、腫瘤細(xì)胞疫苗,即通過自體腫瘤細(xì)胞粗提取物，經(jīng)物理化學(xué)或生物手段處理

33、后抑制其生長能力，保持其免疫原性，但其免疫原性好，需加入佐劑如卡介苗等以增強(qiáng)免疫原性，但效果不甚理想。,79,參考檔案,2、腫瘤基因工程疫苗,腫瘤基因工程疫苗通過基因重組技術(shù)，將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞而制備的疫苗。,80,參考檔案,1)、提高機(jī)體抗腫瘤能力,將外源基因?qū)朊庖呒?xì)胞，其表達(dá)產(chǎn)物作用于免疫細(xì)胞，促進(jìn)免疫細(xì)胞生長、分化，從而提高機(jī)體的抗腫瘤能力。目前研究較多的是細(xì)胞因子基因的轉(zhuǎn)導(dǎo)，如IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、IL-15、IL-18、IFN-以及GM-CSF等。 實驗顯示，在各種細(xì)胞因子中，以GMCSF基因修 飾的腫瘤細(xì)胞疫苗效果最好，這與其誘導(dǎo)DC成熟有關(guān)。,81,參考

34、檔案,2)、增強(qiáng)腫瘤免疫原性,通過表達(dá)腫瘤所缺乏的某些分子，以增強(qiáng)其免疫原性。如將B7基因?qū)刖哂心[瘤抗原的腫瘤細(xì)胞，不僅能恢復(fù)腫瘤特異性免疫反應(yīng)，也可增強(qiáng)IL-2的抗瘤活性。一些腫瘤相關(guān)抗原（TAA）基因的轉(zhuǎn)導(dǎo)研究，顯示也可以增強(qiáng)其免疫原性，如CEA、AFP、gp100、MART-1。,82,參考檔案,3)、基因產(chǎn)物直接殺傷瘤細(xì)胞,如TNF基因?qū)肽[瘤細(xì)胞可使局部持續(xù)分泌TNF、從而直接殺傷腫瘤細(xì)胞。,83,參考檔案,3、肽疫苗,肽疫苗主要包括以下二種： 1）、癌基因、抑癌基因突變肽疫苗 目前已合成的p21-K-Ras-125突變肽、EGFRvIII突變肽和Her2/neu肽等。 2）、病毒

35、相關(guān)疫苗 如EB病毒與鼻咽癌、Burkitt淋巴瘤，HBV與肝癌，人類T細(xì)胞白血病病毒與成人T細(xì)胞白血病。,84,參考檔案,4、核酸疫苗,核酸疫苗是由能引起保護(hù)性免疫反應(yīng)的抗原基因片段及其載體構(gòu)建而成。包括DNA疫苗和RNA疫苗。,85,參考檔案,5、抗獨(dú)特型抗體疫苗,抗獨(dú)特型抗體疫苗具有模擬抗原及免疫調(diào)節(jié)的雙重作用，能克服機(jī)體免疫抑制，打破免疫耐受，故能代替腫瘤抗原誘導(dǎo)特異性主動免疫反應(yīng)。 腫瘤抗原可誘導(dǎo)抗體(Ab1)產(chǎn)生，該抗體可變區(qū)的獨(dú)特型決定簇具有免疫源性，可誘導(dǎo)抗體Ab2產(chǎn)生，稱為抗獨(dú)特性抗體。在這些Ab2中，有的可模擬原來的抗原結(jié)構(gòu)誘導(dǎo)抗原的特異性免疫反應(yīng)，可作為 腫瘤疫苗應(yīng)用。,

36、86,參考檔案,有些已進(jìn)入、期臨床： 卵巢癌相關(guān)抗原CA125的獨(dú)特型疫苗：AcA125 黑色素瘤的獨(dú)特性疫苗：BEC2、TriGem等 淋巴瘤的獨(dú)特性疫苗：Id-KLH 乳腺癌的獨(dú)特性疫苗：1E10 結(jié)直腸癌的獨(dú)特性疫苗：105AD7,87,參考檔案,6、樹突狀細(xì)胞（DC）疫苗,腫瘤抗原屬于內(nèi)源性抗原，機(jī)體主要依靠CTL免疫應(yīng)答殺傷腫瘤細(xì)胞。但腫瘤細(xì)胞表面的MHC-抗原肽段復(fù)合物表達(dá)水平低，需要經(jīng)體內(nèi)抗原提呈細(xì)胞加工、處理，提供誘導(dǎo)T細(xì)胞活化的第二信號，才能激發(fā)腫瘤特異性CTL的產(chǎn)生。由于DC在誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答中的重要功能，目前認(rèn)為， DC在啟動抗腫瘤免疫的抗原呈遞中發(fā)揮重要作

37、用。,88,參考檔案,Dendritic cells connect innate immunity and adaptive immunity,89,參考檔案,體外實驗證實，人DC至少有三條來自于不同前體細(xì)胞的發(fā)育途徑： 1）CD34+細(xì)胞分化為DC 2）外周血單核細(xì)胞分化為DC 3）淋巴樣DC前體細(xì)胞分化途徑,90,參考檔案,臨床應(yīng)用,腫瘤抗原可以基因、多肽、蛋白、甚至完整細(xì)胞的形式負(fù)荷給DC，因此DC疫苗的制備明顯比基因修飾的腫瘤細(xì)胞疫苗容易，因而促進(jìn)了DC疫苗進(jìn)入臨床試驗。 1996美國斯 坦福大學(xué)的Hsu等首先采用抗獨(dú)特型抗體負(fù)荷的DC疫苗治療了4例B細(xì)胞型淋巴瘤，3例獲部分緩解。,

38、91,參考檔案,臨床應(yīng)用,Nestle(1998)等采用腫瘤細(xì)胞溶解物或MHCII類分子限制的多肽抗原負(fù)荷DC，然后與免疫佐劑KLH（keyhole Limpet hemocyanin）聯(lián)合應(yīng)用治療了16例轉(zhuǎn)移性黑色素瘤，其中2例獲完全 緩解，3例獲部分緩解，1例獲微小反應(yīng)；在反應(yīng)的5例患者中， 有2例為腫瘤細(xì)胞溶解物負(fù)荷的DC疫苗。,92,參考檔案,由于大多數(shù)腫瘤抗原 未被識別，因此腫瘤細(xì)胞溶解物負(fù)荷的DC疫苗可使更多的患者接受此種方法治療。,93,參考檔案,三、腫瘤的被動免疫治療,（一）、抗體靶向治療 1. 抗腫瘤單克隆抗體直接體內(nèi)應(yīng)用 很多進(jìn)入臨床治療試驗，包括抗白細(xì)胞 分化抗原CD19

39、、CD20、CD22、CD33，表皮生長因子受體（EGFR），MU C1，前列腺特異性抗原（PSA），前列腺特異性膜抗原（PSMA），癌基因cerbB2產(chǎn)物，神經(jīng)節(jié)苷酯GD3、GM2等抗原的單抗。,94,參考檔案,2. 抗腫瘤單克隆抗體與抗腫瘤藥物、生物毒素、細(xì)胞因子或放射性核素偶聯(lián)： 生物毒素，如假單胞菌毒素或蓖麻毒素 放射線同位素，如131I 、186Re、177Lu、90Y、212Bi、67Cu、等 單抗作為導(dǎo)向物可增加毒素、放射性同位素等在腫瘤局部 的濃度，增加對腫瘤的殺傷力或誘導(dǎo)腫瘤局部的免疫反應(yīng)。,95,參考檔案,3. 基因工程抗體-毒素（或酶）融合蛋白直接殺瘤 4. 抗腫瘤單克隆

40、抗體和抗效應(yīng)細(xì)胞表面分子的抗體組成雙特異性抗體，可引導(dǎo)殺瘤效應(yīng)細(xì)胞向腫瘤灶集中 5. 胞內(nèi)抗體在腫瘤細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，特異性作用于致瘤的癌基因產(chǎn)物或端粒酶,96,參考檔案,（二）、腫瘤過繼性免疫治療 向腫瘤患者體內(nèi)輸注具有抗瘤活性的免疫細(xì)胞，直接殺傷腫瘤細(xì)胞或激發(fā)機(jī)體抗腫瘤免疫效應(yīng)。 回輸?shù)男?yīng)細(xì)胞包括：在體外用腫瘤抗原或淋巴因子激活的淋巴細(xì)胞（CIK、TIL等）、導(dǎo)入外援細(xì)胞因子基因并表達(dá)相應(yīng)產(chǎn)物的淋巴細(xì)胞等。,97,參考檔案,1、LAK細(xì)胞,LAK細(xì)胞是在1980年由美國國立癌癥研究所Rosenberg發(fā)現(xiàn)，并在1982年由Grimm等命名的。這是一類由IL-2激活的能夠殺傷NK抵抗的新型免疫細(xì)

41、胞，是一種強(qiáng)烈的，廣譜的，具有殺瘤活性的細(xì)胞。隨后臨床上廣泛應(yīng)用于腫瘤等疾病治療。但由于LAK細(xì)胞活性的維持需要IL-2，而IL-2副作用大，而且在以后的臨床總結(jié)中發(fā)現(xiàn)LAK細(xì)胞療效較低，現(xiàn)已基本不用。,98,參考檔案,2、CD3AK細(xì)胞,是在LAK細(xì)胞基礎(chǔ)上，用抗CD3單抗和IL-2聯(lián)合誘導(dǎo)的殺瘤細(xì)胞。由于使用了抗CD3單抗刺激，減少了IL-2的用量，降低LAK治療的毒副作用，且CD3AK的抗腫瘤活性大大高于LAK細(xì)胞。 山東胡偉等對晚期惡性腫瘤患者輸注自體 CD3AK 細(xì)胞 1個療程后 ,實體瘤組治療有效率為 25. 45%,臨床獲益率為 74. 54%;淋巴瘤組有效率為 83. 33%,

42、臨床獲益率為 91. 67%。,99,參考檔案,在利用外周血淋巴細(xì)胞制備免疫效應(yīng)細(xì)胞的研究中，為增加效應(yīng)細(xì)胞的數(shù)量和殺瘤活性，常添加一些激活劑如抗CD3單抗，植物血凝素PHA等，以提高免疫治療療效。 實驗顯示PHA預(yù)刺激雖能促進(jìn)IL-2激活的殺傷細(xì)胞的增殖，但對殺傷活性并無明顯改善，而培養(yǎng)15天以上，經(jīng)PHA預(yù)刺激的P-LAK和P-CD3AK細(xì)胞殺傷活性顯著提高，且PHA與抗CD3單抗有協(xié)同效應(yīng)。,100,參考檔案,3、TIL細(xì)胞,腫瘤浸潤的淋巴細(xì)胞，是從新鮮的腫瘤組織中分離出來，體外經(jīng)IL-2，抗CD3單抗，TNF等刺激，經(jīng)20-45天培養(yǎng)，獲得的具有一定特異性的抗腫瘤細(xì)胞。其局限在于分離困

43、難，體外培養(yǎng)時間過長。,101,參考檔案,我們于1997-1998年選擇21例癌性胸腹水患者，其中肺癌4例，乳腺癌5例，腸癌4例，骨癌7例，胰腺癌1例。所有病例均經(jīng)病理學(xué)和細(xì)胞學(xué)診斷。共抽取33次胸腹水做TIL細(xì)胞培養(yǎng)，抽取胸水2502200ml，腹水量12004400ml。21例患者中14例經(jīng)16次的TIL胸腹腔回輸治療?；剌斊陂g隔天皮下注射IL-2 50萬單位。14例患者回輸治療結(jié)果顯示總有效率為78.57%，其中3例胸腹水消失，并觀察1個月無復(fù)發(fā)，1個月后檢查胸腹水無瘤細(xì)胞；8例胸腹水有明顯減少，并控制1個月以上；3例僅控制12周。,102,參考檔案,4、TAK細(xì)胞,TAK是由可溶性腫瘤

44、抗原，抗CD3單抗和IL-2共同誘導(dǎo)的殺瘤細(xì)胞。用可溶性腫瘤抗原誘導(dǎo)細(xì)胞識別腫瘤，以提高殺瘤親和性；用抗CD3單抗誘導(dǎo)所有T細(xì)胞活化，培養(yǎng)出以CD8+T細(xì)胞為主的殺瘤細(xì)胞。TAK細(xì)胞不僅增加了殺瘤的特異性，且體外增殖快，IL-2用量低。,103,參考檔案,我們用鹽析法提取胃癌可溶性抗原（TSA），并用抗CD3單抗和IL-2共同刺激正常人的外周血單核細(xì)胞，培養(yǎng)10天后，經(jīng)流式細(xì)胞儀表型分析，表明其免疫效應(yīng)細(xì)胞以CD8+T細(xì)胞為主，其細(xì)胞增殖速度，增殖水平與CD3AK和LAK相比明顯升高，且對抗原來源的胃癌細(xì)胞具有極強(qiáng)的殺傷活性（98.5%），高于CD3AK（82.1%）和LAK（62.05%）。

45、,104,參考檔案,我們于1996-1998年，采用靜脈或口服化療和免疫效應(yīng)細(xì)胞輸注為主體的化學(xué)免疫療法，治療晚期原發(fā)性肝癌18例。 收治的38例晚期原發(fā)性肝癌病人中，18例采用化學(xué)免疫療法（甲組），同期收治的晚期肝癌患者，除對癥處理外，單用靜脈化療或肝動脈插管化療20例，列為對照組（乙組）。 總緩解率（CR+PR）：甲組22.22%（4/18），乙組無1例緩解。,105,參考檔案,5、CIK細(xì)胞,是將人外周血單個核細(xì)胞經(jīng)體外用各種細(xì)胞因子共同刺激培養(yǎng)所獲得的免疫細(xì)胞。由于同時表達(dá)CD3和CD56分子，故又稱為NK樣T細(xì)胞，CIK細(xì)胞兼具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性和NK細(xì)胞的非MHC限制性殺瘤

46、特點(diǎn)，其抗腫瘤活性遠(yuǎn)大于LAK和TIL。因此被認(rèn)為是新一代腫瘤過繼細(xì)胞免疫治療的首選方案。 刺激因子除了抗CD3單抗、IL-2外，還需用IFN-和IL-1等細(xì)胞因子。,106,參考檔案,CIK細(xì)胞殺傷機(jī)制,、識別 由于CIK的細(xì)胞殺傷作用是非MHC限制性的，故CD4、CD8在其識別腫瘤細(xì)胞或病毒感染的細(xì)胞過程中并非必不可少。細(xì)胞表面粘附分子LFA-1 ICAM-1在CIK細(xì)胞識別過程中起關(guān)鍵作用。對正常細(xì)胞無毒性作用。,107,參考檔案,、殺傷 CIK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞或感染細(xì)胞的直接殺傷： CIK細(xì)胞在受到外源性抗CD3McAb或敏感靶細(xì)胞刺激時會釋放具有細(xì)胞毒性的胞漿顆粒物到膜外空間，其中CD

47、3+CD56+細(xì)胞可產(chǎn)生最大的顆粒釋放量。這些胞漿顆粒物對靶細(xì)胞具有直接殺傷作用。 炎性細(xì)胞因子的殺傷活性：培養(yǎng)的CIK細(xì)胞可以分泌多種細(xì)胞因子，如IFN-、TNF-（腫瘤壞死因子-）、IL-2等，不僅對靶細(xì)胞有直接抑制作用，還可通過調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)反應(yīng)性間接殺傷靶細(xì)胞。 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡：CIK細(xì)胞在培養(yǎng)過程中表達(dá)FasL（型跨膜糖蛋白），一方面增強(qiáng)了其對FasL+腫瘤細(xì)胞引發(fā)的Fas-FasL凋亡的抵抗性，還可通過對Fas+（型跨膜糖蛋白）腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡行使其對腫瘤細(xì)胞的慢性殺傷作用，保證抗瘤活性的長期持久。,108,參考檔案,CIK細(xì)胞的殺瘤特點(diǎn),1、增殖速度快 CIK細(xì)胞中的效應(yīng)細(xì)胞

48、CD3+CD56+細(xì)胞在正常人外周血中極其罕見，僅1%5%，在體外經(jīng)多因子培養(yǎng)2830天，CD3+CD56+細(xì)胞迅速增多，較培養(yǎng)前升幅可達(dá)1000倍以上。且所占百分比也大幅上升，細(xì)胞毒活性亦達(dá)峰值。 2、殺傷活性高、殺瘤譜廣 CIK細(xì)胞的總殺傷單位（TLU）為LAK 細(xì)胞的73倍甚至更高，CIK細(xì)胞的瘤細(xì)胞抑制Log指數(shù)為2.53.5，較LAK細(xì)胞的瘤細(xì)胞抑制指數(shù)高2 個Log。其抗病毒活性大大增強(qiáng)。 因沒有T 淋巴細(xì)胞殺傷時的MHC 限制性，故對于多種腫瘤細(xì)胞系和新鮮腫瘤組織均表現(xiàn)出強(qiáng)大的殺傷活性。 3、對多重耐藥腫瘤細(xì)胞同樣敏感 CIK細(xì)胞對化療藥物敏感的親本細(xì)胞和不敏感的轉(zhuǎn)化細(xì)胞均具有強(qiáng)

49、大的殺傷活性，兩者比較無差別。 4、殺瘤活性不受CsA、FK506等免疫抑制劑的影響 免疫抑制劑CsA（環(huán)孢霉素A）和FK506（普樂可復(fù)）不影響靶細(xì)胞誘導(dǎo)的CIK細(xì)胞脫顆粒，并且CIK細(xì)胞對靶細(xì)胞的殺傷活性不會因此降低。 5、對正常骨髓造血前體細(xì)胞毒性很小 CIK細(xì)胞對正常髓系克隆生成幾乎沒有影響，對GM-CFU（粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落形成單位）僅有不足1級的抑制。 6、能抵抗腫瘤細(xì)胞引發(fā)的效應(yīng)細(xì)胞Fas-FasL凋亡 CIK細(xì)胞內(nèi)有抗凋亡基因表達(dá)，并檢出多種保護(hù)基因，如Bcl-2等和survivin的轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)。CIK細(xì)胞具備合成FasL的能力， CIK細(xì)胞可以對抗體內(nèi)FasL陽性腫瘤所引發(fā)

50、的效應(yīng)細(xì)胞活性下降。,109,參考檔案,CIK制備,采集：外周血單個核細(xì)胞。 分離：PBMNC經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液分離、洗滌后懸浮于含10%AB血清的RPMI 1640中。 培養(yǎng)：第一天培養(yǎng)加入-IFN 1000U/ml，24小時后加入IL-2 1000U/ml，在37，5% CO2孵箱中培養(yǎng)。以后每3天更換培養(yǎng)液補(bǔ)加IL-2 1000U/ml；培養(yǎng)710天。 無菌檢測：細(xì)菌霉菌培養(yǎng)陰性；熱源檢測陰性。 收獲：收集細(xì)胞，加入含1%白蛋白的生理鹽水洗滌三遍。,110,參考檔案,111,參考檔案,112,參考檔案,CIK治療,回輸：洗滌后的細(xì)胞懸浮于1%白蛋白生理鹽水中，將CIK細(xì)胞通過輸血器經(jīng)靜脈輸

51、給患者。 療程：培養(yǎng)的第8-10天開始，分四次回輸，每次間隔1-2天。自回輸CIK細(xì)胞前一天起, 連續(xù)每日靜脈輸注IL-2，每日劑量為100萬單位直到回輸結(jié)束。,113,參考檔案,觀察指標(biāo),1、CIK培養(yǎng)前后免疫標(biāo)志檢測（包括CD3、CD4、CD8、CD3CD56等） 2、CIK回輸前后患者外周血免疫標(biāo)志檢測（包括CD3、CD4、CD8、CD3CD56等） 3、CIK細(xì)胞回輸前后患者不良反應(yīng)的觀察。,114,參考檔案,115,參考檔案,臨床應(yīng)用,體內(nèi)回輸C IK細(xì)胞, 可以在沒有損傷機(jī)體免疫系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的前提下,直接殺傷腫瘤細(xì)胞, 并可調(diào)節(jié)和增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能。 特別適應(yīng)于那些對手術(shù)、放療、

52、化療已無適應(yīng)證的晚期腫瘤患者,因而成為治療腫瘤的重要輔助治療方法,為預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)、改善生存質(zhì)量提供了新途徑。 一般在放療、化療后間隔24周,機(jī)體免疫力有所恢復(fù)時,輸入C IK細(xì)胞,可提高腫瘤患者的緩解率并在清除微小殘留病灶方面發(fā)揮重要作用。,116,參考檔案,Combined transcatheter arterial chemoembolization and cytokine induced killers for hepatocellular carcinoma,67 patients with hepatocellular carcinoma 21 patients were tre

53、ated with TACE + CIK 46 patients were treated with TACE only. Result: The median survival period of controlled group and observed group is 22 months (95% C7, 37), 10 months (95%C8, 12) respectively. The six-month, one year, and two years living rates were 85.71%, 58.35%, 48.62% and 69.05%, 32.74% ,3

54、.97% respectively,117,參考檔案,Kaplan-Meier analysis survival for 67 hepatocellular carcinoma,118,參考檔案,典型病例,患者，男，61歲，于2009.6.25因“右上腹悶痛1周”住我院，入院查B超:右肝實性占位（結(jié)合臨床：傾向原發(fā)性肝癌）伴門脈癌栓形成。MRI(NO.9401):1.右肝占位，考慮肝硬化惡變并門脈癌栓形成，腫瘤大小約：11.2x6cm。2.脾腫大并少量腹水3.雙腎囊腫。AFP:204628ng/ml。診斷為：1.原發(fā)性肝癌伴門脈主干癌栓（IIIA期）2.乙肝后肝硬化3.右肺錯構(gòu)瘤術(shù)后4.C7

55、、T9局部骨質(zhì)缺損。入院后予2009.6.29、2009.7.22、2009.8.24行介入治療，共用FUDR3.0、艾恒600mg。同時配合CIK細(xì)胞免疫療法。,2009.8.31復(fù)查AFP:49249ng/ml。MRI:1.原發(fā)性肝癌介入治療后較前好轉(zhuǎn)，部分病灶存活，腫瘤大小約：6.4x4.88cm。療效評價：好轉(zhuǎn)。,119,參考檔案,典型病例,患者，男，38歲，于2008.10.24以“反復(fù)腹脹痛1月”為主訴就診我院。當(dāng)時B超、CT:右肝多發(fā)實性占位，考慮原發(fā)性肝癌（最大者大小約11.4x10.2x15cm），門脈高壓并脾腫大；AFP:375.3ng/ml，AFP-L3:18.5；肝穿細(xì)

56、胞學(xué)見肝細(xì)胞癌。分別于2008.10.31、2008.11.30、2009.1.6、2009.2.23，2009.6.22行肝動脈化療栓塞術(shù)，共用澤菲7.2，艾恒900mg，碘化油93ml，治療后出現(xiàn)栓塞后綜合癥，對癥處理后緩解。期間配合CIK免疫治療2療程。,2009.8.19復(fù)查AFP:2.79ng/ml，MRI：肝癌介入治療后：腫瘤存活區(qū)域較前縮小。,120,參考檔案,典型病例,患者，男，51歲。 2003.2.21因“右上腹悶痛”在外院查彩超示：肝右后下段占位性病變，約3.0cm。AFP 1274ng/ml。擬診“原發(fā)性肝癌硬化型”，在上海逸仙醫(yī)院行“肝右葉部分切除術(shù)”。術(shù)后病理：肝細(xì)

57、胞癌分化中等伴壞死,癌旁腺管內(nèi)見癌栓。 2003.4.21復(fù)查AFP 51.79ng/ml，我院行TACE術(shù)，予“脫氧氟尿苷、0.75、順鉑60mg、表阿霉素20mg”肝動脈灌注；另“表阿霉素30mg+碘油5ml”，其中4ml肝右動脈、余1ml肝左動脈灌注。于2003.5.31、2003.6.6復(fù)查AFP分別為255ng/ml、309ng/ml。遂于2003.6.19再行TACE術(shù)，予“表阿霉素40mg+碘油5ml”肝固有動脈灌注。術(shù)后復(fù)查AFP正常。 2003.6、2003.8、2003.10、2003.12分別給予CIK一療程（隔天一次，共4次）配合白介素-2免疫治療，無明顯反應(yīng)。2004

58、.5 ，2005.3， 2005.11分別行3療程的CIK治療。 目前身體狀況良好，每半年復(fù)查1次，各項指標(biāo)均正常，未做其他治療。 2009.5.21檢查，乙肝病毒DNA500拷貝數(shù)/毫升，甲胎蛋白2.07ng/ml，甲胎蛋白異質(zhì)體25ng/ml，肝功正常。,121,參考檔案,典型病例,患者，女，52歲。 于2003.08在我院診斷為“左乳腺癌”，行左乳腺癌改良根治術(shù)，期間查CT示：肝內(nèi)多發(fā)肝硬化結(jié)節(jié)。2005.03在福州軍區(qū)總醫(yī)院查PET/CT示：肝右葉內(nèi)異常代謝灶，考慮惡性腫瘤。后在上海中山醫(yī)院診斷為”肝癌“，查AFP 2603ng/ml，2005.3.17行TACE術(shù)1次，用FUDR 1000mg，艾恒